PERCOBAAN I KARBOHIDRAT
I.
TUJUAN PRAKTIKUM 1. Mengidentinfikasi karbohidrat secara kualitatif 2. Mengidentifikasi polisakrida secara kualitatif 3. Mengidentifkasi gula pereduksi 4. Membedakan monosakarida dan disakarida 5. Mengindentifikasi pentosa 6. Mengidentifikasi ketosa 7. Mempelajari reaksi-reaksi yang terjadi pada identifikasi karbohidrat 8. Mengetahui sifat-sifat karbohidrat.
II.
DASAR TEORI Karbohidrat adalah turunan aldehid atau keton dari poliaalkohol dengan rumusan umum Cn(H2O)n. Karbohidrat adalah bagian dari zat gizi utama yang berperan sebagai sumber energi terutama pada manusia, karbohidrat di konsumsi sebagai polisakarida, disakarida, dan monosakrida. Polisakarida adalah polimer dari monosakarida, yang terpenting sebagai bahan dimer dari monosakarida. Disakarida yang lazim dikonsumsi adalah maltosa dan sukrosa. Laktosa merupakan satu-satunya disakarida yang dihasilkan oleh mamlia, glukosa, galaktosa dan fruktosa merupakan monosakarida yang mempunyai 6 atau C(heksosa). Glukosa dan galaktosa merupakan suatu aldosa (gula dengan gugus aldehid) sedangkan fruktosa adalah ketosa (gula dengan gugus keton) beberapa karbohidrat mempunyai sifat sebagai gula pereduksi seperti glukosa, fruktosa, maltosa dan lain-lain. Fungsi karbohidrat menyediakan sebagian energi dalam kebanyakkan organisme (karbohidrat sederhana adalah gula; kabohidrat yang kompleks dapat dipecahkan menjadi gula sederhana) karbohidrat juga adalah komponen struktural dari dinding sel dan membran sel. Karbohidrat bekerja sama sebagai senyawa antar metabolik yaitu (glukosa-6-fosfat). Karbohidrat misalnya (ribose, deoksiribosa) adalah komponen dari nukleutida yang membentuk DNA dan RNA. Karbohidrat juga memainkan peran sebagai pelicin, dalam latar komunikasi dan imunitas.
III.
ALAT DAN BAHAN Alat: 1. Tabung reaksi
: 6 buah
2. Rak tabung reaksi
: 1 buah
3. Penjepit tabung
: 1 buah
4. Pipet tetes
: 2 buah
5. Porselin tetes
: 1 buah
6. Lampu spritus
: 1 buah
7. Gelas beker 500 ml
: 2 buah
8. Hotplate
: 1 buah
9. Kaki tiga dan kawat kasa
: 1 buah
10. Botol semprot
: 1 buah
Bahan: 1. Larutan amilum, glukosa, sukrosa, maltosa, fruktosa, dan laktosa 1 % 2. Larutan iodium 3. Larutan Fehling A 4. Larutan Fehling B 5. Pereaksi Benedict 6. Pereaksi Barfoed 7. Pereaksi Molisch 8. Pereaksi Seliwanoff
IV.
CARA KERJA 1. Uji Molisch a) Masukkan 15 tetes larutan uji ke dalam tabung reaksi b) Tambahkan 3 tetes pereaksi molisch, dicampurkan dengan baik c) Miringkan tabung reaksi kemudian alirkan dengan hati-hati larutan H2SO4 pekat melalui dinding tabung agar bercampur dengan baik. Diamati apa yang terjadi 2. Uji iodium a) Masukan 1 ml larutan uji ke dalam tabung reaksi b) Tambahkan 2 tetes larutan iodium c) Kemudian, amati warna spesifik yang terbentuk
3. Uji benedict a) Masukan 2 ml larutan benedict ke dalam tabung reaksi b) Ditambahkan 1 ml (2 tetes) larutan uji dan campurkan dengan baik. c) Kemudian dipanaskan kedalam air mendidih selama 15 menit d) Perhatikan warna atau endapan berwarna hijau sampai merah bata. 4. Uji fehling a) Sebanyak 1 ml (2 tetes) larutan fehling A dan B dimasukan ke dalam tabung reaksi. b) Ditambahkan 1 ml (20 tetes) larutan uji, dan campurkan dengan baik. c) Perhatikan warna atau endapan yang terbentuk. Reaksi positif bila terjadi endapan yang berwarna hijau sampai merah bata. 5. Uji barfoed a) Sebanyak 10 tetes larutan uji dimasukan kedalam tabung reaksi b) Ditambahkan 10 tetes pereaksi barfoed dan campurkan dengan baik c) Kemudian di panaskan dengan air mendidih selama 5 menit d) Perhatikan warna atau endapan yang terbentuk 6. Uji seliwanoff a) Sebanyak 5 tetes larutan uji dimasukan kedalam tabung reaksi. b) Ditambahkan 15 tetes pereaksi seliwanoff dan campurkan dengan baik c) Kemudian dipanaskan dengan air mendidih selama 1 menit. d) Perhatikan warna atau endapan yang terbentuk.
