Les Anaerobies

Les anaérobies

Aspect microscopique Bacill es Gram + pré sen tan t un e s pore À l’E F : mo biles le plu s s ouvent par cilia tur e p ér itr ich e

Sp ore tr ès ré sis tan te, n on dé tru ite à 100° C p en da nt 3 à 5 heure s.

Classification Elle se fait selon leur habitat, leurs caractères morphologiques et culturaux et leur pouvoir pathogène. On distingue: •la flor e tell urique : bactéries saprophytes du sol et commensales des cavités naturelles de l'homme et des animaux. Exemple : le genre Clostridium. Règle appliquée pour les conserves industrielles : 10 min à 120°C. •la flor e d e Vei ll on : bactéries commensales des voies respiratoires, digestives et génitales de l'homme et des animaux et qui ne peuvent survivre dans le sol, non sporulées. Exemples : nombreux genres comme Bacteroides, Peptococcus, Mobiluncus, Fusobacterium.

Pouvoir pathogène Cl ostridium tetan

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Forme v égétativ e : bacil le s à bo uts car rés en ch aîn ette s plus o u mo in s longu es Gr am + Forme de r és istance : spore dan s u n enviro nn ement f av orable p ermet le dé ve loppemen t d’un n ouve au Cl ostr idium tetani . Prés ent dan s le so l et les p oussière s  tétanos

• Le tétanos est secondaire à l'introduction dans l'organisme de spores de Clostridium tetani consécutive à un traumatisme. • Si l'anaérobiose est suffisante (plaies profondes, multiplication de bactéries aérobies associées), les formes végétatives apparaissent par germination des spores. • Cependant, la multiplication bactérienne reste localisée à la porte d'entrée, la maladie est uniquement due à la toxine. • La toxine, libérée au cours de la multiplication entre par endocytose par les terminaisons nerveuses du site infecté. • Elle empêche la libération d'inhibiteurs du motoneurone (glycine, GABA) et provoque une paralysie spastique. (muscle restant en contraction)

Clostridium botulinum Ob se rv atio n mi cr osco piq ue Gran d bacille ( 5 µm de lo ng, 1 µm de large ), Gram +, Fo rman t un e s pore o valaire ter min al e défo rman te . Ca ractèr es bio chimi ques : ANS, gluc ose + , mo bile.

Clostridium botulinum est l'agent d'une intoxication alimentaire, le botulisme. La maladie n’est pas due à la bactérie mais à l’ingestion de sa toxine présent dans un aliment mal stérilisé. C’est une toxine thermolabile (sensible à la chaleur), il y a risque de contamination uniquement lors de l’ingestion d’aliments non chauffés. L'intoxication se traduira par une paralysie des muscles lisses essentiellement.

Clostridium perfringens Obs erv atio n a u ME B Gran d bacille ( 5 µm de lo ng, 1 µm de large ), Gram +, Fo rman t un e s pore o valaire ter min al e défo rman te .

Responsable de gangrènes gazeuses post-traumatiques, de toxi-infections alimentaires et d'entérites nécrosantes. C'est l'anaérobie le plus répandu dans l'environnement (sol, eau, air, poussières). C'est aussi un commensal des flores de l'intestin, du vagin ou des voies aériennes supérieures de l'Homme et des animaux. Sa présence dans les eaux est un critère de contamination fécale.

Angine fuso-spirochétienne de Vincent • Angine ulcéro-nécrotique accompagnée d'une fièvre élevée et d'une réaction ganglionnaire de voisinage. • Le diagnostic est bactérioscopique avec la présence d'une bactérie de type Fusobacterium et d'une bactérie de type spirochète. • Le traitement de cette angine est simple à base de pénicilline G.

Les milieux de culture des Clostridium Milieu de SCHAEDLER Bouillon trypticase soja Polytone Sg glucose Extrait de levure Tris-hydroxyméthylaminométhane 3g Hémine L-cystéine ED pH = 7,6

Utilisation:

10 g 5g 5g

Source N et de C, de vitamines Tampon (maintien du pH constant)

0,01 g 0,40 g qsp 1 L

Facteur de croissance (synthèse des cytochromes) Acide aminé, réducteur

Ce milieu peut-être : • enrichi par addition de vitamine K3. • sélectif par addition d'inhibiteurs . • solide par addition d'agar : gélose Schaedler.

