Trabajo Inmunologia Quimioluminisencia....docx

UNIVERSIDAD DE ORIENTE NUCLEO DE BOLIVAR ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD “DR. FRANCISCO VIRGILIO BATTISTINI CASALTA” DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS ASIGNATURA: INMUNOLOGIA II LABORATORIO DE INMUNOLOGIA II

PROFESORA:

REALIZADO POR:

Lic. Esmeralda Partidas

Colina María Laura C.I: 23.905.045

CIUDAD BOLIVAR, JUNIO 2016.

HISTORIA

En los sistemas inmunoanalíticos competitivos utilizados en la actualidad e independiente del tipo de respuesta que midamos (radiactividad, densidad óptica, fluorescencia, electroquimioluminiscencia o quimioluminiscencia), el fundamento y el comportamiento de la inmunorreacción primaria [Ag-Ac] se mantiene tal como fuera explicado entre las décadas de 1960 y 1980 por los doctores Rosalyn Yallow, David Rodbard, Roger Ekins, entre otros. Un gran avance científico se produjo en la década de 1970 con el desarrollo de los anticuerpos monoclonales y, a partir de allí, el desarrollo de las técnicas inmunométricas llamadas también "Sistemas Sándwich", donde participan dos anticuerpos que, según el diseño de los distintos fabricantes, pueden ser monoclonal-monoclonal o policlonal-monoclonal. En este desarrollo, la reacción transcurre con equilibrios múltiples; en el “Sándwich” Ab-Ag-Ab, uno de los anticuerpos está unido a una fase sólida y el otro está unido a una marca o a un anclaje, se desarrollan en condiciones de no competencia donde el analito que se va a dosar es ligado con una fuerza equivalente a una unión covalente. Además permitió disminuir los tiempos de incubación, agregar o aumentar pasos de lavados, disminuir uniones inespecíficas y lograr niveles de detección de concentraciones mucho más bajos, por lo menos un orden de magnitud menor que los sistemas competitivos. A finales de la década de 1980, la tecnología permitió obtener sistemas de respuestas mucho más amplificadas que la radiactividad y la densidad óptica basadas en los mismos principios de las inmunorreacciones, se logró disminuir en otro orden de magnitud el nivel de detección de muchos analitos que resultó de gran utilidad para el diagnóstico médico. Existen muchos métodos para detectar el complejo Ag-Ac, una vez que éste se ha formado. Uno de ellos es la quimioluminiscencia, la cual está tomando cada vez mayor auge. Cuando se utilizan sustancia productoras de luz al ser estimuladas. También están tomando cada vez mayor auge las técnicas quimioluminiscentes. QUIMIOLUMINISCENCIA La quimioluminiscencia consiste en términos generales en la producción química de la luz. Los marcadores quimioluminiscentes son sustancias capaces de emitir luz cuando, al absorber la energía de una reacción química oxidativa, son colocadas en un estado de excitación electrónica. La emisión de luz se produce al

volver a su estado inicial y la energía química absorbida se cede en forma de fotones fácilmente cuantificables con un fotodetector. Generalmente se emplean para detectar la existencia de sustancias químicas en las biopsias de tejidos. Si, por ejemplo, queremos saber si un fragmento de hígado tiene una proteína que caracteriza al cáncer, se baña la muestra con un anticuerpo que se pega a esa proteína. El anticuerpo va combinado con una sustancia quimioluminiscente. Se examina el espécimen al microscopio y, si se aprecia que brilla con luz propia, es que contiene la proteína. Los marcadores quimioluminiscentes, como es la biotinas, constituyen una alternativa al uso de isótopos radiactivos en el inmnunoanálisis, pues los compuestos quimioluminiscentes son de gran estabilidad y la emisión de luz sólo se produce cuando se provoca la reacción oxidativa siendo posible almacenar largo tiempo los compuestos luminiscentes. En la actualidad disponemos de varios métodos para seleccionar células a las que previamente se ha unido un anticuerpo. Se ha propuesto un nuevo sistema automatizado de quimioluminiscencia que puede mejorar la reproducibilidad y reducir la variación entre laboratorios ya que el diagnóstico por el laboratorio del APS sigue siendo un reto para cada profesional de laboratorio en el campo FUNDAMENTO Es un inmunoensayo que se basa en la emisión de luz asociada con la energía. La quimioluminiscencia es definida también como la emisión de fotones de luz asociada con la disipación de energía con una sustancia electrónicamente excitada esto se da a través de una reacción enzima sustrato. La emisión de luz es causada por los productos de una reacción específica química, en la cual se involucran las siguientes sustancias según el sistema automatizado que sea utilizado: éster de acridina, peróxido-ácido, hidróxido de sodio, fosfatasa alcalina. En el caso de esta reacción el agente quimioluminiscente es el éster de acridina que es oxidado por el peróxido ácido y el hidróxido de sodio. TIPOS DE QUIMIOLUMINISCENCIA 1. Quimioluminiscencia (Directa) Emplea como fase sólida, micro partículas paramagnéticas recubiertas de anticuerpos específicos contra la sustancia a analizar y como marca el éster de acridina, además el sustrato es oxidante utiliza catalizadores y es necesaria la existencia de cofactores.

