Isolasi, Karakterisasi Dan In Vitro Kegiatan Farmakologi Dari.pdf

Pharmacogn J. 2018; 10 (2): 384-393

Artikel asli

Sebuah multifaset Journal di bidang Natural Products dan Farmakognosi www.phcogj.com | www.journalonweb.com/pj | www.phcog.net

Isolasi, Karakterisasi dan in vitro Kegiatan farmakologi dari Tagetes Erectus Linn Resmi S, Divya V Nair, ATHULYA Subhash, Rose Jose, Wisnu V, Subin Mary Zachariah *

ABSTRAK Tagetes erectus ( keluarga: Asteraceae), umumnya dikenal sebagai 'marigold Afrika', adalah tanaman hias luas di India. Tanaman ini telah digunakan dalam obat-obatan tradisional di India dan di tempat lain dalam pengobatan dingin, bronkitis, rematik dan peradangan. Quercetin flavonoid telah diisolasi dari ekstrak metanol tanaman dengan kromatografi kolom dan diidentifikasi oleh co-TLC, perbandingan titik leleh, UV, IR dan NMR. konten Quercetin telah diperkirakan 1,22 (± 0,26)% dalam ekstrak metanol Tageteserectus

Resmi S, Divya V Nair, ATHULYA Subhash, Rose Jose, Wisnu V, Subin Mary Zachariah *

Departemen Farmasi Kimia dan Analisis, Amrita Sekolah Farmasi, Amrita Vishwa Vidyapeetham, Kochi-682.041, Kerala, INDIA. Korespondensi Dr Subin Mary Zachariah Departemen Farmasi Kimia dan Analisis, Amrita Sekolah Farmasi, Amrita Vishwa Vidyapeetham, Kochi-682.041, Kerala, INDIA. Telepon No:

Seluruh tanaman berdasarkan metode HPTLC menggunakan systemchloroform pelarut: metanol (8,5: 1,5). Minyak esensial diisolasi oleh hidrodistilasi (hasil minyak 0,04% v / w) dan 25 senyawa yang terdiri 93,9% dari konstituen diidentifikasi dengan analisis GC-MS. Monoterpenoid didominasi minyak (78,5%), dengan piperitone sebagai senyawa utama (40,1%) diikuti oleh terpinolene (12,7%) dan limonene (12,0%). Itu in vitro tes antioksidan dari ekstrak metanol menunjukkan aktivitas moderat dengan IC50 nilai 109,45 (± 1,22) μ g / ml untuk DPPH radikal uji scavenging dan 201,53 (± 4,48) μ g / ml untuk superoksida pemulungan assay dan quercetin senyawa penanda menunjukkan IC50 nilai 26,40 (± 1,75) dan 13,87 (± 0.54) μ g / ml masing-masing. Mengurangi uji daya juga menunjukkan aktivitas moderat. aktivitas antibakteri ekstrak metanol dan minyak esensial terhadap bakteri gram positif dan gram negatif yang dilakukan dengan menggunakan metode difusi disk. Minyak esensial menunjukkan aktivitas yang luar biasa terhadap organisme diuji, sedangkan ekstrak hanya menunjukkan aktivitas moderat.

Kata kunci: Aktivitas antibakteri, metode difusi Disc, DPPH radikal uji scavenging, Flavonoid, Quercetin, Terpinolene.

PENGANTAR penawaran Fitokimia dengan biosintesis, distribusi alami, isolasi,

dari dua unit isoprena dan seskuiterpen oleh tiga unit

penjelasan struktur dan fungsi logis bio dari berbagai senyawa

isoprena.

kimia yang ditemukan dalam tanaman kingdom.It memiliki aplikasi dalam makanan, pewarna, rasa, kosmetik, nutraceuticals dan industri farmasi. 1

0484-2857900,7903 E-mail Id: subinmaryzachariah @ tujuan. amrita.edu

flavonoid Ini adalah kelompok terbesar yang terjadi secara alami senyawa

MATERIAL DAN METODE Koleksi tanaman Tanaman ini dikumpulkan dari Tirunelveli, Tamilnadu selama Februari 2011 dan disahkan oleh Dr. VJ Dominic, Kepala,

fenolik dengan kerangka dasar 2- fenil benzo- γ-pyrons.

Departemen Botani, SH College, Thevera, dan spesimen voucher

• Tanggal pengajuan: 2017/12/10;

Berbagai jenis flavonoid berbeda dalam tingkat oksidasi dan

diendapkan di Herbarium of Tropical Botanic Garden dan

• Ulasan selesai: 18-11-2017;

dalam pola substitusi.

Research Institute (Herbarium No. TBGT 66.412).

Sejarah

• Tanggal diterima: 27-12-2017

Minyak esensial DOI: 10,5530 / pj.2018.2.64

Minyak atsiri merupakan komponen yang mudah menguap uap tanaman

Pasal Tersedia online

bertanggung jawab atas aroma tanaman dan merupakan terutama dari

http://www.phcogj.com/v10/i2

terpenoid dan beberapa fenolat sederhana dan hidrokarbon. minyak

Persiapan Ekstraksi yang Tanaman dipotong kecil-kecil, teduh kering dan bubuk. Bubuk

esensial terbentuk di kelenjar atau sel khusus. Mereka mungkin memiliki

(50g) menjadi sasaran Soxhlet ekstraksi selama 72 jam

© 2018 Phcog.Net. Ini adalah sebuah artikel

beberapa tindakan septik antibakteri atau anti. Ini minyak aromatik yang

menggunakan petroleum eter, kloroform, dan metanol

OpenAccess didistribusikan di bawah persyaratan

digunakan dalam aration prep- parfum, kosmetik, dan sebagai obat dan

lisensi International Creative Commons Atribusi 4.0 .

berturut-turut. Ekstrak terkonsentrasi pada tekanan rendah

sebagai tambahan makanan. Kimia minyak esensial adalah campuran

menggunakan rotary evaporator untuk menghasilkan 0,402 g

hak cipta

hidrokarbon alifatik, monoterpens, seskuiterpen dan turunannya oksigen mereka. terpenoid ini terdiri dari unit isoprena. Monoterpenes dibuat

ekstrak eter-pet, 0,2348 g ekstrak kloroform dan 0,1929 g ekstrak metanol masing-masing. 2

Mengutip artikel ini: Resmi S, Nair DV, Subhash A, Jose R, Wisnu V, Zachariah SM. Isolasi, Charac- terization dan In vitro Kegiatan farmakologi dari Tagetes Erectus Linn. Pharmacog J. 2017; 9 (1): 73-82.

