Identificacion De Neisseria

IDENTIFICACION DEL GENERO NEISSERIA Características del género Neisseria El género Neisseria incluye bacterias con morfología de diplococcos Gram-negativos con una reacción positiva a las pruebas de oxidasa y catalasa. Conjuntamente con los géneros Moraxella (incluyendo Branhamella catarrhalis, actualmente Moraxella catarrhalis), y Kingella conforman la familia Neisseriaceae. Algunas de las características que permiten diferenciar entre los géneros de la familia Neisseriaceae se muestran en el cuadro 3.

En el género Neisseria, el cual tiene la mayor importancia clínica dentro de la familia Neisseriaceae, se incluyen las siguientes especies: • • • • • • • •

N. gonorrhoeae N. meningitidis N. lactamica N. cinerea N. polysaccharea N. subflava N. sicca N. mucosa

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1

• •

N. elongata N. flavescens

IDENTIFICACION DEL GENERO NEISSERIA

Cuadro 3. Características diferenciales de los géneros de la familia Neisseriaceae. Características Género Morfología celular Catalasa Ácido a partir de glucosa

Neisseria

Diplococos¹

Branhamella2

Diplococos

Kíngella

Cocobacilos

Moraxella

Bacilos

+ + + +

V3

+ –

+ –

–

Oxidasa

+ +

¹ N. elongata tiene forma bacilar. ² Actualmente la especie B. catarrhalis se incluye en el género Moraxella. ³ La producción de ácido depende de cada una de las especies del género.

Los diplococos Gram negativos del género Neisseria se asemejan a granos de café y algunos producen cápsula. Las especies de Neisseria se caracterizan por ser de metabolismo aerobio y el crecimiento de las especies patógenas se ve favorecido mediante incubación en una atmósfera altamente húmeda y enriquecida a 5-8% de CO2. Su temperatura de crecimiento es óptima entre los 35-37oC y tienen requerimientos nutricionales complejos. Algunas especies son capaces de degradar unos pocos carbohidratos, mientras que otras son completamente incapaces de hacerlo, mientras que las especies saprófitas, especialmente, producen pigmentos carotenoides. Las especies patógenas primarias para el ser humano son N. gonorrhoeae y N. meningitidis. N. gonorrhoeae es nutricionalmente mucho más exigente que N. meningitidis, de manera tal que puede crecer únicamente en medios enriquecidos como agar chocolate, pero no puede crecer en agar sangre, mientras que N. meningitidis puede crecer tanto en agar sangre como en agar chocolate.

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N. gonorrhoeae es el agente etiológico de la gonorrea, una enfermedad de transmisión sexual. N. gonorrhoeae es un patógeno humano obligatorio y no hay reservorios animares. N. gonorrhoeae es una bacteria altamente sensible a la desecación y cambios de temperatura, por lo que la infección se presenta al haber contacto íntimo y prolongado de mucosas y secreciones. El periodo de incubación de la infección varía de de 2 a 7 días. Posterior a este período, en hombres se presenta una descarga purulenta abundante, disuria y si no se da tratamiento pueden presentarse complicaciones como epididimitis y prostatitis. En más del 50% de las mujeres se puede presentar una infección asintomática o con sólo un aumento de las secreciones vaginales. En las infecciones sintomáticas hay un aumento de secreción vaginal, disuria, dolor abdominal y alteraciones menstruales. Las muestras clínicas de origen genital deben ser inoculadas en medios enriquecidos pero selectivos, como el agar Thayer-Martin modificado (MTM) o el agar Martin-Lewis (ML), que contienen cuatro antibióticos que ayudan a suprimir el crecimiento de bacterias contaminantes: vancomicina (MTM, 3 μg/ml; ML, 4 μg/ml), colistina (7.5 μg/ml), lactato de trimetoprim (5 μg/ml) y un agente antifúngico (MTM, nistatina, 13.5 μg/ml; ML. anisomicina,20 μg/ml).

