Bismillah Mentahan.docx

ABSTRAK Makalah ini menjelaskan studi fisikokimia yang dilakukan pada tanaman hias, Rudbeckia triloba (Asteraceae). Untuk tujuan ini, minyak atsiri, infusa, dekok, dan maserasi hidroalkohol yang diperoleh dari bagian udara berbeda dari Rudbeckia triloba dianalisis. Konstituen fitokimia utama yang diidentifikasi dengan analisis GC-MS ditemukan α-pinene (pada daun kering (46,0%) dan bunga (40,1%)) dan β-phellandrene (dalam minyak atsiri dari infloresensi kering (26,09%)). Uji FolinCiocalteu dan quercetin mengungkapkan nilai yang berbeda dari total kandungan fenolik dan flavonoid dari kelopak, daun, dan biji sebagai fungsi dari pelarut yang digunakan dan prosedur ekstraksi. maserasi hidroalkohol dari kelopak ditemukan untuk menyajikan kandungan fenolik dan flavonoid maksimum (130,29 ± 5,58 mg setara asam galat / g bahan nabati kering dan 30,72 ± 1,35 mg setara kuercetin / g bahan nabati kering, resp.) Dan juga menunjukkan nilai yang lebih rendah EC50 (0,32% (v / v)), diperoleh dengan menerapkan uji DPPH⋅. Membandingkan metode ekstraksi yang diterapkan, maserasi ditemukan menjadi yang paling efektif untuk senyawa fenolik, kemungkinan besar karena pelarut (etanol 70%). Penggunaan campuran air-alkohol mengarah pada peningkatan hasil ekstraksi senyawa fenolik (termasuk yang memiliki berat molekul lebih tinggi) dibandingkan dengan menggunakan air sebagai pelarut ekstraktif, dalam kasus infusa dan dekok PENGENALAN Selama berabad-abad, tanaman herbal digunakan sebagai sumber obat. Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) melaporkan bahwa populasi dunia menggunakan obat tradisional untuk kebutuhan perawatan kesehatan utama mereka. Dalam konteks ini, produk alami, seperti ekstrak tumbuhan, baik sebagai senyawa murni atau sebagai ekstrak terstandarisasi, memberikan peluang tak terbatas untuk penemuan obat baru. Juga, bahan nabati digunakan dari zaman kuno sebagai sumber perasa, minuman, wewangian, dan produk kosmetik. Ini karena bahan tanaman memiliki sifat unik untuk mensintesis senyawa aktif biologis yang dihasilkan sebagai metabolit dari apa yang disebut metabolisme sekunder. Di antara empat kelas utama metabolit sekunder bioaktif (terpen, fenolik, glikosida, dan alkaloid), senyawa fenolik (yang berasal dari metabolisme sekunder dari asam amino aromatik) memiliki aktivitas antioksidan, antikarsinogenik, dan antimutagenik, yang sangat penting bagi kesehatan manusia. Mereka juga diketahui mengurangi risiko kardiovaskular. Studi epidemiologis menunjukkan kemampuan polifenol tanaman untuk menawarkan perlindungan terhadap perkembangan kanker, penyakit kardiovaskular, diabetes, osteoporosis, dan penyakit neurodegeneratif . Grup fenolik dalam polifenol menerima elektron untuk membentuk radikal fenoksil yang relatif stabil, mengganggu reaksi oksidasi berantai dalam komponen seluler. Fenolik mewakili berbagai macam senyawa seperti fenol sederhana, asam fenolat, kumarin, flavonoid, stilbena, tanin terhidrolisa dan terkondensasi, lignan, dan lignin. Perlu dicatat bahwa flavonoid merupakan salah satu fenol alami yang paling penting. Kelas senyawa penting lainnya yang terjadi dalam bahan tanaman diwakili oleh terpenoid, yang memainkan peran penting dalam pengembangan sistem kehidupan. Kebanyakan dari mereka adalah zat yang mudah menguap dan umumnya hadir dalam minyak esensial yang diperoleh dengan metode ekstraktif.