384

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN

Kualitatif Evaluasi Kimia

sistem pelarut

Uji kimia untuk Deteksi Konstituen kimia

Kloroform: metanol (8,5: 1,5, v / v)

Kuantitas kecil petroleum eter, kloroform dan metanol ekstrak diambil untuk tes kimia berikut

Prosedur solusi metanol ekstrak dan senyawa standar quercetin yang diterapkan pada

Karbohidrat (uji Molish ini)

pelat TLC Pra dilapisi. 15μl dan 20μl tes solu- tion dan 1μl-4μl 0f quercetin standar

Sekitar 1 g ekstrak dilarutkan dalam 1 ml air. Dua tetes larutan alkohol 1% dari α-naftol

yang diterapkan pada pra-dilapisi gel silika F254 TLC plate (E. Merck) ketebalan

ditambahkan. Kemudian, 1 ml conc. H2SO4 hati-hati ditambahkan sepanjang sisi tabung tes sehingga membentuk lapisan yang berat di bagian bawah. warna ungu tua

seragam 0,2 mm. piring ini dikembangkan dalam sistem pelarut 8 cm. Sistem pelarut kloroform: metanol. Setelah pembangunan piring diamati di bawah 254nm.

di persimpangan dua cairan menunjukkan adanya karbohidrat.

Steroid dan Terpenoid (Leibermann-Burchard Test) 10 mg ekstrak dilarutkan dalam CHCl3 kering, menjadi anhidrida asetat ini ditambahkan diikuti dengan beberapa tetes con. H 2 BEGITU 4. Warna hijau menunjukkan adanya steroid dan warna merah muda menunjukkan adanya terpenoid.

Jumlah konten fenolik Metode kolorimetrik dimodifikasi reagen Folinciocalteu ini (FCR) digunakan untuk penentuan total phenolics.0.5ml ekstrak metanol dicampur dengan 5 ml reagen Folinciocalteu ini. Setelah 5 menit, 4ml dari 20% larutan natrium karbonat ditambahkan. Campuran dibiarkan berdiri selama 15 menit dan absorbansi diukur pada 765nm. Jumlah

3) Alkaloid

fenolik diperkirakan sebagai asam Galia setara / g berat kering dari kurva kalibrasi

a) uji Dragendorff 's

menggunakan asam Galia standar (20 μ g-100 μ g) dalam metanol. 4

10 mg ekstrak dilarutkan dalam MeOH dan beberapa tetes Dragendorff 's Reagent ditambahkan. Oranye endapan merah menunjukkan adanya alkaloid.

GC-MS Analisis isolasi Essential Oil

b) uji Mayer

minyak esensial

10 mg ekstrak dilarutkan dalam conc. HCl dan disaring. Beberapa tetes larutan

Seluruh tanaman (segar: 400g) yang dipotong kecil-kecil dan hidro suling menggunakan alat

dituangkan ke pusat kaca arloji. reagen Mayer ditambahkan dalam tetes ke sisi kaca

Clevenger-tipe untuk 3 h. Minyak yang diperoleh dikeringkan natrium sulfat anhidrat dan disimpan

arloji dengan bantuan sebuah batang kaca. Pembentukan endapan putih agar-agar di

dalam kulkas sampai analisis lebih lanjut.

persimpangan dua cairan menunjukkan adanya alkaloid.

kromatografi gas Analisis GC-FID dilakukan pada gas Varian CP-3800 chroma- tograph dioperasikan

c) uji Wagner

dengan injector tidak pisah, dilengkapi dengan CP Sil 8CB menyatu kolom kapiler

Untuk ekstrak menambahkan beberapa tetes reagen Wagner (melarutkan 2g dari 6g yodium kalium

silika (30 mx 0,32 mm, 0,25 m ketebalan film) dengan detektor FID menggunakan

iodida dalam 100ml air) memberikan kemerahan endapan coklat.

nitrogen sebagai gas pembawa pada laju alir 1 mL / menit. Program suhu: injektor

d) uji Hager ini Untuk ekstrak menambahkan beberapa tetes reagen Hager ini (larutan jenuh asam pikrat) memberikan

suhu 220oC, oven 50-230oC suhu di 3oC / menit, suhu detektor 250oC. persentase relatif dari komponen diperoleh dari puncak wilayah laporan persen volatil dari GC-FID.

endapan kuning.

4) Flavonoid

a) uji Shinoda

Gas kromatografi spektrometri massa Analisis GC-MS dilakukan pada Hewlett Packard 6890 gas grafik chromatograph

10 mg ekstrak dilarutkan dalam MeOH. Mg liku ditambahkan ke dalam ini, dan kemudian conc. HCl

dilengkapi dengan 5% PH silang ME siloxane HP-5 kolom kapiler MS (30 mx 0,32 mm,

ditambahkan dalam tetes. Sebuah warna pink menunjukkan ence Pres- dari flavanoids.

ketebalan film 0,25 m) ditambah dengan 5973-seri massa detektor selektif. injeksi pisah dari 1,0 ml minyak esensial dengan helium sebagai gas pembawa pada mode

b) Satu tetes ekstrak di atas ditempatkan pada kertas filter terkena uap amonia.

aliran konstan 1,4 ml / menit dilakukan. Program suhu untuk analisis itu; injektor suhu

Sebuah warna kuning menunjukkan adanya flavonoid.

220oC, oven suhu 60oC untuk 246oC (3oC / min), suhu detektor 250oC. spektrum

5. Saponin

massa: Electron Impact modus (EI +), 70 eV, suhu sumber ion 250oC dan dengan

Ekstrak dilarutkan dalam air dan dikocok dengan baik. pembentukan buih, yang berlangsung untuk waktu

berbagai 40-400μ massa.

yang lama, menunjukkan adanya saponin.

