Informe De Instrumental Vit C.docx

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA HPLC 1. DESARROLLO DE UNA TÉCNICA Y CUANTIFICACIÓN DE UN PRODUCTO COMERCIAL VITAMINA C (ACIDO ASCORBICO) Autores: Camilo Andrés Hernandez Vargas Cod: 06162706 Corporación Tecnológica de Bogotá , Tecnología en Regencia en Farmacia, Instrumental Bogotá -Colombia Fecha 28-03-19 [email protected];

tomar las medidas necesarias para la preparación de

1. RESUMEN

las muestras ya que se oxida con facilidad al estar Se realizo la práctica con el fin de determinar el contenido de vitamina C en un producto comercial, mediante

el

método instrumental

HPLC

(Cromatografía Líquida de Alta Resolución).

expuesta con la luz. Cada tableta contiene 500 mg de activo, el objetivo principal es cuantificar y confirmar la cantidad de activo que declarada es verídica. Por otra parte, se buscó encontrar las condiciones óptimas para la extracción, identificación y condiciones

La cromatografía por HPLC se basa en la distribución de los componentes en fases inmiscibles, una estacionaria y otra móvil, en la práctica se pudo llevar a cabo el reconocimiento del cromatógrafo HPLC, donde hay un sistema de suministro un inyector, columna y un detector, por medio de este método analítico de HPLC, se llevó a cabo el análisis de un

cromatográficas para cuantificar; para ello se implementó la monografía USP 40 Capítulos Generales <580> Valoración de Vitamina C, Se utilizo el método II, Método cromatográfico aplicando el procedimiento II que se realiza por gradiente y realizando una variación en tiempo para la solución amortiguadora y el solvente.

producto farmacéutico Ácido ascórbico (Vitamina C). Se evaluó los siguientes parámetros: Columna El ácido ascórbico (AA) es una vitamina esencial en la dieta humana, y su determinación por cromatografía liquida es una técnica sensible y rápida, es importante

(dimensiones, relleno y tamaño de la partícula), fase móvil, flujo, longitud de onda, temperatura, cantidad a inyectar presión, finalmente requisitos de aptitud, concentración es decir que utilizamos el tipo de

cromatografía en fase inversa. Se realiza la creación

Analysis UN Product pharmaceutical ascorbic acid

del proyecto y método, se preparó fase móvil y se

(vitamin C ).

transfiere a cada uno de los reservorios. Se adecuo la columna, purgamos el equipo con la finalidad de evitar

Ascorbic acid (AA) is an essential vitamin in the human

que halla aire en la tubería y varié los tiempos de

diet, and its determination by liquid chromatography

retención y la presión. Se crea la secuencia y se

is a sensitive and rapid technique, it is important to

registran las muestras que se van a inyectar en este

take the necessary measures for the preparation of

caso sería el estándar y muestra; Se guarda secuencia

the samples as it is easily oxidized when exposed with

y método. Se deja estabilizar el equipo hasta que haya

light. Each tablet contains 500 mg of active, the main

una buena línea base. Se realiza el pesaje y la

goal is to quantify and confirm the amount of asset

preparación de las muestras que se van a inyectar. El

declared to be true. On the other hand, the aim was to

equipo a través de la interfaz transforma la

find the optimal conditions for the extraction,

información

cromatogramas

identification and chromatographic conditions to

representando en Picos de forma simétrica indicando

quantify; to this end, the monograph USP 40 General

la respuesta de la muestra y el estándar en un tiempo

Chapters <580> Valuation of Vitamin C was

de retención muy similar.

implemented, Method II, Chromatographic method

por

medio

was used by applying the procedure II that is Palabras Clave:

performed by gradient and performing a variation in time for the buffer solution and solvent.

Cromatografía

HPLC,

fase

móvil,

Vitamina

C,

concentraciones, Fase móvil, Fase estacionaria.

The following parameters were evaluated: Column (dimensions, fill and particle size), mobile phase, flow,

2. ABSTRACT

wavelength, temperature, quantity to inject pressure, finally aptitude and concentration requirements. The

The practice was carried out in order to determine the

project and method is created, the mobile phase is

vitamin C content in a commercial product, using the

prepared and transferred to each of the reservoirs.

