2° Laboratorio De Microbiologia I

Laboratorio de Microbiología I- Materiales de Laboratorio: Reconocimiento, Utilidad y Limpieza

I.- OBJETIVOS  

Que el alumno conozca parte del material necesario en un laboratorio de microbiología y parasitología. Que el alumno aprenda a manejar el material utilizado en un laboratorio de microbiología y parasitología.

II.- MARCO TEORICO Algunos de los instrumentos más utilizados en los laboratorios, son elaborados de vidrio resistente a altas temperaturas, por su alto contenido de dióxido de silicio, bajo álcali, óxido bórico y vestigios de otros óxidos, lo que condiciona su escaso coeficiente de dilatación, teniendo una gran aplicación en la fabricación de materiales de laboratorio, uno de los mas conocidos es .el vidrio PYREX. Así como los elaborados de distintos metales pesados como platino,' mercurio, aluminio, cobre que les otorgan características como buenos conductores del calor o por que al medio ambiente son muy manejables sin alterar su composición.

Instrumentos de vidrio como la probeta, la pipeta o el tubo de ensayo, y otros como el mechero Bunsen, son de los más comunes en la mayoría de los laboratorios científicos.

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MATERIAL DE VIDRIO

Constituye una de las principales herramientas para los fines que se persigue en el laboratorio. Los requisitos necesarios para que un material sea un "buen material", son: 1. Ser de buena calidad; es decir que no sean fácil de quebrarse. 2. Ser de color neutro. 3. Poseer resistencia a las acciones mecánicas y a las variaciones de temperatura así como también a los álcali-libre (no se raje). 4. Poseer bajo coeficiente de dilatación (que no pierda su forma).

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Tubos de Ensayo: Se emplean como recipientes de medios de cultivo. Tubos de prueba Deben ser de vidrio neutro, paredes gruesas y equilibradas, de preferencia sin rebordes para facilitar el taponamiento. De 16 x 150 mm De 15 x 125 mm De 13 x 100 mm para estudio de fermentación –trabajos mecánicos De 10 x 75 mm pruebas, estudios serologicos. Tubos de Roux Con escotadura de 4 cm. de fondo, de 25 x 200 mm para Tubos de centrífuga De vidrio, pueden ser cónicos o cilíndricos, siempre de paredes gruesas, De paredes gruesas, por estar inmersos rotando a alta velocidad. De polietileno, se utiliza para centrifugaciones a altas velocidades, de medidas semejantes a los anteriores.

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Cápsulas o Placas Petri: Cajas cilíndricas, se emplean como recipientes de medios de cultivo para el cultivo y aislamiento de microorganismos. Las más usadas son las de 10, 15 ó 20 mm x 100 mm.

Cultivos bacterianos Colonias de bacterias Escherichia coli (más grande, rosa) y Proteus vulgaris (más pequeña, de color castaño) que crecen juntas en una placa Petri. En circunstancias normales estas bacterias son inofensivas y habitan en el intestino humano favoreciendo la digestión, si bien pueden convertirse en patógenas y producir infecciones del tracto urinario. Los científicos y médicos llevan a cabo cultivos bacterianos y estudian sus características con el fin de adquirir conocimientos respecto a las enfermedades bacterianas y su prevención. Placas Brewer: Para el cultivo y aislamiento de microorganismos anaeróbicos. Son idénticas a las anteriores, con excepción de las tapas que además de ser mas pesadas están adaptadas para crear anaerobiosis. Pipetas: Tubos cilíndricos delgados terminados en punta, graduados al décimo o al centésimo de mI. Se emplean en la medición de pequeñas cantidades de líquidos. Pueden ser: Serológicas: son terminales y con capacidad de 0.1 a 25 ml. Volumétricas, se reconocen por presentar una dilatación bulbosa central con unas marcas de aforamiento conocida, en el extremo proximal angosto de la pipeta, se les llama también pipetas de bola, las medidas más conocidas son de 10, 25, 50 y 100 ml.

Pipetas Pasteur: Confeccionados de varillas de vidrio de diámetro de 4 x 20mm de 30 ó 40cm de longitud. La calidad de vidrio debe facilitar reblandamientos a la acción directa de la llama del mechero, para conseguir por estiramiento la capilaridad deseada. Se emplea para la toma de pequeños inóculos de siembra.

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. Matraces y Erlenmeyers: Recipientes de forma cónica y cuello corto, volumétricos útiles para la preparación y almacenamiento de soluciones, colorantes, reactivos, medios de cultivos, etc.

