Departamento de Microbiología, Inmunología y Parasitología Facultad de Medicina Universidad de Buenos Aires Cursada de Micología 2006
Diagramación General de la Cursada Seminarios Clases Teóricas Trabajos Práctico
Seminarios Generalidades del reino fùngico (8 y 9 de agosto) Micosis superficiales (10 y 11 de agosto) Micosis Subcutáneas (17 y 18 de agosto) Micosis Sistémicas Endémicas (24 y 25 de agosto) Micosis Oportunistas I Candidiasis, Criptococosis, Neumocistosis (31/8 y 1/9) Micosis Oportunistas II Aspergilosis y Cigomicosis (5 y /9 de septiembre) Lugar: Piso 12, 13 o aula A piso 14. Bajar los seminarios de Internet:
http://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/main.htm
Trabajos Prácticos Micosis Superficiales (15 y 16 de agosto) Micosis Subcutáneas (23 y 23 de agosto) Micosis Sistémicas Endémicas (29 y 30 de agosto) Micosis Oportunistas (7 y 8 de septiembre) Lugar: Piso 14 lado Uriburu Bajar las guías de Internet:
http://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/main.htm
Bibliografía Recomendada
SEMINARIOS Y CLASES TEORICAS DE LA CURSADA
MICROBIOLOGÍA MÉDICA. 1996. Basualdo J.; de Torres, A.; Cotto C. y col. Editorial Atlante. MICOLOGÍA MÉDICA 1995. López Martínez y col. Editorial Atlante MICOLOGÍA MÉDICA ( ILUSTRADA). 1993 Arena, Roberto. Editorial Interamericana. 2º edición, 2003. MICOLOGÍA MÉDICA. 1993 Torres Rodriguez, José María y col. Editorial Masson.. LECCIONES DE MICOLOGÍA CLÍNICA. 1997. Negroni,, Ricardo. Editorial La Agenda.
Generalidades del Reino Fungi
Industria alimenticia Infección Alergia Micetismo Ingesta de hongos tóxicos
Hongos
Industria farmacológica Biodegradación
Micotoxicosis Ingesta de alimentos contaminados con METABOLITOS fúngicos.
CLASIFICACIÓN DE LOS SERES VIVOS
HONGOS DEFINICIÓN: Son organismos eucariot as, aclorófilos, cuya pared celular contiene quitina y su membrana plasmática ergosterol. Son heterótrofos, absorbentes, saprobiontes y a veces parásitos. ¾El cuerpo se llama thallo y puede ser: unicelular Îhongos levaduriformes pluricelulares Î hongos miceliales ¾ No forman tejidos. Son inmóviles. ¾ La respiración es aerobia estricta o anaerobia facultativa. Pueden fermentar azúcares. ¾ La reproducción se produce por medio de esporos ( de origen asexuados o sexuados).
Hongos
Pared celular
Membrana celular
Célula de levadura Mitocondrias Núcleo Nucleolo Retículo endoplásmico
Hifa
Célula fúngica
PARED CELULAR DE LOS HONGOS ¾ Constituída por varias capas de estructura microfibrilar embebidas en una matriz amorfa. FIBRILARES: quitina y celulosa MATRIZ AMORFA Polímeros de a) la glucosa (glucanos con enlaces β(1-3) β (1-6) α(1-3) Cryptococcus neoformans tiene β (1-6)* b) de la manosa (mananos) c) galactosamina Proteínas
A veces Melanina
PARED CELULAR DE LOS HONGOS Función:
Îmantener la forma Î evitar el shock osmótico (esferoplastos) Î sitio de unión de enzimas Î interfase con el medio Î propiedades antigénicas Î sus componentes ( β glucan, mananos, zimosan) son reconocidos por los receptores Toll
MEMBRANA CITOPLASMÁTICA
Compuesta por: Fosfolípidos, carbohidratos y Proteínas: a) estructurales b) funcionales (permeasas) Dentro de los lípidos, es importante el ergosterol,por ser el blanco de varios antifúngicos. Posee invaginaciones denominadas mesosomas.
Función: 1. Regula el pasaje de sustancias. 2. Posee permeabilidad selectiva por las permeasas 3. Posee enzimas de la cadena respiratoria
Citoplasma
Mitocondrias: Contienen ADN autoreplicable.. Varían según las condiciones de nutrición de la célula.
Retículo endoplásmico: origina microvesículas,, transporta enzimas hidrolíticas..
Aparato de Golgi: rudimentario
Ribosomas: tienen peso molecular de 80 S, pueden estar aislados o formando polirribosomas..
