Dna-plasmídico.docx
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AISLAMIENTO DE DNA PLASMÍDICO Nombres: Mayén Bernal David; Fuentes Jiménez Luis Eduardo; Suárez Gómez Alexis Gabriel Grupo: 4QM2. Sección: 1 Correos: [email protected] [email protected] [email protected]
INTRODUCCION: Los plásmidos existen naturalmente en muchas especies diferentes de bacterias. Fueron descubiertos por los médicos y los científicos debido a que a menudo son portadores de genes que le dan a sus bacterias huéspedes resistencias a uno o más antibióticos. En efecto, antibióticos históricamente potentes perdieron su efectividad contra muchas de las infecciones bacterianas de la actualidad debido a que los plásmidos se dispersan entre las especies bacterianas mediante transferencias horizontal. Los plásmidos que se emplean para la investigación de DNA recombinante son derivados a partir de estos plásmidos naturales; sin embargo, son típicamente mucho más simples, dado que solo contienen los elementos de DNA mencionados. Los plásmidos son moléculas circulares de DNA de doble cadena que se encuentran naturalmente en varias especies de bacterias. Estos elementos genéticos son extracromosomales, se replican de manera independiente del cromosoma bacteriano y codifican para una gran variedad de enzimas que confieren resistencia a antibióticos y metales pesados, degradan complejos orgánicos y/o producen toxinas, etc. Dadas estas características, los plásmidos han sido empleados como vectores o vehículos de clonación de moléculas de DNA foráneas que permiten el transporte y manipulación de este. Es así como, hoy en día, se dispone de una gran variedad de plásmidos sintéticos de naturaleza modular con características diversas para lograr ya sea la clonación de un fragmento de DNA genómico, de cADN o de PCR, o para la expresión de estos y obtención del respectivo producto proteico. Entre las propiedades de los plásmidos que favorecen su utilización como vector de clonación se incluyen: su pequeño tamaño que hace el DNA sea fácil de aislar y de manipular ; su naturaleza circular que hace que el DNA sea más estable durante la extracción; su origen de replicación independientemente del control directo de la replicación del cromosoma bacteriano; su múltiple número de copias, de manera que se aumenta la eficiencia de la extracción del DNA plasmídico; y la presencia de marcadores seleccionables, tales como genes de resistencia a antibióticos, haciendo así más fácil
la detección y selección de las bacterias que contienen plásmidos. OBJETIVO: Aislar DNA plasmídico bacteriano, comprobando dicho aislamiento mediante electroforesis en gel de agarosa RESULTADOS:
DNA
-Superenrrollado.
-Lineal. RNA
-Circular relajado.
Figura 1: Gel de electroforesis a base de agarosa, para el corrimiento del DNA plasmídico, identificando las tres posibles isoformas: superenrrollado, circular relajado y lineal. DISCUSIONES: Para la obtención de DNA plasmídico se usan bacterias con el plásmido, los cuales codifican para una gran variedad de enzimas que confieren resistencia a antibióticos y metales pesados, principalmente para resistir a la presencia de estas sustancias. Después de obtener el DNA plasmídico de las bacterias sometidas a antibióticos, este se somete a varias soluciones; la solución 1 (solución de GTE) la cual tiene una fuente de carbono que es la glucosa, un regulador osmótico que se le Tris y el EDTA, la función de esta solución es retirar el cofactor y neutralizar. Después se añadió la solución 2 la cual contienen SDS y NaOH esto para lisar la bacteria con la presencia del detergente y que se libere el contenido de la célula. Después se añadió la solución 3 la cual tiene acetato de potasio el cual tiene
un efecto de Salting out para separar las macromoléculas. Después se adiciona la solución 4 la cual contiene Isopropanol la cual precipita al DNA plasmídico que es el de interés. Después se agrega la solución 5 la cual tienen la regulador tris-EDTA la cual sirve para regular el pH y que el DNA se encuentre con carga para que se pueda separa en la electroforesis. Cabe recalcar que las soluciones 1 y 5 que tiene EDTA sirve como agente quelante para el calcio y el magnesio presente, los cuales son cofactores de nucleasas las cuales degradan el DNA, es por ello que se utiliza y el DNA se encuentre completo para su identificación.