Matraces Aforados o Fiolas: Recipientes de forma esférica y base plana. Están calibr4ados a medidas exactas mediante un foro en la parte media del cuello del recipiente en el que se indica la medida. Se emplean para la preparación de reactivos de preferencia solución buffer.

Los matraces Erlenmeyer son recipientes de vidrio de forma troncocónica que se utilizan en el laboratorio para medir o contener líquidos. Kitasato: Son frascos muy parecidos a los Erlenmeyers, se caracterizan por sus paredes gruesas y por una tubuladura lateral en el cuello, la misma que sirve de tabulación lateral para hacer el vacío. Se utiliza

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Probetas: Recipientes graduados de forma cilíndrica y capacidad variable, con base para la esterilidad. Pueden estar graduada.

Vasos de Precipitación o Beacker: Recipientes cilíndricos y cortos, con una depresión en el margen de la bocadura. Su utilidad es amplia. El vidrio debe ser resistente al calor.

Frascos viales para Hemocultivos, vacunas, Cultivos de Tejido: Son de vidrio neutro, resistentes al calor, transparentes y con tapas de rosca, Con capacidad para 50ml y 100ml blancos o de color ámbar pueden utilizarse para la reserva de soluciones y medios de cultivo en stock, previamente taponados con algodón esterilizados, Perlas de Vidrio Neutro: Se emplean para desfibrilar sangre y para recoger cosechas microbianas en la preparación de antígenos, De 4 a 6 mm. Varilla: de Vidrio Macizo

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MATERIAL DE OTRA NATURALEZA Vástago de metal con una cubierta de ebonita aislante del calor y en el extremo proximal una tuerca para insertar el alambre de plástico o necron, Asa de Kolle Varillas metálicas o de vidrio que llevan en un extremo alambre de platino; cuando el alambre es recto se llama Necrón y cuando el alambre forma un anillo de diámetro variable en su extremidad toma el nombre de asa. Espátulas de Metal con mango de madera Estuches cilíndricos o Cubículares Mecheros de Bunsen Canastillas o Cestos de Metal Soportes Universales Trípodes

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EQUIPOS DE LABORATORIO Potenciómetro: Miden el pH de los medios de cultivo y de las solucione buffer. Constituido de un par de electrodos sensible a concentraciones de hidrogeniones, conectados a un potenciómetro que indique las mediciones, Los potenciómetros emplean un electrodo de vidrio, unido a un electrodo de calomel como estándar.

Centrífugas: Se utiliza en la separación de sólidos suspendidos en líquidos. Hay centrífugas de tamaño y velocidades variables, la velocidad, se mide en revoluciones por minuto, La velocidad a la cual sedimentaran las partículas en un líquido dependen de varios factores: Tamaño de la partícula. El peso de la partícula. La viscosidad del líquido. La fuerza gravitacional.

Ultra centrifugación; para obtener alteraciones elevadas (mayor o igual a 100 000 g), pueden ser: Ultracentrifugación analítica: para determinación de características físicas de proteínas o de ácido nucleicos. Ultracentrifugación preparativa: permite la separación de organelos

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(mitocondrias, etc.), la separación se debe efectuar en gradiente de densidad. Incubadoras y Hornos Los hornos son capaces de mantener t° mas de 100°c y las incubadoras menos de 100° c .Los hornos no tienen salida de aire, las incubadoras si.

Baños de agua También llamados BAÑO MARIA tienen salida de aire presentan un termostato que regula la temperatura del agua presenta un piso para colocar los materiales que se desea.

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Refrigeradoras y congeladoras Son incubadoras de temperatura fría menor de cero grados y los frigideres de dos a siete grados.

Filtración Sirve para separar materiales líquidos de sólidos un ejemplo los FITROS DE MEMBRANA.

Espectrofotómetro Se puede observar los colores de los alimentos con una intensidad que el aparto brinda.

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Autoclave Funciona por las presiones que se dará a una mayor temperatura logrando su esterilización como por ejemplo las conservas.

Horno Pasteur Es como una mufla que tiene tres paredes y la cubierta es de asbesto sirve para la esterilización por el calor seco. Estufas de aire caliente Al igual que el anterior es utilizado en la esterilización por el calor seco. Tienen solo dos paredes y son de forma cúbica.

Aparato de arnolo koch Es un tipo de esterilizador con calor húmedo de forma cilíndrica.

