Informe Seminario Diagnostico Virologico.docx

Universidad de Oriente Núcleo Bolívar – Virología Universidad De Oriente Núcleo Bolívar Escuela de ciencias de la salud “Dr. FRANCISCO BATTISTINI CASALTA” Departamento de Bioanálisis Virología

Tema Nº1: Diagnostico Virológico.

Profesora: Zulinan Vasquez

Integrantes del grupo: Br. Aragón María CI:25.901.361 Br. Arnias Uriel CI:23.986.987 Br. Carrisales Jhoselin CI:26.384.187 Br. Sánchez Milagro CI:26.829336 Br. Vahlis Petter CI:25.933.187

Ciudad Bolivar, octubre 2018

Universidad de Oriente Núcleo Bolívar – Virología Western Blot Es una prueba para el estudio de proteínas, descrito por primera vez por Towbin, que permite la detección de una sola proteína dentro de una muestra biológica. La especificidad se logra mediante la utilización de un anticuerpo que reconoce y se une a un epítope único de la proteína de interés. Esta puede estimar el tamaño de una proteína, confirmar la presencia de modificaciones post-traduccionales y comparar cuantitativamente los niveles de proteína entre muestras. a)

Preparación de la muestra: Extracción de las proteínas de las muestras biológicas mediante disrupción mecánica o química. b) Electroforesis en gel de Acrilamida: Las proteínas en el extracto se separan de acuerdo a su tamaño mediante electroforesis. Se prepara un gel de acrilami-da, bisacrilamida. El dodecilsulfato de sodio (SDS) añadido al gel se une a las proteínas y confiere, de forma proporcional a la masa de cada proteína, una carga negativa a cada una de ellas. c) Transferencia electroforética a una membrana: Las proteínas son transferidas electroforéticamente a un soporte rígido o membrana, dónde quedan inmovilizadas. d) Hibridación del Anticuerpo: La membrana con las proteínas inmovilizadas debe tratar-se para bloquear las zonas con ausencia de proteínas y así evitar la unión no específica de los anticuerpos. A continuación se incuba con un anticuerpo primario dirigido contra el epítopo específico de la proteína diana. Tras varios lavados de la membrana, se adiciona un anti-cuerpo secundario marcado que se unirá de forma específica al anticuerpo primario, proporcionando una forma de detección. e) Detección de las Bandas: Después de un lavado de la membrana para eliminar el anticuerpo no unido, se pro-cede a detectar la localización de la banda en la membrana. Para la detección de quimioluminiscencia, se utiliza un anticuerpo secundario conjugado con el enzima peroxidasa (HRP); la adición de un sustrato de HRP provoca una reacción enzimática que da como resultado final la emisión de luz. Dicha luz pue-de ser detectada en una película de rayos X, o de forma digital, mediante un sistema de captación de imágenes. La detección de fluorescencia se basa en la captación de luz emitid por sustancias fluoróforas conjugadas con el anticuerpo secundario.

ELISA (Enzyme-Linked-Immunosorbent Assay) Los métodos ELISA son los que contienen una mezcla de péptidos sintéticos o recombinantes, y en algunos casos una combinación de ambos, frente a los que se miden los anticuerpos IgG que tiene la muestra. Cuando se indica que un suero es reactivo con esta metodología se está afirmando que tiene anticuerpos frente a alguno o todos los antígenos empleados en la prueba, pero no sabemos frente a cuál o cuáles. 

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La molécula de captura es fijada a una fase solida (tubos, microplacas, etc.) y con la incubación de la muestra (suero o plasma) a temperatura y tiempos definidos, formando así el complejo Ag-Ac, eliminándose los excedentes de reactivos y muestra que no intervienen en la reacción mediante lavados con soluciones tamponadas. La detección del Ag, o el Ac, o el complejo inmune Ag-Ac es colorimétrica, para lo cual se usa un sustrato cromógeno, que es desdoblado por la enzima de marcación. Luego se lee la absorbancia a una determinada longitud de onda, que puede transformar el resultado de un valor cualitativo a uno cuantitativo.

Universidad de Oriente Núcleo Bolívar – Virología Hemaglutinación Las Hemaglutininas son glicoproteínas capaces de unirse a receptores específicos en la membrana de glóbulos rojos de diferentes especies animales pueden ponerse en evidencia en el sobrenadante de los cultivos, poniendo en evidencia la infección de esas células a través de la unión de los glóbulos rojos a la superficie celular. Propiedad descubierta en 1941 por Hirst McCLelland, para el virus de la influenza, es utilizada para cuantificar virus. Es un método simple, de un solo paso, que implementa suero y que a menudo se usa para la detección de antígenos virales en muestras clínicas. Estos dependen de la fijación inicial de anticuerpos antivirales específicos sobre eritrocitos. Estas pruebas en general se complementan o se confirman por medio de otros ensayos debido al elevado porcentaje de reacciones inespecíficas. Técnica Western Blot

Utilidad 

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ELISA (Enzyme-LinkedImmunosorbent Assay)

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Hemaglutinación

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Diagnostico Permite la detección de una sola proteína dentro de una muestra biológica. Estima el tamaño de una proteína. Confirmar la presencia de modificaciones posttraduccionales.

 Orthomyxovirus.  Adenovirus.  Rotavirus. • VIH.  Enfermedad de Lyme.  Encefalopatía Espongiforme Bovina. (Enfermedad de las vacas locas)

Son económicos. Poseen gran estabilidad. Poseen gran versatilidad porque permiten desarrollar diferentes formatos de acuerdo a la molécula que se desea poner en evidencia.

 Hepadnavirus. • VHA. • VHB. • VHC.  Retrovirus. • HIV.  Hantavirus.  Herpesvirus. (Citomegalovirus Humano)  Togavirus. (Rubeola)  Virus Epstein-Barr.  Grupos sanguíneos.  Enfermedad de Chagas.  VDRL. (Venereal Dysease Research Laboratory)  Adenovirus.  Rotavirus. (En heces el más importante, mostrando una buena sensibilidad cuando se lo compara con el EIA)

Técnica rápida y barata. Tiene buena sensibilidad y especificidad cuando es utilizada junto con otras técnicas serológicas.