6. Terpenoid

0,5 g bubuk mentah dilarutkan dalam 5 ml metanol. 2 ml ekstrak diperlakukan dengan 1 ml 2, 4-dinitrofenil hidrazin dilarutkan dalam 100 ml 2M HCl. Sebuah warna kuning-oranye diamati sebagai indikasi terpenoid. 3

Standardisasi Standarisasi tanaman atau bagian tanaman dilakukan. Hal ini untuk memeriksa apakah bagian-bagian tanaman sesuai dengan berbagai parameter yang disebutkan dalam pedoman WHO. Berbagai parameter dievaluasi meliputi nilai Ash, nilai Kepahitan, Pembengkakan dan Foaming indeks dll

Kinerja tinggi Lapis Tipis solusi Chromatography Uji

Identifikasi komponen Komponen minyak diidentifikasi oleh MS pencarian perpustakaan, relatif reten- tion indeks (RRI) dihitung sehubungan dengan homolog alkana n dan dibandingkan dengan data literatur dan dibandingkan dengan spektrum massa diterbitkan.

In vitro Antioksidan Tes DPPH Radical Scavenging Activity 2, 2-Diphenyl-1-pikrilhidrazil (DPPH) mengurangi aktivitas secara luas metode yang digunakan untuk skrining fitokimia untuk kegiatan antioksidan mereka. DPPH ditandai sebagai radikal bebas stabil karena delokalisasi elektron cadang lebih molekul. delokalisasi ini juga menimbulkan warna ungu tua, ditandai dengan pita serapan dalam larutan etanol berpusat di sekitar 517 nm. Ketika larutan DPPH dicampur dengan yang dari zat yang dapat menyumbangkan atom hidrogen, maka ini menimbulkan bentuk tereduksi dengan hilangnya warna violet. mewakili

15 mg dari ekstrak metanol dilarutkan dalam 1,5 ml metanol.

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

385

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN

DPPH radikal oleh Z. Dan molekul donor oleh AH, reaksi utama adalah, Z + AH ↔

Dimetil sulfoksida yang diresapi pada cakram kertas No.1 saring Whatman (6 mm diameter). cakram ini kemudian aseptik diterapkan pada permukaan piring agar pada interval baik-spasi. piring ini diinkubasi pada 37 ° C selama 24 jam dan diamati zona

ZH + A. Dimana ZH adalah bentuk dikurangi dan A. adalah radikal bebas yang dihasilkan pada langkah pertama ini. A. akan radikal ini kemudian mengalami reaksi lebih lanjut yang mengontrol stoikiometri keseluruhan. Absorbansi tion solu- dihasilkan diukur pada 517 nm. Parameter

penghambatan termasuk diameter cakram diukur. Kontrol cakram diresapi dengan 10 μ l pelarut (DMSO) dan streptomisin (2 μ g / disc, referensi bagi bakteri) yang digunakan bersama cakram tes di setiap percobaan. 7,8

penting dalam metode ini adalah nilai IC50. IC50 didefinisikan sebagai konsentrasi substrat yang menyebabkan hilangnya 50% dari aktivitas DPPH. 4,5,6

Anti assay jamur Jamur tumbuh dalam kaldu nutrisi selama 24 jam (pH 7,2-7,4) digunakan sebagai inokulum.

% Inhibisi

=

(Absorbansi kontrol Absorbansi - sampel) Absorbansi kontrol

Mueller-Hinton media agar dituangkan ke piring petri dengan kedalaman seragam dari 5 mm

× 100

dan dibiarkan membeku. suspensi mikroba pada 5 x 106 cfu / ml yang tersebar di permukaan media menggunakan kapas steril untuk memastikan pertumbuhan konfluen organisme. Aliquots (10 μ l) masing-masing ekstrak tanaman pada 4 mg / 10 μ l pengenceran di Dimethyl

Superoksida Kegiatan Scavenging

sulfoksida pelarut inert yang diresapi pada cakram kertas No.1 saring Whatman (6 mm

aktivitas scavenging superoksida ditentukan dengan metode Mc-Cord dan Fridovich

diameter). cakram ini kemudian aseptik diterapkan pada permukaan piring agar pada interval

(Mc-Cord dan Fridovich, 1969). Metode ini melibatkan induksi cahaya generasi oksida super dengan riboflavin dan sesuai pengurangan tetrazolium biru nitro (NBT). anion Super oksida (O2) bertindak sebagai elektron reduktor dalam beberapa reaksi termasuk pengurangan quinines, tetra nitro metana, sitokrom C dan nitro diganti aromatik seperti

baik-spasi. piring ini diinkubasi pada 37 ° C selama 24 jam dan diamati zona penghambatan termasuk diameter cakram diukur. Kontrol cakram diresapi dengan 10 μ l dari pelarut (DMSO) dan nistatin (2 μ g / disc, referensi untuk jamur) yang digunakan sisi along- cakram tes di setiap percobaan. 7,8

NBT. Pengurangan NBT untuk formazan biru telah banyak digunakan sebagai probe generasi O2 dalam sistem kimia dan biologi. NBT dalam bentuk teroksidasi adalah larut senyawa kuning dalam campuran berair. pengurangan untuk formazan disertai dengan hilangnya muatan positif mengakibatkan penurunan substansial dalam kelarutan,

HASIL

gangguan cincin tetrazol dengan modifikasi ditandai dari spektrum penyerapan di daerah

pencabutan

tampak dan munculnya warna biru intens. Campuran reaksi (s) yang terdapat EDTA (6 mM), NaCN (3 μ g), riboflavin (2 μ g), tetrazolium biru nitro (50 μ g), KH2PO4 penyangga (67 mM, pH 7,8) dan berbagai konsentrasi ekstrak dalam volume akhir 3 ml. Tabung diterangi dalam terang sinar matahari selama 15 menit. Densitas optik di 560 nm diukur sebelum dan sesudah pencahayaan. Penghambatan generasi radikal superoksida ditentukan dengan membandingkan nilai Bance absor- dari kontrol dengan orang-orang

Tagetes erectus bubuk tanaman (350g) dikemas dalam alat soxhlet. 3 liter pelarut yang digunakan untuk ekstraksi. Bubuk tanaman diekstraksi dengan Petroleum eter (60-80 Hai c), kloroform, dan metanol selama 72 jam setiap. Ekstrak ini terkonsentrasi di evaporator vakum rotary untuk mendapatkan 2,8, 1,6 dan 1,4 g petroleum eter, kloroform, dan ekstrak metanol masing-masing Nilai-nilai ekstraktif diberikan dalam Tabel 1.

dari perawatan. 4,6

fitokimia Screening Ekstrak petroleum eter dari tanaman Tagetes erectus memberikan hasil positif untuk kehadiran Terpenoid. ekstrak kloroform menunjukkan tes positif untuk Terpenoid, Steroid.

