Les Bacillus

Les Bacillus

Aspect microscopique Bacill es Gram + pré sen tan t un e s pore À l’E F : mo biles le plu s s ouvent par cilia tur e p ér itr ich e

Dis tin ctio n de tro is gro up es: Bacillu s à spor e o vale non dé forman te, Bacillu s à spor e o vale dé forman te , Bacillu s à spor e ro nde dé forman te

Ob se rv atio n a u ME B

Forme v égétativ e : bacil les à bo uts arr ondis

Forme de r és istance : sp ore dan s u n envir onn ement f av orable perme t le dé ve loppemen t d’un n ouve au Bacillu s.

Bacillus anthracis Ob se rv atio n mi cr osco piq ue Gran d bacille ( 5 µm de lo ng, 1 µm de large ), Gram +, Fo rman t un e s pore o valaire cen trale n on dé formant e. immo biles ca psulé Car actèr es bi och imi ques : AAF, gl uco se + , n on e xig ean t, VP + (caractè re de la clas sif icatio n des Bacillu s), g élat inase +, u réas e - , malto se +, sa cc haro se + Il é lab or e un e to xin e co mp ren an t tro is f acte urs agis sa nt en syn er gi e: • facteur I  o edé mato gène • facteur II  immun ogèn e • facteur II I lé ta l

Les milieux de culture des Bacillus Gélose à l’amidon Gélo se n utritiv e à 1% d’amido n de r iz ou de p omme de te rr e Ensemencer par u ne str ie cen tr al e à partir d’ une sus pensio n bacté rien ne. Ou en faisan t 5 ou 6 dé pôts d’ö se sur la gélo se

Incu ber 2 4 h eures à 37° C

Gélose à l’oeuf Gélo se try pticas e-soja à 10 % de jaun e d’œuf sté rile Ensemencer par u ne str ie cen tr al e à partir d’ une sus pensio n bacté rien ne. Ou en faisan t 5 ou 6 dé pôts d’ö se sur la gélo se

Incu ber 2 4 h eures à 37° C

Milieu TCA

Source N

Composition Peptone trypsique de caséine Chlorure de sodium Sulfite de sodium Cystine Rouge de phénol Gélose ED

pH = 6,8 à 7

20 g 5g 0,5 g 0,5 g 0,017 g 2,5 g qsp 1 L

Sources minérales Source de C et N

Indicateur de pH

Ensemencement •Régénére r les mi lie ux 2 0 min au B M à 100° C. •Refro idir les tu bes à 45°C . •Inco rp ore r le s ucr e dé sir é p our un e co nce ntratio n fi na le de 1 % (10g.L -1 ). •So lidif ier le s milieux s ous l ’eau fro ide . •Enseme ncer p ar p iq ûre cen tr ale. •Incu ber 2 4 heure s à 3 7°C.

Milieu de Mossel Composition Extrait de viande Peptone Mannitol Chlorure de sodium Rouge de phénol Agar ED

pH = 7,1

Source N

1g 10 g 10 g 10 g 0,025 g 12 g qsp 1 L

Sources de carbone Sources minérales

Indicateur de pH

Au mo me nt de l’emp lo i, aj outer à 9 0 mL de milieu: • 10 mL de jaun e d’œ uf dil ué au ½ dan s de l’e au phy sio logiq ue • 1, 2 , 5 ou 1 0 mL de p olymy xin e à 1 mg/ mL ( Inhibiteur ) C’es t u n milieu d’iso leme nt sé lectif de s Ba cillus de l’e spèce Bacillu s cer eus à p artir des al ime nts ou de s selle s.

Ensemencement

Iso le men t p ar la tech nique de s quadr an ts .

Gélose au lait Gélo se blan che à 2,5 à 3 % d’a gar en s olutio n dan s l’e au dans laq uelle o n ajo ute l a même q uanti té de lai t sté rile.