V.
Hasil Pengamatan No
Cara Kerja
1
Uji Fehling
Hasil
a) Masukkan 1 ml (2 tetes) larutan fehling A dan B dimasukan ke
Fehling A ( Biru tua) Fehling B (Bening)
dalam tabung reaksi. b) Ditambahkan 1 ml (20 tetes) larutan uji, dan campurkan
Menjadi warna biru malam
dengan baik. c) Perhatikan warna atau endapan
2
Amilum biru malam, (-) endapan
yang terbentuk. Reaksi positif
Glukosa merah bata, (+) endapan hijau
bila terjadi endapan yang
Sukrosa biru malam, (-) endapan
berwarna hijau sampai merah
Maltosa biru merah, (+) endapan merah
bata.
Laktosa biru merah, (+) endapan merah
Uji Seliwanoff a) Sebanyak 5 tetes larutan uji dimasukan
kedalam
Bening
tabung
reaksi. b) Ditambahkan 15 tetes pereaksi seliwanoff
dan
campurkan
dengan baik c) Kemudian dipanaskan dengan air mendidih selama 1 menit. d) Perhatikan warna atau endapan yang terbentuk.
Amilum bening Glukosa bening Sukrosa bening Maltosa bening Laktosa bening
3
Uji Iodium a) Masukan 1 ml larutan uji ke Bening dalam tabung reaksi b) Tambahkan
2
tetes
larutan Amilum hitam pekat
iodium kemudian, amati warna Glukosa merah kejinggaan spesifik yang terbentuk
Sukrosa kuning bening Maltosa kuning bening Laktosa kuning bening
4
Uji Molisch a) Masukkan 15 tetes larutan uji Bening ke dalam tabung reaksi b) Tambahkan 3 tetes pereaksi Coklat kehitaman molisch, dicampurkan dengan baik c) Miringkan
tabung
reaksi Amilum bening, gumpalan coklat
kemudian alirkan dengan hati- Glukosa bening, gumpalan coklat (+) cincin hati larutan H2SO4 pekat melalui ungu dinding tabung agar bercampur Sukrosa bening, gumpalan coklat cincin dengan baik. Diamati apa yang ungu terjadi
Maltosa gumpalan coklat cincin ungu Laktosa gumpalan coklat cincin ungu
5
Uji benedict a) Masukan 2 ml larutan benedict Biru terang ke dalam tabung reaksi b) Ditambahkan 1 ml (2 tetes) Warna tetap larutan
uji
dan
campurkan
dengan baik. c) Kemudian dipanaskan kedalam Amilum biru terang air mendidih selama 15 menit Glukosa merah bata perhatikan warna atau endapan Sukrosa biru terang berwarna hijau sampai merah Maltosa oren, (+) endapan oren
bata.
6
Laktosa merah bata
Uji barfoed a) Sebanyak 10 tetes larutan uji dimasukan
kedalam
Bening
tabung
reaksi b) Ditambahkan 10 tetes pereaksi Biru muda barfoed dan campurkan dengan baik c) Kemudian di panaskan dengan air mendidih selama 5 menit perhatikan warna atau endapan yang terbentuk
Amilum biru muda Glukosa (+) endapan merah Sukrosa biru muda Maltosa biru muda Laktosa biru muda
VI.