% Inhibisi

=

(Absorbansi kontrol Absorbansi sampel) Absorbansi kontrol

ekstrak metanol menunjukkan hasil positif untuk

× 100 Tabel 1: nilai ekstraktif.

Mengurangi metode assay Daya Dalam pengujian ini warna kuning dari larutan uji berubah menjadi berbagai nuansa hijau dan biru tergantung pada kekuatan mengurangi ekstrak. Kehadiran pengecil menyebabkan konversi Fe3 + / ferisianida digunakan dalam metode ini ke bentuk besi. Dengan mengukur pembentukan biru persion di 700nm, adalah mungkin untuk menentukan konsentrasi Fe2 +, penyerapan lebih tinggi

Pelarut

1

2

3

rata-rata

Pet.ether

0,39

0,398

0.42

0,402

Khloroform

0.22

0.25

0,23

0,23

metanol

0.19

0,18

0,20

0.19

pada 700nm menunjukkan kekuatan mengurangi lebih tinggi.

Berbagai konsentrasi ekstraksi (1 ml) dicampur dengan 1 ml 200 mmol / l buffer natrium fosfat (pH 6,6) dan 1 ml dari 1% kalium ferricyanide. Campuran diinkubasi pada 50oC selama 20 menit. Setelah 1 ml dari 10% asam trikloroasetat (w / v) ditambahkan. Dari 1 ml dicampur dengan 1 ml air deionisasi dan 250 μ l segar klorida (0,1%). absorbansi diukur pada 700 nm: a absorbansi yang lebih tinggi menunjukkan kekuatan mengurangi lebih tinggi. 4

assay Anti bakteri Bakteri tumbuh dalam kaldu nutrisi selama 24 jam (pH 7,2-7,4) digunakan sebagai ulum inoc-. Mueller-Hinton media agar dituangkan ke piring Petri untuk seragam kedalaman 5 mm dan dibiarkan membeku. suspensi mikroba pada 5 x 106 cfu / ml yang tersebar di permukaan media menggunakan kapas steril untuk memastikan pertumbuhan konfluen organisme. Aliquots (10 μ l) masing-masing ekstrak tanaman pada 4 mg / 10 μ l pengenceran di pelarut inert

386

Gambar 1: spektrum UV.

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN Meja 2: skrining fitokimia dari ekstrak erectus Tagetes. Kelas senyawa

Ekstrak Eter Pet

Ekstrak kloroform

Ekstrak metanol

steroid -

+

-

-

-

+

a) Dragendorff Uji

-

-

-

b) Uji Mayer

-

-

+

c) uji Hager ini

-

-

+

d) uji Wagner

-

-

+

+

+

+

a) Uji Liebermann-Burchard

flavonoid a) uji Shinoda

alkaloid

terpenoid a) Uji untuk terpenoid

Tanin dan senyawa fenolik

-

-

solusi timbal asetat

-

-

b)

solusi FeCl3 5%

-

-

c)

encer HNO3

-

-

-

-

Sebuah)

kalium dikromat

d)

Tabel 3: Standardisasi Metode Pengamatan. metode

Pengamatan

Jumlah Ash

12,81% b / b

Asam larut Ash

0,49% b / b

Larut Air Ash

3,65% b / b

kepahitan Nilai

3.44

pembengkakan Indeks

3cm

Busa Indeks

<100

yodium Nilai

8.95

Gambar 2: struktur rangka flavonol. alkaloid, karbohidrat, senyawa fenolik, terpenoid dan flavonoid dan nilai-nilai abu diberikan dalam Tabel 2 dan Table3.

Senyawa diisolasi dari ekstrak metanol Tagetes erectus TE-01 telah diperoleh sebagai kristal kuning dari etanol, menghasilkan 500 mg, memberikan hasil positif untuk Flavonoid. UV, IR dan NMR senyawa diambil. Identitas senyawa yang telah dilakukan dengan rekan-TLC. spektrum UV (Gambar 1) menunjukkan dua puncak serapan utama. Puncak 1 adalah pada 257nm dan puncak lain adalah pada 307nm. UV spektrum tercatat 220-450 nm. Flavonol pada dasarnya menunjukkan dua puncak pada 250nm dan 370Nm (Gambar 4). Yang terkait dengan struktur masing-masing dua gugus di kerangka mereka: fenil propana (Band I) dan chromanone (Band II). Flavonol adalah kelas flavanoids yang memiliki 3-hydroxyflavone back- tulang (Gambar 3). The flavonol yang paling umum adalah quercetin, myricetin, kaempferol, rutin dan azaleatin. Untuk masing-masing senyawa, daerah puncak ditentukan pada panjang gelombang memberikan absorbansi UV maksimal. 9 Gambar 3: spektrum IR.

spektrum IR senyawa terisolasi IR spektrum dipamerkan band serapan pada 3411cm- 1 yang menunjukkan adanya OH

menunjukkan puncak pada 1318.9cm- 1 untuk kehadiran lentur dari CH di hidrokarbon aromatik.

peregangan getaran fenol, 1383.1cm- 1 Band yang menunjukkan keberadaan OH lentur fenol, dan menunjukkan sebuah band di 1203cm- 1 untuk peregangan CO fenol. Hal ini juga menunjukkan sebuah band di 1663.8cm- 1

spektrum NMR senyawa terisolasi 1H-NMR (400MHz, CD3OD): 6,274 (9, 1H, d, J = 2,269), 6,439 (11, 1H, d, J = 2,269) 6,813

yang menunjukkan C = O aril ketonic peregangan dan band di 1167cm- 1 yang menunjukkan

(7, 1H, dd, J = 8,430, J = 2,776 ), 7,398 (10, 1H, dd, J = 2,776, J = 1,774), 7,633 (8, 1H, dd, J

kehadiran C-CO-C peregangan dan membungkuk di keton. Juga

= 8,430, J = 1,774).

