Bndg (rodriguez Cardozo)

Dra. María Belén Rodriguez Cardozo Directora

BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS ( B. N. D. G. ) CREACION Y OBJETO

1.-

Motivación histórica

2.- Antecedentes de su creación y emplazamiento en el Hospital Dr. C. G. Durand 3.- Ley de creación y Decreto Reglamentario 4.- Convenio MSyAS - MCBA

BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS El Banco Nacional de Datos Genéticos (BNDG) creado por Ley Nacional 23.511 tiene su motivación histórica en la desaparición forzada de personas ocurrida durante los años 1976 – 1983 en la República Argentina, no obstante lo cual esta Ley comprende y alcanza a todo conflicto relativo a la filiación de las personas. Desde el año 1984 hasta la fecha se han extraído en este BNDG muestras hemáticas de 8.000 personas familiares de desaparecidos, niños secuestrados o nacidos presuntamente durante el cautiverio de sus madres que nos fueran enviados exclusivamente por los Juzgados Penales intervinientes y por la Comisión Nacional por el Derecho a la Identidad. Los archivos de esta población del BNDG incluyen a aproximadamente 360 grupos familiares (ramas paternas y maternas), la mayoría de los cuales integran los registros de la Comisión Nacional por la Desaparición de Personas (CONADEP) ante la cual fueron efectuadas las denuncias por la desaparición de personas a partir del año 1984.

BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS A la fecha, se han identificado por estudios genéticos realizados en este BNDG 97 menores y jóvenes que de esta forma recuperaron su identidad e inserción familiar. La actividad del BNDG ha continuado incrementándose desde la creación de la Comisión Nacional por el Derecho a la Identidad (CONADI) la cual recepciona las denuncias que no fueron presentadas ante CONADEP y continúa con la investigación de aquellas que tienen su legajo ante esa Comisión, comprendiendo a presunta supresión de estado civil, tráfico de menores, etc. La Comisión Nacional por el Derecho a Ia Identidad desde el año 1998 centraliza los estudios para la identificación genética en este BNDG.

Decreto 700/89 Artículo 2º - El Director del BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS tendrá a su cargo las siguientes funciones: Organizar, coordinar y supervisar las actividades científicas y técnicas propias. Fijar las pautas y políticas científicas y técnicas necesarias para su desarrollo, de acuerdo a lo determinado por la ley. Preparar el presupuesto y cálculo de recursos del BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS y someterlo a aprobación de la prioridad.

Art. 7º - Los servicios del BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS serán prestados en forma gratuita, debiendo los interesados abonar únicamente al mismo, el costo de los reactivos a emplearse para la realización del examen respectivo. Estarán exceptuados de abonar los reactivos aludidos en el párrafo anterior, los familiares de niños desaparecidos o supuestamente nacidos en cautiverio o aquellos que acrediten imposibilidad económica de afrontar el pago de los citados reactivos.

Art. 11º - El BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS determinará el día y la hora en que se realizará las pruebas procediendo a notificar dicha circunstancia a los interesados por medio fehaciente. Todo lo concerniente al control de la prueba por las partes como a la intervención de los consultores técnicos, se regirá por las normas establecidas en los Códigos Procesales en lo Civil y Comercial y en Materia Penal de la Nación y Leyes Complementarias. En la fijación de los turnos para la realización de las pruebas, deberá respetarse rigurosamente el orden cronológico de la recepción de oficios el que no deberá ser alterado salvo por la existencia de fuerza mayor o de urgencia derivada de causas graves, las que deberán ser debidamente fundadas por el Director General del BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS.

Art. 13º - La Dirección del BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS dictará las normas necesarias para garantizar la corrección y veracidad de los estudios y habilitará a los funcionarios responsables de las áreas de identificación de personas, de extracción, de inmunogenética, de conservación de muestras y de registro para que den fe de los actos que les corresponda, bajo pena de nulidad. Art. 14º - El BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS no proporcionará información a particulares sobre los datos registrados, ni tampoco a entidades públicas o privadas, cualquiera sea la índole de las razones alegadas. La información almacenada solo será suministrada por requerimiento judicial, en causa determinada.

DECRETO 511 /09 Artículo 1º - Sustitúyese el artículo 1º del Decreto Nº 700 del 24 de mayo de 1989, por el siguiente: “ARTICULO 1º - El BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS tendrá su asiento en el Hospital General de Agudos ‘Carlos G. DURAND’ dependiente del GOBIERNO DE LA CIUDAD AUTONOMA DE BUENOS AIRES. La estructura y planta de personal, ámbito físico, mobiliario y equipamiento son los que se detallan en los Anexos I, II y III del convenio a que se refiere el artículo 3º el cual, a todos los efectos, forma parte del presente. “El BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS estará bajo la conducción técnica y administrativa de un profesional en bioquímica o biología molecular, con reconocida experiencia en genética forense, quien desempeñará el cargo de ‘Director del BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS’ (Ley Nº 23.511), y tendrá su despacho en dependencias del Hospital General de Agudos ‘Carlos G. DURAND’. El Director del BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS será seleccionado en concurso público de oposición y antecedentes, que garantice su idoneidad científica y la transparencia del proceso de selección.”

Art. 2º - Sustitúyese el artículo 14 del Decreto Nº 700 del 24 de mayo de 1989, por el siguiente: “ARTICULO 14.- El BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS no proporcionará información a particulares sobre los datos registrados, ni tampoco a entidades públicas y/o privadas cualquiera sea la índole de las razones alegadas. La información almacenada sólo podrá ser suministrada por requerimiento judicial, en causa determinada, a los fines de respaldar las conclusiones de los dictámenes periciales elaborados por el citado Banco para posibilitar su control por los peritos de parte.”

MARCADORES GENÉTICOS Y FILIACIÓN Condiciones previas al empleo de un sistema 1º - La transmisión genética del sistema debe ser bien conocida 2º - Los determinantes genéticos deben estar bien desarrollados al nacimiento y permanecer constantes durante toda la vida. 3º - La identificación de los antígenos o de los genes deberá ser realizada con métodos fiables y reproductibles.

Características de MHC - HLA y ADN • Ambas investigaciones ya no pertenecen al campo experimental. • Los métodos para su investigación son controlables, seguros y reproductibles. • Existen tablas de frecuencias de antígenos y de genes según las razas y el lugar geográfico de la investigación.

MARCADORES GENÉTICOS Y FILIACIÓN (CONT...)

Características del ADN • Permite su utilización para el estudio de evidencias tales como: manchas, fluídos, cabellos, restos cadavéricos, etc. • Las técnicas de amplificación (PCR) permiten acceder a pequeñas cantidades de material genómico aunque éste se encuentre parcialmente degradado. • El locus del ADN investigado debe estar revalidado por estudios familiares que demuestren que ese locus cumple con las Leyes de Mendel y que muestra una baja frecuencia de mutaciones.

GENÉTICA FORENSE

ES UNA RAMA DE LA MEDICINA LEGAL

CONSISTE EN LA APLICACIÓN DE LOS CONOCIMIENTOS DE LA GENÉTICA A LA RESOLUCIÓN DE LOS PROBLEMAS JUDICIALES

¿ Que puede Investigarse hoy además de todo lo que veremos en esta presentación?  Posibilidad de analizar características físicas a través de los marcadores genéticos SNPs: •

Sexo

• Color del pelo: pelirrojo • Pigmentación: Color de los ojos, color de la piel • Características faciales • Lateralidad (zurdo o diestro).- gen CAPG?? • Edad • Parámetros biométricos - altura - masa corporal

Posibilidad de analizar características Físicas:

El pelo rojo está regulado por un solo gen

Melanocortin 1 receptor gene MC1R

Algunas características faciales pueden ser simples

BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS

ESTUDIOS PERICIALES : Metodologías I. Técnicas Inmunoserológicas a) Aglutinación-elución : antígenos ertrocitarios (ABO, Rh-Hr, MNSs, P, Kell, Kidd y Duffy). b) Microlinfocitotoxicidad-doble fluorocromasia: antígenos HLA Clase I. c) Microlinfocitotoxicidad antígenos HLA Clase II II. Técnicas de Biología Molecular 1- Genoma Nuclear: ADN Codificante. a) PCR-SSP y PCR-SSO (low-medium y high resolution) Genes MHC Clases I y II. b) PCR-SSOP (high resolution) Genes MHC Clases I y II

BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS Genoma Nuclear : ADN no codificante. (VNTRs) 

 





Sin amplificación: SLPs: Locus D7S21, D7S22, D12S11, D16S309, D4S163 y D2S44. PCR-Ampli FLP : Locus D1S80. PCR-STRs : Locus CSF1PO, D3S1358, TPOX, FGA, TH01, D8S1179, vWA, D21S11, D16S539, D7S820, D13S317, D18S51, D5S818, Amelogenina. D2S531 D19 Penta D y Penta E Cromosoma Y PCR-STRs: Locus DYS393, DYS19, DYS389 II , DYS390, DYS391, DYS385, DYS438, DYS439, DYS436, DYS434, DYS435, DYS437, GATA A7.2, GATA A7.1, GATA A4, GATA A10, GATA C4, GATA H4. Genoma Mitocondrial : Secuenciación de Region D-Loop, Segmentos Hipervariables HV1 y HV2

La Prueba de ADN Consiste en el análisis de un número determinado de Polimorfismos genéticos en una muestra biológica El conjunto de los distintos alelos presentes se denomina PERFIL GENÉTICO Si se cuenta con el perfil genético de dos individuos se puede proceder a calcular su índice de relación por medio del cálculo matemático estadístico adecuado.

ETAPAS DE UN ESTUDIO PERICIAL  Etapa

Preanalitica  Etapa analitica  Etapa postanalitica

ETAPAS DE UN ESTUDIO PERICIAL  Etapa

Preanalitica

Etapa analitica  Etapa postanalitica 

¿De que depende el éxito de la pericia?