HPLC instrumental method (High Resolution Liquid Chromatography).

The column was adjusted, the equipment was purged in order to prevent air from being found in the pipe

Chromatography HPLC is based on the distribution of

and the retention times and pressure varied. Create

the components in immiscible phases, one stationary

the sequence and record the samples to be injected in

and one mobile, in practice this might lead one end

this case would be the standard and sample; save

Recognition HPLC chromatograph, UN hay Where

sequence and method. The equipment is stabilized

injector system provided a detector column UN and,

until there is a good baseline. Weighing and

through this analytical method HPLC was conducted

preparation of the samples to be injected is

performed. The computer through the interface

medida que adelantan por la columna. El grado de

transforms

of

retención de los componentes de la muestra

chromatograms representing in Peaks symmetrically

depende de la naturaleza del compuesto, de la

indicating the response of the sample and the

composición de la fase estacionaria y de la fase

standard in a very similar retention time.

móvil.

the

information

by

means

El tiempo que tarda un compuesto a ser eludido de

KEYWORDS Chromatography HPLC, mobile phase, vitamin C,

la columna se denomina tiempo de retención y se considera

concentrations, mobile phase, stationary phase.

característica

una de

propiedad un

identificativa

compuesto

en

una

determinada fase móvil y estacionaria.

3. INTRODUCCIÓN

La utilización de presión en este tipo de

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA

cromatografías incrementa la velocidad lineal de

RESOLUCIÓN (HPLC)

los compuestos dentro de la columna y reduce así su difusión dentro de la columna mejorando la resolución de la cromatografía.

CROMATOGRAFÍA DE FASE INVERSA La HPLC de fase inversa (RP-HPLC) consiste en una fase estacionaria apolar y una fase móvil de polaridad moderada. El tiempo de retención aumenta con la adición de disolvente polar a la fase móvil y disminuye con En el HPLC el compuesto pasa por la columna cromatográfica

a

través

estacionaria (normalmente,

un

de

la fase

cilindro

con

pequeñas partículas redondeadas con ciertas características

químicas

en

su

superficie)

mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria a

la introducción de disolventes más hidrofóbicos. La cromatografía de fase reversa es tan utilizada que a menudo se lo denomina HPLC sin ninguna especificación adicional.

Cromatografiar: Separar por cromatografía. La cromatografía de fase reversa se basa en el

Cromatógrafo:

principio de las interacciones hidrofóbicas que resultan de las fuerzas de repulsión entre un disolvente relativamente polar, un compuesto relativamente apolar, y una fase estacionaria apolar. La fuerza conductora en la unión del compuesto a la fase estacionaria es la disminución del área del segmento apolar del analito expuesto al disolvente. Sistema instrumental para llevar a cabo la Cromatografía: La cromatografía es un método

separación cromatográfica.

físico de separación en el cual los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una que es

Fase estacionaria: La fase estacionaria es una de

estacionaria (fase estacionaria) mientras que la

las

otra, (la fase móvil) se mueve en una dirección

cromatográfico. Puede ser un sólido, un gel, o un

determinada.

líquido. Si es un líquido, puede estar adherido

dos

fases

que

forman

un

sistema

sobre un sólido. Este sólido puede o no contribuir Cromatograma:

al proceso de separación. El líquido también se puede unir químicamente al sólido (fase unida químicamente) o inmovilizarse sobre él (fase inmovilizada). formas en las que se presenta la fase estacionaria. Fase inmovilizada: Es una fase estacionaria que está inmovilizada sobre las partículas del soporte o sobre la pared interna de la columna, por ejemplo, por polimerización in situ (reticulación)

Es un gráfico u otra representación de la respuesta

después del recubrimiento.

del detector, de la concentración del analito en el

Fase móvil: Es un fluido que penetra a través o a

efluente o de otra magnitud utilizada para medir

lo largo del lecho estacionario, en una dirección

una propiedad del efluente frente al volumen de

determinada.

efluente o tiempo. En cromatografía en plano, "cromatograma" puede ser el papel o capa con las zonas separadas.