Tidak hanya tanaman tahunan tetapi juga tanaman kultur dipelajari dalam hal sifat farmakologisnya. Di antara tanaman kultur, spesies dekoratif Rudbeckia hadir di taman-taman tertentu atau publik. Berasal dari Amerika Utara, Rudbeckia adalah tanaman berbunga dari keluarga Asteraceae, ditemukan di 25 spesies abadi, tahunan, atau dua tahunan berbeda. Varietas yang paling umum dari tanaman ini adalah Rudbeckia fulgida, Rudbeckia hirta, Rudbeckia laciniata, atau Rudbeckia triloba.

Yang terakhir ini dilaporkan di Austria pada tahun 1970-an, sementara di Rumania, telah ditemukan untuk pertama kalinya di Maramures dan kabupaten Neamt.

Beberapa penelitian tentang sifat biokimia varietas Rudbeckia dilaporkan . Dengan demikian, minyak atsiri daun dari tiga anggota herba dari keluarga Asteraceae, Rudbeckia fulgida, Rudbeckia hirta, dan Symphyotrichum novae-angliae, diperoleh dengan hidrodistilasi dan dianalisis dengan kromatografi gas-spektrometri massa. Komponen utama dalam minyak atsiri Rudbeckia fulgida adalah hidrokarbon seskuiterpen (germacrene D (30,1%) dan cad-cadinene (17,8%)); komposisi serupa dilaporkan dalam kasus minyak daun Rudbeckia hirta, dengan 23,6% germacrene D dan 16,2% cadcadinene. Minyak daun dari ekstrak ini ditemukan tidak aktif untuk aktivitas antimikroba. Studi lain melaporkan komposisi kimia, mineral, dan efek antioksidan Rudbeckia laciniata [12]. Komponen umum Rudbeckia laciniata adalah protein kasar. Kandungan mineral tertinggi adalah kalium, diikuti oleh kalsium dan magnesium, menunjukkan bahwa Rudbeckia laciniata adalah bahan alkali. Kandungan senyawa fenolik dan flavonoid total dan aktivitas pembersihan radikal DPPH dari Rudbeckia laciniata juga dilaporkan. Profil kimia Rudbeckia hirta didirikan dengan teknik kromatografi lapis tipis (KLT) dan dengan cara total konten polifenol. Seperti tentang tindakan terapi dari spesies genus Rudbeckia, mereka relatif bervariasi. Senyawa aktif atau ekstrak tanaman ini menunjukkan efek anti-inflamasi (Rudbeckia hirta), antimycobacterial (Rudbeckia subtomentosa), antileukemic (Rudbeckia mollis), antitusif (Rudbeckia fulgida), aktivitas antioksidan, antibakteri, antivirus, antijamur, dan sitotoksik (Rudbeckia laciniata).

belum ada penelitian yang melaporkan dalam literatur tentang komposisi kimia dan aktivitas antioksidan dari Rudbeckia triloba. Dalam tulisan ini, bagian udara yang berbeda dari Rudbeckia triloba digunakan untuk mendapatkan minyak atsiri, infusa, decoct, dan maserasi hidroalkohol. Bahan padat tanaman (daun kering dan perbungaan), minyak esensial dari perbungaan kering, dan ekstrak air atau hidroalkohol yang diperoleh diperoleh dari kelopak, daun, dan biji kering yang dikarakterisasi dengan metode kromatografi atau / dan spektrofotometri.

PERCOBAAN

Pengumpulan Bahan Tumbuhan Rudbeckia triloba dikumpulkan pada Agustus 2016 dari kebun-kebun tertentu yang ditempatkan di daerah pedesaan batas Bucharest, Rumania. Pabrik itu dikonfirmasi di Kebun Raya Bukares, tempat spesimen voucher disimpan (406406 / 30.03.2017). Setelah dikumpulkan, bahan tanaman dipisahkan menjadi komponen udara utamanya: perbungaan, kelopak, daun, dan biji yang dicuci bersih dengan air untuk menghilangkan kotoran. Kemudian, bahan nabati tersebut dikeringkan pada suhu kamar. Komponen kering tanaman dipotong kecil-kecil dan disimpan dalam paperbag sampai percobaan lebih lanjut. 1. Preparasi bahan tanaman Infusa, dekok, dan maserasi diterapkan pada tiga bagian udara tanaman, yaitu, kelopak, biji, dan daun.