Las colonias de N. gonorrhoeae a las 24 horas de incubación son pequeñas, de 0.5 a 1.0 mm de diámetro, generan una coloración blanca-grisácea y son levantadas y brillantes. • •

N. meningitidis es agente etiológico de bacteremia y meningitis epidémica. N. meningitidis puede presentar una cápsula de polisacáridos extracelulares, la cual se ha clasificado en trece diferente serotipos: A, B, C, D, X, Y, Z, W125, 29E, H, 1, K y L. N. meningitidis coloniza las colonizada la mucosa respiratoria, N. meningitidis puede alcanzar sangre y generar una meníngococcemia, la cual puede evolucionar a coagulación intravascular diseminada, choque endotóxico y necrosis en glándulas suprarrenales, además de un cuadro de meningitis aguda.

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IDENTIFICACION DEL GENERO NEISSERIA •

La infección invasiva por N meningitidis puede provocar rápidamente la muerte del paciente.

Para el aislamiento de N meningitidis a partir de muestras clínicas como sangre y líquido cefalorraquídeo se puede utilizar agar sangre y agar chocolate. El crecimiento en agar sangre de un aislamiento primario de N meningitidis es variable, aunque posteriormente la bacteria puede adaptarse al medio durante los subcultivos. Luego del período de incubación bajo las condiciones adecuadas, las colonias de N. meningitidis son de 1.5 mm de diámetro aproximadamente, redondas, de superficie y borde lisos, con aspecto húmedo y brillante. Algunas colonias son mucoides por la cápsula dando una coloración que va de blanco a gris.

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IDENTIFICACION DEL GENERO NEISSERIA Branhamella (Moraxella) catarrhalis es considerada como parte de la flora normal, aunque se ha relacionado como agente causante de infecciones pulmonares y de oído medio. Esta es una bacteria no fastidiosa que crece tanto en agar chocolate como en agar sangre, dando una morfología colonial similar a las de Neisseria, pero que puede ser fácilmente diferenciada de las especies de Neisseria mediante la prueba de ADNasa.

Cuadro 4. Características de N. gonorrhoeae, N. meningitidis, M catarrhalis y K denitrificans. Característica

N meningitidis

M. catarrhalis

K. denitrificans

N. gonorrhoeae

–

V1

+

+

Beige a gris, transparente, lisa, 1-3 mm

Rosada, opaca, seca, 13 mm

Beige a gris, transparente, lisa, 1-2 mm

Glucosa

+

–

+

+

Maltosa

–

+

–

–

Lactosa

–

–

–

–

Sacarosa

–

–

–

–

Fructosa

–

–

–

–

Reducción de nitratos

–

–

+

+

ADNasa

–

+

–

–

Crecimiento en agar sangre Morfología colonial en agar chocolate

Beige a gris, transparente, lisa, 0.5 - 1mm

Ácido a partir de:

V, variable.

IDENTIFICACION DEL GENERO NEISSERIA

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DIA 1 Neisseria • • • • •

•

• Entrega de cultivos. • Describir la morfología colonial. • Realizar frotis y tinción de Gram. • Describir la morfología microscópica. • Sembrar la bacteria en una placa de agar chocolate y en una placa de agar sangre. • Incubar las placas por 18-24 horas a 35-37oC en atmósfera con 5-8% CO2.

La susceptibilidad a los antimicrobianos se puede determinar también por la prueba de difusión en disco u obtenerse las CIM con Etest® (AB Biodisk). Este documento presenta los métodos para las pruebas de susceptibilidad de N. gonorrhoeae a los antimicrobianos con los antibióticos recomendados comúnmente por la OMS para el tratamiento primario de la infección: ciprofloxacino, azitromicina, ceftriaxona,cefixima y espectinomicina [OMS 2001].

DIA 2 Neisseria 1• Describir la morfología colonial. 2• Realizar frotis y tinción de Gram. 3• Describir la morfología microscópica. 4• Realizar la prueba de catalasa.

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6• Realizar la prueba de oxidasa.

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FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS

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PRUEBA DE LA ENZIMA SUSTRATO

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ESQUEMAS DE IDENTIFICACION

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• •

REFERENCIAS-MÁS INFORMACION: Myndi, Perrilla,Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos de Patógenos Bacterianos de Importancia para la Salud Pública en el Mundo en Desarrollo,2002. Rojas, Norma, Bacteriología clínica,2006, facultad de microbiología, Universidad de costa rica.

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