PEMBAHASAN Pada praktikum ini, untuk mengidentifikasi karbohidrat menggunakan larutan uji berupa larutan amilum, sukrosa, maltosa, laktosa, dan glukosa. Adapun larutan pereaksi berupa uji molisch, uji iodium, uji benedict, uji fehling, uji barfoed, dan uji seliwanoff. Uji Molisch Merupakan uji dalam membedakan atau senyawa bukan karbohidrat yang didalamnya terdapat senyawa kompleks yaitu pereaksi Molisch terdiri dari senyawa yang akan beraksi dengan furfural yang membentuk senyawa kompleks berwarna ungu yang disebabkan oleh adanya dehidrasi asam sulfat pekat terhadap karbohidrat. Tujuan ditambahkan H2SO4 (asam sulfat) pekat menghidrolisis ikatan pada sakarida yang menghasilkan furfural. Pada praktikum yang telah dilakukan dengan menggunakan larutan uji amilum, glukosa, sukrosa, maltosa, fruktosa, dan laktosa 1% yang dicampurkan dengan pereaksi molisch serta ditetesi dengan H2SO4 pekat menunjukan perubahan warna serta terdapat endapan cincin ungu yang menunjukkan larutan uji ini positif dan mengandung karbohidrat didalam senyawa karbon yang terdapat monosakarida yaitu gula sederhana pada glukosa, pada disakarida sukrosa,
oligosakarida maltosa, laktosa dan polisakrida yaitu amilum yang bereaksi dengan asam akan menghasilkan cincin ungu. Uji Iodium Setelah melakukan percobaan kita mengetahuit adanya atau tidak polisakarida dalam larutan uji, yang mendinteksi amilum yang ditandai dengan warna biru. Pada hasil pengamatan percobaan menunjukan bahwa amilum 1% positif pada reaksi ini karena, pecahnya pati dengan pereaksi larutan iodium. Sedangkan pada larutan uji monosakrida dan oligosakarida yaitu glukosa, sukrosa, maltosa, fruktosa, dan laktosa menghasilkan negatif. Pada larutan uji amilum menunjukan positif terhadap larutan iodium karena dalam larutan pati terdapat unit-unit glukosa yang membentuk rantai heliks karena adanya ikatan dengan konfigurasi pada tiap glukosanya. Hala ini, menyebabkan pati menhasilkan warana biru pekat pada saat dilakukan percobaan yaitu amilum positif dan yang negatif larutan uji glukosa, sukrosa, maltosa, fruktosa, dan laktosa berwarna kuning setelah ditambahkan pereaksi iodium dan tidak terjadi perubahan warna. Uji Fehling Pada percobaan karbohidrat yang dilakukan dengan uji gula pereduksi menggunakan uji glukosa, fruktosa, sukrosa, laktosa dan amilum yang direaksikan dengan Fehling A dan B yang dipanaskan dengan air mendidih selema 5 menit agar mudah tereduksi. Dari pecobaan,yang dilakukan menghasilkan larutan uji fruktosa, glukosa, dan laktosa terjadi perubahan warna yaitu merah bata yang menunjukan hasil negatif karena, bukan gula pereduksi. Akan tetapi larutan uji fruktosa harusnya menghasilkan negatif karena bukan gula pereduksi namun, karana adanya pencampuran dengan pereaksi fehling A dan B dapat menjadi positif berwrna merah bata disebabkan oleh reaksi larutan Cu(II) dengan dioksida yang dereduksi menjadi Cu(I) dalam suasana basa serta larutan pereaksi Fehling ini terdapat natrium hidroksida, dengan adanya aldehida dan ketosa dalam pereaksi Fehling yang menjadikan fruktosa akan berubah warna merah bata positif pada uji Fehling.
