Banco Sangre -control De Calidad Centrifugas

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U.C.S FACULTAD DE BIOANALISIS REGION XALAPA LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGIA WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

PRACTICA CONTROL DE CALIDAD DE CENTRIFUGAS OBJETIVO E l alumno identificará cual es el propósito de realizar a cabo un buen control de calidad de los aparatos y equipo en el banco de sangre. Fundamento: • •

La calibración funcional de las centrífugas se retire a la verificación de la reacción u obtención del producto que se lleve acabo, por lo que el procedimiento es diferente para cada tipo de centrífugas. L a velocidad de rotación se calcula a partir de los golpes que da contra un lápiz, la parte lateral de la plataforma de agitación cuando está en movimiento, dura un período de 15 segundos y multiplicándose por cuatro.

GENERALIDADES: Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las muestras a intensas fuerzas que producen la sedimentación en poco tiempo de las partículas que tienen una densida mayor que la del medio que las rodea.

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En general se diferencian en función de los márgenes de aceleración a que someten a las muestras en : centrífugas (de pocas g a aprox. 3000 xg), super-centrífugas (o centrífugas de alta velocidad, rango de 2000 xg a 20000 xg) y ultracentrífugas (de 15000 xg a 600000xg). En las centrífugas se suele controlar la temperatura de la cámara para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido a la fricción. En las ultracentrífugas, la velocidad extrema (más de 100000 rpm), hace que sea neceario hacer un intenso vacio en la cámara de la centrífuga para evitar el calentamiento de rotor y muestra. En una centrífuga el elemento determinante es el rotor, dispositivo que gira y en el que se colocan los tubos.

Existen varios tipos : * Rotor basculante. Los tubos se colocan en un dispositivos (cestilla) que, al girar el rotor, se coloca en dispocisión perpendicular al eje de giro. Así pues los tubos siempre giran situados perpendicularmente al eje de giro.

*Rotor de ángulo fijo. Los tubos se insertan en orificios en el interior de rotores macizos. El caso extremo es el de los rotores verticales en los que el tubo se sitúa paralelo al eje de giro. Este tipo de rotores es típico de ultracentrífugas y se emplea en separaciones de moléculas en gradientes de densidad autogenerados (por ej. de cloruro de cesio).

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Los parámetros a tener presentes en cualquier centrifugación, que determinarán las condiciones son : •

volumen de solución a centrifugar, que determinará el tipo de tubos y rotores a emplear.

•

naturaleza química de la solución, que determinará la naturaleza del tubo a emplear

En general cuanto mayor sea esa diferencia antes (menor tiempo y menor fuerza de aceleración) sedimentará. Cuando el diferencial es muy pequeño se pueden aplicar centrifugaciones de cientos de miles de g durante horas.

CONTROL DE CALIDAD DEL EQUIPO •

El correcto funcionamiento del equipo en el laboratorio nos permitirá la optimización en los programas de calidad de componentes y reacción realizada en el banco de sangre. Se consideran 3 aspectos el manejo , la limpieza ya que debe ser diaria en forma superficial y semanalmente a fondo y el mantenimiento es te puede ser preventivo que se considera como primera opción , un mantenimiento periódico que conserva al equipo en condiciones de funcionamiento permanente, este mantenimiento debe darse como mínimo cada 6 meses.(2)

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Las centrífugas de los laboratorios clínicos es diseñada para proporcionar una fuerza centrífuga en los fluidos y componentes celulares, teniendo tres funciones principales: 1. Preparación de suero y plasma 2. Obtención de complejo ag-ac 3. Reacciones de aglutinación. 4. La cantidad relativa de la fuerza centrífuga se incrementa con la velocidad del eje de rotación lo cual incrementa la ampliación del eje.

CALIBRACIÓN FUNCIONAL PREPARACIÓN DE REACTIVOS a) Use antisueros puros Anti-A, Anti-D o suero coombs, para la calibración de las diferentes fases ( medios) b) Prepare soluciones al 5% de eritrocitos de prueba y de los eritrocitos control – CALIBRACIÓN DE LA FASE SALINA 1. Marcar 6 tubos como 1 P hasta 6 P para las células de prueba. Marcar 6 tubos con IC hasta 6c para las células de control 2. agregar 1 gota de anti-A diluido de tal forma que de una reacción de 1 a 2+ acada tubo 3. Agregar a cada 1 gota de eritrocitos a prueba al 5% a todos los tubos marcados con la letra T 4. agregar 1 gota de suspensión de células control – al 5% a todos los tubos marcados con la letra C. 5. centrifugar los tubos 1T 1C por el tiempo indicado, resuspender las células y anotar cuidadosamente el grado de aglutinación y observaciones 6. centrifugar los tubos restantes incrementando el tiempo según la tabla

FASE ALBUMINOSA 1. marcar 6 tubos como 1P hasta 6P para las células a prueba. Marcar 6 tubos 1C hasta 6C para las células control -. 2. agregar una gota de antisuero anti-D diluido a cada tubo 3. agregar 1 gota de suspensión de células al 5% a todos los tubos marcados con la letra P 4. agregar 1 gota de suspensión de células control - al 5% a todos los tubos marcados con la letra C. 5. centrifugar los tubos 1P y 1C por el tiempo indicado , resuspender las células y anotar cuidadosamente el grado de aglutinación y observaciones 6. centrifugar los tubos restantes incrementando el tiempo según la tabla

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FASE DE LAVADO 1. 2. 3. 4.