Precauciones durante el proceso de recogida y envío de muestras al laboratorio

guantes

Bolsas tipo ziploc o papel madera

TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA SANGRE CÉLULAS EPITELIALES BUCALES

Material esteril

Taco de Globulos Blancos

ADN en condiciones de ser utilizado

HLA

Cromosoma Y

STRs

ADN

Almacenamient o Mitocondrial

Cromosoma X

Autosómicos

Toma de Muestra en Sala de Autopsia • Todas las muestras que se tomen del cadáver deben ser congeladas JAMÁS deberán ser colocadas en formol. • Si se realiza la toma de muestra inmediatamente después del fallecimiento se podrá acceder a un fragmento de Hígado o músculo esquelético, en caso contrario se accederá a hueso o dientes-

Muestras indubitadas en cadaveres en buen estado de conservación  Sangre Postmortem:  Se toma una muestra de 10 ml de sangre en EDTA al 5%  Músculo esqueletico:  Se seleccionan dos fragmentos de músculo esqueletico de unos 10 g de

peso se coloca en un recipiente plástico con boca ancha y tapa a rosca  Músculo cardiaco  4 piezas dentales Muestras indubitadas en cadaveres en avanzado estado de putrefacción o esqueletizados Huesos: preferentemente huesos largos Dientes: 4 piezas dentarias que no esten externamente dañados ni hayan sido sometidos a endodoncias.

Otras Muestras de referencia en personas fallecidas 



Análisis de restos biológicos existentes en centros hospitalarios: sangre, biopsias, preparaciones histologicas Análisis de restos biológicos del fallecido que aún permanezcan en el ambito familiar: maquinas de afeitar, peines, cepillos de dientes, ropas usadas.

Restos Cadavericos  En buen estado de conservación: si se trata de tejido muscular se coloca el mismo en un frasco estéril de boca ancha sin líquido fijador. Si se trata de viceras se eligen las que estén mejor conservadas: ej: corazón  Carbonizado: se procesa lo que se encuentre sin haberse carbonizado  En mal estado de conservación: se elige huesos largos y piezas dentarias. Restos Fetales y Placentarios Se colocan en un frasco estéril sin líquido fijador

Recogida de Indicios Biológicos en el lugar de los hechos Manchas secas Indicios húmedos Indicios líquidos Pelos dubitados Restos cadavericos Restos fetales y Placentarios

Per sonal • En España esta labor la realizan los médicos forenses y la Policía Judicial, sin perjucio de que el Juez Instructor pueda solicitar la colaboración de otros expertos calificados de acuerdo a la Ley de Enjuiciamiento Criminal. • Este Personal debe tener formación, conocimiento técnico y experiencia adecuada para el desempeño de estas funciones por lo cual se realizan programas de formación y entrenamiento en estas áreas.

Indicios Líquidos Semen: o o

Los preservativos con semen líquido se atan y se coloca en un frasco estéril Semen en escasa cantidad: se deberá tomar con un hisopo estéril

Pelos o

Dubitados:

Se toman con una pinza limpia colocando cada pelo o grupo de pelos en un papel pequeño y luego se introduce en una bolsa de papel pequeña.

Indicios Húmedos Ropas u otros objetos con indicios húmedos: se dejarán secar en un lugar protegido sobre una superficie limpia

Indicios Líquidos Sangre en gran cantidad: se debe tomar con una pipeta de plástico estéril y colocarla en un tubo con EDTA al 5% Sangre en escasa cantidad: se deberá tomar con un hisopo estéril Sangre coagulada: se deberá tomar con una cucharita de plástico e introducirla en tubo o frasco estéril

Manchas secas en muestras pequeñas y de fácil transporte  Armas blancas: se colocan por separado en cajas de cartón  Llaves, monedas, joyas: con pinzas se colocan en bolsas de

papel  Piedras, ramas y hojas: idem anterior  Billetes, papeles, cartones pequeños: idem

Manchas secas en muestras grandes no Transportables Soportes no absorbentes (cristales, metales) puedo proceder así: A) Frotando con un hisopo estéril ligeramente mojado en agua destilada B) Raspando la mancha con un bisturí sobre un papel Soportes absorbentes Telas, alfombras, se recorta la mancha con un bisturí o una tijera y se coloca en una bolsa de papel.

Manchas secas en muestras pequeñas y de fácil transporte Colillas: deben tomarse con pinzas limpias e introducirse por separado en bolsas de papel Chicles: deben tomarse con pinzas limpias e introducirse en envases de plástico duro Sobres y sellos: sin despegarse se recogen con pinzas y se introducen en bolsas de papel o plástico

Protección de las Muestras Contaminación por material biológico humano: Se debe al depósito de material biológico humano en el lugar de los hechos y/o en el cuerpo de la víctima con posterioridad a la producción del delito. Puede estar causada por personas ajenas a la investigación (curiosos o familiares) o personas que colaboran en la investigación y que de forma accidental o desconocimiento producen la contaminación.

Documentación en casos de Interés criminal Documentación necesaria:  Formulario de envío de muestras: en este formulario debe

constar

a) La investigación solicitada b) Antecedentes y datos de interés sobre la causa c) Causa de los hechos, lugar, fecha instrumento utilizado en

la agresión, si hay cadaver: antigüedad, conservación d) Datos de la víctima: e) Edad, sexo, grupo poblacional, existencia de lesiones, traumatismos heridas, relación con el sospechoso

Documentación en casos de Interés criminal Datos del o los sospechosos: Edad, sexo, grupo poblacional, existencia de lesiones, traumatismos, heridas.

Documentación Recomendable  Informe Preliminar de autopsia  Informe clínico  Informe o datos de la inspección ocular  Localización de las muestras o indicios

biológicos  Fotografía de los indicios biológicos

Identificación de las muestras • Listado de los indicios Biológicos:  Número de referencia de la muestra  Tipo de muestra con una descripción breve (hisopado vaginal, camisa azul )  A quién pertenece (victima, imputado/s)  Tipo de indicio en concreto que debe estudiarse (semen, sangre, saliva etc)

Cadena de custodia:  Nombre o identificación y firma de las personas responsables de la recogida de muestras  Fecha y hora de la toma de muestras  Condiciones de almacenaje de las muestras hasta el envío al Laboratorio

De la correcta recolección de las muestras y de la elaboración del Documento de cadena de custodia

Este es el principio de la Prueba Forense

AGRESIONES SEXUALES Documentación requerida 



 

Datos de la víctima: Edad, sexo, grupo poblacional, relaciones sexuales próximas a la agresión, uso de productos vaginales, datos del reconocimiento ginecologico Datos de la agresión: lugar de los hechos, fecha y hora de los hechos, penetración (vaginal, anal y/o bucal Relación de parentesco víctima-agresor Si hubo uso de preservativos

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS EN EL CUERPO DE LA VICTIMA • Manchas de sangre, semen u otros fluídos biológicos • Saliva en marcas de mordeduras • Uñas • Pelos dubitados Manchas de sangre, semen u otros fluídos biológicos Tomar la mancha con un hisopo estéril ligeramente mojado en agua destilada. Limpiar toda el área presionando suavemente y si es posible con un solo hisopo

Toma de indicios Biológicos     

2 tomas bucales: con hisopo estéril Se buscarán manchas de semen o saliva así como posibles mordeduras Peinado de vello púbico 2 tomas cervicales, 2 tomas vaginales, y 1 toma de genitales externos Lavado vaginal: Luego del hisopado se utilizarán 10 ml de suero fisiológico estéril que se recoge en un frasco plástico

Toma de indicios Biológicos 

2 tomas anales y toma del margen anal: mediante hisopos estériles



Las ropas vestidas por la víctima en el momento de la agresión: debe envolverse por separado en papel



Recogida de muestras indubitadas: Muestras indubitadas de la víctima Muestras indubitadas del sospechoso

 

Saliva en marcas de mordeduras Tomar la mancha con un hisopo estéril ligeramente mojado en agua destilada. Limpiar de forma circular la marca dejada por los dientes y toda el área interior que delimita.

Uñas y Pelos Dubitados Uñas: primero tomar con una pinza todo indicio que se pueda visualizar y guardarlo en frasco estéril luego cortar las uñas y almacenarlas en otro frasco estéril Pelos: deben ser tomados con una pinza colocados sobre papel pequeño y luego en un sobre de papel

SISTEMAS DE EMPAQUETADO Y PRESERVACIÓN DE MUESTRAS Identificación de las muestras Cadena de custodia Sistemas de empaquetado

Sistemas de empaquetado y preservación de muestras Los indicios líquidos, los tejidos blandos y órganos y los indicios húmedos (si estos últimos no se dejan secar) se deben mantener y enviar refrigerados Identificación de las muestras: El número de referencia de la muestra Tipo de muestra A quien pertenece y/o localización

Sistemas de empaquetado y preservación de muestras o Frascos o recipientes con indicios líquidos o con órganos, tejidos

blandos o Hisopos estériles en seco: Los hisopos serán empaquetados en

cajas de cartón pequeñas en estos recipientes los hisopos están protegidos y se secan totalmente. o Muestras con manchas secas: Cada muestra será colocada sobre un papel o Pelos dubitados: Deben ser recogidos en papeles pequeños que

serán doblados y luego introducidos en bolsas precintadas y correctamente identificadas. Enviar al laboratorio sin refrigerar

Recepción de Muestras en el Laboratorio

Normas de recepción de muestras

Normas de recepción de muestras  Recibir las muestras y rellenar la hoja de custodia donde debe constar

     

Nombre de la persona que entrega las muestras Nombre de la persona que recibe las muestras Fecha y hora de entrega Empresa que realiza el transporte Chequear el número de referencia de cada muestra Comprobar que todas las muestras estén empaquetadas y que los precintos estén integros

Conclusiones 





Es fundamental la recolección de muestras y su almacenamiento Es absolutamente imprescindible que se mantega la cadena de seguridad para todas las etapas de la pericia El Laboratorio que realizará la pericia deberá cumplir con todo lo pautado: infraestructura, tecnología y materiales necesarios para la pericia.

Etapa Analítica Las Muestras en poder del Laboratorio pericial

• • • • • • •

A.D.N: Acido desoxirribonucleico. Genes: Son tramos funcionales del ADN. Locus: posición de un gen sobre un cromosoma (plural Loci). Alelos: formas alternativas o variantes de un locus. Homocigota: los dos alelos (materno y paterno ) son iguales. Heterocigota: los dos alelos (materno y paterno ) son distintos. Polimorfismo genético: variabilidad entre personas, es decir múltiples alelos para un mismo locus en distintas personas.