Sebelum infusa dan dekok, jumlah bahan sayuran kering yang ditimbang (1 g) direndam dengan volume kecil bi-distilled water (air suling rangkap) dingin dan didiamkan selama 10 menit. Prosedur pendahuluan ini memungkinkan sel-sel tanaman untuk berkembang dan dengan demikian melepaskan bahan aktifnya ketika menyiapkan infusa atau dekok. Infusa disiapkan dengan menambahkan 50 mL air bidistilled matang/sudah dididihkan ke bahan sayuran basah. Campuran ditutup dengan kaca arloji, dibiarkan selama 15 menit. Dekok dibuat dengan merebus bahan tanaman basah dengan 50 mL air selama 10 menit. Setelah itu, campuran dibiarkan selama 15 menit. Ekstrak hidroalkohol dibuat dengan memaserasi 0,5 g bahan nabati dalam 50 mL etanol 70% selama 7 hari, dalam keadaan gelap, pada suhu kamar. Kemudian, setiap ekstrak tanaman disaring melalui kertas saring. Filtrat secara kuantitatif dipindahkan ke labu ukur 100 mL dan dibawa ke perlakuan dengan air bidistilled (dalam perlakuan infusa dan dekok) dan dengan etanol 70% (dalam perlakuan maserasi), agar mendapatkan ekstrak encer. Bagian dari ekstrak filtrat yang diperoleh disimpan pada suhu -45 ° C untuk analisis lebih lanjut. Minyak atsiri diisolasi dari perbungaan kering, dengan hidrodistilasi dalam peralatan tipe Clevenger, selama 4 jam, menggunakan prosedur standar.

Minyak atsiri dikeringkan pada Na2SO4 anhidrat dan disimpan pada + 4 ° C. Kuantitas minyak atsiri dari tanaman dinyatakan dalam persentase (v / w), sebagai rata-rata nilai yang diperoleh dari lima ekstraksi. 2. Persiapan larutan Reagen Analitik Larutan induk asam galat (GA) 500 μg / mL disiapkan dengan melarutkan 0,0125 g asam galat dalam air suling, dipindahkan ke 25 mL dalam labu volumetrik. Larutan kerja asam galat 50 μg / mL diperoleh dengan pengenceran dari Larutan induk. Larutan induk quercetin (Q) 1 mg / mL dibuat dengan melarutkan 0,0250 g Quercetin dalam etanol 96% dan dipindahkan ke dalam labu volumetrik 25ml. Larutan kerja quercetin 100 μg / mL diperoleh dari Larutan induk, dengan pengenceran dengan etanol 96%. Larutan etanol 0,05% dari DPPH⋅ disiapkan sebelum digunakan. 3. Analisis GC-MS Analisis GC-MS dilakukan dengan sistem Thermo Electron (kromatografi GC focus digabungkan dengan detektor massa perangkap ion Quercetin Polaris). Kolom kapiler DB-5MS (25 mx 0,25 mm; ketebalan film 0,25 m) digunakan dengan helium sebagai gas pembawa (1 mL / menit).

Oven GC diprogram pada suhu awal 60 ° C selama 3 menit. Temperatur ditingkatkan hingga 200 ° C pada kecepatan 10 ° C / menit, dijaga konstan selama 2 menit, dan kemudian meningkat hingga 240 ° C pada kecepatan 12 ° C / menit dan ditahan pada 240 ° C selama 2 min. Kedua suhu injektor dan detektor dijaga pada 250 ° C. Mode ionisasi dampak elektronik adalah 70 eV, dan deteksi dilakukan dalam kisaran 35-300 amu (mode scan penuh). Identifikasi komponen dilakukan dengan menggunakan software Xcalibur®, NIST Mass Spectral Library, dan data literatur MS. Indeks retensi (RI) dari senyawa ditentukan relatif terhadap waktu retensi larutan standar n-alkana untuk GC (C8-C20). Persentase relatif dari masing-masing komponen dihitung berdasarkan area puncak GC tanpa menggunakan faktor koreksi. Untuk analisis GC-MS, minyak esensial hidrodistilled diencerkan dalam heksana (1: 100) dan 1 μL diinjeksikan. Triplus HS Autosampler (Thermo Electron) digunakan untuk analisis headspace, sejumlah 1 g perbungaan atau daun dimasukkan dalam botol sampel (ukuran 20 mL) dan disegel dengan septum karet silikon dan tutup aluminium. Botol headspace yang mengandung bahan tanaman dipanaskan hingga 80 ° C selama 10 menit, dan 500 μL gas headspace diinjeksikan ke dalam kolom. Analisis GC-MS dilakukan dengan cara yang sama seperti untuk minyak atsiri.

