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AREA SEROLOGIA ANTICUERPOS CONTRA LEISHMANIA Sinónimos • Test Serológico para Leishmania- Test Serológico de Kala-azar

LEISHMANIASIS Las leishmaniasis son un conjunto de enfermedades muy dispares entre sí. Existen dos formas básicas: • •

Cutánea (afecta a la piel) Visceral (afecta a los órganos)

La forma cutánea de la enfermedad (Leishmaniasis Cutánea) en humanos, también conocida en Perú como uta se caracteriza por la aparición de úlceras cutáneas indoloras en el sitio de la picadura las cuales se pueden curar espontáneamente o permanecer de manera crónica por años. La resolución de la enfermedad puede presentarse después de un tratamiento sitémico consistente en la aplicación intramuscular de fármacos basados en antimonio (antimoniato de meglumina - Glucantime - y estibogluconato de sodio - Pentostam -) durante 20 a 30 dias. La Leishmaniasis Visceral es la forma clínica que cobra más vidas mundialmente; tal es el caso de India, Sudán y Brasil. Esta presentación puede ser fatal si no se trata a tiempo. Esta presentación clínica se caracteriza por la inflamación del hígado y del bazo acompañada por distensión abdominal severa, pérdida de condición corporal, desnutrición y anemia. El ciclo biológico se inicia cuando un mosquito infectado del género Lutzomyia pica a un huésped susceptible, inoculándole formas de promastigote, las cuales al penetrar células o ser fagocitados se redondean y adquieren forma de amastigote.

Éstas se reproducen intensamente por bipartición rompiendo la célula e invadiendo otras produciendo su destrucción y daño en los tejidos parasitados.

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Localización en el huésped Estos parásitos pueden encontrarse en diferentes sitios según la especie responsable de la infección. Así, por ejemplo L. tropica se localiza en los bordes de la lesión ulcerosa; L. mexicana y sus subespecies, en los bordes de la lesión o un poco más profundos, como en los casos crónicos de pabellón auricular; en las formas clínicas nodulares de la forma diseminada o anérgica, se observan una gran cantidad de parásitos en estas lesiones. En la leishmaniasis mucocutánea se encuentran abundantes parásitos en las lesiones de la mucosa orofaríngea, y mientras que en el kala-azar o leishmaniasis visceral se identifica a los parásitos en órganos o tejidos ricos en células reticuloendoteliales, como bazo, médula ósea e hígado, aunque en las fases agudas se pueden encontrar en mucosa y piel aparentemente sanas. Manifestaciones clínicas En el sitio de inoculación de las formas infectantes, se observa una reacción inflamatoria de células plasmáticas y macrófagos con abundantes parásitos, la lesión se ulcera, produce exudado abundante; tejido de granulación y necrosis. La úlcera es de bordes regulares o irregulares pero bien definidos, indurados y enrojecidos, abarca piel y tejido subcutáneo, generalmente es circular, única y no dolorosa. La lesión tiende a la curación espontánea en menos de un año excepto las de pabellón auricular que se vuelven crónicas y mutilantes. En la leishmaniasis diseminada, la lesión, que puede ser úlcera, placa o nódulo, es seguida de lesiones satélite que con el tiempo tienden a cubrir gran parte de la superficie cutánea. Generalmente son superficiales y no producen metástasis a mucosas, contienen gran cantidad de parásitos, no curan espontáneamente, tienden a la cronicidad y son resistentes a los medicamentos

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http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com específicos. En la leishmaniasis mucocutánea, domina el cuadro clínico la gran destrucción de mucosa nasofaríngea, en la que se incluye el tabique nasal, dando un aspecto muy peculiar a la nariz de estos pacientes (nariz de tapir) por la falta de sostén. Frecuentemente se presentan complicaciones respiratorias y adelgazamiento por alteración en la deglución. En la leismaniasis visceral o kala-azar, se considera como reservorios al hombre, los perros y los zorros, y afecta tanto a niños como adultos. Los parásitos se multiplican abundantemente en bazo y médula osea produciendo ante todo malestar general, fiebre, cefalea, anorexia, pérdida de peso, esplenomegalia, hepatomegalia, linfadenopatía, pancitopenia, hipergammaglobulinemia, palidez de mucosas y obscurecimiento de la piel. Generalmente tiende a la cronicidad.