Sources of Biological Evidence Blood Semen Saliva Urine Hair Teeth Bone Tissue

Cantidad de ADN obtenido Tipo de muestra ADN esperado  Sangre total 20-40 μg/ml  Semen 150-450 μg/ml (1-3 pg/cel.)  Pelo con bulbo 1-750 ng/bulbo  Saliva 1-10 μg/ml  Orina 1-20 ng/ml  Hígado 15 μg/mg  Músculo-Piel 3 μg/mg  Huesos 3-10 ng/mg

Muestras en soportes no absorbentes

Elección de la técnica de extracción de ADN • Extracción con solventes Organicos:

sobre todo en muestras con escasa cantidad de ADN y sobre todo si ellas proceden de material graso.

• Extracción Diferencial: para muestras procedentes de una violación (masculinafemenina) separa ambos componentes

Elección de la técnica de extracción de ADN cont. • Pelo: es de difícil extracción la melanina hidrosoluble forma un complejo con la enzima polimerasa inhibiendo la PCR • Uñas: para encontrar material procedente de otro individuo hace falta una presion de 1.2 gr que rara vez se logra con un rasguño.

REAL TIME

Se Extraen dos fracciones de cerdas en dos recipientes distintos.

Se recolecto en bolsas tipo Ziploc

Se corta de la Prenda usada una fracción que visualmente presente zonas de roce o manchas

Se puede fraccionar esa región en dos o mas tubos distintos

Mancha ya recortada

FTA cards. Se recorta o con Punch o con bisturí una fracción de la mancha

Ropa intima femenina recortada

Media parte posterior del talón (se saca una parte del género y se corta y fracciona en varios eppendorf)

HISTOCOMPATIBILIDAD • Evolucion técnica Biologia Molecular Serologia

2.- ESTUDIO DE ANTIGENOS DE HISTOCOMPATIBILIDAD

LOCUS LOCI

Clase I ABC

LOCUS LOCI

Clase I ABC

LOCUS LOCI

Clase I ABC

Titular

Padre Alegado

Abuela Materna Alegada (fallecida)

FENOTIPO

GENOTIPO

FENOTIPO

GENOTIPO

FENOTIPO

A03011-05 A11011-03/05/06 B4101/02/03 B5801-04/05

A03011-05 - B4101/02/03 A11011-03/05/06 B5801-04/05 ó A03011-05 - B5801-04/05 A11011-03/05/06 B4101/02/03

A11011-03/05/06 A31012-04 B07021/022/023/03-06/0710/15/17 B5801-04/05

A11011-03/05/06 B07021/022/023/03-06/07-10/15/17 A31012-04 B5801-04/05 ó A11011-03/05/06 – B5801-04/05 A31012-04 B07021/022/023/03-06/07-10/15/17

A03011-05 A11011-03/05/06 B07021/022/023/03-06/0710/15/-17 B3501-04/06092/11/15/17/18/20/21/23/24/27/ 29/30/33

Tío Materno Alegado

Tía Materna Alegada 1

GENOTIPO MAS ROBABLE A11011-03/05/06 - B3501-04/06092/11/15/17/18/20/21/23/24/27/ 29/30/33 A03011-05 B07021/022/023/03-06/0710/15/-17

Tía Materna Alegada 2

FENOTIPO

GENOTIPO

FENOTIPO

GENOTIPO

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

A3, A11; B35, B41

A3-B41 / A11-B35

A03011-05 B07021/022/023/ 03-06/0710/15-17 B4101/02/03

A03011-05 - B4101/02/03 A03011-05 B07021/022/023/03-06/0710/15-17

A11011-03/05/06 A2601/02/04/05/08/09/11N/12/14 B3501-04/06092/11/15/17/18/20/21/23/24/27/ 29/30/33 B3801-022/04

A11011-03/05/06 - B3501-04/06092/11/15/17/18/20/21/23/24/27/ 29/30/33 A2601/02/04/05/08/09/11N/12/14 - B3801-022/04

Tía Abuela Paterna – Materna Alegada 1

Tía Abuela Paterna – Materna Alegada 2

Tía Abuela Paterna – Materna Alegada 3

FENOTIPO

GENOTIPO

FENOTIPO

GENOTIPO

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

A03011-05 A2601/02/04/05/08/09/11N/ 12/14 B3801-022/04 B4101/02/03

A2601/02/04/05/08/09/11N/12/14 – B3801-022/04 A03011-05 – B4101/02/03

A2601/02/04/05/08/09/11N/12/ 14 B1501101/01102N/013/0407/20/25-27/28/32-35/38-40/50 B3801-022/04

A2601/02/04/05/08/09/11N/12/ 14 - B1501101/01102N/013/0407/20/25-27/28/32-35/38-40/50 A2601/02/04/05/08/09/11N/12/ 14 - B3801-022/04

A2601/02/04/05/08/09/11N/12/14 B1501101/01102N/013/0407/20/25-27/28/32-35/38-40/50 B3801-022/04

A2601/02/04/05/08/09/11N/12/14 - B3801-022/04 A2601/02/04/05/08/09/11N/12/14 - B1501101/01102N/013/0407/20/25-27/28/32-35/38-40/50

MARCADORES GENETICOS 1.-ESTUDIO DE ANTIGENOS ERITROCITARIOS Titular

SISTEMA

Padre Alegado

Abuela Materna Alegada (fallecida)

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

ABO

O

---

O

---

O

---

Rh / Hr

CDce

CDe/cde R1/r

CDe

CDe / CDe R1 / R1

CDEce

CDE/cde Rz / r

MNSs

MSs

MS / Ms

Ms

Ms / Ms

MS

MS / MS

P

P1

---

P1

---

P1

---

KELL CELLANO

K k

K/k

k

k/k

k

k/k

KIDD

Jk (a-b+)

Jkb / Jkb

Jk (a-b+)

Jkb / Jkb

Jk (a-b+)

Jkb / Jkb

DUFFY

Fy (a-b+)

Fyb / Fyb

Fy (a+b+)

Fya / Fyb

Fy (a-b+)

Fyb / Fyb

Tío Materno Alegado

SISTEMA

Tía Materna Alegada 2

Tía Materna Alegada 1

GENOTIPO MAS PROBABLE

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

FENOTIPO

ABO

A2

---

B

---

A2

Rh / Hr

CDEc

CDE/cDE Rz/R2

CDEce

CDE / cde Rz / r

ce

cde/cde r / r

MNSs

---

---

MSs

MS / Ms

MSs

MS / Ms

P

P1

---

P1

KELL CELLANO

Kk

K/k

Kk

K/k

Kk

K/k

KIDD

Jk (a+b+)

Jka / Jkb

Jk (a+b+)

Jka / Jkb

Jk (a+b+)

Jka / Jkb

DUFFY

Fy (a-b+)

Fyb / Fyb

Fy (a-b+)

Fyb / Fyb

Fy (a-b+)

Fyb / Fyb

SISTEMA

Tía Abuela Paterna – Materna Alegada 1

P1

Tía Abuela Paterna – Materna Alegada 2

Tía Abuela Paterna – Materna Alegada 3

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

FENOTIPO

GENOTIPO MAS PROBABLE

ABO

---

---

---

---

---

---

Rh / Hr

---

---

---

---

---

---

MNSs

---

---

---

---

---

---

P

---

---

---

---

---

---

KELL CELLANO

---

---

---

---

---

---

KIDD

---

---

---

---

---

---

DUFFY

---

---

---

---

---

---

1

2

A2 B48 A29 B44 DR8 DRX DQ4 / DQX 0 cDE / cDE R2/R2 P1 Ns/Ns k/k JKb/JKb Fyb/Fyb

A25 B44 A31 B51 DR7 DR8 DQ2/ DQ3 0 cDE/cDE R2/R2 P1 Ms/Ms k/k Jkb/Jkb Fya/Fyb

7

8

9

A29 B44 A31 B51

A29 B44 A31 B51

0 cDE/cDE R2/R2 P1 Ms/Ns k/k Jkb/Jkb Fyb/Fyb

0 cDE/cDE R2/R2 P1 Ms/Ns k/k Jkb/Jkb Fya/Fyb

A2 B48 A31 B51 DR8 DR8 DQ4 DQ3

1) abuelo paterno alegado. 2) abuela paterna alegada. 3) abuelo materno alegado. 4) abuela materna alegado. 5) padre alegado desaparecido. Información genética deducida. 6) madre alegada desaparecida. Información genética deducida. 7) tía paterna alegada. 8) tía paterna alegada. 9) tía paterna alegada. 10) tía materna alegada. 11) nieta alegada.

0 cDE/cDE R2/R2 P1 Ms/Ns k/k Jkb/Jkb Fya/Fyb

5 A29 B44 ó A25 B44 A2 B48 ó A25 B44 A29 B44 ó A31 B51 A2 B48 ó A31 B51 DR8 ó DR7 DR8 ó DR8 DRX ó DR7 DRX DR8 DQ4 DQ2 ó DQ4 DQ3 ó DQX DQ2 ó DQX DQ3 ó

11 A2 B48 A2 B35 DR8 DR4 DQ4 DQ3 0 CDE/CDE R1/R2 Ns/Ns k/k Jka/Jkb Fya/Fya

1) abuelo paterno alegado. 2) abuela paterna alegada. 3) abuelo materno alegado. 4) abuela materna alegado. 5) padre alegado desaparecido. Información genética deducida. 6) madre alegada desaparecida. Información genética deducida. 7) tía paterna alegada. 8) tía paterna alegada. 9) tía paterna alegada. 10) tía materna alegada. 11) nieta alegada.

3

4

A1 B37 A2 B7 DR15 DR4

A2 B35 A31 B51 DR4 DR8

DQ3/DQ6 A1 Cde/cDE R0/R2 P1 Ns/Ns k/k Jka/Jkb Fya/Fyb

DQ3 / DQ3

6 11 A2 B48 A2 B35 DR8 DR4 DQ4 DQ3 0 CDE/CDE R1/R2 Ns/Ns k/k Jka/Jkb Fya/Fya

A1 B37 ó A31 B51 A1 B37 ó A2 B35 A2 B7 ó A31 B51 A2 B7 ó A2 B35 DR15 ó DR8 DR15 ó DR4 DR4 DR8 ó DR4 DR4 DQ3 ó DQ3 DQ3 DQ6

0 CDe/cde R1/r Ms/Ns k/k Jka/Jkb Fya/Fya

10 A1 B37 A31 B51 DR 15 DR8 DQ3 / DQ6 A1 cDE/cDE R0/r Ns/Ns k/k Jka/Jkb Fya/Fya

Marcadores VNTRs y STRs Herencia Mendeliana o al Azar

LEYES DE MENDEL  Primera

ley, o Principio de la segregación.