Inclusiones: vacuolas lipídicas
Núcleo
Las células fúngicas pueden ser uni ó multinucleadas. Pueden ser homocarióticas ó heterocarióticas.. Poseen nucléolo. La membrana nuclear es doble y posee poros. El número de cromosomas es variable.
Cápsula
Presente en algunas levaduras (C. neoformans) Compuesta por mucopolisacáridos Es un factor de virulencia con propiedades antifagocíticas
Nutrición
Los hongos son heterótrofos. Obtienen sus alimentos del medio externo por la liberación de ). enzimas hidrolíticas (nutrición lisotrófica). Las enzimas degradan los sustratos los que son absorbidos en forma selectiva y activa. Los hongos son capaces de sintetizar sus propias proteínas , carbohidratos y lípidos. Necesitan pequeñas cantidades de oligoelementos ( Fe, Zn, Cu, vitaminas)
Digestión extracelular y Nutrición absortiva Polímeros insolubles del huésped
Transp orte interno
Poro Septal Hifa invasiva
Productos solubles Tejido del huésped
Levadura invasiva
¿Que elementos debería contener un medio de cultivo para permitir el desarrollo fúngico?
Medio de cultivo
Agar glucosado de Sabouraud Peptona 10g Glucosa 20g Agar 20g Agua csp 1000ml pH 7
MEDIOS DE CULTIVOS Medio de lactrimel Harina 14 g Leche en polvo 14 g Miel 7 g Agar 2 g Agua destilada 1000 ml pH 7
THALLO
VEGETATIVO
FRUCTIFICACION
Nutrición
Reproducción
Crecimiento
Conservación de la especie a distancia
Resistencia
Fijación
THALLO LEVADURIFORME Elementos esféricos u ovoides de 3 - 80µ de diá metro Crecen por brotación ó gemación, la separación se produce por estrangulación ó tabicamiento.
Pseudomicelio: brotes que no se separan de la célula madre, sino que se alargan formando cadenas de células elongadas. Las colonias son pastosas o cremosas. Elementos de resistencia clamidoconidios
LEVADURAS
THALLO FILAMENTOSO = MICELIO ¾ Constituído por estructuras denominadas HIFAS de crecimiento apical y lateral. ¾ Macroscópicamente son algodonosos, aterciopelados, pulverulentos, y poseer distintos colores. ¾ Micelio tabicado: los que poseen tabiques, 2 a 5 µ de diámetro ¾Micelio cenocítico: los que no poseen tabiques, 10 a 15 µ de diámetro ¾ Las hifas pueden ser hialinas o pigmentadas ( melanina)
ASPECTO MACROSCÓPICO DE LAS COLONIAS DE HONGOS MICELIALES
y al microscopio?? ????
ASPECTO MICROSCÓPICO DE LOS MICELIOS
Ú NGICAS ESTRUCTURAS FÚ
THALLO VEGETATIVO LEVADURIFORME
PSEUDOMICELIO
FILAMENTOSO
TABICADO hialino pigmentado
CENOCÍTICO
THALLO DE FRUCTIFICACIÓN ASEXUADA = ANAMORFA = IMPERFECTA ¾ Los núcleos realizan solo mitosis ESPOROS ASEXUADOS A. Esporos asexuados externos = CONIDIAS Según tamaño ¾ macroconidias ¾ microconidias
THALLO DE FRUCTIFICACIÓN Esporos asexuados externos = CONIDIAS Según su origen ¾ blastoconidias ¾ blastoartroconidias
¾ artroconidias B. Esporos asexuados internos:
¾ESPORANGIOS--esporangiosporos
THALLO DE FRUCTIFICACIÓN SEXUADA = TELEOMORFA = PERFECTA ¾ Se unen células haploides ¾ Con núcleos de distinta polaridad (- ) y (+) Îplasmogamia Îcariogamia Îmeiosis Zigosporos Îmitosis
Ascosporos Basidiosporos
ESPOROS SEXUADOS ¾ Esporos
sexuados internos
se generan dentro de fruto
División
CIGOTE Î micelio cenocíticos ASCOS Îlevaduras y micelio tabicado Cleistotecio
Peritecio Cleistotecio
Apotecio
ESPOROS SEXUADOS ¾Esporos
sexuados externos
Basidiosporos baside
Clasificación División: - Chytridiomicota (sin importancia) - Zygomycota (micelio cenocítico y zigosporos en cigotes) - Ascomycota (levaduras u hongos filamentosos ascos con ascosporos) - Basidiomycota (basides con basidiosporos)
Hongos anamorfos (Deuteromycetes)
TAXONOMÍA ¾ Los hongos se identifican en el laboratorio según su Fructificación o reproducción asexuada
Histoplasma capsulatum - Ajellomyces capsulatus CLASIFICACIÓN BASIDIOMYCOTA (baside- basidiosporos) ASCOMYCOTA (ascos- ascosporos) ZYGOMYCOTA (cigotes- zigosporos)
DIMORFISMO ¾ Los hongos dimórficos son los que desarrollan distinta
morfología dependiendo del medio en que se encuentran. ¾El principal estímulo para el dimorfismo es la temperatura y los nutrientes.
