Biochimie Lp 10.docx

Dozarea colesterolului seric

Colesterolul este sterol constituent al tuturor tesuturilor animale. Sinteza colesterolului are loc in celulele reticulate si histocitare raspandite in tot organismul, sediul principal al biosintezei colesterolului fiind insa parenchimul hepatic. Biosinteza sa se poate realiza insa si la nivelul peretului intestinal, al glandelor suprarenale, al musculaturii, etc. Colesterolul se prezinta sub doua forme : libera si esterificata cu acizi grasi, suma acestora constituind colesterolul total. Colesterolul esterificat este sintetizat in principal in ficat. Desi colesterolul si esterii sai manifesta solubilitate redusa in mediu apos , totusi , in plasma si tesuturi , sunt mentinuti in stare solubila datorita unor asociatii moleculare solubie pe care le formeaza prin combinare cu proteinele (complexe lipoproteice). In plasma, colesterolul se afla legat de diferite clase de lipoproteine : 60% din colesterolul total de catre LDL; 20% de HDL; 15% de VHDL si 5 % de chilomicroni. Colesterolul reprezinta component majora in β-lipoproteine (LDL) care transporta colesterolul esterificat spre tesuturi (inclusive vasele sanguine) pt a fi depozitat. α-lipoproteinele transporta colesterolul de la tesuri la ficat pt metabolizare ( coversia in acizi biliari). HDL sunt in competitie cu LDL, pt fixarea la receptorii tisulari si pot astfel reduce acumularea colesterolului in peretii vaselor sanguine. Colesterolul sanguine este de origine hepatica ( endogena ) dar si exogena. Hipercolesterolemia,se intalneste intr-o serie de afectiuni, in special ale ficatului iar hipercolesterolemii secundare se mai intalnesc si in arteroscleroza, diabet zaharat , obezitate,hipotiroidism , azotemii cornice, sindrame nefrotice,etc. Un nivel ridicat al colesterolului seric este implicat in formarea placilor arteroslerotice reprezentand un factor de risc in aparitia bolilor arterelor coronare. In consecinta , determinarea colesterolului total si a celor doua fractiuni LDL-colesterol si HDL-colesterol sunt frecvent solicitate ca teste screening sau pt monitorizarea pacientilor cu afectiuni coronariene. Hipocolesterolemiile sunt mai rar intalnite dar pot sa existe fie ca boli de sine statatoare (colesteroloza familiala) sau secundare in cadrul altor boli ( anemii, hipertiroidism , infectii grave, etc.) Repartizarea colesterolului intre eritrocite si plasma este aprox. egala; in eritrocite predomina insa colesterolul liber (22-30%), iar in plasma cel esterificat (70-78%). In conditii fiziologice , intre colesterolul hepatic si cel sanguin exista in echilibru dinamic , nivelul colesterolului sanguin fiind dependent de factorii care influenteaza biosinteza sa in tesutul hepatic care intervine in reglarea colesterolemiei, proces in care sunt implicate sinteza , depozitarea , degradarea ( catabolizarea ) si excretia colesterolului sanguine. Dozarea colesterolului total Metoda Watson Principiul metodei Se bazeaza pe reactia de culoare a colesterolului in prezenta de anhidrida acetic si acid sulfuric ( reactia Liebermann ). Complexul colorat este stabilizat cu acid 2-5 dimetilbenzensulfonic.

Tehnica de lucru Se realizeaza urmatoarea schema experimental : Reactivi (ml) Ser Acid acetic glacial Reactiv de culoare Apa distilata Solutie standard de colesterol

Proba de analizat (P) 0,2 0,2 5,0 -

Standard (S)

Proba in alb (B)

5,0 0,2 0,2

0,2 5,0 0,2 -

Se lasa 10-15 min la temperature camerei Acid sulfuric concentrat 0,6 0,6 Dupa 20 min e fotometreaza la 560 nm fata de proba in alb