Enseme ncer en fai san t 5 ou 6 dé pôts d’ö se s ur la g élos e Incu ber 2 4 h eures à 37° C

Gélose à l’amidon

Lecture des milieux

Reco uvrir de lu go l l a gélo se ap rè s cul ture

Gélose à l’œuf

Pas de co lora tio n n oire a uto ur des cul ture s: abs ence d’amido n  il a été hydr olys é p ar les bacté ries , tes t positif Colo ratio n n oire autour de s cul ture s: p rés en ce d’amido n  te st négatif

Lecture dir ecte : Éclai rciss emen t du milieu de cultu re  les bactérie s o nt hy dro lysé l es lécithines du jaun e d’œ uf , tes t positif Pas de chan ge men t du mi lieu  te st négatif

Gélose Mossel Colo nies ro uges en to urée s d’ un h al o opaq ue et blan ch âtr e  suspicion de Bacillu s cer eus , LECITHINASE +++

Colo nies ro uges  pas d’utili satio n de man nito l p ar les bactér ies  MA NNI TO L Pré sen ce d’u n hal o: hy droly se des lécithines par u ne lécithin as e, en cho line solu ble e t diglycér ide in soluble q ui pré cip ite dan s l e mil ie u en fo rman t un tro uble.

Gélose au lait Lecture dir ecte ap rès cu lture

Halo cl air a uto ur de la cu lture  hyd ro lyse de la ca séine , tes t p os itif Pas de mo dif icatio n du mili eu autour de l a cul ture  te st n égatif , la c asé in e n ’e st pas hyd ro lysé e.

Correction du TP

1er jour

N° impair: Bacilles en chaînette Gram +

N° pair: Bacilles en chaînette Gram + présence d’une spore déformante dans le bacille.

2nd jour Coloration des spores au vert de Malachite

N° pair: présence d’une spore centrale ovoïde déformante

Lecture du VF N° impair: culture en surface  AS 1ère orientation: bacilles Gram +, mobiles, catalase +, VP+, non exigeants,(sporogène), AS  orientation vers le genre Bacillus. N° pair: culture dans tout le tube  AAF 1ère orientation: Bacilles Gram +, mobiles, VP+, non exigeants, sporogènes, AAF  orientation vers le genre Bacillus.

Lecture des milieux CTA N° impair

gluco se Virage de l’indicateur de pH  glucose +

xylos e Virage de l’indicateur de pH  xylose +

arabino se Virage de l’indicateur de pH  arabinose +

N° pair

gluco se Virage de l’indicateur de pH  glucose +

xylos e Pas de virage de l’indicateur de pH  xylose -

arabino se Pas de virage de l’indicateur de pH  arabinose -

Lecture de la gélose à l’amidon (n°pair et impair) Pas de coloration autour de la culture  absence d’amidon qui a été hydrolysée par l’α-amylase des Bacillus.

Lecture de la gélose au lait (n°pair et impair) Présence d’un halo d’éclaircissement autour de la culture  de la caséine a été hydrolysée par les protéases des Bacillus.

Lecture de la gélose à l’œuf n° pair Présence d’un halo clair autour de la culture  les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus.

n° impair Pas de modification autour de la culture  les lécithines n’ont pas été hydrolysées.

Lecture de la gélose de Mossel n° pair

Colonie rose  pas d’utilisation du mannitol par les Bacillus  MANNITOL Présence d’un halo clair autour de la culture  les protéines du jaune d’oeuf ont été hydrolysées par les protéases des Bacillus.

Présence d’un halo opaque autour de la culture  les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus.

Suspicion de Bacillus cereus Identification de l’espèce: Bacillus présentant divers enzymes (α-amylase, lécithinase, protéases), glc +, xylose-, arabinose -, culture caractéristique sur Mossel  Bacillus cereus.

Lecture de la gélose de Mossel n° impair

Colonie jaune  Utilisation du mannitol par les Bacillus  MANNITOL +

Absence d’un halo opaque autour de la culture  les lécithines n’ont pas été hydrolysées par les Bacillus.

Il s’agit d’un Bacillus autre que Bacillus cereus Identification de l’espèce: Bacillus présentant divers enzymes (α-amylase, protéases), glc +, xylose+, arabinose + Bacillus subtilis (tableau p 132 du livre).