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INFORME DE GEOLOGIA FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

“AÑO DEL BUEN SERVICIO AL CIUDADANO”

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

ASIGNATURA

: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL.

DOCENTE

: MERCY PAOLI, ROJAS MORENO.

ESTUDIANTES

:       

SECCION

FERNANDEZ BRAVO, Dayana. GARAY ALVAREZ, Kellcy. GASPAR PRIALE, Javier. GOMEZ ALBERTO, Karen. HINOSTROSA ASTUÑAUPA, Charlie. MAYTA QUISPE, Estefani. ÑAHUI GALA, Luz maría.

: 4431 HUANCAYO – PERÚ 2017-II

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INDICE PORTADA ÍNDICE INTRODUCCION MARCO TEÓRICO 1. TEMA 2. PROPOSITO 3. OBJETIVOS 4. DEFINICIONES 5. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS 6. PROCEDIMIENTO 7. RESULTADO

CONCLUSIONES RECOMENDACIONES

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INTRODUCCION

El presente trabajo de laboratorio se refiere al tema de “PREPARCION DE MEDIOS DE CULTIVOS” se puede definir como un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas optimas permiten el crecimiento adecuado de los microorganismos. Cabe recalcar que una forma muy útil de poder aislar, identificar y conservar los microorganismos es mediante el uso de medios de cultivo, inicialmente ideados por Pasteur (que como ya sabemos se considera el padre de la microbiología), quien se dio cuenta que los microorganismos podían crecer en soluciones que tuvieran azúcar y una fuente de nitrógeno. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo. Lo que comúnmente se utiliza es el MEDIO COMUN que pueden ser preparados en forma líquida, sólida y semisólida. El medio común es aquel que posee los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. La forma más sencilla de clasificar los medios de cultivo es por su consistencia, entonces aparecen los medios de cultivo sólidos y los medios de cultivo líquidos o también llamados caldos que ya se mencionaron anteriormente. En ambos medios debe haber una buena cantidad de nutrientes que faciliten el crecimiento bacteriano y la diferencia radica en la presencia de una sustancia que se llama Agar o “Agar-Agar” y que es la encargada de darle la solidez y consistencia al medio. Esta sustancia proviene, principalmente, de un alga llamada Gelidium, aunque muchos otros géneros pueden servir como fuente de este polisacárido (es decir, un azúcar grande formado por la unión de azúcares pequeños). La ventaja fundamental de usar un medio de cultivo líquido, que se utilizó en la práctica de laboratorio nos permite que crezcan las bacterias que se encuentran en muy poca cantidad, es decir, cuya concentración es muy baja en la muestra que estamos analizando. También es llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. Para el caso del medio de cultivo sólido, la ventaja radica en que permite detectar los diferentes tipos de bacterias que puedan encontrarse en una sola muestra, entonces el usar uno u otro medio de

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cultivo dependerá de lo que busquemos o queramos: aislar una bacteria que se encuentre en cantidades muy pequeñas (medio líquido) o todas las bacterias que puedan haber en una muestra (medio sólido). Los medios de cultivo son uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos, pues se trata de observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observación de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la utilización del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexión en su evolución. La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo Brefeld, que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a base de gelatina. Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamaño) y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido. Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado por Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido transparente ideal para la observación de la morfología macroscópica de las colonias microbianas.

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MARCO TEORICO

1. TEMA: “Preparación de medios de cultivo”

2. PROPOSITO:  Identifica los requerimientos nutricionales de los microorganismos y prepara diferentes medios de cultivo.

3. OBJETIVOS:  Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes.

4. FUNDAMENTO:  La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio.

5. DEFINICIONES:

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6. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS a. EQUIPO CANT.

EQUIPO

01

Hornilla eléctrica

01

Balanza eléctrica

CARACTERISTICA

De presión de 3 ejes.

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b. MATERIALES CANT.

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EQUIPO

CARACTERISTICA

01

Probeta graduada

100mL

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Varilla de vidrio

Ayuda a homogenizar

Vaso 600mL precipitado

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C. EQUIPOS CANT.

EQUIPO

CARACTERISTICA

01

Frasco de Peptona

100mL

01

Frasco de extracto de carne

Ayuda a homogenizar

01

Frasco de NaCl

600mL

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Cintas de pH

Se utilizó para saber el pH del caldo nutritivo.