Penentuan kadar Fenolik total (TPC) 1. Semua pengukuran absorbansi dilakukan pada spektrometer UV-Vis (Jasco V-530, Jasco, Jepang), dilengkapi dengan sel kuarsa (panjang jalur cahaya 1 cm). 2. Uji spektrofotometri Folin-Ciocalteu (F-C) digunakan untuk menentukan kandungan total polifenol. Aliquot (0,1-0,5 mL) dari larutan kerja asam galat (50 μg / mL) dimasukkan ke dalam serangkaian labu terkalibrasi 5 mL. 3. Kemudian, 2,5 mL dari 10% reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan. Campuran diinkubasi dalam keadaan gelap selama 5 menit. 4. Kemudian, 2 mL larutan natrium karbonat 7,8% ditambahkan ke setiap sampel, dan volume total ditambahklan 5 mL air suling. 5. Setelah dihomogenkan, campuran diinkubasi dalam keadaan gelap selama 30 menit sebelum mengukur absorbansi pada 760 nm terhadap larutan kosong (diperoleh tanpa ditambahkan asam galat). 6. Kurva kalibrasi standar disiapkan dalam kisaran konsentrasi 1-5 μg / mL asam galat. 7. Untuk menentukan kadar fenolik total dalam ekstrak, alikuot dari masing-masing ekstrak encer digunakan sebagai pengganti asam galat, dan prosedur F-C diterapkan. 8. Kadar fenolik total dihitung dalam hal setara asam galat per gram bahan sayuran kering (mg GAE / g), dengan menerapkan persamaan regresi dari kurva kalibrasi A = 0,0968CGA + 0,0197 dengan R2 = 0,9998, di mana A adalah absorbansi dan CGA adalah konsentrasi larutan asam

galat (μg / mL). Pengukuran spektrofotometri untuk setiap sampel dilakukan dalam rangkap tiga.

2.7. Penentuan kadar Flavonoid total (TFC) 1. Kadar flavonoid ditentukan secara spektrofotometri, berdasarkan pembentukan kompleks Al (III) -flavonoid. 2. Quercetin digunakan sebagai flavonoid standar, dan prosedur yang dikutip diterapkan dengan sedikit modifikasi. 3 3. Aliquot (0,1-0,5 mL) dari larutan kerja quercetin (100 μg / mL) atau sampel ekstrak yang diencerkan dan etanol (hingga 2 mL campuran alkohol) ditambahkan dalam serangkaian labu terkalibrasi 5 mL. 4. Selanjutnya, 0,1 mL aluminium klorida 10%, 0,1 mL larutan kalium asetat 1M, dan air ditambahkan ke setiap sampel untuk membuat volume total 5 mL. 5. Campuran dihomogenkan dan didiamkan selama 30 menit pada suhu kamar. 6. Kemudian, absorbansi diukur pada 427 nm terhadap reagen kosong (untuk setiap sampel, campuran kosong disiapkan, tanpa penambahan AlCl3). 7. Kadar flavonoid total dari bahan nabati dihitung dalam hal setara kuersetin per gram bahan nabati kering (mg QE / g), dengan menerapkan persamaan regresi dari kurva kalibrasi A = 0,0652CQ + 0,0804 dengan R2 = 0,9992, di mana CQ adalah konsentrasi larutan kuersetin (μg / mL). 8. Pengukuran spektrofotometri untuk setiap sampel dilakukan dalam rangkap tiga. 2.8. DPPH⋅ Radical Scavenging Assay 1. Aktivitas pembersihan radikal bebas DPPH⋅ dari ekstrak herbal yang diperoleh ditentukan. 2. Aliquot dari ekstrak filtrat (0,01-0,3 mL) dicampur dengan etanol hingga 1,9 mL. 3. Kemudian, 0,1 mL larutan etanol 0,05% dari DPPH⋅ ditambahkan ke masing-masing sampel hingga total volume 2 mL. 4. Larutan standar yang mengandung 0,1 mL 0,05% DPPH⋅ dan 1,9 mL etanol juga disiapkan. 5. Campuran dihomogenkan dan disimpan dalam keadaan gelap selama 30 menit, pada suhu kamar. 6. Kemudian, pengukuran absorbansi dilakukan pada 517 nm terhadap reagen kosong (untuk setiap sampel, campuran kosong disiapkan tanpa menambahkan DPPH⋅). 7. larutan DPPH⋅ baru disiapkan dan disimpan di lemari es sampai digunakan. 8. Nilai EC50 diperoleh dengan mengatur atau menempatkan absorbansi pada 517 nm dibandingkan konsentrasi larutan ekstrak. Konsentrasi (%, v / v) larutan sampel yang menurunkan absorbansi awal DPPH⋅ sebesar 50% mewakili EC50.

