Informe Nº4 Laboratorio De Bioquimicai

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE INGENIERÍA INDUSTRIAL Y DE SISTEMAS ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO Nº 4 BIOQUÍMICA 1 TEMA: ____

Reconocimiento de proteínas _____

INTEGRANTES: CÓDIGO

APELLIDOS Y NOMBRES

CORREO ELECTRÓNICO

2008002303 2008015683 2008003532 2008235371 2008013626

Palacios Rodriguez Ângela Salome Ordoñes Vanessa Salvatierra Ccachulli Amys Celestina Serrano Yarleque Soraida Brigitte Zambrano Sayas Linda Lady

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DOCENTE: Ing. Guillermo Chumbe Gutiérrez

Semestre 2009 – I

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I.

INTRODUCCIÓN

Em este presente trabajo desarrollamos el tema de Reconocimiento de proteínas y para esto hemos realizado un trabajo de investigación mediante el cual estamos exponiendo las diferentes formas de reconocer la presencia de las proteínas en una sustancia ( clara de huevo), las reacciones a utilizar, etc. Este informe en completo también contiene la experiencia en el laboratorio, imágenes de ella y algunos resultados que se pedía en la realización de informe y que se requería saber en cada experimentación.

II.

MARCO TEÓRICO

PROTEINAS: Son biomoleculas de gran tamaño y peso molecular formadas por C, H, O, y N. Son macromoléculas o polímeros de aminoácidos. AMINOACIDOS Son moléculas orgánicas que presentan grupo amino (- NH2) y un grupo nacido carboxi8lico (- COOH). En disolución los aminoácidos forman iones dobles denominados (Zwitteriones) debido a sus grupos acido y base; además, un aminoácido, dependiendo del PH de la solución, puede comportarse como acido o como base por esta razón se les denomina anfótera. AMINOACIDOS NO ESENCIALES Acido aspartico Acido glutamico prolina serina tirosina asparagina glutamina cisteína glicina alanina

ESENCIALES Histidina treonina triptófano leucina isoleucina valina fenilalanina Lisina metionina arginina

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ESTRUCTURA DE LAS PROTEINAS: Estructura primaria: es la secuencia de aminoácidos de la proteína (en forma lineal).

Estructura secundaria: La estructura secundaria es la disposición de la secuencia de aminoácidos en el espacio. La a (alfa)-hélice Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre sí misma la estructura primaria. La conformación beta En esta disposición los aminoácidos no forman una

hélice sino una cadena en forma de zigzag.

Estructura terciaria: informa sobre la disposición de la estructura secundaria de un polipéptido al plegarse sobre sí misma originando una conformación globular. Aparecen varios tipos de enlaces:(el puente disulfuro, los puentes de hidrógeno, los puentes eléctricos, las interacciones hidrófobas)

Estructura cuaternaria: Esta estructura informa de la unión, mediante enlaces débiles (no covalentes) de varias cadenas polipeptídicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptídicas recibe el nombre de protómero.

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Reacciones de reconocimiento •

Reacción de Biuret

El reactivo de Biuret está formado por una disolución de sulfato de cobre en medio alcalino, este reconoce el enlace peptídico de las proteínas mediante la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos, lo que produce una coloración rojo-violeta. •

Reacción de Millon

Reconoce residuos fenólicos, es decir aquellas proteínas que contengan tirosina. Las proteínas se precipitan por acción de los ácidos inorgánicos fuertes del reactivo, dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar. •

Reacción xantoproteica

Reconoce grupos aromáticos, es decir aquellas proteínas que contengan tirosina o fenilalanina, con las cuales el ácido nítrico forma compuestos nitrados amarillos.

III.

MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Y REACTIVOS: Para la práctica y experimentación sobre reconocimiento de proteínas se utilizaron los siguientes elementos. REACTIVOS • Acido nítrico concentrado • Hidróxido de sodio al 40 % • Hidróxido de sodio al 20% • Sulfato cúprico al 1% • Acetato de plomo al 5%

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MATERIALES • Tubo de ensayo • Gradilla • Varillas de vidrio • Mechero • Vaso precipitado • Vagueta • Pipeta MUESTRA • Clara de huevo METODOLOGIA: Existen varios métodos diferentes para el reconocimiento de proteínas uno de estos es la coagulación de proteínas debido al gran amaño de sus moléculas, también esta la reacción xantoproteica que es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, otra es la reacción de biuret y finalmente la reacción de los aminoácidos azufrados.

IV. •

DESCRIPCION DE LA PRÁCTICA REACCIÓN XANTOPROTEICA:  Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solución problema (clara de huevo).

 Añadir 1 cc. de HNO3 concentrado.

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 Calentar al baño maría a 100 0C.

 Enfriar en agua fría.  Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%.

40%

•

REACCIÓN DE BIURET:

 Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albúmina de huevo.

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 Añadir 2cc. de solución de hidróxido sódico al 20%.

 A continuación 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%. Debe aparecer una coloración violeta-rosácea característica.

Sulfato cúprico 1%

4 a 5 gotas

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•

REACCIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS AZUFRADOS:

 Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albúmina de huevo (clara de huevo).

 Añadir 2 cc. de solución de hidróxido sódico al 20%.

 Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%.

 Calentar el tubo hasta ebullición.

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 Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre.

Resultados final de las diferentes reacciones para identificar proteínas

V.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

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• ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo? La desnaturalización de proteínas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albúminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente y líquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa sólida intercomunicada. Esa misma desnaturalización puede producirse a través de una desnaturalización química, por ejemplo volcándola en un recipiente con acetona. Desnaturalización irreversible de la proteína de la clara de huevo y pérdida de solubilidad, causadas por la alta temperatura (mientras se la fríe)

• ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización? El efecto de la temperatura, cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas y, se desnaturalizan.

• ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína? Para saber si una sustancia desconocida, es una proteína se utiliza el Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

• ¿Qué coloración da la reacción del Biuret? La coloración que presenta es el color violeta, indicando la presencia de proteínas.

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• ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret? Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 ªC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc. Si una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret, porque el reactivo reacciona con cualquier proteína, liquida o sólida, por ejemplo cuando haces una cuantificación de proteínas en suero (liquida) o cuando haces una prueba cualitativa en huevos, carne, papas, etc.

• Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué? La glicina no reaccionó con el reactivo de Biuret porque está en forma libre y no hay enlaces peptídicos con los que pueda reaccionar este reactivo. De esta manera, la glicina dio una prueba negativa. Además en la reacción xantoprotéica da negativo porque carece de grupos aromáticos.

VI.

CONCLUSIONES

•

Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo ya que cumplen muchas funciones

•

Las proteínas están constituidas por aminoácidos por los cuales los métodos se basan en el reconocimiento de los aminoácidos

•

Al realizar las diferentes pruebas con la albúmina se pudo comprobar experimentalmente efectivamente que se trata de una proteína

•

Las proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas (mercurio ,cobre ,plomo) formando precipitados

•

En las reacciones donde se obtuvo precipitación se debió a un cambio en el estado físico de la proteína , mientras que en la coagulación se ha producido un cambio en el estado físico y en la estructura química por eso es irreversible

VII. BIBLIOGRAFÍA • •

http://www.monografias.com Ediciones Pamer

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• •

http://es.wikipedia.org/wiki/Proteínas http://www.proteinas.org.es

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