Pruebas Bioquimicas De Identificacion.docx

PRUEBA CATALASA

FUNDAMENTO Detecta la presencia de la enzima catalasa.

PROCEDIMIENTO En portaobjetos colocar sobre una colonia unas gotas de H202 3 %.

RESULTADO Liberación de burbujas rápida y sostenida indica la producción de oxígeno molecular = prueba (+)

COAGULASA

Detecta un factor de agregación “clumping factor” en la superficie de la bacteriana.

se coloca una colonia sospechosa de pertenecer a una especie de Staphylococcus y se emulsifica en una gota de plasma de conejo.

“arracimamiento” bacteriano en un minuto = prueba (+). Si el resultado es negativo ensayar la producción de coagulasa en tubo.

PYR

detecta la enzima pirrolidonil arilamidasa se utiliza como sustrato el reactivo L-pirrolidonil- beta-naftilamida (PYR), para la identificación rápida de enterococos.

Realizar un alto inóculo (2 MacFarland) e introducir un disco de PYR. Tiempo y Tº de incubación: 30 minutos a 35º C. Tiempo de lectura: 5 minutos.

Disco rosado o rojo (+) Disco y/o solución amarillo a incoloro ().

S. aureus produce una DNAasa termoestable que hidroliza DNA. La producción de DNAsa puede determinarse incorporando ácido desoxirribonucleico (DNA) en agar nutritivo .

Se inocula el microorganismo en manchas densas sobre agar DNA y después de 18 a 24 hs de incubación. Revelar con HCl al 1N, que precipita el DNA nativo del medio.

Positivo: halo claro, transparente alrededor del crecimiento bacteriano. Negativo: el medio se observa opaco.

MANITOL SALADO

el medio contiene manitol (1%), cloruro de sodio (7,5 %), rojo de fenol y peptonas.

Sembrar la cepa e incubar 18 a 24 hs a 35ºC.

Crecimiento y viraje S. aureus Crecimiento sin viraje. S. epidermidis

BILIS ESCULINA

Se basa en la capacidad de ciertas bacterias (Estreptococos del grupo D) para hidrolizar la esculina en presencia de 1-4% de sales biliares.

Se inocula el microorganismo en la superficie de un pico de flauta. Incubar 24 hs.

Positivo: se observa un oscurecimiento o ennegrecimiento del medio de cultivo. Negativo: ausencia de oscurecimiento del medio de cultivo.

DNASA

PRUEBA CAMP

FUNDAMENTO Los Estreptococos grupo B secretan el factor CAMP que interactúa con la ßhemolisina secretada por una cepa ßhemolítica de S. aureus (ATCC 25923) lo que causa un acrecentamiento o sinergismo de la hemólisis.

PROCEDIMIENTO En placa de agar sangre sembrar una estría de la cepa de S. aureus y perpendicularmente a ésta (lo más cerca posible, sin llegar a tocarla) sembrar la cepa de Estreptococo en estudio. Tiempo y temperatura de incubación: Incubar 24 hs a 35ºC en aerobiosis (en CO2 aumentan los falsos positivos).

RESULTADO El sinergismo se observa como un área de ß-Hemólisis en forma de “punta de flecha” en la zona de desarrollo más cercana a ambas estrías.

Ciertas cepas son capaces de hidrolizar el hipurato de sodio. La producción de hipuricasa resulta en la hidrólisis del hipurato de sodio con la formación de benzoato de sodio y glicina.

Inocular un tubo con medio hipurato de sodio con el microorganismo. Incubar 24 hs a 35ºC. Centrifugar. Pipetear 0.8 ml el sobrenadante. Agregar 0.2 ml de cloruro férrico 7%. Inocular un tubo con 0.4 ml de medio hipurato de sodio con el microorganismo. Incubar 2 hs a 35ºC. Agregar 0.2 ml de Ninhidrina.

La formación de un precipitado denso y persistente por 10 minutos = prueba (+) Benzoato de sodio La aparición de un color púrpura profundo = prueba (+) glicina.

PRUEBA DE LA SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a la novobiocina.

Se inocula el microorganismo en agar Mueller Hinton según técnica de KirbyBauer, utilizando discos de Novobiocina (5 µg).

Sensible: inhibición del desarrollo con un diámetro mayor o igual a 16 mm Staphylococcus R Micrococcus S

BACITRACINA

Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a la bacitracina.

Se inocula el microorganismo en AS según técnica de Kirby-Bauer utilizando discos de Bacitracina (0.04 U).

Sensible: Cualquier zona de inhibición del desarrollo.

HIPURATO DE SODIO

PRUEBAS DE IDENTIFICACION RAPIDA:

1. Catalasa 2. Oxidasa 3. Coagulasa

PRUEBAS PARA IDENTIFICACION COCOS GRAM + :

1. 2. 3. 4. 5.

Dnasa Manitol salado Bilis esculina Camp Hidrolisis del hipiruvato 6. Voges-proskauer

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A ATB: 1.disco de optoquina 2. disco de novobiocina 3. disco de bacitracina