Kit Zr Plant Rna Mini Prep

Protocolo del Kit ZR Plant RNA Mini Prep

23/07/09

Añadir 48 ml de etanol al 100% o 52 ml de etanol al 95% a 12 ml del Buffer de Lysis si este no viene preparado. 1._Transferir una muestra de planta finamente macerada al ZB Bashing Bead Lysis Tube y añadir 800 µl del Lysis Buffer. 2.-Asegurar en batidor provistos de bolas con un tubo de 2 mili litros titular de montaje y procesar. 3._Centrigufar la columna a 12,000 rpm durante un minuto. 4._Tomar 400 µl del sobrenadante y pasarlo al Zymo Spin III Column. Centrifugar a 800 rpm por 30 segundos y conservar el eluido. 5._Añadir 0.8 volúmenes de alcohol absoluto al eluido que estará en el tubo colector. 6._Pasar la mezcla al Zymo-Spin II Column que deberá estar colocado en su tubo colector. Centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos y desechar el eluido. 7._Añadir 400 µl de la solución RNA Prep Buffer, centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos y desechar el eluido. 8._Añadir 800 µl de RAN Wash Buffer a la columna, centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos y desechar el eluido. Repetir este paso agregando 400 µl de RNA Wash Buffer. 9._Centrifugar la columna a 12,000 por dos minutos. 10._Retirar la columna del tubo colector y colocarla en un tubo estéril (libre de ADasa y ARasa). Añadir 25 µl de agua estéril (libre de ADNasa y ARNasa) y dejar reposar por un minuto. 11._Centrifugar A 10,000 rpm por 30 segundos para separar el ARN de la columna. El ARN puede o no se usado después del momento de su extracción de no se utilizado conservar a -70ºC. 12._ Si el ARN será usado transferir el eluido a la Zymo Spin IV-HRC Spin Filter en un tubo estéril (libre de ADNasa y ARNasa) y centrifugar a 8,000 rpm por un minuto.