Uji Benedict Pada percobaan karbohidrat yang dilakukan dengan uji gula pereduksi, yang menggunakan larutan uji yang direaksikan dengan larutan benedict yang terdapat Cu(II) sulfat yang dilarutkan dalam buffer natrium karbonate yang suasana basa direduksi oleh karbohidrat yang mempunyai gugus aldehida akan membentuk Cu2O yang berwarna kuning sampai merah bata menujukan reaksi positif. Pada hasil pengamatan yang telah dilakukan terlihat pada reaksi larutan uji berupa monosakarida dan disakrida sebagai perduksi yaitu glukosa, maltosa, fruktosa, dan laktosa yang digunakan pada uji Benedict menunjukan hasil positif dengan warna merah bata. Pada larutan uji amilum dan sukrosa (polisakarida) yaitu pati menghasilkan reaksi negatif yang menunjukkan perubahan warna biru karena bukan gula perduksi akibat gugus aldehida dan ketonnya digunakan berkaitan gliksidik. Sedangkan pada fruktosa bukan gula perduksi namun dapat berubah menjadi glukosa dan manusia yang memberiksan hasil positif pada uji benedict karen dapat beraksi dalam gugus diomatik dan alfa hidroksi keton. Uji Benedict ini,mempermudah dalam membedakan monosakrida dan disakarida dengan polisakarida melalui perubahan warna pada reaksi larutan uji. Uji Barfoed Merupakan uji dalam membedakan monosakarida dengan disakarida dengan menggunakan pereaksi barfoed yang didalamnya terdapat larutan kuoridsetat dan asam asetat dalam air. Pada pecobaan yang dilakukan dengan larutan uji berupa larutan glukosa, sukrosa, maltosa, fruktosa, laktosa dan amilum dengan pereaksi barfoed menghasilkan reaksi positif pada larutan uji glukosa dan fruktosa. Karena, saat dipanaskan di air mendidih terjadi perubahan warna endapan merah bata lebih cepat, yang menunjukan bahwa larutan uji tersebut adalah monosakarida dan pada amilum,sukrosa,maltosa,dan laktosa. Yang menunjukan lambatnya perubahan bahkan tidak ada perubahan tetap berwarna biru yang menujukan hasil reaksi negatif karena disakarida yang memiliki konsentrasi rendah tida menunjukan reaksi positif berbeda dengan monosakarida yang dapat cepat mereduksi. Hal ini terjadi dikarenakan asam asetat, asam laktat, dan ion cut yang dihasilkan direduksi sehingga menghasilkan warna meraah bata menunjukan adanya monosakarida serta ikatan peptida saling
berikatan satu sama lain sehingga menunjukan reaksi positif, reaksi yang terjadi dalam suasana asam. Uji Seliwanoff Merupakan uji dalam membedakan gula ketosa dan aldosa yang dimana ketosa dibedakan dari aldosa dengan gugus fungsi keton dan aldehida gula tersebut. Jika gula tersebut mempunyai gugus keton, berarti ketosa dan sebaliknya mengandung gugus aldehid berarti aldosa. Dalam percobaan dilakukan dengan larutan uji peraksi seliwanoff yang didasari pada ketika pemanasan, kerosa lebih cepat terhidrasi dari pada aldosa. Dalam percobaan dilakukan seusai prosedur dengan menggunakan larutan uji yaitu, amilum, glukosa, sukrosa, maltosa, fruktosa da laktosa yang dipanaskan di air mendidih selama 2 menit menghasilkan reaksi negatif. Pada larutan uji berwarna bening tidak berwarna dan tidak mengalami perubahan yang berarti larutan uji ini tidak mengandung gula ketosa. Kemungkinan ini dapat terjadi karena adanya kesalahan dalam pencampuran larutan uji dengan pereaksi Seliwanoff atau saat pemanasan dan saat penetesan larutan. Akan tetapi pada prinsipnya sukrosa merupakan gula ketosa yang mempunyai gugusketon dengan adanya sakarida melalui pemanasan yang adanya perubahan warna menjadi merah cerry yaitu reaksi positif. Sedangkan pada amilum, glukosa, maltosa, fruktosa, dam laktosa menghasilkan negatif karena tidak mengandung gugus keton (Theodore seliwanoff 1887). Untuk hasil yang didapatkan dari uji karbohidrat ini yaitu: 1. Uji molisch Dimasukkan 15 tetes larutan uji ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 3 tetes pereaksi molisch, dicampurkan dengan baik, dimiringkan tabung reaksi kemudian alirkan dengan hati-hati larutan H2SO4 pekat melalui dinding tabung agar bercampur dengan baik. Hasil yang didapatkan pada percobaan ini amilum bening, gumpalan coklat. Glukosa bening, gumpalan coklat (+) cincin ungu. Sukrosa bening, gumpalan coklat cincin ungu. Maltosa gumpalan coklat cincin ungu. Laktosa gumpalan coklat cincin ungu. 2. Uji iodium Dimasukan 1 ml larutan uji ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 2 tetes larutan iodium, kemudian diamati warna spesifik yang terbentuk. Hasil yang didapatkan