Fase parasitaria, en los tejidos del hospedero Fase saprofítica, en el suelo HONGOS DIMÓRFICOS
Paracoccidioides brasiliensis . Histoplasma capsulatum Coccidioides posadasii ( Argentina). Blastomyces dermatitidis. Coccidioides immitis (EEUU) Sporothrix schenckii. Penicillium marneffei
Fase saprofítica (suelo)
Ciclo de vida de Coccidioides immitis
Fase parasitaria (tisular)
DROGAS ANTIFUNGICAS Modos Acción
ESTRUCTURA DE LA DROGAS ANTIFUNGICAS
POLIENES
Caspofungina, anidulafungina , micafungina
Anfotericina B, nistatina
AZOLES
Imidazoles: Ketoconazol. Triazoles: Fluconazol, itraconazol, voriconazol, posaconazol, ravuconazol
PIRIMIDINA FLUORINADA
5-Fluorocitosina
DERIVADOS TETRAHiDROFURANOS
Sordarinas, azasordarinas
MORPHOLINA
Amorolfina
PEPTIDOS-NUCLEOSIDE
Nikomycina Z
ALLILAMINAS
Terbinafina, butenafina
EQUINOCANDINAS
OTRAS
Griseofulvina
MODOS de ACCION
Como actúan los antifúngicos Síntesis de pared :*Inhibidores de la síntesis de glucanos: equinocandinas * Inhibidores de la síntesis de quitina: nikomicina Función de membrana Anfotericina B, nistatina Síntesis del ergosterol Azoles, allilaminas, morpholina
División nuclear griseofulvina Síntesis de los ácidos nucleicos: 5-Fluorocitosina Síntesis proteica: Sordarinas, azasordarinas
ANFOTERICINA B genera poros en la membrana
Síntesis Ergosterol Allilaminas
X
Escualeno
2,3 oxidoescualeno Azoles
Lanosterol Fluconazol Lanosterol 14 α demetilasa Gen ERG 11
X
Voriconazol Itraconazol
Zymosterol
Ergosterol
Morfolinas
5-fluorocitosina Inhibe la timidilato sintasa Inhibe la síntesis de DNA
5-fluoro-UTP Incorporado en RNA Interrumpe la síntesis proteica
EQUINOCANDIN S: Caspofungina
Inhibición de síntesis β-(1-3) glucanos (de glucan si ntasa ) Actúa en los puntos de activo crecimiento y de ramificación (sitios de activa síntesis de pared en los micelios) Brotes fracasan en la separación de la célula madre Se producen células osmóticamente sensibles
Tipos de resistencia a los antifúngicos INTRÍNSECA: Ningún miembro de la especie fúngica es sensible. Deberíamos hablar de insensibilidad Candida krusei y fluconazol PRIMARIA Una especie normalmente sensible al antifúngico posee una CEPA que expresa resistencia natural a la misma droga . NUNCA tuvo contacto previo con la droga SECUNDARIA Cuando una CEPA previamente sensible adquiere resistencia al compuesto después del contacto. C. albicans y fluconazol
RESISTENCIA A LOS ANTIFÚNGICOS MECANISMOS RESISTENCIA A LOS ANTIFÚNGICOS
Permeabilidad disminuída
Eflujo activo
Inactivación enzimática
Modificación del blanco de acción
sobreproducción de la enzima blanco
Alteración de una vía metabólica
Mutaciones en el gen que codifica a la enzima
Determinación de la sensibilidad antifúngica 1 - MÉTODOS DE DIFUSIÓN EN AGAR Sensibilidad al fluconazol
Discos: de una determinada potencia del antifúngico
2 - MÉTODOS DE DILUCIÓN CIM Antifúngico
Susceptible
Fluconazol
≤ 8 µg/ml
Itraconazol
≤ 0.125 µg/ml
Susceptible Dosis Dependient e 16-32ug/ml (SDD) 0.25-0.5 µg/ml
Resistente
≥ 64 µg/ml ≥ 1 µg/ml
MUCHAS GRACIAS HASTA LA PROXIMA