 Segunda

ley, o Principio de la transmisión independiente.

Gregor Johann Mendel

MADRE P A D R E

A

a

B

AB

aB

b

Ab

ab

STRs AUTOSOMICOS EN ESTUDIOS DE FILIACIÓN

ESTUDIOS DE ADN APLICACIÓN FORENSE

 En procesos de Filiación: Paternidad, Maternidad y otros.

 En Criminalística.  En identificación de cadáveres y/o restos cadavéricos.

EVOLUCION HISTORICA DE LOS ESTUDIOS DE FILIACION • •

• • •

•

1900-1950: Grupos sanguíneos o Antígenos Eritrocitarios (ABO, Rh) 1947-1960: Proteínas Plasmáticas (Haptoglobina,Transferrina, Factores del Complemento, etc). 1965-1980: Enzimas Eritrocitarias (GPT, PGM, etc). 1980: Sist. HLA o Complejo Mayor de Histocompatibilidad 1985: Polimorfismos del ADN. Huella Digital Genética o Fingerprint STRs

REPRESENTACION GRAFICA DE LOS STRs

•Unidades de repetición de 2 a 7 pb. •Altamente polimórficas. •Pueden ser analizados por técnicas de amplificación (PCR). • Escasa muestra • Muestras parcialmente degradadas • PCR Multiplex

Grupo Español Portugués de la ISFG http://www.isfg.org/

STRs AUTOSOMICOS Requisitos para ser aplicados en Genética Forense

 Ubicación en cromosomas diferentes.  Alta reproducibilidad en los resultados.  Escasa o nula tendencia a producción de artefactos ( STRs tetraméricos).  Bajo índice de mutación.  Rango de longitud alélica de 90-500 pb.

STRs NOMENCLATURA

Número de unidades de repetición completas. Número de unidades de repetición completas, separación con un punto y número de unidades de repetición incompletas. STRs: Número de loci Actualmente se recomienda el estudio de por lo menos 13 loci autosómicos.

cromosoma

TERMOCICLADOR

REACCION EN CADENA DE LA POLIMERAZA (PCR)

SECUENCIADOR AUTOMATICO ABI 3100

ABI 3100 TECNOLOGIA

LADDER ALELICO

ELECTROFEROGRAMA ALELOS

INVESTIGACION DE LA PATERNIDAD

ADN NUCLEAR

Human Identity Testing with Multiplex STRs

Two different individuals

AmpFlSTR® SGM Plus™ kit

amelogenin D19

D3

DNA Size (base pairs) D8 TH01 VWA D21

D16 D18

D2

FGA

probability of a random match: ~1 in 3 trillion amelogenin D3 D19 D8

VWA TH01

Results obtained in less than 5 hours with a spot of blood the size of a pinhead D16 D21 FGA

D18

Simultaneous Analysis of 10 STRs and Gender ID

D2

Investigación de Paternidad : TRÍO Padre

Hijo

1 D8S1179Madre

15-15

13-15

13-15

2 D21S11

28-30

30-31

30-31

3 D7S820

8-11

12-12

12-12

4 CSF1PO

10-12

11-13

12-13

5 D3S1358

16-18

16-17

17-18

7-9

6-7

6-6

7 D13S317

10-12

10-12

10-11

8 D16S539

9-12

9-11

9-15

9 D2S1338

24-25

16-17

17-23

10 D19S433

13-13

12-13.2

12-14

11 VWA

19-19

18-18

18-18

12 TPOX

11-11

11-11

10-11

13 D18S51

13-13

13-17

13-15

14 D5S818

10-13

11-11

11-12

15 FGA

19-22

20-24

20-25

X-Y

X-X

X-X

6 TH01

16 Amelogenina

Investigación de Paternidad : TRÍO Padre

Hijo

1 D8S1179Madre

15-15

13-15

13-15

2 D21S11

28-30

30-31

30-31

3 D7S820

8-11

12-12

12-12

4 CSF1PO

10-12

11-13

12-13

5 D3S1358

16-18

16-17

17-18

7-9

6-7

6-6

7 D13S317

10-12

10-12

10-11

8 D16S539

9-12

9-11

9-15

9 D2S1338

24-25

16-17

17-23

10 D19S433

13-13

12-13.2

12-14

11 VWA

19-19

18-18

18-18

12 TPOX

11-11

11-11

10-11

13 D18S51

13-13

13-17

13-15

14 D5S818

10-13

11-11

11-12

15 FGA

19-22

20-24

20-25

X-Y

X-X

X-X

6 TH01

16 Amelogenina

Investigación de Paternidad : TRÍO Padre

Hijo

1 D8S1179Madre

15-15

13-15

13-15

2 D21S11

28-30

30-31

30-31

3 D7S820

8-11

12-12

12-12

4 CSF1PO

10-12

11-13

12-13

5 D3S1358

16-18

16-17

17-18

7-9

6-7

6-6

7 D13S317

10-12

10-12

10-11

8 D16S539

9-12

9-11

9-15

9 D2S1338

24-25

16-17

17-23

10 D19S433

13-13

12-13.2

12-14

11 VWA

19-19

18-18

18-18

12 TPOX

11-11

11-11

10-11

13 D18S51

13-13

13-17

13-15

14 D5S818

10-13

11-11

11-12

15 FGA

19-22

20-24

20-25

X-Y

X-X

X-X

6 TH01

16 Amelogenina

Investigación de Paternidad : TRÍO Padre

Hijo

1 D8S1179Madre

15-15

13-15

13-15

2 D21S11

28-30

30-31

30-31

3 D7S820

8-11*

12-12

12-12

4 CSF1PO

10-12*

11-13

12-13

5 D3S1358

16-18

16-17

17-18

7-9

6-7

6-6

7 D13S317

10-12

10-12

10-11

8 D16S539

9-12

9-11

9-15

9 D2S1338

24-25*

16-17

17-23

10 D19S433

13-13*

12-13.2

12-14

11 VWA

19-19*

18-18

18-18

12 TPOX

11-11

11-11

10-11

13 D18S51

13-13*

13-17

13-15

14 D5S818

10-13*

11-11

11-12

15 FGA

19-22*

20-24

20-25

X-Y

X-X

X-X

6 TH01

16 Amelogenina

CONCLUSIONES  El

Hijo comparte con su madre biológica el 50% de los marcadores STRs estudiados.

 El

Padre Alegado NO comparte 8 de los 15 marcadores STRs autosómicos investigados.

 El

Padre Alegado queda excluído de ser el padre biológico del Hijo.

Investigación de Paternidad : Dúo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

D8S1179 D21S11 D7S820 CSF1PO D3S1358 TH01 D13S317 D16S539 D2S1338 D19S433 VWA TPOX D18S51 D5S818 FGA Amelogenina

Padre

Hijo

15-15 28-30 8-11 10-12 16-18 7-9 10-12 9-12 24-25 13-13 19-19 11-11 13-13 10-13 19-22 X-Y

13-15 30-31 12-12 11-13 16-17 6-7 10-12 9-11 16-17 12-13.2 18-18 11-11 13-17 11-11 20-24 X-X

Investigación de Paternidad : Dúo Padre 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

D8S1179 D21S11 D7S820 CSF1PO D3S1358 TH01 D13S317 D16S539 D2S1338 D19S433 VWA TPOX D18S51 D5S818 FGA Amelogenina

15-15 28-30 8-11* 10-12* 16-18 7-9 10-12 9-12 24-25* 13-13* 19-19* 11-11 13-13 10-13* 19-22* X-Y

Hijo 13-15 30-31 12-12 11-13 16-17 6-7 10-12 9-11 16-17 12-13.2 18-18 11-11 13-17 11-11 20-24 X-X

CONCLUSIONES  Debido

a que se carece del perfil genético de la madre NO es posible definir en el Hijo el “haplotipo materno”. En consecuencia, tampoco es posible definir los “genes obligados paternos”.

 El

Padre Alegado NO comparte 7 de los 15 marcadores STRs autosómicos investigados.

 El

Padre Alegado queda excluído de ser el padre biológico del Hijo.