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

387

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN

Gambar 4: spektrum NMR.

Gambar 6: gambar 3D dari HPTLC.

Gambar 5: Piring dikembangkan di bawah 254nm.

Dari hasil UV, IR dan NMR, serta co-TLC dengan senyawa otentik, senyawa terisolasi dianggap sebagai quercetin. Estimasi ekstrak metanol Tagetes erectus menggunakan HPTLC Perhitungan

ekstrak metanol diperkirakan untuk kehadiran quercetin. 15 mg ekstrak metanol dilarutkan dalam 1,5 ml metanol. 15 μ l dan 20 μ l dari larutan uji dan 1 μ l-4 μ l dari stdquercetin ditambahkan. Konsentrasi quercetin dalam ekstrak dihitung pada daerah

Gambar 7: kurva standar berdasarkan tinggi puncak.

dari grafik. dalam 15 μ l (150 μ g) - mengandung 1,77 μ g. 100 μ g - 1,18 μ g yaitu; 1,18%. dalam 20 μ l (200 μ g)

- mengandung 1,97 μ g quercetin yaitu; 100 μ g - mengandung 0,985 μ g yaitu; 0,985%. visualisasi: Setelah mengembangkan, piring diamati di bawah UV 254nm Gambar dari pelat kromatografi divisualisasikan di bawah 254 nm serta 366 nm. Parameter aspek visual ini unik untuk HPTLC. Di 254 nm, latar belakang yaitu lempeng muncul hijau atau biru, karena indikator fluoresensi tergabung dalam adsorben sedangkan pecahan muncul bintik-bintik gelap karena pendinginan fluoresensi. Gambar ini adalah non-spesifik bintik hitam hanya terlihat pada latar belakang neon yang terang.

persyaratan umum dari gambar 3D Gambar 5 dan 7 adalah untuk mengambil serangkaian gambar pada posisi tetap, tetapi pada kedalaman fokus yang berbeda. Karena sebagian besar sampel mikroskopis pada dasarnya transparan, dan kedalaman lapangan sampel terfokus ini sangat sempit, adalah mungkin untuk menangkap gambar “melalui” objek tiga dimensi menggunakan peralatan 2D seperti mikroskop confocal. Software kemudian mampu merekonstruksi model 3D dari

388

Angka 8: Jumlah konten fenolik.

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN

Gambar 9: Mengurangi metode uji kekuatan Tagetes erectus dan Standard.

Gambar 10: DPPH Gratis radikal Kegiatan Tagetes erectus dan Standard.

Tabel 4: Jumlah konten fenolik. asam galat ( μ g

Absorbansi asam

/ ml)

Galia

Ekstrak metanol

absorbansi

( μ g / ml)

Ekstrak

20

0,222

100

0.087

40

0,422

200

0,201

60

0,652

400

0,588

80

0,852

100

1,057

sampel asli yang dapat dimanipulasi dengan tepat. pengolahan ternyata instrumen 2D menjadi instrumen 3D, yang tidak akan dinyatakan ada.

Gambar 11: DPPH Gratis radikal Kegiatan Tagetes erectus dan Standard.

Daerah puncak dari ekstrak metanol (15 μ tanah 20 μ l) dan Quercetin (1 μ l ke 4 μ l) konsentrasi dicatat. Hasil penelitian menunjukkan linearitas dan yang terbaik pas persamaan linear adalah y = 223,402 + 232.827x. r = 0,998 dan STDEV 3.85%. Ada korelasi yang baik antara daerah puncak dan konsentrasi sponding corre- dari ekstrak metanol dan quercetin seperti yang ditunjukkan pada Gambar kurva standar (Gambar 8). Stasioner silika fase gel dan pelat TLC dan kloroform fase gerak: metanol (8,5: 1,5) telah memberikan pemisahan yang baik. Kurva standar ditemukan linear tergantung pada konsentrasi terhadap daerah.

Properti antioksidan vitro Jumlah konten fenolik

Metode Folin-Ciocalteau memiliki keuntungan dari respon setara dengan fenol yang berbeda, sehingga cocok untuk mengukur tingkat massa akurat dari jumlah zat fenolik. Metode ini tergantung pada pengurangan FCR oleh fenol untuk campuran oksida biru yang memiliki penyerapan mal maxi di wilayah 760 nm. Intensitas pewarnaan biru yang dihasilkan sebanding dengan jumlah total senyawa fenolik hadir

Gambar 12: Super Oxide Scavenging Kegiatan Tagetes erectus

dan Standard.

dalam sampel pengujian. Berikut asam galat diambil sebagai standar. Dari grafik itu dihitung bahwa 400 μ g / ml ekstrak metanol laser mengandung 55 μ g konten fenolik yang equalent ke 55 μ l asam gallic mengandung fenolat diberikan pada Tabel 4.

Mengurangi metode uji daya Dalam metode ini konsentrasi ekstrak metanol Tagetes erectus dan quercetin yang diambil adalah 5-25 ( μ g / ml) yang menunjukkan pada Tabel 5. Grafik

peningkatan konsentrasi pengurangan bentuk ferri ke bentuk besi dari ricyanide fer- juga meningkat

Dalam metode ini konsentrasi ekstrak metanol Tagetes erectus dan quercetin yang diambil adalah 5-25 ( μ g / ml). Grafik diplot terhadap absor- Bance vs konsentrasi. Ketika konsentrasi meningkatkan serapan juga meningkat karena ketika konsentrasi meningkat pengurangan bentuk ferri ke bentuk besi sianida ferri juga meningkat.