pada percobaan ini amilum hitam pekat, glukosa merah kejinggaan, sukrosa kuning bening, maltosa kuning bening, laktosa kuning bening. 3. Uji benedict Dimasukan 2 ml larutan benedict ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 1 ml (2 tetes) larutan uji dan campurkan dengan baik. Kemudian dipanaskan kedalam air mendidih selama 15 menit. Perhatikan warna atau endapan berwarna hijau sampai merah bata. Hasil yang didapatkan pada percobaan ini amilum biru terang, glukosa merah bata, sukrosa biru terang, maltosa oren, (+) endapan oren, laktosa merah bata. 4. Uji fehling Sebanyak 1 ml (2 tetes) larutan fehling A dan B dimasukan ke dalam tabung reaksi. Ditambahkan 1 ml (20 tetes) larutan uji, dan campurkan dengan baik. Perhatikan warna atau endapan yang terbentuk. Reaksi positif bila terjadi endapan yang berwarna hijau sampai merah bata. Hasil yang didapatkan pada percobaan ini amilum biru malam, (-) endapan, glukosa merah bata, (+) endapan hijau, sukrosa biru malam, (-) endapan, maltosa biru merah, (+) endapan merah, laktosa biru merah, (+) endapan merah. 5. Uji barfoed Sebanyak 10 tetes larutan uji dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 10 tetes pereaksi barfoed dan campurkan dengan baik. Kemudian di panaskan dengan air mendidih selama 5 menit. Perhatikan warna atau endapan yang terbentuk. Hasil yang didapatkan pada percobaan ini amilum biru muda, maltosa (+) endapan merah, sukrosa biru muda, maltosa biru muda, laktosa biru muda. 6. Uji seliwanoff Sebanyak 5 tetes larutan uji dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 15 tetes pereaksi seliwanoff dan campurkan dengan baik. Kemudian dipanaskan dengan air mendidih selama 1 menit. Diperhatikan warna atau endapan yang terbentuk. Hasil yang didapatkan pada percobaan ini amilum bening, glukosa bening, sukrosa bening, maltosa bening, laktosa bening.
VII.
KESIMPULAN Dari praktikum yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa menggunakkan larutan uji seperti amilum, glukosa, maltosa, sukrosa, laktosa. Apabila dilakukan atau ditambahnya larutan pereaksi sesuai prosedur yang ada maka ada perubahan warna dan lain sebagainya. Adapun larutan pereaksi yang digunakan adalah uji molisch, uji
iodium, uji benedict, uji fehling, uji barfoed, dan uji seliwanoff.
VIII.
DAFTAR PUSTAKA
Ngsli, yohanes Biokimia (metabolisme dan biogenetika). edisi pertama , yogyakarta : graha ilmu 2009
Yazid E. & nursanti , L , 2006, penuntun praktikum biokimia yogyakarta :, andi offset
Jaya mahar mallgan, 2014, kimia penganalisis karbohidrat progam studi ilmu dan teknologi pangan, universitas Brawijaya
Page, D.S (1998).prinsip-prinsip biokimia tag. R. soandoro erlangga: jakarta
Sudar madji, B.,at.al. (1982) analisa bahan makanan dan pangan liberty: Yogyakarta
IX.
LAMPIRAN Pertanyaan : 1. Sebutkan beberapa sumber alam dari amilum? Jawaban Amilum banyak terdapat di alam sebagai pati pada umbi, daun dan biji-bijian. 2. Pada percobaan ini manakah yang menunjukan hasil negatif terhadap uji fehling? Mengapa? Jawaban Surkrosa dan amilum karena, bukan gula pereduksi dan termasuk dalamm pati(polisakarida). 3. Menurut hasil percobaan, apakah sukrosa termasuk gula pereduksi jelaskan alasan anda?
Jawaban Sukrosa bukan gula pereduksi, karena sukrosa tidak memiliki kemampuan untuk mereduksi. Karena gugus aldehida dan ketonnya digunakan untuk berkaitan glikosidik menghubungkan dua monosakarida.
4. Tuliskan reaksi kimia yang terjadi dalam uji berikut: Jawaban a. Uji molisch
b. Uji iodium
c. Uji Fehling
D. Uji Benedict
E. Uji Barfoed
F. Uji Seliwanoff
Gambar:
Uji Molisch Amilum Tidak ada cincin ungu NEGATIF
Uji Molisch Glukosa Terdapat cincin ungu POSITIF
Uji Molisch
Uji Molisch
Sukrosa
Maltosa
Terdapat cincin ungu
Tidak ada cincin ungu
POSITIF
NEGATIF
Uji Molisch
Uji Iodium
Laktosa
Amilum
Terdapat cincin ungu
Terbentuk warna hitam
POSITIF
POSITIF
Uji Iodium
Uji Iodium
Sukrosa
Glukosa Terbentuk kejinggaan POSITIF
warna
merah
Terbentuk warna kuning/jingga NEGATIF
Uji Iodium
Uji Iodium
Maltosa
Laktosa
Terbentuk warna kuning/jingga
Terbentuk warna kuning/jingga
NEGATIF
NEGATIF
Uji Benedict
Uji Benedict
Amilum
Glukosa
Terbentuk warna biru terang
Terbentuk warna merah bata
NEGATIF
POSITIF
Uji Benedict
Uji Benedict
Sukrosa
Maltosa
Terbentuk warna biru terang
Terbentuk warna merah bata
NEGATIF
POSITIF
Uji Benedict Laktosa Terbentuk warna merah bata POSITIF
Uji Fehling Amilum Terbentuk warna biru terang NEGATIF
Uji Fehling Glukosa Terbentuk warna merah bata POSITIF
Uji Fehling Maltosa Terbentuk warna merah bata POSITIF
Uji Fehling Sukrosa Terbentuk warna biru terang NEGATIF
Uji Fehling Laktosa Terbentuk warna merah bata POSITIF
Uji Barfoed Amilum Terbentuk warna biru terang NEGATIF
Uji Barfoed Glukosa Terbentuk endapan merah bata POSITIF
Uji Barfoed
Uji Barfoed
Sukrosa
Maltosa
Terbentuk warna biru terang
Terbentuk warna biru terang
NEGATIF
NEGATIF
Uji Barfoed
Uji Seliwanoff
Laktosa
Amilum
Terbentuk warna biru terang
Terbentuk warna bening
NEGATIF
NEGATIF
Uji Seliwanoff Glukosa Terbentuk warna bening NEGATIF
Uji Seliwanoff Sukrosa Terbentuk warna bening NEGATIF
Uji Seliwanoff Maltosa Terbentuk warna bening NEGATIF
Uji Seliwanoff Laktosa Terbentuk warna bening NEGATIF
Karbohidrat Uji Molis
Larutan Uji Masukkan kedalam tabung reaksi 1ml larutan uji Molis Tambahkan 2 tetes dan di kocok
H2SO4
Tambahkan 1 ml H2SO4 Amati hasilnya.
Uji Iodium
Larutan uji Ambil sebanyak 1ml larutan uji Masukkan ke dalam tabung reaksi
Iodium Tambahkan 2 tetes iodium Amati perubahan warna
Uji Benedict
Larutan Benedict Masukkan 2 ml larutan benedict ke dalam tabung reaksi
Larutan uji Kemudian tambahkan 1 ml larutan uji
Benedict + Larutan uji Panaskan 5 menit amati perubahan warna Uji Fehling
Fehling A+B
Di ambil sebanyak 1 ml masukkan dalam tabung reaksi Tambahkan dengan larutan uji sebanyak 1 ml
Larutan uji Panaskan pada air mendidih selama 5 menit Amati warna endapan yang terbentuk
Uji Barfoed
Larutan uji Masukkan 5 tetes larutan sampel ke dalam tabung reaksi
Larutan barfoed
Tambahkan 1 ml larutan barfoel
Panaskan dalam penangas air, hitung waktu tertentu perubahan warna merah bata Uji seliwanoff
Larutan seliwanoff
Masukkan 3 ml larutan seliwanoff ke dalam tabung reaksi
Larutan uji
Tambahkan 1 ml larutan uji Panaskan selama 30 detik, amati hasil.