Bouillon ou gélose Schaedler simple: bactéries non exigeantes du genre Clostridium . Bouillon ou gélose enrichi(e): bactéries exigeantes de la flore de Veillon. Milieu de culture utilisé pour les bactéries anaérobies exigeantes : gélose Schaedler + vitamine K3 + sang frais à une concentration de 5%.

Milieu de Rosenow cystéine Composition Peptone trypsique Extrait de viande de bœuf Chlorure de sodium Chlorhydrate de Cystéine Glucose Indicateur d’Andrade (fushine acide dans de l’ED) ED

10 g 3g 2g 0,3 g 2g 10 mL

Source N et de C Sources minérales Acide aminé, réducteur Source énergétique carbonée Indicateur d’oxydo réduction

qsp 1 L

pH = 7,2

Ajouter dans le tube: Un morceau de marbre Un morceau de cervelle de boeuf

Ensemencement Régénér er le milieu 20 mi n au BM à 10 0°C p our ass ure r l’an aé ro bie La p ré sen ce d’u n réd ucteur ren fo rce l’an aéro bie Ensemen ce r en p rofo nde ur l e tube en év itan t les bu lle s d’air Recouv rir de pa raf fin e fo ndue Incuber 24 he ure s à 37° C.

Milieu MRS Composition Peptone trypsique de caséine Macération de viande Extrait de levure Acétate de sodium Citrate d’ammonium Phosphate bipotassique Tween 80 Sulfate de magnésium Sulfate de manganèse Glucose Agar ED

15 g 500 mL 5g 5g 2g 2,4 g 1 mL 0,2 g 0,05 g 20 g 12 g qsp 1 L

Source N et de C, vitamines et minéraux, d’acides aminés Inhjbiteurs (concentrations ) Source minérale Apport d’acides gras Sources minérales Source énergétique de C

pH = 6,5 inhibiteur C’es t u n milieu d’is oleme nt s électif e t enrichi de s Lacto b acill us u tilis é p our l’is olement e t l e dé nombre men t de ces bactérie s da ns le s pro duits laitier s.

Ensemencement

Iso leme nt p ar la techni que de s quadr ants et incu batio n s ous atmo sp hèr e à C O2 .

Lecture des milieux

Milieu de Rosenow Cystéine

Colo ratio n ro se à ro uge ca rmin au niv eau de la cerv elle  ferme ntation du glu co se

Pas de co loration r os e  glu co se Déco lorati on du mili eu v oir vir ag e au vert  les ba ctéries s ont ré ductrices Appar itio n de bulles , déco llemen t de la p araffi ne  pro du ctio n de gaz par les bacté ries

Type respiratoire

Gélose de Schaedler en anaérobios

Cu lture s ur l a hau te ur du tube, à l’exce ptio n de la surface en co ntact av ec l’O 2 de l’ai r  bacté ries A NS. Colo nies blan ch es con to urs ré gu lier s, bo mbé es ,typ e S  cul tur e s ur milieu riche en an aé ro bio se

n° impa ir: Bac il le s Gra m -  cult ure sur mi lieu riche , bac té rie s exige ant es faisa nt pa rtie de l a f lo re de ve ill on

Colo nies blan ch es co nto urs ré gu lier s, bo mbée s, type S  cul ture s ur milieu riche e n an aé ro bio se

n° pa ir: Bac illes Gra m + sp orogè ne  bact éries faisant part ie de l a flore telluri que .

Gélose MRS Petites co lonies bla nche s  carac téris tiq ues de s Lacto bacillu s

Cul ture s ur le s boî te s m ise s en anaé robio se et sous at mos phè re à CO 2  bac té ries cu lt iv ant en abse nc e d’ O 2 né ce ss aire à l a fe rme nt at ion d u lact ose du l ait  product io n d’aci des re spons able s de l’ app ari tion du ca illé.

Frottis du yaourt

Bacilles Gram +  caractér istiq ues de s Lacto bacill us

Coq ues en ch aî nette Gr am +  carac téris tiq ues de s Lacto co ccu s

La f er mentati on du yao urt est due à de ux typ es de bactér ie p ro voquan t le caillé du l ait p ar p rod uctio n d’acide s lo rs de l’util is atio n du lacto se.