0,6

Calcul mg%colesterol=Ep/Es x 200 unde: Ep=extinctoa probei Es= extinctia martorului Observatii: - Se va folosi numai sticlarie perfect uscata. - Serurile icterice sau cu hemoliza dau rezulate eronate. Variatii Fiziologice ale colesterolului seric Valorile normale ale colesterolului seric variaza foarte mult in functie de sex ,varsta , alimentative, echilibru neuro-endocrin. In general se considera ca normale urmatoarele valori : - 100-150 mg% ml ser , la copilul mai mic de 1 an ; -

Pana la 40 ani : 120-220mg% ml ser ; 3,1-5,6 mmol/l ser 40-50 ani : 150-260mg% ml ser ; 3,8-7,0mmol/l ser; Dupa 60 de ani , nivelul seric normal al colesterolului la femei este mai mare decat la barbati. Crestere constanta , in timpul sarcinii si dupa mese.

Variatiile colesterolului seric in functie se sex si varsta Varsta (ani) 20 30 40 50 60 70

Barbati (mg colesterol/100 ml ser) 110-250 120-290 135-315 150-340 140-320 140-310

Femei (mg colesterol/100 ml ser) 110-250 120-290 135-290 135-290 145-355 140-310

Se constata ca valorile pt sexul feminin sunt usor mai scazute decat cele pt sexul masculin pana la menopauza , cand le depasesc. La femei, colesterolul scade in perioada de mijloc a ciclului menstrual si creste in perioada premenstruala si im tipmul sarcinii. La nou-nascut colesterolul seric este de 90 mg/100 ml ser , creste cu 40% pana in a 3-a zi de viata , apoi creste lent cu varsta pana in jur de 50 de ani. In general , pt toate persoanele peste 20 de ani , fara deosebire de sex sau varsta , se considera o valoare de sub 200 mg/100 ml ser ca fiind de dorit , valori de 200-239 mg/100 ml ser ca fiind valori de granite , iar valorile mai mari de 240 mg/ 100 ml ser sunt considerate ca indicatoare a necesitatii reducerii colesterolului prin regim alimentar. Variatii patologice Valori crescute (Hipercolesterolemii) in: - Hiperlipemia esentiala;hipercolesterolemia esentiala;sindroame nefrotice ( in particular “nefroze lipolitice”, mai mare de 500 mg% ml ser), pancreatite, ictere prin retentie, obstructia extrahepatica a canalelor biliare ,hipotiroidism (mixedem),tulburari de metabolism ale lipidelor :diabet , obezitate, aterom,xantomatoze diverse, alcoolism, sarcina, intoxicatii acute cu fosfor, tetraclorura de carbon,morfina,obstructii ale cailor biliare , dieta cu continut ridiact de grasimi , hipertensiune arterial, infarct miocardic , arteroscleroza, ciroza biliara, stres. Valori scazute (Hipocolesterolemii) in: -

-

-

Insuficiente hepatice grave (ciroza) cand scade mai ales fractiunea esterificata. Unele maladii infectioase severe (pneumonie , tuberculoaza, difterie). Hemopatii severe ( anemia Biermer, anemie pernicioasa /hemolitica/sideroblastica,talasemie, leucemie mielocitara cronica, boala Hodgkin,macroglobulinemie Waldenstrom, policitemia vera, metaplazie mieloida,mielofibroza limsarcom , etc.) Pneumonie , febra tifoida , endocardita maligna , hipertoroidism (inconstant),stari grave de denutritie , malabsorbtie, medicatie hipolipemianta , infarct acut de miocard. Afectiuni genetice (a-β-lipoproteinemie, an-α-lipoproteinemie). Valori ale colesterolului sub 100 mg/100 ml si ale lipidelor totale sub 250 mg/100ml s-au descris intr-o boala cu caracter familial denumita abetalipoproteinemie sau acantocitoza si in care exista o perturbare cu caracter genetic in proces de sinteza a betalipoproteinelor . Scaderea colesterolemiei sub 100 mg s-a observant si in deficitul familial de α1 lipoproteinemie ( Boala Tangier). Sepsis, stress.