Padre

Hijo

Madre

1 D8S1179

15-15

13-15

13-15

2 D21S11

28-30

30-31

30-31

3 D7S820

8-11

12-12

12-12

4 CSF1PO

10-12

11-13

12-13

5 D3S1358

16-18

16-17

17-18

7-9

6-7

6-6

7 D13S317

10-12

10-12

10-11

8 D16S539

9-12

9-11

9-15

9 D2S1338

24-25

16-17

17-23

10 D19S433

13-13

12-13.2

12-14

11 VWA

19-19

18-18

18-18

12 TPOX

11-11

11-11

10-11

13 D18S51

13-13

13-17

13-15

14 D5S818

10-13

11-11

11-12

15 FGA

19-22

20-24

20-25

X-Y

X-X

X-X

6 TH01

16 Amelogenina

1 D8S1179

Padre

Hijo

Madre

13-13

13-16

2 D21S11

30.2-28

30-30.2

30-30

3 D7S820

8-12

8-12

10-12

4 CSF1PO

11-13

12-13

11-12

5 D3S1358

18-18

18-18

16-18

6 TH01

7-9.3

9.3-9.3

7-9.3

7 D13S317

9-11

8-9

8-12

8 D16S539

9-11

11-11

10-11

9 D2S1338

19-20

17-20

17-25

10 D19S433

12-16

12-14

13-14

11 VWA

16-17

17-17

17-17

12 TPOX

11-11

8-11

8-11

13 D18S51

12-15

13-15

13-13

14 D5S818

11-12

12-13

11-13

15 FGA

19-25

24-25

21-24

X-Y

X-Y

X-X

16 Amelogenina

13-16

1 D8S1179Madre

Padre

Hijo

13-13

13-16

13-16

2 D21S11

30.2-28

30-30.2

30-30

3 D7S820

8-12

8-12

10-12

4 CSF1PO

11-13

12-13

11-12

5 D3S1358

18-18

18-18

16-18

6 TH01

7-9.3

9.3-9.3

7-9.3

7 D13S317

9-11

8-9

8-12

8 D16S539

9-11

11-11

10-11

9 D2S1338

19-20

17-20

17-25

10 D19S433

12-16

12-14

13-14

11 VWA

16-17

17-17

17-17

12 TPOX

11-11

8-11

8-11

13 D18S51

12-15

13-15

13-13

14 D5S818

11-12

12-13

11-13

15 FGA

19-25

24-25

21-24

X-Y

X-Y

X-X

16 Amelogenina

Padre

Hijo

13-13

13-16

13-16

2 D21S11

30.2-28

30-30.2

30-30

3 D7S820

8-12

8-12

10-12

4 CSF1PO

11-13

12-13

11-12

5 D3S1358

18-18

18-18

16-18

6 TH01

7-9.3

9.3-9.3

7-9.3

7 D13S317

9-11

8-9

8-12

8 D16S539

9-11

11-11

10-11

9 D2S1338

19-20

17-20

17-25

10 D19S433

12-16

12-14

13-14

11 VWA

16-17

17-17

17-17

12 TPOX

11-11

8-11

8-11

13 D18S51

12-15

13-15

13-13

14 D5S818

11-12

12-13

11-13

15 FGA

19-25

24-25

21-24

X-Y

X-Y

X-X

1 D8S1179 Madre

16 Amelogenina

1 D8S1179Madre

Padre

Hijo

13-13

13-16

13-16

2 D21S11

30.2-28

30-30.2

30-30

3 D7S820

8-12

8-12

10-12

4 CSF1PO

11-13

12-13

11-12

5 D3S1358

18-18

18-18

16-18

6 TH01

7-9.3

9.3-9.3

7-9.3

7 D13S317

9-11

8-9

8-12

8 D16S539

9-11

11-11

10-11

9 D2S1338

19-20

17-20

17-25

10 D19S433

12-16

12-14

13-14

11 VWA

16-17

17-17

17-17

12 TPOX

11-11

8-11

8-11

13 D18S51

12-15

13-15

13-13

14 D5S818

11-12

12-13

11-13

15 FGA

19-25

24-25

21-24

X-Y

X-Y

X-X

16 Amelogenina

CONCLUSIONES  El

Hijo comparte con su madre biológica el 50% de los marcadores STRs estudiados, quedando definidos los “genes obligados paternos”.  El Padre Alegado comparte con el Hijo Alegado el 50 % restante de los marcadores STRs autosómicos investigados. Por lo tanto no se puede excluir el alegado vínculo biológico.  Se procede al cálculo matemático-estadístico del Índice y Probabilidad de Paternidad.

INCOSISTENCIAS GENÉTICAS EN STRs

DEFINICIÓN Una mutación es cualquier cambio que se produce en la secuencia de nucleótidos del ADN. Dicho cambio es estable y heredable en el material genético.

La mutación es la fuente primaria de variabilidad genética

MUTACIONES

Es la frecuencia con la que se observa un tipo particular de mutación en una población de células o de individuos.

Frecuencia de mutación=2/8=0, 25.

   

Están diferenciadas en maternas y paternas. Se describen para cada locus, pero no para cada alelo. Se expresan como un cociente o en % Tasas de mutación entre 5 x 10-4 y 7 x 10-3 Un laboratorio que efectúe 100 pruebas de paternidad al año con 15 marcadores, puede observar entre 2 y 20 mutaciones cada año.

1 D8S1179 2 D21S11 3 D7S820 4 CSF1PO 5 D3S1358 6 TH01 7 D13S317 8 D16S539 9 D2S1338 10 D19S433 11 VWA 12 TPOX 13 D18S51 14 D5S818 15 FGA 16 Amelogenina

Padre 13-13 30.2-28 8-12 11-13 18-18 7-9.3 10-11 9-11 19-20 12-16 16-17 11-11 12-15 11-12 19-25 X-Y

Hijo 13-16 30-30.2 8-12 12-13 18-18 9.3-9.3 8-9 11-11 17-20 12-14 17-17 8-11 13-15 12-13 24-25 X-Y

Madre 13-16 30-30 10-12 11-12 16-18 7-9.3 8-12 10-11 17-25 13-14 17-17 8-11 13-13 11-13 21-24 X-X

1 D8S1179 2 D21S11 3 D7S820 4 CSF1PO 5 D3S1358 6 TH01 7 D13S317 8 D16S539 9 D2S1338 10 D19S433 11 VWA 12 TPOX 13 D18S51 14 D5S818 15 FGA 16 Amelogenina

Padre 13-13 30.2-28 8-12 11-13 18-18 7-9.3 10-11 9-11 19-20 12-16 16-17 11-11 12-15 11-12 19-25 X-Y

Hijo 13-16 30-30.2 8-12 12-13 18-18 9.3-9.3 8-9 11-11 17-20 12-14 17-17 8-11 13-15 12-13 24-25 X-Y

Madre 13-16 30-30 10-12 11-12 16-18 7-9.3 8-12 10-11 17-25 13-14 17-17 8-11 13-13 11-13 21-24 X-X

1 D8S1179 2 D21S11 3 D7S820 4 CSF1PO 5 D3S1358 6 TH01 7 D13S317 8 D16S539 9 D2S1338 10 D19S433 11 VWA 12 TPOX 13 D18S51 14 D5S818 15 FGA 16 Amelogenina

Padre 13-13 30.2-28 8-12 11-13 18-18 7-9.3 10-11 9-11 19-20 12-16 16-17 11-11 12-15 11-12 19-25 X-Y

Hijo 13-16 30-30.2 8-12 12-13 18-18 9.3-9.3 8-9 11-11 17-20 12-14 17-17 8-11 13-15 12-13 24-25 X-Y

Madre 13-16 30-30 10-12 11-12 16-18 7-9.3 8-12 10-11 17-25 13-14 17-17 8-11 13-13 11-13 21-24 X-X

RECOMENDACIONES DE ISFG 





Calcular los IP de cada locus y el IPA y la PPA, sin incluir el locus con la inconsistencia genética. Calcular el IP del D13S317, considerando la tasa de mutación μ correspondiente a ese locus. Calcular el IPA y la PPA incluyendo también al D13S317.

Como las tasas de mutación tienen valores muy bajos, tanto el IPA como la PPA con el D13S317 descienden significativamente.

 En

el informe deben constar

IPA y PPA sin mutación.  IPA y PPA con mutación. 

 Para

confirmar que se trata de una mutación se debería SECUENCIAR.

Son producto de una limitación técnica.  Se evidencian como Falsos Homocigotas  Principal causa: modificación de la zona de anillamiento del primer, que impide a éste unirse durante la reacción de PCR, por lo que dicho alelo no se amplificará.  En casos excepcionales se visualiza la no amplificación de ningún alelo, si ocurre en ambos cromosomas. 

EQUIPO COMERCIAL POWERPLEX

EQUIPO COMERCIAL IDENTIFILER

1 D8S1179 2 D21S11 3 D7S820 4 CSF1PO 5 D3S1358 6 TH01 7 D13S317 8 D16S539 9 D2S1338 10 D19S433 11 VWA 12 TPOX 13 D18S51 14 D5S818 15 FGA 16 Amelogenina

Padre 13-13 30.2-28 8-12 11-13 18-18 7-9.3 9-11 9-11 19-20 12-16 16-16 11-11 12-15 11-12 19-25 X-Y

Hijo 13-16 30-30.2 8-12 12-13 18-18 9.3-9.3 8-9 11-11 17-20 12-14 17-17 8-11 13-15 12-13 24-25 X-Y

Madre 13-16 30-30 10-12 11-12 16-18 7-9.3 8-12 10-11 17-25 13-14 17-18 8-11 13-13 11-13 21-24 X-X

→¿Mutación o alelo nulo?



Cálculo del IPA y PPA sin el locus que presenta la inconsistencia.



Cálculo del IPA y PPA considerando al vWA como posible mutación.



Cálculo del IPA y PPA considerando al vWA como posible alelo nulo.



La única forma de confirmar la inconsistencia es por SECUENCIACIÓN.

STRs de cromosomas sexuales Aplicaciones Forenses

STRs del cromosoma X Aplicaciones Forenses

Características del Cromosoma X 



  

El cromosoma X fue descubierto por Barr y Bertram en 1949. Se cree que, al igual que el cromosoma Y, evolutivamente deriva de los cromosomas autosómicos. Corresponde a un 5% del genoma humano. Es pobre en genes. Se asocia a ciertas enfermedades genéticas.

Mujeres → Homocigotas

Hombres → Hemicigotas.

Herencia del Cromosoma X

n padre transmite su único cromosoma X a todas sus hijas mujeres.

U

Importancia en Genética Forense

odas las hijas mujeres de un mismo padre tienen el mismo cromosoma X

Utilidad de los STRs del Cromosoma X en aplicaciones forenses  Casos de Paternidad en ausencia del Padre, donde la titular es una mujer.

Entre una hija legal y una hija alegada. Entre una abuela paterna y una nieta alegada.

Estudio de STRs del Cromosoma X 

Los STRs del Cromosoma X son los marcadores más nuevos, con respecto a los otros STRs de utilidad en Genética Forense.



No hay disponibilidad de equipos comerciales por el momento.



Elaboración de bases de datos poblacionales a través de trabajos de cooperación entre laboratorios de distintos países.