2. Quimiolumiscencia amplificada (indirecta) Esta quimioluminiscencia indirecta reacciona por enzimas (fosfatasa alcalina) o iones utiliza también catalizadores y puede necesitar o no cofactores y el sustrato es el éster de fosfato. MARCADORES DE REACCIÓN LUMINISCENTE Ester de Acridina. Hidróxido de Sodio Peróxido Acido Fosfatasa Alcalina VENTAJAS DE LA QUIMIOLUMINISCENCIA Alta sensibilidad (femtogramos 10"15g). No emplea radiactividad. No genera riesgo contaminante ni ruido de fondo a la hora de efectuar el proceso del análisis de una muestra, control o estándar. Los resultados son rápidos (generalmente a los 15 min). Equipos automatizados de fácil manejo. EQUIPO Hitachi 911 Es un analizador automático altamente sensible que puede realizar una amplia gama de pruebas. Es útil para determinar analitos del metabolismo de proteínas, carbohidratos, lípidos, purinas; así como electrolitos del metabolismo óseo, del metabolismo del hierro. También determinan enzimas para evaluar daño al miocardio, pancreático, muscular, hepático y renal fundamental para le eficacia diagnóstica y control terapéutico. Además se emplean para la monitorización de fármacos, perfil reumático, reactantes de fase aguda.

UNIDADES O PARTES DEL EQUIPO El equipo posee dos unidades Unidad de Control: Compuesta por el monitor. CPU, impresora y teclado. Unidad de Análisis: Esta compuesta por las sondas de succión, las cubetas porta muestras para la unidad de análisis la parte óptica de este equipo es

el fotómetro con longitud de onda 360m/hora y posee un ionselectivo760m/hora.

MUESTRAS QUE MANEJA EL EQUIPO: Suero Plasma Orina LCR PRECAUCIONES QUE SE DEBE TENER CUENTA AL MOMENTO DE USAR EL EQUIPO Observar la fecha de caducidad de los reactivos No se recomienda hacer los exámenes en pacientes con sueros lipémicos o hemolizados. Si se da un uso frecuente realizar las calibraciones correspondientes. PRUEBAS QUE SE REALIZAN Perfil Hormonal Química Sanguínea (Perfil Lipídico, Perfil Renal, Perfil Cardiaco, etc.) Proteínas en Suero y en LCR Drogas Terapéuticas (Ácido Valproico) Drogas de Abuso como la Cocaína, TMC. Pruebas Inmunológicas - PCR-C, C3 y C4 complementario, entre otros Se han desarrollado sistemas automatizados para el uso de inmunoensayos por quimioluminiscencia (emisión de luz asociada con la energía) desplazando aquellas metodologías como el Radioinmunoanálisis (RIA), Inmunoradiometría (IRMA) y otras, haciendo hincapié que cada vez son más sencillas las determinaciones

inmunológicas

con

esta tecnología de

vanguardia,

es

un método de lectura que se basa en el principio de emisión luminosa a través de una

reacción

(Enzima-Sustrato).

La

variedad

de pruebas que

conforman

esta metodología permite realizar diferentes determinaciones de casi todas las áreas del Laboratorio Clínico tales como: Endocrinología, Inmunología, Virología, Epidemiología, Hematología, Bioquímica Clínica, etc. Los

laboratorios

de investigación que

han

desarrollado

estos ensayos de

quimioluminiscencia han demostrado la excelente correlación con los ensayos de referencia, como los automatizados y Radioinmunoanálisis, donde encuentran precisión, baja reactividad cruzada, gran sensibilidad analítica sobre el orden de diez veces más sensible que la mayoría de los ensayos de hoy en día. La mayor parte de los ensayos se determinan en aproximadamente 15 a 30 minutos y por su simplicidad

se

ha

convertido

en

una

opción

muy

propia

para

evitar

los riesgos inherentes en la metodología del RIA como lo son la utilización de isótopos radioactivos. Este sistema posee una gran especificidad y sensibilidad ya que con este método radiométrico se puede determinar una reacción antígeno-anticuerpo aunque su concentración sea del orden de los picogramos y con un mínimo de desnaturalización.

Referencias Bibliográficas

 Cubedo, R. Servicio de Oncología Médica, Clínica Universitaria Puerta de Hierro

(MADRID).

Buscador

en

línea:

[http://www.tideca.net/content/sensibilidad-de-las-t%C3%A9cnicasinmunoanal%C3%ADticas-primera-parte]  González, J.M. 1998. Inmunoanalisis con reactivos marcados. Bioquímica clínica. Edit. Mc. Gram-hill interamericana. España. Cap 5:41-42 [Mayo 2015].

Buscador

en

línea:

[http://www.labmedica.es/inmunologia/articles/294740707/analisis-porquimioluminiscencia-identifica-anticuerpos-antifosfolipidos.html]

 Grupo Industrial MexLan S.A de C. V. Ensayos inmunoenzimaticos por Quimioluminiscencia.

Buscador

en

[http://es.pdfcoke.com/doc/96236339/QUIMIOLUMINISCENCIAFUNDAMENTO#pdfcoke]

línea: