Diagnostic In Infectia Vhc

Diagnostic in infectia VHC

Diagnosticul infecţiei VHC TESTE

EXEMPLE

APLICATII

COMENTARII

SEROLOGICE ELISA de Nu pot detectie Ac anti diferenţia VHC între o infecţie acută, RIBA / Western cronică sau Blot vindecată

ELISA-sensibilitate mare, în populaţii cu risc scăzut de infecţie are valoare predictivă mică

MOLECULARE

TESTE DE GENOTIPARE

TESTE CALITATIVE RT-PCR

Diagnosticul infectiei active

Detecţia timpurie a infectiei O singură determinare negativă-neconcludentă

TESTE CANTITATIVE -Rt-PCR -b-DNA

Aprecierea rezultatelor terapiei

Nu exclude diagnosticul infecţiei

Secvenţiere nucleotidică, RFLP, LiPA

Genotipuri Subtipuri Qvasispecii

Apreciază durata tratamentului şi prognosticul răspunsului virusologic

Patternul serologic al infectiei VHC acute cu vindecare antiAc anti VHC HCV

Symptoms +/-

HCV RNA

ALT ALT

Normal 0

1

2

3 4 Months

5

6

1

2 3 Years

Time after Exposure

4

Patternul serologic al infectiei VHC care cronicizeaza antiAc anti HCVVHC

Symptoms +/-

HCV RNA

ALT

ALT

Normal 0

1

2

3 4 Months

5

6

1

2 3 Years

Time after Exposure

4

Diagnosticul infecţiei VHC TESTE

EXEMPLE

APLICATII

COMENTARII

SEROLOGICE

ELISA RIBA / Western Blot

Nu pot diferenţia între o infecţie acută, cronică sau vindecată

ELISA-sensibilitate mare, în populaţii cu risc scăzut de infecţie are valoare predictivă mică

MOLECULARE

TESTE CALITATIVE RT-PCR

Diagnosticul infectiei active

Detecţia timpurie a infectiei O singură determinare negativă-neconcludentă

TESTE CANTITATIVE -RT-PCR -b-DNA

Aprecierea rezultatelor terapiei – (RVSrăspunsul virusologic sustinut

Nu exclude diagnosticul infecţiei

Secvenţiere nucleotidică, RFLP, LiPA

Genotipuri Subtipuri Qvasispecii

Apreciază durata tratamentului şi prognosticul

TESTE DE GENOTIPARE

Anti-HCV / HCV RNA

Interpretare clinică

Anti-HCV negativ, HCV-RNA •Absenţa infecţiei VHC negativ Anti-HCV pozitiv, HCV-RNA •Infecţie VHC acută sau cronică pozitiv (activă) •Infecţie acută recentă în care nu a avut loc încă seroconversia Anti-HCV negativ, HCV-RNA •Infecţie cronică la un pacient pozitiv imunosupresat

Anti-HCV pozitiv + HCV RNA negativ • Infecţie vindecată • Viremie cu nivel redus sau fluctuantă, intermitent negativă

Succesul terapeutic in hepatita cronica C

Raspunsul virusologic sustinut (RVS) ARN VHC (UI/mL)

8

7

IFN+RBV

6

Recadere in timpul tratamentului

Nonresponderi Recadere dupa oprirea tratamentului scadere 2 log

5 4 3 2

1

RVR

EVR

EoT

RVS

Limita de detectie

0 -6 0 TRATAMENT

6

4

12

36 42 48 54 60 66 72 78

Timp (saptamani)

Secventiere ADN – metoda Sanger • Tehnica prin care se poate determina ordinea exacta a bazelor azotate intr-un fragment ADN tinta • Aplicatii: • • • • •

Biologie moleculara Studii filogenetice Metagenomica Medicina Antropologie

Secventierea ADN

DIDEOXYNUCLEOTIDE

Metoda Sanger

Genotipare VHC

LiPA

Distributia genotipurilor VHC pe glob, OMS 2009

LiPA Line Probe Assay – genotipare Hibridizare cu sonde moleculare cu specificitate pentru regiuni conservate din cadrul genotipurilor si subtipurilor evidentierea profilului specific unui genotip prezent in ampliconii din 5’NTR si core.

Diagnostic V.H.A.

EVOLUTIA MARKERI DE INFECTIE VHA

HEPATITA A NU CRONICIZEAZA!! simptomatologie

IgG

ALT IgM Viremie Infectie VHA in MF

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

saptamana Diagnostic hepatita acuta A = detectie Ac anti VHA IgM (ELISA de captura)

ELISA de detectie anticorpi de clasa IgM

ELISA de captura ETAPE 1. Incubare ser pacient 1h la 37ºC

Ag marcat enzimatic = conjugat

2. Spalare 3. Incubare conjugat 30 min la 37ºC 4. Spalare

IgM 5. Incubare substrat 20 min la t. camerei Anti-IgM

6. Citire la spectrofotometru

Utilizarea metodelor moleculare in infectiile virale: HIV, hepatite, papilomavirusuri • infectia HIV • infectia VHB – Monitorizarea evolutiei naturale /sub tratament a hepatitei virale B – Initierea tratamentului pt hepatita cronica B

• infectia VHC – Diagnosticul infectiei active+ Aprecierea rezultatelor terapiei – GENOTIPARE - apreciază durata tratamentului şi prognosticul

• infectia HPV – GENOTIPARE – genotipuri “high risk” si “low risk”

Un test de triaj pentru infectia VHC da un rezultat pozitiv. Precizati semnificatia rezultatului, tehnica utilizata si care sunt etapele urmatoare in algoritmul de diagnostic.

Precizati diagnosticul la un pacient care prezinta urmatorii markeri serici si metode de profilaxie: • AgHBs - negativ • anti HBc IgM - negativ • anti HBe - negativ • anti VHC –negativ • Anti VHA Ig M - pozitiv

Precizati diagnosticul unui pacient care prezinta urmatorii markeri serici, semnificatia fiecarui marker si etapa urmatoare in diagnostic • AgHBs - negativ • anti VHD IgM - negativ • anti HBc IgG -negativ • anti HBs – pozitiv • anti VHA Ig G – pozitiv • anti VHC - pozitiv

Precizati diagnosticul unui pacient care prezinta urmatorii markeri serici si modalitati de evolutie: • AgHBs - pozitiv • anti VHD IgM - pozitiv • anti HBc IgG - pozitiv • anti HBs – negativ • anti VHA Ig G - negativ

Este posibil un astfel de profil serologic? Argumentati. Precizati semnificatia fiecarui marker: • • • •

AgHBs –pozitiv anti HBc IgM – pozitiv anti HBc IgG – pozitiv anti HBs – negativ