3. Hasil dan Pembahasan 3.1. yield Minyak Esensial

Kandungan rata-rata dalam minyak esensial perbungaan Rudbeckia triloba adalah 0,300% (mL minyak atsiri / 100 g tanaman). Minyak esensial berwarna kuning muda dengan bau tertentu.

3.2. Hasil Analisis GC-MS Analisis GC-MS mengungkapkan bahwa jumlah komponen volatil dari minyak esensial hydrodistilled dari perbungaan adalah berbeda dari bahan tanaman kering (daun dan perbungaan) yang mengalami ekstraksi headspace. Tabel 1 menunjukkan kandungan relatif senyawa volatil dari daun, perbungaan, dan minyak esensial perbungaan Rudbeckia triloba yang tumbuh di Rumania, dinyatakan sebagai persentase dari total area. Dengan demikian, menggunakan headspace, dua puluh dua senyawa yang diidentifikasi dalam daun menyumbang 99,0% dari total komponen yang diidentifikasi, dengan α-pinene (46,0%), β-phellandrene (24,6%), sabinene (9,6%), dan germacrene D ( 6.1%) sebagai komponen utama. Bunga-bunga Rudbeckia triloba mengandung tiga puluh tiga komponen (98,6%), dengan konstituen utama yang sama, tetapi dalam persentase yang berbeda: α-pinene (40,1%), germacrene D (24,0%), βphellandrene (13,9%), dan sabinene (9,7%). Jumlah total komponen yang diidentifikasi dari minyak esensial perbungaan adalah empat puluh satu, mewakili 95,9% dari total area. Kandungan arau kompenen yang sama adalah senyawa volatil utama dari minyak atsiri, dengan β-phellandrene (26,09%), germacrene D (21,6%), α-pinene (16,3%), dan sabinene (12,0%).

Table 1: Compounds identified by GC­MS technique in the Rudbeckia triloba.