Diagnóstico Son importantes los aspectos epidemiológicos y clínicos, ya que la procedencia del paciente y el tipo de lesión orientan el diagnóstico. El diagnóstico de laboratorio se efectúa por métodos directos e indirectos. El primero tiende a demostrar la presencia del parásito por examen microscópico mediante improntas en porta-objetos tomados del borde la lesión ulcerosa y teñidos con colorantes derivados del Romanowsky; este método es efectivo en la fase aguda del padecimiento. Se puede recurrir a la biopsia de la lesión ulcerosa, de nódulos en la leishmaniasis diseminada o de médula ósea en la leishmaniasis visceral o kala-azar para frotis y tinción. Como métodos indirectos, se utilizan productos tomados de la lesión e inoculados en medios de cultivo especiales, como el de NNN, Nakamura y Diamon entre otros, observando al microscopio cada tercer día. También se utiliza la

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http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com inoculación de estos productos al ratón blanco o hamster dorado, donde se desarrollarán lesiones características. Entre los métodos inmunológicos utilizados para el diagnóstico de las leishmaniasis se cuenta con la intradermorreacción de Montenegro, altamente específica y de gran utilidad en la leishmaniasis cutánea. A excepción de la diseminada, en la cual resulta negativa, explora respuesta de inmunidad celular dependiente de linfocitos T y se vuelve positiva 24 a 48 horas después de su aplicación en individuos que están o han estado en contacto con el agente etiológico. Otras técnicas utilizadas son la inmunofluorescencia indirecta, ELISA, Dot-ELISA y hemaglutinación indirecta, con que se detectan inmunoglobulinas específicas. Los títulos de estos anticuerpos son bajos en leishmaniasis cutánea localizada, altos en mucocutánea y muy elevados en cutánea diseminada y visceral. Las pruebas inmunológicas cuantitativas son de utilidad para seguir la evolución del padecimiento cuando se está instituyendo el tratamiento específico Muestra: • Suero

Preparación

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Separar el suero de los glóbulos rojos

Almacenamiento • Temperatura ambiente: 3 días; Refrigerado:2 semanas; Congelado: 3 años. Limitaciones • Reactividad cruzada con tripanosomiasis; falsos-positivos con malaria. Método: • Ensayo Inmunoenzimático absorbido (ELISA) La técnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay) se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectofotométricamente. Este principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal : es versátil, robusto, simple en su

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http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com realización, emplea reactivos económicos y consigue, mediante el uso de la fase sólida, de una separación fácil entre la fracción retenida y la fracción libre.

El método directo permite la detección del antígeno con un anticuerpo específico conjugado con una enzima como sistema de marcaje. En el método indirecto el antígeno reacciona con el anticuerpo específico. El complejo antígeno-anticuerpo es entonces detectado por un segundo anticuerpo que reconoce dominios constantes de anticuerpos. Este anticuerpo, que suele ser específico de especie, es el que está marcado enzimáticamente. Esto permite que un mismo anticuerpo marcado sea capaz de detectar diferentes antígenos. En ambos métodos, la reacción enzimática puede ser detectada espectrofotográficamente con un lector ELISA. Valor de referencia •

Negativo

Utilidad clínica •

Como soporte en el diagnóstico clínico de leishmaniasis visceral, leishmaniasis cutánea y mucocutánea.

El diagnóstico serológico de leishmaniasis visceral es más confiable que el diagnóstico serológico de la enfermedad cutánea, aunque este ha sido mejorado con el uso de test de alglutinación directa. Las pruebas de ELISA son positivas en 85% de los casos. Ha habido una ráfaga en los reportes de leishmaniasis visceral con características atípicas en pacientes con SIDA. La esplenomegalia es la mayor característica en otros pacientes y es a menudo ausente en pacientes con SIDA. La gamapatía policlonal Ig.G en la electroforésis de proteínas en suero es típica de kala-azar. Estos pacientes presentan leucopenia, trombocitopenia y anemia.

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http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com La prueba serológica para leishmaniasis visceral es de ayuda en el diagnóstico clínico, pero para la enfermedad cutánea y mucocutánea nó, porque los pacientes no tienen anticuerpos circulantes detectables. Los anticuerpos aparecen rápidamente y desaparecen con el tratamiento; títulos mayores o iguales a 1:8 son considerados significativos. http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_68.asp?cuaderno=68 http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/elisa.htm http://www.medmol.es/tecnica.cfm?id=28 http://www.oftalmo.com/seo/archivos/maquetas/E/4685B6FB-977C-FF69-0B56-000041364ABE/f0401c.jpg http://www.lablasamericas.com.co/newDB/examenes.php?codigo_examen=L120 http://documents.pdfcoke.com/docs/h5pcxhhbaz1bkg464xr.pdf

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