Marcar 8 tubos y agregar a cada uno 1 gota de g.r al 5% agregar solución salina hasta ¾ partes del tubo Centrifugar los tubos en grupo de dos 1´30”, 2´, 2´30” y 3. Examinar los tubos centrifugados y ver si el sobrenadante está claro y el botón este bien delineado. 5. Seleccionar aquel tiempo centrifugado donde el botón este bien delineado y el sobrenadante este claro. VELOCIDAD DE ROTACIÓN El diámetro de rotación puede ser checado por este método: 1. colocar un lápiz perpendicular al borde de la plataforma y una hoja de papel en contacto con la punta del lápiz, de tal manera que al funcionar el rotor, se dibuje sobre el papel del circulo.

RELOJ DEL ROTOR 1.-.Poner en funcionamiento simultáneamente, el reloj del rotor que está evaluando y un cronómetro de referencia Al final del tiempo programado, anotar la diferencia existente entre los 2 relojes. Repetir los 2 puntos anteriores 2 veces mas. Calcular el promedio de las 3 lecturas. El criterio de aceptación es que no debe haber mas del 10% de diferencia en las lecturas individuales. RESULTADOS CALIBRACIÓN DE LA FASE SALINA Sobrenadante claro

Botón bien delineado

Fácil resuspensión

Grado de aglutinación

15

Prob

Contr

Prob

Contr

Prob

Contr

Prob

Contr

20

Si

Si

No

No

Si

Si

++

No

25

Si

Si

N

N

Si

Si

++

N

30

Si

Si

No

No

Si

Si

+++

No

35

Si

Si

No

No

Si

Si

+++

No

5

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40

Si

Si

No

No

Si

Si

+++

No

45

Si

Si

No

No

Si

Si

+++

No

FASE ALBUMINOSA

Sobrenadante claro

Botón bien delineado

Fácil resuspensión

Grado de aglutinación

15

Prob

Contr

Prob

Contr

Prob

Contr

Prob

Contr

20

Si

Si

No

No

Si

Si

+

No

25

Si

Si

N

N

Si

Si

+

N

30

Si

Si

No

No

Si

Si

+++

No

35

Si

Si

No

No

Si

Si

No ++

40

Si

Si

No

No

Si

Si

++

No

45

Si

Si

No

No

Si

Si

++

No

FASE LAVADO Sobrenadante claro

Botón bien delineado

Segundos

Prob

Contr

Prob

Contr

1:00 min

Si

Si

No

No

1:30 min

Si

Si

N

N

2:00 min

Si

Si

No

No

2:00 min

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Si

Si

No

No

2:30 min

Si

Si

No

No

3:00 min

Si

Si

No

No

3:00 min

VELOCIDAD ROTACIÓN Tiempo que pego el lápiz 11 segundos 11 x 4= 44 x 4 = 170 rpm Diámetro del rotor: 1.8 cm

RELOJ DEL ROTATOR 1ª lectura

80 seg

2ª lectura

90 seg

3ª lectura

90 seg

Total

260 seg Media: 8 6.6

Datos de los equipos utilizados

1. Reactivo anti A

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Marca o casa comercial

Transclone

caducidad

28-feberero-2002

Lote

461314XE

2. Centrífuga serofuge II, casa comercial Clay adams : 3. Agitador , casa comercial equipar CONCLUSIONES: es importante llevar acabo en el laboratorio de banco de sangre un buen mantenimiento del equipo con el que se cuenta porque si no se realiza un control adecuado y realizamos nuestras pruebas a realizar cotidianamente nos pueden llevar a dar algún resultado falso positivo, por eso es importante checar la velocidad de centrifugación de nuestras centrífugas para evitar retrasos de trabajo hay que engrasar periódicamente el eje de la centrífuga , hay que llevar calibraciones adecuadamente cada 2 a 3 meses y llevar una revisión periódica de los agitadores.

REFERENCIAS: 1. Kaplan ,L.A, Química clínica, Técnicas de laboratorio, Editorial médica panamericana, buenos aires argentina , 1998. 2. Radillo, G.A, Medicina Transfusional, Editorial prado,1999,México, pagina 329 3. http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/fraccionamiento.htm

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