STRs del Cromosoma X incluidos en el estudio  DXS7423  DXS6809  DXS7132  DXS9902  DXS6789

Ejemplo de estudio de STRs - X Madre – Hija alegada – Padre Alegado

Perfiles genéticos: MARCADOR

PADRE ALEGADO

TITULAR

MADRE

DXS8378

11

11-12

10-12

DXS9898

12

12-12

12-12

DXS7133

9

9-10

9-10

GATA31E08

10

10-11

11-11

GATA172D05

8

6-8

6-12

DXS7423

15

15-15

15-15

DXS6809

33

33-33

32-33

DXS7132

14

13-14

12-13

DXS9902

12

11-12

10-11

DXS6789

20

20-20

20-20

Definimos lo que la titular heredó de su madre... MARCADOR

PADRE ALEGADO

TITULAR

MADRE

DXS8378

11

11-12

10-12

DXS9898

12

12-12

12-12

DXS7133

9

9-10

9-10

GATA31E08

10

10-11

11-11

GATA172D05

8

6-8

6-12

DXS7423

15

15-15

15-15

DXS6809

33

33-33

32-33

DXS7132

14

13-14

12-13

DXS9902

12

11-12

10-11

DXS6789

20

20-20

20-20

Comparamos los genes obligados paternos con el perfil genético del padre alegado... MARCADOR

PADRE ALEGADO

TITULAR

MADRE

DXS8378

11

11-12

10-12

DXS9898

12

12-12

12-12

DXS7133

9

9-10

9-10

GATA31E08

10

10-11

11-11

GATA172D05

8

6-8

6-12

DXS7423

15

15-15

15-15

DXS6809

33

33-33

32-33

DXS7132

14

13-14

12-13

DXS9902

12

11-12

10-11

DXS6789

20

20-20

20-20

CONCLUSIONES: En caso de compartir el perfil de STRs del cromosoma X, no puede ser excluido el alegado vínculo biológico.  El estudio de STRs del cromosoma X permite excluir con certeza un vínculo biológico cuando no se comparten los marcadores (en aquellos vínculos que tienen una herencia obligada). 

STRs del cromosoma Y Aplicaciones Forenses

Representación gráfica del Cromosoma Y • • •

•

Cromosoma pequeño (2% del genoma). 60% de su contenido de ADN está constituido por secuencias repetitivas polimórficas. Carece de cromosoma homólogo→haploidía parcial → falta de recombinación durante la meiosis, excepto PAR y PAR2. Todas las secuencias polimórficas constituyen un grupo de ligamiento, es decir que se heredan en bloque.

COMO LOS STRs DEL CROMOSOMA Y SE HEREDAN EN BLOQUE.

AL CONJUNTO DE ESTOS MARCADORES TIPIFICADOS EN UN INDIVIDUO CONSTITUYE UN HAPLOTIPO

Importancia en Genética Forense

odos los hijos varones de un mismo padre tienen el mismo haplotipo de cromosoma Y

Herencia del Cromosoma Y

n

Utilidad de los STRs del Cromosoma Y en aplicaciones forenses  Estudios antropológicos y/o evolutivos.  Genética de poblaciones.  Identificación humana.  Estudios de filiación en ausencia del padre.  Casos forenses → asaltos sexuales.

Bases de Datos para STRs del cromosoma Y       

En Berlín, en 1998 se crea una importante base de datos europea. Disponible en Internet: http://ystr.charite.de Tiene 4 objetivos principales: Estandarizar un haplotipo común de STRs del cromosoma Y. Garantizar los resultados emitidos por los laboratorios mediante controles de calidad periódicos Determinar la estratificación poblacional caucásica en Europa. Recopilar una amplia base de datos que permita la estimación real de frecuencias haplotípicas para su aplicación en la práctica forense.

YHRD (Y cromosome Haplotype Reference Database) • Disponible en Internet http://www.yhrd.org • Cuenta con mas de 59.000 haplotipos distribuidos en todos los continentes. • Todos los laboratorios que desean contribuir con datos de sus poblaciones deben realizar un control de calidad obligatorio previo. • El BNDG ha contribuido con más de 300 haplotipos.

Herencia del Cromosoma Y

El cromosoma Y se hereda por línea

Filiación en ausencia del Padre Caso 1 Abuelo Paterno Alegado

Titular

MARCADOR

TITULAR

ABUELO PATERNO ALEGADO

1 - DYS456

16

16

2 - DYS389I

13

13

3 - DYS390

24

25

4 - DYS389 II

29

30

5 - DYS458

18

15

6 - DYS19

14

17

11-14

11-14

8 – DYS393

12

12

9 – DYS391

10

10

10- DYS439

12

11

11-DYS635

23

23

12-DYS392

13

11

13-Y GATA H4

12

12

14-DYS437

15

14

15-DYS438

12

11

16-DYS448

19

20

7 - DYS385 a/b

MARCADOR

TITULAR

ABUELO PATERNO ALEGADO

1 - DYS456

16

16

2 - DYS389I

13

13

3 - DYS390

24

25

4 - DYS389 II

29

30

5 - DYS458

18

15

6 - DYS19

14

17

11-14

11-14

8 – DYS393

12

12

9 – DYS391

10

10

10- DYS439

12

11

11-DYS635

23

23

12-DYS392

13

11

13-Y GATA H4

12

12

14-DYS437

15

14

15-DYS438

12

11

16-DYS448

19

20

7 - DYS385 a/b

CONCLUSIONES 



La tipificación en el haplotipo del Cromosoma Y del titular y del abuelo paterno alegado difiere en 9 de los 16 loci analizados. Por lo tanto el titular y el abuelo paterno alegado NO presentan identidad haplotípica, y queda excluido el vínculo biológico por rama paterna entre ambos.

Filiación en ausencia del Padre Caso 2

Tío Paterno Alegado

Titular

MARCADOR

TITULAR

TIO PATERNO ALEGADO

1 - DYS456

14

14

2 - DYS389I

13

13

3 - DYS390

24

24

4 - DYS389 II

29

29

5 - DYS458

18

18

6 - DYS19

14

14

11-14

11-14

8 – DYS393

12

12

9 – DYS391

10

10

10- DYS439

12

12

11-DYS635

23

23

12-DYS392

13

13

13-Y GATA H4

11

11

14-DYS437

15

15

15-DYS438

12

12

16-DYS448

19

19

7 - DYS385 a/b

CONCLUSIONES 1.

2.

3.

La tipificación en el haplotipo del Cromosoma Y del titular y del tío paterno alegado muestran identidad total en el haplotipo investigado. El haplotipo no presenta/presenta n número de ocurrencias en la Base de Datos YHRD, para los 16 loci STRs investigados. El tamaño de la base de datos varía según el número de loci que se ingresan. En nuestra Base de Datos de STRs del cromosoma Y el mencionado haplotipo no presenta/presenta n número de ocurrencias, sobre 301 haplotipos de 10 loci STRs.

CONCLUSIONES El titular y su tío Paterno alegado presentan identidad haplotípica del cromosoma Y y para los 16 marcadores STRs estudiados. Por lo tanto no puede ser excluído entre ellos el alegado vínculo biológico por rama paterna.

Aplicaciones de STRs autosomicos y del Cromosoma Y En Muestras Complejas

¿Qué técnicas moleculares podemos utilizar? Ya está extraído el ADN

STRs autosómicos: a) Identifiler b) Minifiler c) Strs del Cromosoma Y

Secuenciación del ADN mitocondrial

Perfil genético obtenido de un cepillo de dientes Balance perfecto de los picos

Stutter Products STUTTER

Stutter Products

Se trata de pequeños picos que suelen ser una unidad de repetición menos del pico principal.

Stutter Products

Allele Dropout or Null Alleles Mutations in the primer binding sites may result in an allele failing to amplify.

Perfil genético obtenido de un hisopado vaginal

Descontando el patrón de la victima

Degraded/Trace DNA Samples

BAJA CONCENTRACION DE ADN

Larger alleles “drop-out” when template DNA is low in quantity or quality, reducing certainty of genotypes.

CONCLUSIONES 

De acuerdo a los resultados obtenidos para el locus Amelogenina la muestra remitida e identificada como “N4” cepillo de dientes….. Correspondería a un individuo del sexo masculino



No es posible excluir el alegado vínculo biológico por rama materna paterna entre la muestra remitida e identificada por el Juzgado interviniente como “Nº4” cepillo de dientes color rojo marca “NN” y el Sr/ Sra. -------- (padre alegado desaparecido)

ANALISIS DE PERFILES MEZCLA Perfil mezcla: procede de mas de una persona.

Se detecta por la presencia de mas de dos alelos en varios de los sistemas analizados; además los diferentes alelos que aparecen en un marcador pueden estar desbalanceados.

Etapas en el análisis de mezclas forenses Primero: Identificar la presencia de una mezcla y designar los alelos sin ambigüedad. Las mezclas se detectan por 1) Presencia de extra – bandas: descartar bandas artefactuales.

Stutter o tartamudeos Contaminación Amplificación inespecífica, bandas “pullup”, anomalías cromosómicas, etc.

2) Desbalance entre las intensidades de los alelos Amplificación diferencial por escasa cantidad de ADN Mutaciones en la zona de annealing del primer

Segundo: Identificar el número de personas que contribuyen a la mezcla y su proporción relativa.

Tercero: Comparar con muestras indubitadas. Cuarto: Valoración estadística.

DNA Mixtures

MEZCLAS COMPLEJAS Caso: Violación múltiple, se analizan una bombacha, un hisopada vaginal y muestras de Sangre de la víctima y de 3 sospechosos. Se estudian 17 STRs autosómicos y 5 Y-STRs.

Muestra

D3S1358

Penta E D5S818 Penta D D8S1179

Bombacha

14-15-17- 13-14-15- 11-12 9*-10- 13-14 18 19 12-16 Hisopado 14-15-(17- 12-13-14- 11-12 9-9*-10- 12-13-14 18) 15-19 12-13-16 (f.espermat. ) víctima 15 12-15 11-12 9-13 12 Sospechoso 1 Sospechoso 2 Sospechoso 3

17-18

12-15

7-11

10-13

10-15

17-18

13-14

11

10-12

12-13

14-15

15-19

11-12

9*-16

14

MEZCLAS COMPLEJAS Muestra

D3S1358

Penta E

14-15-17-18 13-14-1519 Hisopado 14-15-(17-18) 12-13-14(f.espermat.) 15-19 Bombacha

D5S818

11-12 11-12

Penta D

D8S1179

9*-10-12- 13-14 16 9-9*-10- 12-13-14 12-13-16

víctima

15

12-15

11-12

9-13

12

Sospechoso 1

17-18

12-15

7-11

10-13

10-15

Sospechoso 2

17-18

13-14

11

10-12

12-13

Sospechoso 3

14-15

15-19

11-12

9*-16

14

CONTINUACION …

Muestra

AMELG

DYS19

DYS390

DY391

DYS392

DYS393

Bombacha

XY

14-15

23-25

10-12

11-13

13-14

Hisopado

XY

14-15

23-25

10-12

11-13

13-14

XY

16

23

11

12

14

Sospechoso 2

XY

14

25

12

13

13

Sospechoso 3

XY

15

23

10

11

14

(f.espermat.) Sospechoso 1

Minifiler Muestras altamente degradadas

Conclusiones hisopado vaginal 



De acuerdo al analisis del locus genetico amelogenina se definio un perfil mezcla de por lo menos mas de un individuo masculino y femenino Descontando el perfil genético de la victima podemos inferir que existe mas de un individuo de sexo masculino como posible contribuyente a la mezcla.