Eluir: El proceso de elución se puede detener mientras todos los componentes están aún en el

lecho cromatográfico, o continuar hasta que todos

analito para designar a un componente de la

los componentes lo hayan abandonado.

muestra.

Efluente: Es la fase móvil que sale de la columna.

Soluto: Es un término que designa a los componentes de una muestra en una cromatografía

Estándar:

de reparto. Disolvente: Es un término con el que algunas veces se denomina a la fase estacionaria líquida, en una cromatografía de reparto. Es un patrón primario con una sustancia utilizada

4. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

en química como referencia al momento de hacer una valoración o

estandarización.

MATERIALES

Usualmente

Balones aforados 250 mL Balones aforados 100 mL Balones aforados 10 mL Pipeta aforada 1 mL Pipeta aforada 2 mL Pipeta aforada 5 mL Pipeta aforada 10 mL Pipeta graduada 1 mL Pipeta graduada 5 mL Pipeta graduada 10 mL Vaso de precipitado 250 mL Vaso de precipitado 50 mL Pera de succión Microespatula Vidrio de reloj Filtros para fase móvil y muestras viales

son sólidos que cumplen con las siguientes características:

Composición

conocida,

alta

pureza, deben ser estables a temperatura ambiente, que se puedan secar en estufa, que no absorban

gases

o

reaccionen

con

los

componentes de aire. Muestra: La muestra consiste en un determinado número de componentes cuya separación se alcanza en el lecho cromatográfico cuando son arrastrados o eluidos por la fase móvil.

REACTIVOS

Agua HPLC Metanol HPLC Ácido fosfórico concentrado Ácido ascórbico INSTRUMENTOS

Componentes

de

la

muestra:

Son

Cromatógrafo líquido HPLC marca SHIMADZU-EZCHROM ELITE Balanza analítica Sistema de filtrado para fase móvil ultrasonido

los

constituyentes químicamente puros de la muestra. Pueden no ser retenidos por la fase estacionaria, estar parcialmente retenidos (es decir eluidos en tiempos diferentes), o bien permanentemente retenidos. Se puede aceptar también la palabra

5.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

CONDCIONES CROMATOGRAFICAS 

Determinar

el

contenido

de

Cromatógrafo líquido HPLC

ácido

marca

ascórbico en tabletas de vitamina C usando la técnica de cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC). 

Analizar cuantitativamente el contenido de ácido ascórbico mediante el uso de curva de calibración externa.



Determinar la precisión del análisis y compararla con la composición en el lote de producción del fármaco.

SHIMADZU-

Equipo:

ZCHROM ELITE

Columna:

L7, 10 mm x 4,6 mm, 3,5 µm.

Longitud de

245 nm

onda: Fase móvil:

Gradiente

Flujo:

0,8 mL/min.

Volumen de

10,0 µL.

inyección: Temperatura:

25°C.

Tiempo de

10,0 minutos.

Corrida: Concentración:

0,05 mg/mL Acido Ascórbico

PROCEDIMIENTO ADECUADO PARA UNA CORRIDA CROMATOGRAFICA

Solución Amortiguadora: Pesar 7,8 g de Fosfato Diacido de Sodio en 1 Litro de agua grado HPLC y ajustar a pH 2.5 con H3PO4. Mezclar, sonicar y filtrar por membrana de 0,45 micras y desgacificar. Fase Móvil: Solución Amortiguadora y MEOH HPLC.

DESCRIPCIÓN

Diluyente: Pesar 73 g de Acido Metafosforico en 800

Tomar 10 tabletas y pesar, realizar peso promedio.

mL de Agua grado Hplc, adicionar 84 mL de Acido

Macerarlas para la preparación de la muestra.

Acético y llevar a volumen de 1000 mL.