(Gambar 9) diplot terhadap absorbansi vs konsentrasi. Ketika konsentrasi meningkatkan

Radikal Bebas Scavenging Assay

serapan juga meningkat karena ketika

DPPH radikal aktivitas Scavenging:

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

389

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN Tabel 5: Mengurangi metode uji kekuatan.

Konsentrasi standar

absorbansi

Konsentrasi ekstrak

( μ g / ml)

Absorbansi ekstrak metanol

( μ g / ml)

5

0,169

50

0,18

10

0,190

100

0,38

15

0,212

150

0,6

20

0.228

200

0,76

25

0,461

250

3,08

Tabel 6: DPPH aktivitas antioksidan. Konsentrasi standar

% Penghambatan Standar

Konsentrasi metanol

% Penghambatan metanol

ekstrak ( μ g / ml)

( μ g / ml)

ekstrak

5

11,441 ± 0,316

50

24.53 ± 0,2491

10

18,414 ± 0,504

100

48,40 ± 0,7057

15

30,490 ± 0,391

150

66,62 ± 1,6604

20

41,686 ± 0,630

200

89,01 ± 0,1371

25

45,073 ± 0.140

250

91,17 ± 1,2040

Tabel 7: aktivitas scavenging oksida super.

Konsentrasi

% Penghambatan Standar

standar ( μ g / ml)

Konsentrasi ekstrak metanol

% Penghambatan ekstrak metanol

5

19,8 ± 0,21

50

21,32 ± 0,4918

10

40,2 ± 0.70

100

45,31 ± 0,2801

15

47,8 ± 0,78

150

61,40 ± 0,6135

20

70,8 ± 0,49

200

83,03 ± 0,7938

25

82,9 ± 0,37

250

90,66 ± 0,9950

DPPH adalah stabil radikal bebas pada suhu kamar sering digunakan untuk evalu- makan aktivitas

spektrum GC-MS senyawa yang diperoleh dari minyak TE

anti oksidan menunjukkan pada Gambar 10. Penurunan capac- ity dari DPPH radikal ditentukan oleh

Dalam analisis GC-MS relatif retensi indeks (RRI) dihitung dengan menggunakan rumus.

penurunan dalam absorbansinya pada 517nm, yang disebabkan oleh antioksidan yang menunjukkan di tabel 6. aktivitas scavenging radikal meningkat dengan meningkatnya persentase penghambatan radikal bebas.

=

n× 100 + 100 R senyawa R RRI +R cn1 R

cn

× 100

cn

Super oksida Aktivitas pemulungan

n = C n ( C 5 H 8)

Dalam metode nitro tetrazolium biru ini (NBT) digunakan sebagai salah satu reagen. Persentase penghambatan reduksi NBT dapat digunakan untuk mengukur Super oksida-pemulungan. Persentase penghambatan super oksida dapat ditingkatkan dengan konsentrasi diberikan pada

Anti uji mikroba

Tabel 7.

Dalam metode ini gram yang berbeda positif dan gram negatif seperti Bacillus cereus,

Dalam metode nitro tetrazolium biru ini (NBT) digunakan sebagai salah satu reagen. Persentase

Staphyllococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens,

penghambatan reduksi NBT dapat digunakan untuk mengukur Super oksida-pemulungan.

p.aureogenosa, Bacillus subtilis, Proteus vulgaris. aktivitas antibakteri ekstrak metanol TE

Persentase penghambatan super oksida dapat ditingkatkan dengan konsentrasi.

dan minyak diuji. Streptomisin digunakan sebagai standar. ekstrak metanol menunjukkan aktivitas terhadap Bacillus cereus, Serratia marcescens, Pseudomonas aeroginosa, dan

IC 50 nilai DPPH dan aktivitas scavenging oksida super menunjukkan pada Gambar 11

Bacillus subtilis diberikan pada Tabel 9. Minyak menunjukkan lebih ity activ- dari streptomisin standar.

analisis GC-MS minyak atsiri Hydro distilasi seluruh tanaman segar Tagetes erectus memberikan minyak kuning muda dengan yield 0,04% (v / w). Komposisi minyak diberikan dalam Tabel 8. Sebanyak 25 komponen yang terdiri dari 93,9% minyak diidentifikasi. Minyak itu ditemukan kaya akan monoterpenoid (78,5%), dengan

Konsentrasi ekstrak metanol diambil untuk metode difusi cakram itu 40mg dilarutkan dalam 100 μ l DMSO. Dari larutan stok ini 10 μ l / disc diambil. larutan stok minyak esensial (40mg / 100 μ l) minyak esensial dari Tagetes erectus dibuat dalam DMSO. Hasil dinyatakan bersama dengan yaitu diameter disc; 6mm. Disc diameter-6mm termasuk difusi disk. 40mg →

26,5% hidrokarbon monoterpen dan 52,0% monoterpenoid oksigen. Piperitone (40,1%)

100 μ L → 4 mg (10 μ L / disc) antijamur assay dilakukan dengan jamur seperti Candida

adalah senyawa utama diikuti oleh limonene (12,0%) dan terpinolene (12,7%).

albicans dan Bisa- dida glabrata. Kedua ekstrak metanol dan minyak dari TE menunjukkan

Penelitian ini menunjukkan indol, senyawa volatil nitrogen pada tingkat rendah (1,3%).

lebih aktif daripada standar diberikan dalam Tabel 10. Konsentrasi ekstrak metanol diambil

minyak yang terkandung

untuk metode difusi cakram itu 40mg dilarutkan dalam 100 μ l

11,4% seskuiterpenoid, dengan 9,9% seskuiterpen hidrokarbon dan

1,5% seskuiterpenoid oksigen.

