Lab 1 Calibración De Micropipetas.docx

Calibración de Micropipetas Universidad Autónoma de Chiriquí, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Escuela de Química, Curso de Bioquímica (QM 380) Ashley Blanco 4-798-1580, Abdiel Alonso 4-800-576

Resumen La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas. Para realizar un uso correcto de estas micropipetas es importante corroborar que las mismas estén calibradas. De no ser así, existe una gran posibilidad de que la experimentación tenga un gran margen de error(Miranda,2013). El objetivo general del laboratorio es la practica adecuada de las micropipetas empleadas en el laboratorio químico. Para realizar este se llevó a cabo la dispensión y transferencia del agua mediante la micropipeta con el volumen asignado al vaso colocado con anterioridad en la balanza. Este procedimiento se llevó a cabo 10 veces para así realizar los cálculos presentados en la tabla de resultados y evaluar la exactitud y precisión de la micropipeta utilizada, respondiendo así a las hipótesis presentes en donde no se rechaza la hipótesis nula en la exactitud y precisión. Los objetivos establecidos fueron cumplidos. Se utilizaron y se manejaron adecuadamente las micropipetas y se determinó la precisión y exactitud del instrumento utilizado. Objetivos  Practicar el uso adecuado de las micropipetas empleadas en el laboratorio de química.  Realizar procedimientos y cálculos estadísticos que permiten evaluar la calibración de las micropipetas.  Analizar los resultados obtenidos, concluyendo sobre la exactitud y precisión de los instrumentos utilizados. Introducción Las pipetas son una herramienta básica en cualquier laboratorio de investigación en el que se necesiten preparar disoluciones. Con ellas podremos obtener distintos rangos de volúmenes sin cometer un error excesivo. Son de especial interés para volúmenes pequeños (desde 0,1μl a 5 ml) ya que para mayores se dispone actualmente de

otro tipo de instrumental como las probetas graduadas. (Justavino, 2013) Las exigencias impuestas a las pipetas han aumentado continuamente en los últimos años dada la tendencia a usar volúmenes cada vez más pequeños. Controles gravimétricos periódicos y un ajuste de las micropipetas, son requisitos fundamentales de los modernos sistemas de garantía de calidad. El mantenimiento de una micropipeta incorpora acciones, tales como: Control de fuga, control visual, limpieza, ajuste a especificaciones técnicas y control de volumen. (Arango,2012) El método más sencillo y que requiere de menor equipamiento para calibrar micro pipetas es el de gravimetría. Dicho método consiste en descargar con la micro pipeta un líquido de densidad conocida (generalmente agua destilada) en un recipiente cuya masa es medida antes y después de la descarga.

Conociendo la masa del líquido y su densidad puede calcularse el volumen descargado. Los factores que tienen mayor influencia en la incertidumbre de calibración por este método pueden ser el tipo de construcción del instrumento (pistón-cilindro defectuoso, desgaste, etcétera), el propio método (diferencias en la presión de descarga, variaciones en la temperatura y otras condiciones del ensayo) y errores sistemáticos como la evaporación de la descarga de agua en el recipiente de pesaje o calibración de la balanza, entre otros. El objetivo de este estudio es cuantificar la influencia de la evaporación en los resultados de calibración. Para minimizar la incidencia de la evaporación pueden utilizarse dispositivos disponibles en el mercado que mantienen una atmósfera saturada de humedad en el recipiente de pesada o saturar el ambiente interior de la balanza donde se realiza la descarga. (Fabretti,2009) Materiales y reactivos Vasos químicos (100mL), vasos desechables, micropipetas con puntillas (100 µL - 1000 µL), balanza analítica (sartorius modelo CP224S, 0g-220g), termómetro digital, agua, calculadora, tablas estadísticas, papel toalla. Metodología A. Se colocó la puntilla a la micropipeta y se seleccionó el volumen a medir (500µL) B. Hubo que succionar 5 veces el agua con el fin de estabilizar la humedad del volumen del aire dentro de la pipeta C. Se midió y anoto la temperatura del agua D. Colocamos el vaso en la balanza y se taro.

E. Se dispenso el volumen de agua y se transfirió al vaso. Anotamos el peso detectado por la balanza y se taró) F. Repetimos este paso 10 veces en total y así realizar los cálculos para evaluar la precisión y exactitud. Resultados Exactitud Ho= =µ1 exactitud TcTt Precisión Ho=X1=X2=X3…Xn

Xc2<Xt2

Ha=X1≠X2≠X3...Xn Xc2>Xt2 Cuadro N1, Calibración de micropipeta Masa(g)

T(°C)

V(µ𝐿)

(O-E)2

0.501 27 500.3 0.09 0.502 27 501 1 0.505 27 504.1 16.81 0.502 27 501.1 1.21 0.502 27 501.1 1.21 0.502 27 501.1 1.21 0.501 27 500.1 0.01 0.503 27 502.15 4.62 0.502 27 501.15 1.32 0.502 27 501.15 1.32 (V)=501.4 Desviación estándar(V)=1.08 Coeficiente de variación(precisión)= 0.21 T=4.09 X2= 0.064 No se rechazan las Ho, hay precisión y exactitud. Discusión En esta experiencia, se practicó la calibraron de micropipetas para su uso adecuado. Calibración es comparar contra un estándar o un patrón. Es decir que mediante el método gravimétrico o

fotométrico se compara el volumen real que dosifica la pipeta, contra el estándar internacional (METRIX Laboratorios, 2018). Las micropipetas Eppendorf manuales entregan volúmenes ajustables de líquido en mililitros. En este tipo de pipetas, un volumen de aire ajustable se desplaza de la punta de plástico desechable al presionar el botón hasta el primer alto. Este botón opera como un pistón impulsado por un resorte que desplaza el aire fuera de la pipeta. El volumen de aire desplazado puede variarse mediante un tornillo micrométrico de ajuste localizado en la parte superior del dispositivo. La punta de plástico se coloca dentro del líquido y la presión se libera del botón, ocasionando que el líquido se desplace al interior de la punta (Skoog, West, 2015). La punta es colocada contra las paredes del vaso receptor y el botón se presiona nuevamente hasta el primer alto. Después de un segundo, el botón se presiona hasta el segundo alto, el cual vacía completamente la punta. El intervalo de volúmenes y precisión de las pipetas de este tipo se muestran al margen. La exactitud y precisión de las pipetas automáticas dependen, en parte, de la habilidad y experiencia de los operadores y, por lo tanto, deben ser calibradas para trabajos cruciales (Skoog, West, 2015). Se utilizó una micropipeta azul que puede contener un volumen de 100 µ𝐿 a 1000 µ𝐿. Donde, para esta experiencia utilizamos un volumen de 500 µ𝐿. En el cuadro N1 se pueden observar los resultados obtenidos para 10 repeticiones de la masa y volumen a una temperatura de 27ºC. Al adquirir estos resultados tendremos promedio de volumen de 501.1 µ𝐿, desviación de estándar de 1.08, una precisión de 0.21, T de 4.09 y X2 de 0.064. Con estos resultados no se rechazan las H0 debido a que hay precisión y exactitud ya que, Ho= =µ1

exactitud Tc






Arango, W. (2012). calibración de pipetas. 3-27-2019, de Blog de laboratorios clínicos y biomédicos Sitio web: https://www.franrzmn.com/calibra cion-de-pipetas/ Justavino,A. (2013). calibracion y verificacion de micropipetas. 327-2019, de mamlab Sitio web: http://www.mamlabcalidad.com/ca li.html Fabretti,J. (2019). Calibración del material volumetrico. 3-27-2019, de Academia Sitio web: https://www.academia.edu/29833 719/INFORME_DE_LABORATO RIO_CALIBRACI%C3%93N_DE_ MATERIAL_VOLUMETRICO_QU IMICA_II METRIX Laboratorios. (2018). CALIBRACIÓN, AJUSTE Y DESEMPEÑO DE MICROPIPETAS. 28 de Marzo,





de METRIX Laboratorios Sitio web: http://www.metrixlab.mx/calibracio n-ajuste-y-desempeno-demicropipetas/ Skoog, West. (2015). Qumica Analitica. Mexico : CENGAGE Learning. Ortega, R. (2016). USO Y MANEJO DE MICROPIPETAS. 28 de Marzo, de LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA EXPERIMENTAL. Sitio web: http://depa.fquim.unam.mx/microb io/1515ME-10/micropipetas.pdf