¿Si le incorporamos el Cromosoma Y? • No es posible excluir a los imputados de autos como contribuyentes de la mezcla “HisopadoVaginal” por presentar identico haplotipo de Cromosoma Y con los evidenciados para la muestra mencionada

DYS393

INDIVIDUO 1 DYS390 DYS19

DYS393

0.5 ng DNA DYS389-I DYS389-II

INDIVIDUO AZOOSPERMICO DYS19

INDIVIDUO 2

DYS389-I DYS389-II

DYS390 DYS393 DYS393

0.5 ng DNA DYS390 DYS19 DYS19

DYS389-I

ESPERMA CAVIDAD VAGINAL

DYS389-I DYS390

DYS389-II

CÁLCULOS DE PATERNIDAD

Conceptos Básicos OBJETIVO PRINCIPAL DE LA VALORACIÓN

CÁLCULO DE LR ó IP para cada locus

CÁLCULOS DE PATERNIDAD

Paternidades Simples Premisas 1. Ambos progenitores no están relacionados 2. Población en Equilibrio de H-W 3. No mutaciones 4. Herencia Mendeliana

CÁLCULOS DE PATERNIDAD

Paternidades Simples Probabilidad de transmisión de alelos de los progenitores Individuos homocigotos: 1 Individuos heterocigotos: 0.5

Probabilidad de transmisión de alelos por un hombre al azar Frecuencia poblacional del alelo

CÁLCULOS DE PATERNIDAD

Paternidades Simples Identificación: Madre Alegada-Hijo-Padre Alegado MA

PA ?

H1: MA y PA son los padres biológicos del H H0: Los padre biológicos de H son dos individuos al azar no relacionados con MA y PA

Ej:

H

TPOX

CSF1PO

MA: 8,11

MA: 11,12

H: 8,9

H: 11,12

PA: 9,11

PA: 12,12

CÁLCULOS DE PATERNIDAD EN CASOS COMPLEJOS

Relaciones Familiares Incesto (Vínculo biológico entre la Madre y el Padre Alegado (Hno, Padre, etc.) M1

PA

H1: el padre alegado (PA) es el padre biológico del hijo H0: el padre alegado (PA) NO es el padre biológico del hijo y por lo tanto el padre biológico es otro individuo

M2

Ej: TPOX

CSF1PO

H: 9,11

H: 11,12

PA: 8,11

PA: 11,12

?

H

CÁLCULOS DE PATERNIDAD EN CASOS COMPLEJOS

Relaciones Familiares Incesto Valores del coeficiente de consanguinidad (θ

No relación: 0 Padre/Hijo, hermanos completos: 1/4 Tío/Sobrino, medio hermanos: 1/8 Primos hermanos: 1/16

)

CÁLCULOS DE PATERNIDAD EN CASOS COMPLEJOS

Relaciones Familiares Familiares del Padre Alegado Situaciones en las que se piensa que el PA puede ser familiar del Padre Biológico Distintas Hipótesis: A) Indice de Paternidad (IP) H1: el padre alegado (PA) es el padre biológico del hijo H0: el padre alegado (PA) NO es el padre biológico del hijo y por lo tanto el padre biológico es otro individuo

B) Índice Avuncular (AI) H1: un familiar del padre alegado (PA) es el padre biológico del hijo H0: el padre biológico es un individuo no relacionado

CÁLCULOS DE PATERNIDAD EN CASOS COMPLEJOS

Paternidad con Abuelos Paternos Alegados Aba

Abo

M

H1: el padre biológico de H es un hijo biológico de Aba y Abo

?

H0: el padre biológico es un individuo al azar no relacionado Ej: CSFIPO M: 10,11

H

H: 10,12 Aba: 9,10 Abo: 12,12

2 enfoques

CÁLCULOS DE PATERNIDAD EN CASOS COMPLEJOS

Paternidad con Hijos del Padre Alegado M

PA ?

H1

H2

H3

T

Ej: TPOX

CSF1PO

M: 8, 8

M: 10,12

H1: 8, 8

H1: 10,12

H2: 8, 8

H2: 10,12

H3: 8, 8

H3: 10,12

T: 8, 8

T: 10,12

H1: el padre biológico de H1, H2, H3 es el padre biológico de T H0: el padre biológico de T es un individuo al azar no relacionado

CÁLCULOS DE PATERNIDAD EN CASOS COMPLEJOS

Paternidad con Hermanos del Padre Alegado Aba

Abo

M ? T1

T2

T3

H H1: el padre biológico de H es un hermano completo de T1, T2 y T3 H0: el padre biológico de H es un individuo al azar no relacionado

CÁLCULOS MATEMÁTICO-ESTADÍSTICOS EN CASOS COMPLEJOS

CASOS COMPLEJOS 1-Parentalidad 2-Paternidad en ausencia de padre 

Reconstrucción a partir de familiares.

3-Vínculos biológicos discontinuos 4-Relación biológica  

Incesto Familiar del padre alegado

5-Casos de supresión de identidad

1-PARENTALIDAD Casos en que no puede considerarse a la madre como indubitada. Ej:  Cambio de bebés en maternidad  Identificación de restos cadavéricos

Conviene testear también a ambos padres por separado.

CÁLCULO DE PARENTALIDAD (Padre y Madre dubitados)

Cálculo del IP (Padre y Madre dubitados)

Pob → A = a (frecuencia poblacional del alelo A) Pob → B = b (frecuencia poblacional del alelo B)

2-PATERNIDAD EN AUSENCIA DE PADRE partir de los familiares disponibles se reconstruye la información genética del presunto padre. Con el perfil genético deducido, se realiza el cálculo de paternidad. ESTAMOS ASUMIENDO VINCULOS BIOLOGICOS QUE NO TENEMOS CERTEZA QUE SEAN REALES.

EL UNICO DATO INDUBITADO ES EL DE LOS RESTOS OSEOS DEL PADRE ALEGADO FALLECIDO

RECONSTRUCCIÓN DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA

Reconstrucción a partir de los abuelos Ventaja: Los abuelos tienen todos los alelos del perfil genético del PAF.



Desventaja: El resultado aplica a cualquier hijo de esos abuelos.



RECONSTRUCCIÓN DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA • Otros familiares: hermanos, hijos biológicos. • Se recomienda por lo menos 2 familiares de la misma rama( cuantos más sean, mejor) • Madres Si hay pocos familiares → otros marcadores, como STRs del cromosoma Y, ADN mitocondrial, etc según el caso.

3-VÍNCULOS BIOLÓGICOS DISCONTINUOS • Entre 2 personas: o Hermandad o Media hermandad o Tío – sobrino o Abuela – nieto o etc

Limitación del ADN nuclear en este tipo de pericias

Es difícil la valoración de resultados

4-RELACIÓN BIOLÓGICA

C asos en que los padres alegados están relacionados biológicamente entre ellos.

L as relaciones familiares hacen que se compartan alelos y como consecuencia disminuye la probabilidad de exclusión.

• Se debe incluir en el cálculo un Coeficiente de cosanguinidad (θ). • Se debe calcular el Índice Avuncular (AI). Cálculo convencional: "padre alegado frente a individuo no relacionado “ Cálculo en estos casos: "padre alegado frente a familiar del padre alegado“

asos en que padre alegado y madre del titular están relacionados biológicamente entre sí

Si disponemos de Madre-Padre-Hijo el cálculo se realiza como en un estudio convencional, pero se observará mayor número de marcadores homocigotas en el hijo.

INCESTO

Si no disponemos de la madre sí se modifican las fórmulas, incorporando el Coeficiente de cosanguinidad (θ) a las fórmulas.

5-CASOS DE SUPRESIÓN DE IDENTIDAD • En la mayoría de los casos se realiza el cálculo de Parentalidad. • Los perfiles genéticos de Madre y Padre alegados se reconstruyen a partir de los familiares con que se cuenta. • Se recurre a programas informáticos. • Se realizan paralelamente otros marcadores genéticos: ADN mitocondrial, STRs del Cromosoma Y , HLA, Antígenos Eritrocitarios.

Programas informáticos • Programas gratuitos - Distribuidos por Internet - Entregado a pedido por los autores • Programas “caseros” - Desarrollados en cada laboratorio • Programas comerciales

Objetivo de los programas informáticos • • • •

Base de Datos de Patrones Genéticos Estudios genéticos poblacionales Cálculos en Relaciones de Parentesco Cálculos en Causas de Incriminación

Programas informáticos en cálculo de parentesco CASOS SENCILLOS A MUY COMPLEJOS

FAMILIAS: (Hilde-Gunn Bruu, Ingvild Dalen, Thore Egeland,Petter Mostad ) http://www.nr.no/familias Relaciona posibles pedigrees obteniendo un valor numérico del pedigree más probable. • •

Los casos vistos anteriormente Casos de parentesco con presencia de familiares indirectos

CONCLUSIONES 







Es importante informar al laboratorio que realiza la pericia todas aquellas situaciones que puedan influir en los cálculos. Solicitar asesoramiento acerca de qué familiares son los más aconsejables para realizar una reconstrucción de información genética. Tener en cuenta que en reconstrucciones se están asumiendo vínculos biológicos. El único dato indubitado es SIEMPRE el obtenido de una muestra directa del presunto padre.

BANCO NACIONAL DE DATOS GENETICOS

ADN MITOCONDRIAL EN MUESTRAS FORENSES

DNA NUCLEAR vs MITOCONDRIAL

ADN MITOCONDRIAL Aplicaciones en Genética Forense  Evidencias biológicas muy degradadas o en pequeña cantidad (cabellos, huesos, dientes).