390

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN

Tabel 8: konstituen minyak esensial dari Tagetes erectus seluruh tanaman. RT

Senyawa

4.60

a-Phellandrene

RRI (lit)

RRI (cal c)

%

994

1002

0,4

6.04

limonene

1014

1024

12.0

6.54

E-β-Ocimene

1030

1044

1.4

7.88

Terpinolene

1074

1086

12,7

linalool

1087

1095

2.2

9.72

E-Epoxy ocimene

1128

1137

4.1

10.88

Terpinen-4-ol

1159

1174

0,5

11,43

P cymen--8-ol

1173

1179

2.4

8.27

11.65

ui

1179

-

11.95

-

1187

-

14,58

Piperitone

12,53

1249

1.3 1,6

40.1

14,74

-

1257

-

0,2

15,23

-

1269

-

0,8

-

1273

-

0,3

15,39 15,69 16,06 16,17 17.01 17,46 17,60 19.23 19,47 20.40 20.88 21.04 22,12

indole

Terpinen asetat 4-ol

1280

1290

1.3

1289

1299

0,7

-

1292

-Piperitenone

geranyl asetat Cyperene beta-caryophyllene

a-trans-Bergamotene

E-β-farnesene

-

0,4

1312

--

0,2

1323

1340

1.8

1379

0,2

1373

1398

0,9

1395

1417

3.6

1432

0,3

1439

1454

3.0

1478

1,5

1456

-

1461

26,43 26,57 28,65 29,98

-

1469

1500

0,6

1541

1561

0,4

Spanthulenol

1549

1577

0,6

1553

1582

0,5

caryophyllene oksida

-

1608

-

1646

n-octadecane

1773

35,95

fitol isomer

1817

44.41

fitol isomer

2090

0,1 0,2 2.3 0,2

93,9

monoterpene beroksigen

52,0 9.9

seskuiterpen teroksigenasi

1,5

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

-

-

seskuiterpen hidrokarbon

volatil nitrogen

0,2

2105

26,5

diterpen

-

1800

monoterpene hidrokarbon

hidrokarbon alifatik

0,8

E-nerolidol

34,39

TOTAL

0,1

1411

gamma-Muurolene

Bicyclogermacrene

-

1407

22.99

26,13

0,4

1367

22.80

23,36

-

1327

2,5 0,2 1.3

391

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN Tabel 9: aktivitas anti-bakteri. ekstrak metanol

Micro-organisme

430 Bacillus cereus

Tagetes erectus minyak

Standard (Streptomisin)

8mm

20mm

17mm

Nol

22mm

15mm

Nol

16mm

10mm

Nol

28mm

16mm

14mm

18mm

17mm

7mm

16mm

15mm

12mm

20mm

21mm

Nol

8mm

20mm

96

Staphyllococcus

aureus 443 Escherichia coli

109

Klebsiella pneumoniae 97 Serratia marcescens

741 Pseudomonas Aureogenosa

441

Bacillus subtilis 426

Proteus vulgaris

metode. Di yang minyak lebih aktif terhadap S. aureus, K. pneumonia,

Tabel 10: Anti-jamur assay. mikro organisme

ekstrak metanol

minyak erectus Tagetes

Standard

E. coli dari standar dan ekstrak metanol. Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa sementara

(nistatin)

skrining ekstrak metanol Tageteserectus dan minyak terhadap minyak berbagai bakteri gram positif dan

Candida albicans ( 3017)

10mm

14mm

8mm

Candida glabrata ( 3049)

12mm

14mm

8mm

gram negatif andfungi exhib- ited penghambatan sangat memuaskan. Tagetes erectus menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih baik. Kegiatan ini mungkin karena kehadiran hadir konstituen aktif dalam tanaman dan konstituen yang sebenarnya bertanggung jawab untuk kegiatan tersebut.

DMSO. Dari larutan stok ini 10 μ l / disc diambil. larutan stok minyak esensial (40mg / 100 μ l) minyak esensial dari Tagetes erectus dibuat dalam DMSO. Hasil dinyatakan bersama dengan yaitu diameter disc; 6mm.

DISKUSI DAN KESIMPULAN Tagetes erectus digunakan dari waktu kuno untuk nilai obat besar. Ini hasbeen digunakan dalam pengobatan tradisional India untuk rematik, dingin dan bronkitis. Evaluasi fitokimia pendahuluan menemukan tence exis- alkaloid, flavonoid, polifenol seperti senyawa fenolik

aknowledgement Penulis sangat berterima kasih atas dukungan dan sumber daya yang disediakan oleh-prinsip ruh, Amrita Sekolah Farmasi, Kochi dan Tropical Botanical Gar- den dan Research Institute untuk bantuan dan dukungan mereka.

KONFLIK KEPENTINGAN

dan tanin. 10 Petroleum eter, kloroform dan ekstrak metanol tanaman disusun oleh ekstraksi Para penulis tidak memiliki afiliasi yang relevan atau keterlibatan keuangan dengan organisasi atau soxhlet. Membelai. Ekstrak eter menunjukkan hasil yang positif untuk terpenoid, kloroform

badan dengan kepentingan keuangan dalam atau konflik keuangan dengan materi pelajaran atau

menunjukkan hasil positif untuk steroid, dan metanol menunjukkan hasil yang positif untuk

materi yang dibahas dalam naskah terpisah dari yang diungkapkan.

flavanoids, alkaloid, terpenoid, tanin dan senyawa fenolik. Struktur flavonoidal diisolasi dari ekstrak metanol tanaman. 11 HPTLC pencetakan jari ekstrak metanol telah juga dilakukan. Invitro studi antioksidan telah dilakukan dengan menggunakan ekstrak metanol karena menunjukkan hasil yang positif untuk Flavonoid. Mengurangi uji kekuatan menunjukkan aktivitas moderat. DPPH radikal assay. 12 dan super assay pemulungan oksida menunjukkan aktivitas moderat dengan nilai 109,45 (± 1,22) μ g / ml dan 201,53 (± 4,48) μ g / ml masing-masing. Aktivitas antioksidan di semua model antioksidan yang sebanding dengan standar. 13

SINGKATAN YANG DIGUNAKAN UV: Ultra violet; IR: Infra merah; NMR: resonansi magnetik nuklir; DPPH: 2,2-diphenyl -1-picryl-hydrazyl; IC 50: konsentrasi hambat pada 50%; TLC: kromatografi lapis tipis; GC-FID: Gas chromatog- raphy -FLAME ionisasi detektor; GC-MS: kromatografi gas Mass Spectroscopy; NONA: spektrum massa; DMSO: Dimetil sulfoksida; TE-01: Tagetes erectus; HPTLC: Tinggi perfoemance kromatografi lapis tipis; FCR: Folin Ciocalteau Reagen; NBT: tetrazolium biru Nitro.