Compositionb (%) Number

Compound

RIa

Inflorescences Leaves

Dry material

Essential oil

1

α-Thujene

924

0.2

0.2

—

2

α-Pinene

940

46.0

40.1

16.3

3

Camphene

957

0.2

0.5

0.3

4

Sabinene

978

9.6

9.7

12.0

5

β-Pinene

982

0.8

0.7

—

6

β-Myrcene

991

2.9

1.5

1.7

7

α-Phellandrene

1006

1.1

0.8

1.3

8

3-Carene

1013

0.1

0.2

—

9

α-Terpinene

1018

—

—

0.2

10

p-Cymene

1026

0.6

0.2

—

11

β-Phellandrene

1031

24.6

13.9

26.0

12

Z-β-Ocimene

1046

0.3

0.4

0.6

13

Butyl-2-methylbutanoate

1048

0.2

—

—

14

E-β-Ocimene

1055

0.3

0.3

—

15

γ-Terpinene

1059

0.2

0.0

0.4

16

cis-Sabinene hydrate

1071

—

0.1

—

17

α-Terpinolene

1088

0.8

—

0.2

18

Linalool

1094

0.3

0.1

—

19

trans-para-Mentha-2,8-dien-1-ol

1108

—

0.7

—

20

Α-Campholenal

1127

—

0.7

0.3

21

cis-p-Mentha-2,8-dien-1-ol

1136

—

—

0.1

22

Sabinol

1142

0.2

0.2

0.2

23

cis-Verbenol

1147

—

0.3

0.6

24

Lavandulol

1165

—

—

0.2

25

trans-2-Caren-4-ol

1172

—

0.1

0.3

26

Terpinen-4-ol

1179

—

—

0.5

27

Cryptone

1190

—

0.6

1.0

28

Verbenone

1216

—

0.2

—

29

trans-Carveol

1219

—

—

0.1

30

Butanoic acid, 2-methyl-, hexyl ester

1230

0.6

—

—

31

Cumin aldehyde

1244

—

—

0.4

32

Phellandral

1281

—

—

0.2

33

δ-Elemene

1339

—

—

0.1

34

α-Terpineol acetate

1345

2.5

—

—

35

Cyclosativene

1374

—

—

0.1

36

Α-Copaene

1379

—

—

0.1

37

Β-Maaliene

1388

—

—

0.1

38

Β-Cubebene

1392

—

0.2

0.5

39

β-(E)-Caryophyllene

1427

0.4

1.2

1.7

40

Β-Gurjunene

1435

—

0.3

0.6

41

cis-β-Farnesene

1450

—

—

0.3

42

Humulene

1461

—

0.2

0.4

43

Γ-Gurjunene

1464

—

0.2

0.4

44

Γ-Muurolene

1480

—

0.2

0.6

45

Germacrene D

1490

6.1

24.0

21.6

46

Α-Muurolene

1503

—

0.3

0.5

47

Γ-Cadinene

1523

—

0.3

0.9

48

Δ-Cadinene

1526

—

—

0.2

49

Spathulenol

1588

—

—

0.9

50

Caryophyllene oxide

1597

—

0.1

0.7

51

Cedr-8-en-13-ol

1656

—

—

0.2

52

Cadalene

1680

1.0

0.1

—

53

6-Isopropenyl-4,8a-dimethyl1,2,3,5,6,7,8,8a-octahydronaphthalen-2-ol

1694

—

—

2.2

54

Hexahydrofarnesyl acetone

1747

—

—

0.9

 

Total (%)

 

99.0

98.6

95.9

 

Monoterpene hydrocarbons

 

87.7

68.6

59.0

 

Oxygenated monoterpenes

 

3.0

2.9

3.9

 

Sesquiterpene hydrocarbons

 

7.5

27.0

28.0

 

Oxygenated sesquiterpene

 

—

0.1

4.9

 

Nonterpene ester

 

0.8

—

—

Atas dasar analisis GC-MS, orang dapat menyimpulkan bahwa Rudbeckia triloba merupakan sumber α-pinene yang penting. Hidrokarbon monoterpen ini diketahui memiliki sifat ansiolitik dan obat penenang. Ini juga bertindak sebagai bronkodilator. Dilaporkan bahwa terpene ini memiliki khasiat untuk mengurangi ukuran tumor kanker. 3 kadar total Fenolik dan Flavonoid Bagian utama dari penelitian yang dilaporkan menyimpulkan bahwa polifenol (flavonoid menjadi keluarga terbesar senyawa polifenol) adalah senyawa utama yang bertanggung jawab untuk aktivitas antioksidan dari ekstrak tanaman yang diuji. Tabel 2 menyajikan TPC dan TFC dari ekstrak yang diperoleh (infusa, dekok, dan maserasi hidroalkoholik dari bagian udara berbeda dari Rudbeckia triloba).

Table 2: Total phenolic content (TPC) and total flavonoid content (TFC) of extracts obtained from different aerial parts of Rudbeckia triloba.

