Micologia-diagnostico Poe El Laboratorio

LABORATORIO

Procedimientos de cultivo y aislamiento de hongos Q.C CIRENIA HERNANDEZ TREJO

OBTENCION Y PROCESO DE MUESTRAS

Consideraciones generales 

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Tomar muestra del lugar adecuado Usar tecnica esteril Enviar material adecuado Enviar y procesar con prontitud Etiquetar y enviar diagnosticos probables

Origen de especimenes   

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Sangre Médula osea Líquido cefalorraquideo Cutáneo (pelo, uñas y piel) Tracto respiratorio Tejidos

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Orina Vagina y cuello uterino Heridas Lesiones subcutáneas Lesiones mucocutáneas

Sangre   

Se realiza como hemocultivo 8 ml Vacutainer con polietanol sulfonato de sodio

Médula ósea 

Se colectan 3-5ml de médula ósea

Líquido cefalorraquideo 

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Se colecta asepticamente, la mayor cantidad posible. Del sedimento se toma muestra para examen directo e inoculacion en medios aerobicos y anaerobicos

Especimenes cutaneos, pelo  

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Se toman tallos pilosos (10) Si son pelos rotos se frota la piel cabelluda con hoja de bisturi Colocar el material entre dos portaobejtos o en caja de Petri o incluso en un sobre limpio

Especimenes cutáneos, uña  

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Se limpia la uña con alcohol 70% Con bisturi estéril, se rebaja las capas superficiales y se obtiene queratina mas profunda Se extrae material bajo la lámina Se coloca el material en caja de Petri estéril

Especimenes cutáneos, piel   

Limpiar la piel con alcohol 70% frotar con hoja de bisturi estéril colocar el material obtenido en caja de Petri estéril

Tracto respiratorio, esputo  

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Se colecta por la mañana Se retira la dentadura y se enjuaga la boca Debe ser de una espectoracion profunda colectar en recipiente estéril

Tracto respiratorio, exudado faringeo  

Se puede usar hisopo Preferentemente con abatelenguas estéril que se coloca en tubo estéril manteniendose húmedo

Tracto respiratorio, secrecion bronquial 

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Si es lavado bronquial, por lo general se contamina con flora de cavidad oral. Si es punción transtraqueal no estará conta- minada.

Tracto respiratorio 

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La secrecion mucosa espesa deberá ser pro- cesada para exponer la mayor cantidad de microorganismos Centrifugar para examen directo y cultivo Si se hace un estudio micobacteriologico separar la muestra en dos tubos antes del

Tejidos 

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Las biopsias seran tomadas incluyendo el borde y el centro de la lesion Se mantienen húmedas con solución salina Buscar granos, absesos para cultivar Picar y homogenizar el resto del tejido para cultivar

Orina   

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La primera de la mañana Metodo ideal: cateter No conviene de muestras de 24 hrs. Centrifugar para examen directo y cultivo No exceder de 12-14 hrs a 4°

Vagina y cervix uterino  

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Se puede usar un par de hisopos Uno se coloca en medio de transporte Otro se usa para extendido y examen directo

Heridas, abscesos y secreciones 

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Hacer raspado de fondo y borde de lesiones Aspiración de absesos Hacer extendidos en busqueda de granos y elementos fungicos

EXAMEN DIRECTO DE ESPECIMENE S

Examen directo  

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Fresco en solucion salina Fresco con Lactofenol azulalgodon Preparacion con Hidroxido de Potasio Tincion de Gram Tincion para AAR Tincion con tinta china

Solución salina Cloruro de sodio Agua destilada

0.85 gr 100 ml

- Colocar una gota del especimen y una gota de solucion salina - Las estructuras micoticas se observaran ligeramente verdes, brillantes y birrefringentes

Examen directo Esferulas de C. immitis en esputo

Lactofenol Azul-algodón Cristales de fenol Acido lactico Glicerina Agua destilada Azul algodón solución acuosa 1%

20 gr 20 ml 40 ml 20 ml 2 ml

- El azul algodon se fija a la quitina de los hongos - Se puede hacer una preparacion permanente

Examen directo

Histoplasma

Critptococo

Examen directo

Aspergillus Mucor

Hidroxido de Potasio Hidroxido de potasio, cristales Glicerol Agua destilada

10 g 20 ml 80 ml

De mayor utilidad en observacion de escamas, pelo y uñas, para aclarar la queratina Se deja reposar 20 min o se calienta suavemente Las estructuras fungicas se observan birrefringentes

Examen directo

Examen directo

Examen directo Hifa tabicada en KOH

Examen directo

Examen directo

Parasitacion endotrix

Examen directo

Examen directo

Agentes de Piedra

Examen directo

Malazesia

Tincion de Gram Los hongos suelen ser Gram + Los mas frecuentemente encontrados con esta tincion son levaduras

Examen directo

Pseudohifas y blastoconidias

Examen directo

Malazesia

Examen directo

Actinomicetos

Tincion de Calcofluor blanco - Se trata de un agente blanqueador usado en la industria textil y del papel - Se une a la quitina de los hongos - Se interpreta con el microscopio de fluorescencia

Examen directo

Pelo parasitado

Tincion para AAR - Para Actinomicetos - Coloracion de Ziehl-Neelsen - Coloracion modificada de Kinyoun

Tinta china Tinta china Merthiolate 1:1000 Tween 80 1:1000

15ml 3ml 0.1ml

- Es de utilidad para reconocer la capsula de C. neoformans - Se observa con el condensador del microscopio a la máxima intensdad de luz

Examen directo

Criptococo

Otras tinciones  

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Tinción Hematoxilina y Eosina Tinción de Gomori para actinomicetos Tinción de PAS Tinción de mucicarmin para Criptococo Tincion de Wright Tinción de Fontana-Masson