IC 50 Minyak atsiri dari pabrik itu suling dan analisis gc-ms-nya juga dilakukan. Monoterpenoid didominasi minyak ( 78,5% ), Dengan piperitone sebagai senyawa utama (40,1%) diikuti oleh terpinolene (12,7%), limonene (12,0%) dan linalool. Selanjutnya, metanol ekstrak dan minyak telah dianalisis untuk studi antibakteri dan antijamur. assay antibakteri dilakukan dengan positif gram dan bakteri Gram negatif dilakukan dengan menggunakan difusi disk

392

REFERENSI 1. Torssell KBG. kimia Produk alami, edisi ke-2, Farmasi Swedia Tekan. 1997; 15-24.

2. Evans WC, Treas dan Evans. Farmakognosi, edisi 15, WB Saunders perusahaan

Ltd, London. p.337.

3. Khandelwal KR. Sebuah buku teks dari Farmakognosi Praktis. 16 th edisi Nirali publikasi: 2000; 79-88.

4. Andre T, Richard WS, Noufou O. Evaluasi Kegiatan Antioksidan, Total fenolik dan Isi Flavonoid dari Entada Africana Guill. Et Perr Organ Ekstrak res J

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

Zachariah et al .: isolasi dan in vitro Kegiatan antimikroba Tagetes Erectus LINN 10. Subin MZ, Vidya V, Aleykutty NA, Dr Jaykar B, Halima OA et al. 'Radikal bebas

Med Sc. 2010; 4 (2): 81-7.

pemulungan dan aktivitas antibakteri mirabilis jalapa Linn menggunakan in vitro model. Asian J Pharm Clin

5. Asok GC, Dhanaraj SA, Suresh B, Vijayan P, et al. Gratis aktivitas antioksidan yang dipilih minyak esensial, obat India. 2010; 41 (4): 244-5.

Res. 2012; 5 (3): 115-20.

6. Basav RVC, Karnakumar VB, Rajabhau SS, Kamshetty VM, et al. In vitro antioxi-

11. Leena KP, Annam C. Isolasi dan Karakterisasi Flavone glikosida

Studi aktivitas dant pada bunga dari Tagetes erecta. 2011; 2 (3): 223-9.

vitexin dari Tumpangan air Linn. J Obat Del Ther. 2013; (6): 91-2.

7. Cappuccino JG, Sherman N, Mikrobiologi. Sebuah laboratorium manual. California:

12. Rajan J, Krishna S, Menon SV, Pai RG, Surya M, Javahar M et al. dalam silico Desain,

Benjamin Cumming Ilmu Publishing. 1999.

sintesis, karakterisasi, in vitro Studi anti-inflamasi, dan antioksidan derivatif 4-aril-4H-chromene.

8. Egwaikhide PA, Gimba CE. Analisis Isi fitokimia dan Anti

2017; 10: 408-13.

Kegiatan mikroba Plectranthus glandulosis Whole Plant. Timur Tengah J Sci Res. 2007; 2 (3-4):

13. Padma R, Parvathy NG, Renjith V, Rahate KP. estimasi kuantitatif tanin,

135-8.

fenol dan aktivitas antioksidan dari ekstrak metanol Imperata cylindrica.

9. Markham KR. Teknik identifikasi flavonoid, tekan Akademik New York:

Int. J. Pharm. Sci. Obat Res. 2013; 4 (1): 73-7.

1982; 37-9.

RINGKASAN

•

Tagetes erectus digunakan dari waktu kuno untuk value.It obat yang besar telah digunakan di India cine medi- tradisional untuk rematik, dingin dan bronkitis. Petroleum eter, kloroform dan ekstrak metanol tanaman disusun oleh ekstraksi Soxhlet. Ekstrak Pet.ether menunjukkan hasil positif berupa terpenoid, kloroform menunjukkan hasil yang positif untuk steroid dan ekstrak metanol menunjukkan hasil positif untuk flavanoids, alkaloid, terpenoid, tanin dan senyawa fenolik. HPTLC sidik jari dari ekstrak metanol juga telah dilakukan.

•

In vitro Studi antioksidan telah dilakukan dengan menggunakan ekstrak metanol karena menunjukkan hasil positif untuk metode pengujian daya noids.Reducing flava- menunjukkan aktivitas moderat. DPPH radikal dan superoksida radikal uji scavenging menunjukkan aktivitas moderat dengan IC 50 values109.45 (± 1,22) ug / ml dan 201,53 (± 4,48) ug / ml secara berurut. Minyak atsiri dari tanaman itu distilledand analisis GC-MS yang juga dilakukan. Monoterpenoid didominasi minyak (78,5%) dengan piperitone sebagai senyawa utama (40,1%) diikuti oleh terpinolene (12,7%), limonene (12,0%) dan linalool. ekstrak metanol lebih lanjut dan minyak juga telah dianalisis untuk kegiatan activity.Antibacterial antibakteri dan antijamur dilakukan dengan gram + ve dan gram-ve bakteri menggunakan metode difusi cakram di mana minyak lebih aktif terhadap S.aureus, K.pneumoniae, E.coli dari ekstrak standar dan metanol.

•

Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa sementara pemutaran ekstrak metanol Tagetes erectus dan minyak terhadap berbagai gram + ve dan bakteri gram ve dan minyak jamur dipamerkan penghambatan sangat memuaskan. Tagetes erectus menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih baik. Kegiatan ini mungkin karena kehadiran hadir konstituen aktif dalam tanaman dan konstituen yang sebenarnya bertanggung jawab untuk kegiatan tersebut.

Mengutip artikel ini: Resmi S, Nair DV, Subhash A, Jose R, Wisnu V, Zachariah SM. Isolasi, Karakterisasi dan In vitro Kegiatan farmakologi dari Tagetes Erectus Linn. Pharmacog J. 2018; 10 (2): 384-93.

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Edisi 2, Mar-April 2018

393