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III.-MATEIAL PARA LA PRÁCTICA  Pipetas de diferentes graduaciones.  Asas Bacteriológicas de aro y punta.  Caja de Petri.  Tubos de ensayo con tapón de rosca y tapón de algodón.  Probeta.  Matraz Erlenmeyer.  Vaso de precipitado.  Mechero Bunsen.  Torundas de algodón.

IV. EXPERIMENTO Siga cada uno de los pasos como lo indica su Profesor, Técnico o instructor. 1.

Encienda el Mechero.

2.

Esterilice su asa en el mechero hasta que este al rojo vivo y enfríe en el área de seguridad.

3.

Abra su caja de Petri dentro del área de esterilidad hasta que aprenda a hacerla correctamente.

4.

Tome una pipeta estéril, ábrala y pipetee la cantidad exacta de agua de acuerdo a la graduación de la pipeta.

5.

Tome un tubo de ensayo de rosca o liso y ábralo dentro del campo de esterilidad hasta que aprenda a hacerla correctamente.

6.

Tome la probeta y vierta un poco de agua hasta alguna cantidad exacta.

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V.- RESULTADO Obviamente, hay unos ciertos tipos de experimentaciones que realizamos o determinamos con mas frecuencia que otras. Sin embargo, el personal del Laboratorio esta siempre dispuesto a considerar nuevos retos. No pretendemos ser capaces de realizar cualquier tipo de determinación, pero prometemos considerar, desde nuestra experiencia, todas las posibles alternativas es por eso lo imprescindible de reconocer todos los materiales, su utilidad y su debida limpiezapara cumplir con nuestros propósitos.

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VI.- CONCLUSIONES •

Es muy importante haber reconocido todos los materiales a utilizar en el laboratorio y saber su utilidad para la práctica.

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También era necesario para prevenir cualquier accidente no provocado y no lamentar consecuencias.

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Una de las conclusiones es haber reconocido algunos reactivos que se debe tener cuidado y cogerlo con los guantes para prevenir algún tipo de contaminación.

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Haber reconocido los equipos a utilizar como la centrifuga, el potenciómetro y la estufa de aire caliente.

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Conocer la calidad de las principales herramientas a utilizar como los tubos de ensayo, las pipetas, las placas petri, los matraces, etc.

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Saber desinfectar las placas cuando se encuentren con algunas bacterias u hongos o ácidos, también saber desinfectar las manos y los materiales a utilizar.

VII.- RECOMENDACIONES •

Tener el mandil siempre puesto para evitar contaminación en la ropa cuando se encuentre en el laboratorio.

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Cuando se utilice la pipeta utilizar la bombilla para prevenir cualquier accidente a menos que se utilice agua en ese instante.

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Tener los guantes puestos cuando se trabaje en cultivos de hongos o bacterias en las placas o tubos a utilizar.

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Antes de empezar cualquier experimento desinfectar la zona donde se trabajara.

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No poner cuadernos grandes sobre la zona donde se trabaje ni meter los lapiceros en la boca para prevenir algún tipo de infección.

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VIII.- CUESTIONARIO 1. ¿Para que sirve una caja de Petri? Son utilizadas en bioquímica para llevar a cabo cultivos de microorganismos.

2. ¿Cuál es la finalidad de utilizar materiales estériles en el laboratorio? El propósito del proceso de esterilización es destruir la contaminación microbiana de los productos no estériles. La destrucción microbiana mediante agentes físicos o químicos sigue una ley exponencial, que nos permite calcular la probabilidad de supervivencia de un microorganismo a partir de la dosis suministrada en el tratamiento. La probabilidad de supervivencia está en función del número y tipos de microorganismos (carga biológica), de la letalidad del proceso de esterilización y en algunos casos, del medio ambiente en el que se encuentren los microorganismos durante la esterilización. 3. ¿De que esta formada el asa bacteriológica? Son varillas metálicas o de vidrio que llevan de un extremo alambre de platino; cuando El alambre es recto se llama aguja y cuando el alambre forma un anillo de diámetro variable en su extremidad tómale nombre de asa.

4.- ¿Utilidad del mechero Bunsen? Dispositivo que se utiliza mucho en los laboratorios debido a que proporciona una llama caliente, constante y sin humo. Debe su nombre a Robert Bunsen el que lo creo. Los mecheros Bunsen constan de un tubo vertical, enroscado en su parte baja a un pie por donde entra el gas.Mediante un aro metálico móvil se regula la entrada de aire. La mezcla se enciende por la parte superior.

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 Biblioteca de consulta Encarta 2004.