Informe Nº2 Laboratorio De Bioquimicaii

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE INGENIERÍA INDUSTRIAL Y DE SISTEMAS ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO Nº 2 BIOQUÍMICA 2 TEMA:

_________Extracción de ADN_____

INTEGRANTES: CÓDIGO

APELLIDOS Y NOMBRES

CORREO ELECTRÓNICO

2008015460

Peña Moran María Isabel

[email protected]

2008015683

Salome Ordoñes Vanessa

[email protected]

2008003532

Salvatierra Ccachulli Amys Celestina

[email protected]

2008235371

Serrano Yarleque Soraida Brigitte

[email protected]

2008013626

Zambrano Sayas Linda Lady

[email protected]

DOCENTE: Ing. Guillermo Chumbe Gutiérrez

Semestre 2009 – II

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I.

INTRODUCCIÓN

ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes están formados. La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. Por eso que en este informe de laboratorio mostramos, su definición y algunos conceptos y conocimientos que debemos tener y están relacionados a este tema; y también contiene la práctica de laboratorio que realizamos y los cálculos correspondientes.

II.

MARCO TEÓRICO ÁCIDOS NUCLEÍDOS

Son moléculas constituidas por C, H, O, N y P. Relacionados con la conservación, constituye el material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes están formados. Se componen de un pequeño grupo de unidades monomericas denominadas nucleótidos, unidos mediante enlaces covalentes fosfodiester. Tenemos: • •

ARN ADN

•

El ADN:

Esta formado por dos cadenas de polinucleotidos complementarios y dispuestos en doble hélices sus bases nitrogenadas son adenina, timina, citosina, guanina; carecen de uracilo. La complementación de bases se debe a la formación de enlaces tipo puente de hidrogeno.

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•

La extracción de ADN de una muestra celular:

Se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Para esto tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. .

III.

MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Y REACTIVOS: Para la siguiente determinación se utilizo lo siguiente:

3.1 Materiales • • • •

Gradilla Colador o Centrífuga Rallador mortero

3.2 Muestra • • • •

Cebolla Ajos Tomate Leche

3.3 Material de vidrio UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 3 de 11

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• • • •

Tubos de ensayo Varillas de vidrio Vasos de precipitado de 150 – 250 ml (12 unidades) Pipetas

3. 4 Reactivos • • • • •

Agua (destilada o mineral) Sal de mesa Bicarbonato sódico Detergente líquido o champú Alcohol isoamílico a 0ºC.

3.5 Equipos • •

Nevera Balanza analítica

METODOLOGìA:

La extracción de ADN requiere una serie de métodos básicos. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

IV. •

DESCRIPCIÓN DE LA PRÁCTICA

Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sódico. 5 ml de detergente líquido o champú.

AGUA DESTILADA:

120ml

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SAL DE MESA:

1,5g

BICARBONATO DE SODIO:

5g

CHAMPU:

5ml

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La solución TAMPON

•

Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

Tomate

•

cebolla

ajos

leche

Triturar la muestra con un mortero. Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.

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•

Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.

•

Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.

ALCOHOL ISOAMÍLICO:

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AJOS:

Se añade 10ml de alcohol isoamílico a 0ºC a cada caldo molecular…

TOMATE:

LECHE:

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CEBOLLA:

•

Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado. Ajo

Tomate

Leche

Cebolla

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V.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Describir lo encontrado en la experiencia realizada 1. Tubo de ensayo ( Cebolla) : la coloración que presenta es blanquecina se pequeñas muestras de ADN 2. Tubo de ensayo ( ajos): la coloración que presenta amarillento pálido donde también podemos apreciar pequeñas muestras de ADN 3. Tubo de ensayo (Tomate): la coloración presenta rojiza, fragmentos de ADN en la parte Central. 4. Tubo de ensayo (leche): la coloración de tipo cremosa, mayor conglomeración de fragmentos de ADN.

Resultados finales de la Practica de la Extracción de ADN

VI.

C IONES

ONCLUS

•

A modo de conclusión podemos decir que este informe ha dado a conocer aspectos de la vida natural perceptible como imperceptible a muestras sentidos, es decir, explica aquello que podemos ver a simple vista como lo que no lo podemos ver tan fácilmente.

•

El método utilizado para la extracción de DNA, permite purificar en un grado relativamente alto (porque depende con la precisión de la toma de muestras y UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 10 de 11

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de procedimiento su éxito) y pudimos determinar que es factible utilizarlo en posteriores ocasiones ya que es muy fácil de utilizar y se presta para varias aplicaciones.

VII. BIBLIOGRAFÍA •

http://www.cienciahoy.org.ar/hoy08/adn.htm

•

http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la _ciencia_a_tu_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn. htm

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Editorial Aduni tercera edición de biología y anatomía

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http://html.rincondelvago.com/experimentos.html AUTOR Julián Esteban Londoño

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