Reacciones Febriles

Suero Control Positivo: Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los antígenos febriles en una suspensión. MATERIALES REQUERIDOS, NO INCLUIDOS

ANTÍGENOS FEBRILES AGENTE DE DIAGNÓSTICO

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Pipetas serológicas

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Placa de Reacción

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Agitador

RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la hemólisis. MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA

SIGNIFICADO CLÍNICO La infección causada por microorganis-mos de diversas especies produce entre otros síntomas una marcada elevación de la temperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. enteritis , así como las paratifoideas causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo causado por el genero Rickettsias . La infección por estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la producción de anticuerpos que pueden ser detectados con el antígeno específico. Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rickettsia sp, el antígeno empleado para la determinación de anticuerpos es el de Proteus OX-19, el cual presenta una reacción cruzada con bacterias del genero Rickettsia. La reacción de Huddleson es un método serológico que detecta anticuerpos contra B. abortus, B. melitensis y B. Suis, agentes causales de la brucelosis; también conocida como fiebre de malta o fiebre ondulante por el cuadro febril característico que se presenta. FUNDAMENTO La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente produciendo una reacción de aglutinación macroscópica. CONTENIDO ●

Tífico “O” - Salmonella typhi; Antígeno somático, pH: 6.5 ± 1.0

●

Tífico “H” - Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH: 6.5 ± 1.0

●

Paratífico “A” - pH: 6.5

● ● ●

± 1.0 Paratífico “B” - pH: 6.5 ± 1.0 Proteus OX-19 - pH: 6.5 ± 1.0 Brucella abortus - pH: 6.5 ± 1.0

Suero control negativo: Suero de conejo el cual no ha sido inmunizado contra ningún antígeno, por lo que no muestra ninguna aglutinación con los antígenos en suspensión.

Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se este usando. NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba. 1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar: 0.08 mL, 0.04 mL, 0.02 mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR TOTALMENTE CLARO). 2. Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme. 3. Añadir 30 µL de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 µL). 4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero. 5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante 2 minutos. 6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica. 7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS El grado de aglutinación se registra como sigue:

4+

Aglutinación del 100% de los organismos

3+

Aglutinación del 75% de los organismos

2+

Aglutinación del 50% de los organismos

1+

Aglutinación del 25% de los organismos

-

Aglutinación del 0% de los organismos

El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una aglutinación del 50% de microorganismos (2+) Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente equivalentes a las diluciones para prueba en tubo como se muestra a continuación.

VOLUMEN DEL SUERO

TITULO

0.08 mL

1 : 20

0.04 mL

1 : 40

0.02 mL

1 : 80

0.01 mL

1 : 160

1. Todos los sueros por probar deberán estar totalmente claros y libres de contaminación bacteriana.

0.005 mL

1 : 320

2. No caliente el suero antes de probarlo.

9. Registrar el título del suero en el cual la ultima dilución de una aglutinación sea 2+. PRECAUCIONES

3. Agite bien el antígeno antes de utilizarlo para asegurar una suspensión uniforme.

MÉTODO DE TITULACIÓN EN TUBO: Mezcle bien la suspensión de antígeno mediante agitación suave; prepare una dilución 1:20 del antígeno a utilizar en solución salina. 1. Colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla para cada antígeno a probar, marcándolos del 1 al 6 y el tubo 7 como control. 2. Añadir al tubo 1, 0.9 mL de solución salina y 0.5 mL a los 6 tubos restantes. 3. Añadir 0.1 mL del suero a probar al tubo número 1, mezcle bien y transfiera 0.5 mL al tubo número 2. 4. Continúe esta operación hasta el tubo número 6, eliminar 0.5 mL de esta dilución. El tubo 7 (Control negativo) tendrá únicamente solución salina. 5. Añadir 0.5 mL del antígeno diluido 1:20 a cada uno de los 7 tubos. 6. Agitar bien la gradilla para mezclar el antígeno y el suero e incubar en baño de agua. El tiempo y temperatura recomendado es el siguiente. Antígeno

Temperatura

Tiempo de incubación

Tífico “O”

48-50ºC

18-24 Horas

Tífico “H”

37ºC

2 Horas

S. paratyphi “A” y “B”

48-50ºC

2 Horas

Brucella abortus

37°C

48 Horas

Proteus OX-19

37ºC

18-24 Horas

7. Después de la incubación, saque la gradilla que contiene los tubos del baño y observe la aglutinación. La utilización de una fuente de luz directa contra un fondo negro dará mejores condiciones para la lectura. 8. Registrar los resultados como sigue : 4+

3+

2+

1+

Negativo

Todos los organismos 100% aparecen sedimentados en el fondo del tubo y el sobrenadante es totalmente claro.

4. El antígeno se debe mantener en refrigeración a 2-8ºC cuando no se utilice. 5. No congelar. Se recomienda la utilización de sueros control Positivo y Negativo probados en paralelo con la muestra de suero para asegurar al analista que el antígeno bacteriano en uso es capaz de reaccionar con su anticuerpo homólogo y mostrar cómo serán los resultados esperados en muestras de suero positivas y negativas. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infección anterior. No siempre se presenta producción de aglutininas en infecciones bacterianas. 2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tífica puede producir aglutininas contra antígenos Proteus. 3. En la reacción de Huddleson, títulos de 1:80 pueden consi-derarse ya de significado clínico. Nota: El diagnóstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el laboratorio clínico y el médico, ya que la elevación del título en la muestra de suero con sintomatología reciente y la muestra de suero en fase convaleciente indicará la exactitud del diagnóstico. BIBLIOGRAFÍA 1. Spink, W.W. : Amer, J. Clin, Path., 22 :201, 1952. 2. Dyer, R.E. : J.A.M.A., 124 : 1165, 1944. 3. Welch, H. & stuart, C.A. : J. Lab. Clin. Med., 21 :411, 1936 4. Felix, A. : Brit. MD. J., 11 :597, 1942. Rev.: 22/02/02 IN-384

Aproximadamente el 75% de los organismos se encuentran sedimentados y el sobrenadante es ligeramente turbio.

Fabricado en México por:

Aproximadamente el 50% de los organismos se encuentran sedimentados y el sobrenadante es moderadamente turbio.

Estudios Clasa No. 9

Aproximadamente el 25% de los organismos se encuentran sedimentados y el sobrenadante es turbio. No se observa aglutinación y la suspensión es turbia.

LABORATORIOS MICSA

Col. Jardines Tecma México, D.F.

para: Laboratorios Licon S.A. Viveros del Rocío No. 33 Col. Viveros de la Loma C.P. 54080 Tlalnepantla, Edo. de México Tel.: (55) 5362-0299 Fax: (55) 5362-1792