Vegetabl e material

TFC (QE, mg/g dry vegetable)

TPC (GAE, mg/g dry vegetable)

Infusaion

Decoct

Macerate

Infusaion

Decoct

Macerate

Petals

8.66 ±  0.52

12.69 ±  0.52

30.72 ±  1.35

40.51 ±  2.11

73.53 ±  3.51

130.29 ±  5.58

Leaves

3.22 ±  0.22

2.37 ± 0.11

21.72 ±  1.22

15.02 ±  0.82

62.06 ±  3.12

93.43 ± 4.85

Seeds

0.64 ±  0.06

2.82 ± 0.23 6.65 ± 0.34 5.51 ± 0.32

70.64 ±  3.25

70.14 ± 3.45

Nilai TPC dan TFC maksimum diperoleh dengan maserasi bahan nabati diikuti dengan dekok dan infusa. Semua prosedur ekstraksi menunjukkan nilai maksimum TPC dan TFC dalam kelopak. Perbandingan antara infusa dan dekok menunjukkan bahwa dekok lebih efisien daripada infusa dalam ekstraksi polifenol. Perilaku ini dapat dijelaskan sebagai berikut. Baik infusaa dan dekok adalah prosedur termal yang cocok untuk mengekstraksi senyawa yang stabil terhadap panas yang menyebabkan perbedaan kandungan fenolik total dari infusaa dan dekok. Konsentrasi total total fenolik yang lebih tinggi dalam dekok daripada dalam infusaa, diperoleh dengan memanaskan campuran air-nabati untuk waktu yang cukup lama (15 menit), dapat dijelaskan sebagai berikut: kerusakan konstituen seluler serta hidrolisis tanin terjadi. Degradasi tanin fenolik kompleks serta proses oksidasi enzimatik atau nonenzimatik menyebabkan kandungan tambahan dari senyawa fenolik dalam dekok. Pada saat yang sama, selama dekok, reaksi Maillard terjadi, menghasilkan senyawa fenolik baru.

Juga, membandingkan tiga prosedur ekstraksi yang diterapkan (infusa, dekok, dan maserasi), maserasi tampaknya lebih efisien daripada infusa dan dekok untuk mengekstraksi polifenol (etanol 70% dipilih untuk maserasi, menjadi pelarut yang paling sering digunakan untuk mengekstraksi senyawa fenolik dari tanaman). Perilaku ini dapat disebabkan oleh kemungkinan pembentukan kompleks beberapa senyawa fenolik, memiliki lebih banyak gugus fenol atau memiliki ketinggian molekul yang lebih tinggi daripada fenolik dalam air. Senyawa ini tampaknya larut dalam ekstrak hidroalkohol. Juga, kandungan lebih banyak senyawa nonfenol, seperti terpene, asam organik, gula, dan protein yang larut, dalam infusa daripada dimaserasi dapat mengganggu uji TPC. Ini juga dapat disebabkan oleh kemungkinan pembentukan kompleks beberapa senyawa fenolik dalam ekstrak makerat yang larut dalam campuran etanol-air. Senyawa fenolik ini mungkin memiliki lebih banyak gugus fenol atau mungkin memiliki berat molekul lebih tinggi daripada fenolat dalam ekstrak air. Seperti dilaporkan, campuran air-alkohol yang digunakan dalam prosedur ekstraksi mengarah ke peningkatan pembengkakan bahan tanaman,

memastikan kontak intim antara matriks tanaman dan pelarut dan akibatnya peningkatan hasil ekstraksi . Selain itu, bahan tanaman mengandung berbagai macam senyawa fenolik yang memiliki jumlah kelompok fenolik yang berbeda dengan reaktivitas yang berbeda terhadap reagen Folin-Ciocalteu.

terkait flavonoid, dari data yang dilaporkan dalam literatur, uji utama untuk penentuan kadar total flavonoid umumnya didasarkan pada absorbansi senyawa Al (III) -flavonoid. Perbedaan antara dua metode spektrofotometri yang paling banyak diterapkan adalah media reaksi: (a) di hadapan NaNO2, dalam media alkali dan (b) di hadapan CH3COOK atau CH3COONH4 (tanpa nitrit). Dalam pekerjaan kami, metode spektrofotometri tanpa menggunakan nitrit . Metode yang terakhir ini hanya dapat digunakan untuk menentukan kandungan flavonol (quercetin, rutin, kaempferol, dan morin) dan luteolin (dari keluarga flavones). Mengenai korelasi antara TPC dan TFC, ditemukan signifikan dalam kasus infusa dan maserasi. Berdasarkan data literatur, korelasi seperti itu menunjukkan bahwa flavonoid merupakan bagian penting dari fenol dalam ekstrak tanaman. Hasil pada Tabel 2 menunjukkan bahwa infusa dan maserasi yang diperoleh dari kelopak dan daun tampaknya mengandung persen flavonoid yang signifikan.