 Muestras sin ADN Nuclear (cabello sin bulbo).  Asignación de vínculo biológico entre muestras óseas recuperadas y familiares de una rama materna.

UN NO IC ES IN U O D DI N E V O IDU

DE ICO A UN D CA VIDU I IND O

1 copia por célula

Múltiples copias por célula

ADNmt: LINAJE MATERNO

Tasa de mutación del ADN mit Factores que intervienen en los mecanismos de mutación del ADN mit: • Radicales libres en la mitocondria que tienen efecto mutagénico sobre el ADN. • No posee proteínas de protección. • Actividad reparadora de la DNA polimerasa deficiente. • Mayor N° de rondas de replicación que el ADN nuclear.

mtDNA Sequence Heteroplasmy 16093 (C/T)

16086

16101

Figure 10.9, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2nd Edition © 2005 Elsevier Academic Press

¿ Cómo se analiza la secuencia obtenida? 16303

16311

16319

16327

16336

GTACATAGTACATAAAGCCATTTACCGTACATAG

ANDERSON

GTACATAGCACATAAAACCATTTATCGTACATAG SEC EN ESTUDIO SE DESCRIBEN TODAS LAS DIFERENCIAS MUTACIONALES QUE ENCUENTRE CON RESPECTO A LA SECUENCIA DE REFERENCIA (Sec de Anderson) Y SE OBTIENE EL HAPLOTIPO DE LA MUESTRA EN ESTUDIO.

Ej:

16311-C, 16319-A, 16327-T

ANALISIS DE ADNmt DE HUESOS Y DIENTES

ANALISIS DE ADNmt DE HUESOS Y DIENTES



IDENTIFICACION DE PERSONAS   

 

ATENTADOS DESASTRES EN MASA DESAPARICION DE PERSONAS

FILIACION MATERNA ANTROPOLOGIA

mtDNA FORENSE mtDNA PERMITIO LA IDENTIFICACION DE:    

Czar Nicholas II (Russia), Rey Louis XVII (France) Dr. Joseph Mengele (Germany) Soldados de Viet Nam y Korea

DNA sequence analysis of two hypervariable regions of mitochondrial DNA showed identical sequences for the three daughters and the Tsarina, as would be expected for a maternally inherited character. In addition, the same sequence was found in the current Duke of Edinbrough (Prince Phillip) who is related to the late Tsarina through a maternal line. The same regions of mtDNA for the Tsar had a different sequence from the Tsarina. Princesa Alicia

Zar

Zarina

Felipe de Edimburgo

PERFIL COMPLET O

PERFIL PARCIAL

SIN RESULTADOS

ANALISIS DE ADNmt DE PELOS

PELOS COMO “EVIDENCIA” 





ABUNDANTE: el hombre tiene más de 100.000 bulbos pilosos sólo en la cabeza FACILMENTE TRANSFERIBLE: una persona pierde un promedio de 100 pelos por día DURABLE: se han recuperado pelos de momias de 2000 años

MORFOLOGIA DEL PELO PUNTA

DN AM T

DNA NUCLEAR TALLO

RAIZ BULBO

PELOS COMO “EVIDENCIA” 

el éxito en la obtencion y analisis del dnamt no depende solo del largo del pelo sino del diametro del pelo  

Pelo púbico: mejores resultados Se puede obtener ADN aun de fragmentos de pelo de 5 mm.  

Próximo a la raíz: más ADN Distal a la raíz: menos ADN

0-5

6-10

TIEMPO

11-20

SIN PERFIL

+21

PERFIL PARCIAL PERFIL COMPLETO

TAMAÑO 1-1.9 cm

2-2.9 cm

RECOLECCION Y CADENA DE CUSTODIA DE LAS EVIDENCIAS INFORME EVALUACION DE LAS EVIDENCIAS

COMPARACION DEL PERFIL OBTENIDO CON BASES DE DATOS

EXTRACCION Y CUANTIFICACION DEL DNA

COMPARACION DEL GENOTIPO CON MUESTRAS DE REFERENCIA

AMPLIFICACION POR PCR D-LOOP MtDNA SECUENCIACION GENOTIPIFICACION

COMPARAR LAS SECUENCIAS Q-R

Questioned Known

Caso #1

Caso #2

GCATATTGCGCCTA GCACATTACGTCTA

GCATATTGCGCCTA GCATATTGCGCCTA

EXCLUSION

NO EXCLUSION

CRITERIOS DE NOMENCLATURA 

Siempre se reportan “todas las diferencias” con respecto a la secuencia de Anderson conocida como SECUENCIA DE REFERENCIA DE CAMBRIDGE.



Cada diferencia con respecto a la secuencia de Anderson se define con un número y una letra. Ej: 16.223-T



Las deleciones se reportan anotando la posición donde aparece la deleción seguida de la letra d. Ej: 88 d



Las inserciones se reportan indicando la menor posición donde aparece dicha inserción seguida de la expresión “.1”. Ej: 89.1-C



Las heteroplasmias confirmadas se reportan con los 2 nucleótidos que coexisten en la misma posición. Ej: 73 A=G , 73 A>G ó 73 A
CRITERIOS DE INCLUSION - EXCLUSION

PELO

VICTIMA

AGCTAGATCGTTATTCCGAG AGCTAGATCGTTATTCCGAG

Conclusion: EL PELO PODRIA PERTENECER A LA VICTIMA.

Caso

Ejemplo

Interpretación

MATCH CRITERIA: Interpretación de resultados Secuencias idénticas

Sec 1 Sec 2

GTTTATGCTCCTGAAGT GTTTATGCTCCTGAAGT

Una base heteroplásmica en ambas secuencias en la misma posición

Sec 1 Sec 2

GTT (T/C) ATGCTCCTGAAGT GTT (T/C) ATGCTCCTGAAGT

Una base heteroplásmica en una secuencia no observada en la otra

Sec 1 Sec 2

GTT (T/C) ATGCTCCTGAAGT GTT T ATGCTCCTGAAGT

Una base diferente con no evidencia de heteroplasmia

Sec 1 Sec 2

GTTTATGCTCCTGAAGT GTTCATGCTCCTGAAGT

Dos bases heteroplásmicas en la misma posición en ambas muestras

Sec 1 Sec 2

GTT (T/C) ATGCTCCTG (A/C) AGT GTT (T/C) ATGCTCCTG (A/C) AGT

Una base heteroplásmica en la misma posición, una base muestra heteroplasmia en una muestra pero no en la otra, con un nucleótido en común en cada una de ellas

Sec 1 Sec 2

NO EXCLUSIÓN

¿?

GTT (T/C) ATGCTCCTG (A/C) AGT GTT (T/C) ATGCTCCTG A AGT

Una base heteroplásmica en la misma Sec 1 posición, una base diferente en otra Sec 2 posición con no evidencia de heteroplasmia

GTT (T/C) ATGCTCCTGAAGT GTT (T/C) ATGCTCCTGTAGT

Dos bases diferentes sin evidencia de Sec 1 heteroplasmia Sec 2

GTTTATGCTCCTGAAGT GTTCATGCTCGTGAAGT

EXCLUSIÓN

¿CÓMO SE INFORMA? 

NO SE INFORMA CON UN CÁLCULO YA QUE NO EXISTEN FRECUENCIAS DE HAPLOTIPOS DE ADN MIT.



SE INFORMA COMO UN “PREDICADO VERBAL”. Ej : EXCLUSIÓN

“……queda excluído el alegado vínculo biológico por rama materna ……por diferir en sus secuencias….” Ej : NO EXCLUSIÓN

“ ……no se puede excluir el alegado vínculo biológico por rama materna ……por presentar identidad de secuencia …”

Performance of the Banco Nacional de Datos Genéticos in Argentina Abovich M, Alcazar D, Arellano A, Bettelani M, Cabeller S, Colica M, Cruz M, Echenique C, Filippini S, Fraga M, Gillo C, Lavalle H, Gagliardi F, Garcia Abates A, Ochoa L, Santapa O, Solimine J, Szocs A, Tombesi G, Valente S, Rodriguez Cardozo MB*.

Results and conclusions People sent to BNDG by the CONADI · Ministerio de Justicia y Derechos Humanos

531

386

249

117

104

98 70 58

99

62

62 34

26 3

3

16 10

1995

1996

48

1998

2005

2006

38

29 1997

69

71

54 21

4

2 1994

45

102

64

1999

2000

2001

2002

2003

Año Young People

Family Group

2004

2007

2008

0

0 0

1990

0

1989

2

2005

7

2004

5

2003

2

2002

0 2001

6

2000

0 1

1999

2

1998

1

1997

0

1996

2

1995

3

1994

3

1993

1992

3

1991

0

1988

1 1987

1

1986

4

1985

1984

JOVENES RESTITUIDOS A SUS GRUPOS FAMILIARES

12

11

10

9

9

8

6

5 5

4

3 3

1

0 0 1

Personal del BNDG Bioquímicos y Biólogos y médico: M. Abovich. S. E. Filippini; M. V. Colica; Z. Acosta; M. G. Fraga; J. Solimine; M. Abovich. C. G. Echenique Asesor legal: H. E. Lavalle. : Técnicos Químicos y de Laboratorio: S. F. Valente ; D. Alcazar; O. A. Santapá; F. Gagliardi; A. Szöcs; S. Cabeller; Jessica Magiore, Valeria Técnicos Administrativos: Gastón Tombessi; A. M. Arellano; M. A. Cruz; L. M. Ochoa; C. C. I. Gillo. Javier Arellano, Alejandro Costilla, Hugo Moundjian, Fernando Moundjian Preparadores de Material: N. Gomez; M. S. Ganam;; I. M. Monzón; R. R. Monzón. Area Psicológica : Lic. M. A. Cruz Directora del BNDG: M. Bélen Rodriguez Cardozo

Integrantes del Banco Nacional de Datos Genéticos

D. Alcazar, Dra. Mariel Abovich, Marina Bettelani, Alejandra Cruz, Andrea Szocs, Gastón Tombessi, Florencia Gagliardi, Claudia Guillo, Dra. Gabriela Fraga y el Dr. Hernan Lavalle