Pfge
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- Words: 334
- Pages: 5
PF GE
A
Tem como objectivo ajudar na identificação de bactérias da mesma espécie através da sequenciação do seu DNA.
A 1 -A preparação de DNA adequado para PFGE, começa com a lise das bactérias das quais se quer saber qual a sua estirpe. 2 – Os produtos da lise são incorporadas em blocos de agarose. 3- Após várias lavagens, o DNA dentro do agarose é cortado com enzimas de restrição . 4 – Inicia-se então a eletroforese PFGE.
B
B - Após iniciada a electroforese, o campo eléctrico vai alternar 120° a cada 90 segundos, durante 18 a 24 horas a uma temperatura de 14° C.
Em que situações se aplica
Aplica-se em situações epidemiológicas, de doenças reemergentes, ( ex.: tuberculose) Em que interessa saber se "A estirpe A está relacionada com a estirpe B.“, se foi causada por uma infecção da comunidade ou por um agente patogénico nosocomial.
Assim ao compararmos o resultado da electroforese (fragmentos de DNA), do agente desconhecido com uma estirpe conhecida, podemos saber se são clones de uma mesma estirpe ou não, pois os locci em que as enzimas de restrição iriam actuar e o comprimento destes seriam ou não idênticos.
Estirpes idênticas Estirpe diferente 1 Estirpe diferente 2
Streptococcus pneumoniae
Num estudo feito na Holanda, através do Método de PFGE, numa amostra de 85 culturas puras isoladas, foi possível dividir e identificar com sucesso estes três tipos diferentes de streptococcus. (figura ao lado)
Bibliografia:
•Fey, D.P., Pelsed-Field Gel Electrophoresis: The molecular Epidemiologist Toll. 2004 ; •Denton, H.P,. et al., Partitioned pulsed-field gel electrophoresis – PCR (PPF – PCR): a new method for pulsed-field mapping for STS and microsatellites, Nucleic Acid Reseach, 21/03/1994, Vol. 22, N.º: 9; •Neeleman, C., et al., Amplified fragment lenght polymorphism fingerprinting is an effective tecnique to distinguish Streptococcus pnemoniae from other streptococci and as efficient alternative to Pulsed-field Gel Electrophoresis for molecular typing of pnemococci, Jornal of Clinical Microbiology, Janeiro 2004, Vol. 42, N.º: 1, p. 369 - 371 ; •www.biochem.arizona.edu ; •www.wikipedia.org
A
Tem como objectivo ajudar na identificação de bactérias da mesma espécie através da sequenciação do seu DNA.
A 1 -A preparação de DNA adequado para PFGE, começa com a lise das bactérias das quais se quer saber qual a sua estirpe. 2 – Os produtos da lise são incorporadas em blocos de agarose. 3- Após várias lavagens, o DNA dentro do agarose é cortado com enzimas de restrição . 4 – Inicia-se então a eletroforese PFGE.
B
B - Após iniciada a electroforese, o campo eléctrico vai alternar 120° a cada 90 segundos, durante 18 a 24 horas a uma temperatura de 14° C.
Em que situações se aplica
Aplica-se em situações epidemiológicas, de doenças reemergentes, ( ex.: tuberculose) Em que interessa saber se "A estirpe A está relacionada com a estirpe B.“, se foi causada por uma infecção da comunidade ou por um agente patogénico nosocomial.
Assim ao compararmos o resultado da electroforese (fragmentos de DNA), do agente desconhecido com uma estirpe conhecida, podemos saber se são clones de uma mesma estirpe ou não, pois os locci em que as enzimas de restrição iriam actuar e o comprimento destes seriam ou não idênticos.
Estirpes idênticas Estirpe diferente 1 Estirpe diferente 2
Streptococcus pneumoniae
Num estudo feito na Holanda, através do Método de PFGE, numa amostra de 85 culturas puras isoladas, foi possível dividir e identificar com sucesso estes três tipos diferentes de streptococcus. (figura ao lado)
Bibliografia:
•Fey, D.P., Pelsed-Field Gel Electrophoresis: The molecular Epidemiologist Toll. 2004 ; •Denton, H.P,. et al., Partitioned pulsed-field gel electrophoresis – PCR (PPF – PCR): a new method for pulsed-field mapping for STS and microsatellites, Nucleic Acid Reseach, 21/03/1994, Vol. 22, N.º: 9; •Neeleman, C., et al., Amplified fragment lenght polymorphism fingerprinting is an effective tecnique to distinguish Streptococcus pnemoniae from other streptococci and as efficient alternative to Pulsed-field Gel Electrophoresis for molecular typing of pnemococci, Jornal of Clinical Microbiology, Janeiro 2004, Vol. 42, N.º: 1, p. 369 - 371 ; •www.biochem.arizona.edu ; •www.wikipedia.org
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