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR

IDENTIFICACIÓN El tiempo de retención del pico principal en el

Solución Madre estándar de Ácido Ascórbico: Pesar

cromatograma de la valoración de la solución de la

10,0 mg de estándar Acido Ascórbico, transferir

muestra corresponde con el del cromatograma de la

cuantitativamente a un balón aforado de 10 mL,

solución de estándar según se obtienen en valoración.

completar a volumen con diluente. Mezclar, sonicar y filtrar por membrana de 0,45 micras y desgacificar. La

VALORACIÓN DE ACIDO ASCORBICO

concentración de la solución es de 1 mg/mL de Ácido Ascórbico.

Solución estándar de Ácido Ascórbico: Transferir

6.

RESULTADOS

cuantitativamente una alícuota de 5 mL de la solución madre a un balón aforado de 100 mL, llevar a volumen con diluente, Mezclar, sonicar y filtrar por membrana de 0,45 micras y desgacificar. La concentración de la solución es de 0,05 mg/mL de Ácido Ascórbico. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: Pesar 77.5 mg de las tabletas maceradas; (Equivalente a

25

mg

de

Ácido

Ascórbico),

transferir

cuantitativamente a un un balón aforado de 250 mL, adicionar el 50% de diluyente y sonicar, llevar a

PESO PROMEDIO (mg) 11 1558 12 1546 13 1546 14 1559 15 1551 16 1551 17 1547 18 1550 19 1556

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

20

1549 PROMEDIO

1542 1548 1550 1545 1559 1548 1546 1558 1555 1542

1550

volumen con diluente. Transferir una alícuota de 5 mL y llevar cuantitativamente a un balón aforado de 10 mL

Cromatograma Vitamina C

disolver y llevar a volumen con diluente. Filtrar por membrana de 0,45 micras y desgasificar. La concentración de la solución es de aproximadamente 0,05mg/mL para Ácido Ascórbico. FORMULA PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL CONTENIDO DE ÁCIDO ASCÓRBICO Calcular el % de Ácido Ascórbico / Tabletas en la muestra analizada, utilizando la siguiente fórmula: 𝐴𝑚𝐴𝑠𝑡𝑥𝑊𝑠𝑡𝑉1𝑠𝑡𝑥𝐴1𝑠𝑡𝑉2𝑠𝑡𝑥 𝑥𝑉1𝑚𝑊𝑚𝑥𝑉2𝑚𝐴1𝑚𝑥𝑃𝑝𝐶𝑑=

𝑃𝑜𝑡𝑠𝑡

%

6004827

AREA MUESTRA 5999321

6004876

5996916

6003711

5995802

AREA ESTANDAR

Dónde:

Am:

Área de la muestra.

Ast:

Área del estándar.

6004113

Wst:

Peso del estándar (mg).

6006513

Potst: Potencia del estándar en base húmeda (%). Wm:

Peso de la muestra (mg).

V:

Volumen (mL).

Pp:

Peso promedio (mg).

Cd:

6004808

5997346,333

DESVIACION

1072,199142

1798,535608

RSD %

0,017855677

0,029988857

PROMEDIO

Concentración declarada (mg/Tab). Peso de la Muestra:77,5 mg Volumen 1 del Muestra:250 mL

Volumen 2 del Muestra:10 mL Alícuota del Muestra: 5 mL

Peso del Estandar:10 mg Volumen 1 del Estándar: 10 mL Volumen 2 del Estándar: 100 mL Alícuota del estándar: 5 mL

Potencia del estándar BH:100% Peso promedio:1550 mg Concentración declarada: 500 mg /Tab Tiempo de retencion:4 Min Aprox

7.

ANALISIS DE RESLTADOS

Según los datos arrojados y remplazando en la formula tendríamos 99.9% del activo es decir que por cada tableta contiene 499,5 mg de Ácido Ascórbico. Claramente el producto cumple con los requerimientos óptimos de calidad.

8. BIBLIOGRAFIA QUATTROCHI O, Andrizzi S., Laba R. "Introducción a la HPLC". Artes Gráficas Farro S.A. Buenos AiresArgentina, 1992. SKOOG D, Holler F, Nieman T. "Principios de análisis instrumental 5a ed". Madrid-España. McGraw-Hill. 2001

Plantilla guía práctica de laboratorio corporación tecnológica de Bogotá,