Table 3: Correlations   between   total   phenolic   content   and   flavonoids   content   of extracts obtained from different aerial parts of Rudbeckia triloba.

Extract

Correlation (R2)

Infusaion

y = 0.2259x – 0.4251 (0.9971)

Decoct

y = 0.7059x – 42.568 (0.5212)

Macerate

y = 0.3739x – 17.183 (0.9147)

3.4. Free radical scavenging activity Seperti disebutkan, senyawa polifenol dan flavonoid dianggap memiliki sifat antioksidan yang signifikan terutama karena kandungan penting dalam kelompok hidroksil. Zat-zat ini dapat bertindak sebagai pengumpulan radikal karena gugus fenolik hidroksil adalah antioksidan penyumbang H yang baik, yang mencari spesies oksigen reaktif dan menghentikan produksi radikal baru. Radikal DPPH⋅ yang stabil sering digunakan untuk menilai aktivitas pembersihan radikal dari banyak senyawa aktif biologis. DPPH⋅ memiliki sifat untuk menerima elektron dari antioksidan. Reaksi redoks ini menyebabkan penurunan warna ungu dari radikal DPPH ⋅. Total reaksi antioksidan-DPPH⋅ mengarah ke larutan berwarna kuning. Nilai EC50 yang rendah menunjukkan aktivitas pembersihan yang tinggi. Seperti yang diamati pada Tabel 4, ekstrak yang diperoleh dari kelopak menyajikan nilai terendah EC50 dengan minimum dalam kasus ekstrak maserasi. Mengenai hubungan antara nilai-nilai EC50 dan TPC, umumnya, korelasi linear negatif dilaporkan dalam literatur. Tetapi, tidak selalu ada korelasi linier antara dua parameter analitik

ini. Dalam penelitian kami, korelasi linear negatif diperoleh dalam kasus infusa dan ekstrak maserasi pada tabel 5. Cheynier et al. mengasumsikan bahwa selain pemulungan radikal, aktivitas antioksidan juga dapat dikaitkan dengan mekanisme lain yang berbeda seperti pengikatan katalis ion logam transisi atau penguraian peroksida. Pada saat yang sama, aktivitas pembilasan radikal polifenol tergantung pada struktur molekulnya, masing-masing, pada ketersediaan hidrogen fenolik dan kemungkinan stabilisasi radikal HO dan NO yang dihasilkan melalui sumbangan hidrogen.

Table 4: Total antioxidant capacity of extracts obtained from different aerial parts of Rudbeckia triloba.

Vegetable material

EC50 (% (v/v)) Infusaion

Decoct

Macerate

Petals

0.51 ± 0.03

0.61 ± 0.03

0.32 ± 0.02

Leaves

1.01 ± 0.05

2.52 ± 0.13

0.62 ± 0.03

Seeds

2.22 ± 0.11

3.41 ± 0.17

0.88 ± 0.04

Table 5: Correlations between total antioxidant capacity and total phenolic content of extracts obtained from different aerial parts of Rudbeckia triloba.

Extract

Correlation (R2)

Infusaion

y = −18.132x + 42.952 (0.7760)

Decoct

y = −1.8133x + 72.736 (0.1939)

Macerate

y = −86.751x + 152.73 (0.9504)

4. Kesimpulan Hasil yang diperoleh pada ekstrak Rudbeckia triloba menunjukkan aktivitas antioksidan yang signifikan, terutama maserasi kelopak (dihasilkan dengan menerapkan Folin-Ciocalteu, total flavonoid, dan tes DPPH⋅). Juga, daun, perbungaan, dan minyak esensial perbungaan Rudbeckia triloba ditemukan kaya akan hidrokarbon monoterpen (terutama, α-pinena dalam daun dan perbungaan dan β-phellandrene dan germacrene D, dalam minyak esensial perbungaan).