CONCLUSIONES Logramos observar la presencia de las distintas estructuras del DNA plasmídico de unas bacterias esto por medio de la electroforesis. Bibliografía: - Concepción J. Puerta B. Prácticas de biología molecular. México: editorial Pontificia Universidad Javeriana.c; 2005. 36p.
INTRODUCCION: Los plásmidos existen naturalmente en muchas especies diferentes de bacterias. Fueron descubiertos por los médicos y los científicos debido a que a menudo son portadores de genes que le dan a sus bacterias huéspedes resistencias a uno o más antibióticos. En efecto, antibióticos históricamente potentes perdieron su efectividad contra muchas de las infecciones bacterianas de la actualidad debido a que los plásmidos se dispersan entre las especies bacterianas mediante transferencias horizontal. Los plásmidos que se emplean para la investigación de DNA recombinante son derivados a partir de estos plásmidos naturales; sin embargo, son típicamente mucho más simples, dado que solo contienen los elementos de DNA mencionados. Los plásmidos son moléculas circulares de DNA de doble cadena que se encuentran naturalmente en varias especies de bacterias. Estos elementos genéticos son extracromosomales, se replican de manera independiente del cromosoma bacteriano y codifican para una gran variedad de enzimas que confieren resistencia a antibióticos y metales pesados, degradan complejos orgánicos y/o producen toxinas, etc. Dadas estas características, los plásmidos han sido empleados como vectores o vehículos de clonación de moléculas de DNA foráneas que permiten el transporte y manipulación de este. Es así como, hoy en día, se dispone de una gran variedad de plásmidos sintéticos de naturaleza modular con características diversas para lograr ya sea la clonación de un fragmento de DNA genómico, de cADN o de PCR, o para la expresión de estos y obtención del respectivo producto proteico. Entre las propiedades de los plásmidos que favorecen su utilización como vector de clonación se incluyen: su pequeño tamaño que hace el DNA sea fácil de aislar y de manipular ; su naturaleza circular que hace que el DNA sea más estable durante la extracción; su origen de replicación independientemente del control directo de la replicación del cromosoma bacteriano; su múltiple número de copias, de manera que se aumenta la eficiencia de la extracción del DNA plasmídico; y la presencia de marcadores seleccionables, tales como genes de resistencia a antibióticos, haciendo así más fácil
la detección y selección de las bacterias que contienen plásmidos. OBJETIVO: Aislar DNA plasmídico bacteriano, comprobando dicho aislamiento mediante electroforesis en gel de agarosa RESULTADOS:
DNA
-Superenrrollado.
-Lineal. RNA
-Circular relajado.
Figura 1: Gel de electroforesis a base de agarosa, para el corrimiento del DNA plasmídico, identificando las tres posibles isoformas: superenrrollado, circular relajado y lineal. DISCUSIONES: Para la obtención de DNA plasmídico se usan bacterias con el plásmido, los cuales codifican para una gran variedad de enzimas que confieren resistencia a antibióticos y metales pesados, principalmente para resistir a la presencia de estas sustancias. Después de obtener el DNA plasmídico de las bacterias sometidas a antibióticos, este se somete a varias soluciones; la solución 1 (solución de GTE) la cual tiene una fuente de carbono que es la glucosa, un regulador osmótico que se le Tris y el EDTA, la función de esta solución es retirar el cofactor y neutralizar. Después se añadió la solución 2 la cual contienen SDS y NaOH esto para lisar la bacteria con la presencia del detergente y que se libere el contenido de la célula. Después se añadió la solución 3 la cual tiene acetato de potasio el cual tiene
un efecto de Salting out para separar las macromoléculas. Después se adiciona la solución 4 la cual contiene Isopropanol la cual precipita al DNA plasmídico que es el de interés. Después se agrega la solución 5 la cual tienen la regulador tris-EDTA la cual sirve para regular el pH y que el DNA se encuentre con carga para que se pueda separa en la electroforesis. Cabe recalcar que las soluciones 1 y 5 que tiene EDTA sirve como agente quelante para el calcio y el magnesio presente, los cuales son cofactores de nucleasas las cuales degradan el DNA, es por ello que se utiliza y el DNA se encuentre completo para su identificación.
CONCLUSIONES Logramos observar la presencia de las distintas estructuras del DNA plasmídico de unas bacterias esto por medio de la electroforesis. Bibliografía: - Concepción J. Puerta B. Prácticas de biología molecular. México: editorial Pontificia Universidad Javeriana.c; 2005. 36p.