01

Frascos NaOH 0.1N

Se utilizó para alcanzar un pH 7

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7. PROCEDIMIENTO a. Primero pesamos los ingredientes según la cantidad requerida por los medios a preparar. A continuación se explica detalladamente:

Cloruro de sodio: 0,125g/mL

Extracto de carne: 0,25g/mL

Peptona: 0,25g/mL

b. Colocar la cantidad pesada en el matraz Erlenmeyer (con excepción del agar granulado que se adiciona en caliente), adicionar agua destilada en la proporción requerida. Homogenizar la mezcla mediante la varilla de vidrio.

Mezcla homogénea de peptona, extracto de carne y cloruro de sodio.

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c. Calentamos la muestra (mezcla), empleando la cocina eléctrica, hasta lograr la total disolución de los ingredientes.

d. Después de la disolución total de los ingredientes, enfriar a 50-55°C y luego ajustamos el pH a 7,0 – 7,2 con NaOH 0.1 N. En la imagen se observa que a la solución se incrementa NaOH 0.1 N para ajustar el pH, al final se obtuvo un pH igual a 7.

e. Esterilizar a la autoclave a 15 Ib de presión (121 ° C) por 15 minutos. Terminado el tiempo de esterilización, esperar que la aguja del manómetro descienda y extraer los medios. f.

Los medios sólidos sometidos al proceso de esterilización y enfriados a 50-55°C, deben de repartirse en alícuotas de 12 a 15 mL en 1-2 placas Petri en condiciones asépticas; para ello se tendrá que seguir las siguientes indicaciones:

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No destapar las cajas de petri, sino hasta el momento que vayan a ser utilizadas. Es conveniente colocarse un cubre bocas la persona que va a realizar el vaciado y evitar hablar en todo momento para no contaminar el medio de cultivo. 

Es conveniente mantener el mechero encendido y trabajar cerca del área estéril al momento del vaciado en las cajas de petri. Levantar la tapadera de la caja petri con la mano izquierda, sin soltarla y sin retirarla demasiado de la base de la misma caja mientras que con la mano derecha tomar el matraz que contiene el medio de cultivo y realizar el vaciado de aproximadamente 15 ml a 20 ml de Agar por placa procurando que no se forman burbujas, se procede a tapar la caja inmediatamente.



Si se forman burbujas, tomar el mechero, flamear el medio de cultivo sobre la superficie de la caja de petri y de manera rápida. Se procede a tapar la caja. Esperar a que el medio solidifique.



Se rotulan los medios de cultivo, anotando la fecha y con iniciales el tipo de medio de cultivo. Si las placas no se van a utilizar el mismo día se sujetan con cinta y se colocan en el refrigerador de manera invertida para evitar que el vapor condensado caiga sobre el medio de cultivo y lo pueda contaminar.



Cuando se vayan a utilizar los medios de cultivo preparados, será necesario secar las placas invertidas en estufa a 37 °C por 24 h, para control de esterilidad.

g. Si se desea añadir medio sólido en tubos, entonces se esterilizará el Agar directamente en los tubos a 121·C durante 15 minutos tapados con algodón, gasa y papel estraza. Si desea que solidifiquen inclinados, colocarlos en una superficie lisa inclinándolos en un ángulo de 20° a 30° sobre una varilla de vidrio.

8. RESULTADOS 

En la práctica de laboratorio se realizó un medio de cultivo (CALDO NUTRITIVO) en la cual se midió el pH con ayuda del papel tornasol, enseguida se evidencio un pH resultante igual a 5, el cual no favorece al

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crecimiento de microrganismos ya que el pH adecuado para un medio de cultivo varía entre 7- 7,2.

En la imagen se observa que la solución diluida tiene un pH igual a 5.



Después se agregó a la solución una base “NaOH 0.1 N” de tres a cuatro gotas para ajustar el pH y luego se obtuvo un pH igual a 7, como bien sabemos para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo debe reunir una serie de condiciones entre ellas un pH adecuado o un grado correcto de acidez o alcalinidad, cabe recalcar que la mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro. Se observa que el pH neutro.

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

Al final se obtuvo un medio de cultivo óptimo para el crecimiento de las bacterias.

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