Determinación De Carbohidratos Informe.docx

DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS Katheryn Padilla, Luisa Charry, María Espinel [email protected], [email protected] INTRODUCCION Los carbohidratos son alimentos cuya constitución química está formada por una molécula de carbono, hidrógeno y oxígeno. Su función es contribuir en el almacenamiento y la obtención de energía, sobre todo al cerebro y al sistema nervioso. Gracias a una enzima llamada amilasa, la molécula del carbohidrato (también llamado hidrato de carbono) se descompone, lo que permite que el cuerpo la utilice como combustible. (Zamora 2019). Los carbohidratos son compuestos que contienen cantidades grandes de grupos hidroxilo. Los carbohidratos más simples contienen una molécula de aldehído (a estos se los llama polihidroxialdehidos) o una cetona (polihidroxicetonas). López (2017) Todos los carbohidratos pueden clasificarse como monosacáridos, oligosacáridos o polisacáridos. Un oligosacárido está hecho por 2 a 10 unidades de monosacáridos unidas por uniones glucosúricas. Los polisacáridos son mucho más grandes y contienen cientos de unidades de unidades de monosacáridos. La presencia de los grupos hidroxilo permite a los carbohidratos interactuar con el medio acuoso y participar en la formación de uniones de hidrogeno, tanto dentro de sus cadenas como entre cadenas de polisacáridos. Derivados de carbohidratos pueden tener compuestos nitrogenados, fosfatos, y de azufre. Los carbohidratos pueden combinarse con los lípidos para formar glucolípidos o con las proteínas para formar glucoproteínas. (Carbohidratos 2016)

OBJETIVOS Analizar las propiedades características de los carbohidratos, derivados de su estructura, realizando algunas reacciones generales de identificaron. Identificar mediantes reacciones características presentadas en resultados de las pruebas aplicadas como el comportamiento químico de carbohidratos.

las los así los

Reconocer y analizar las reacciones que se llevan a cada una de las pruebas. METODOLOGIA

RESULTADOS # DE MUESTRA Molish

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Benedict

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Fehling

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Barfoed

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Seliwanof

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Bial

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Lugol

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Leche

miel

Rem o lacha

Jugo de Naranja

lactosa

fructos a

sacaros a

papa

Nombre de la muestra problema

ANALISIS DE RESULTADOS

Prueba de Molish. En la disolución de la leche y el jugo de naranja no apareció el precipitado violeta por lo que se deduce que la muestra es negativa. La sacarosa presentó en interface la formación de un anillo de color rojo violeta después de un tiempo. Lo que nos indica que corresponde a un carbohidrato (disacárido). Para la fructosa, se tiene un color azul clarito inicialmente, al realizar el baño caliente, su tono permaneció. Con la miel, se obtuvo una tonalidad café oscura. Para la reacción con la papa, se aplico temperatura con ayuda del baño caliente, provocando así una separación de dos fases, en el fondo tenía un color café claro y la superior de color naranja. En la remolacha salió positiva la prueba de molish ya que apareció en su parte superior un anillo de rojo y violeta; la remolacha contiene un gran porcentaje de carbohidratos, gracias a que esta raíz guarda grandes cantidades de almidón y esta prueba permite detectar la presencia de hidratos de carbono.

figura 1. reacción de molish con galactosa.

Prueba de Benedict. La leche y la remolacha presenta evidencia de precipitado color rojo ladrillo con la reacción de oxidación de Benedict, por lo que se confirma que es un azúcar reductor. La reacción de la prueba de Benedict en el jugo de naranja no presento ningún cambio de color por lo que se deduce que es un azúcar no reductor. Para la fructosa, dio amarillo quemado inicialmente, al calentar no cambio su tonalidad. Con la miel, dio café en su tono inicial, después de calentar, su coloración cambio a un anaranjado. Para la reacción con la papa, se aplico temperatura con ayuda del baño caliente, dando al final una tonalidad azul oscuro. La sacarosa no presenta evidencia de precipitado por lo que se confirma, que no es un azúcar no reductor.

figura 2. reacción con galactosa.

Prueba de Seliwanoff. La disolución con la leche obtuvo un precipitado de color blanco al colocarlo en el baño de agua caliente, no nos dio un color rojo en la reacción lo cual nos indica que la leche no es una cetosa, por lo cual se difiere que es una aldosa. La remolacha en la prueba de seliwanoff dio positiva debido que dio un color rojo al poner en el baño de agua caliente, lo cual indica que es una cetosa. Para la reacción con la papa, se aplico temperatura con ayuda del baño caliente, no ocurrió ningún cambio, su coloración se mantuvo en café claro. Con la miel, inicialmente dio un color naranja claro, luego del baño caliente cambio su tonalidad naranja oscuro. Para la fructosa, inicialmente dio color azul clarito, al pasarla por el baño caliente dio un tono de naranja fuerte. En la sacarosa no es cetosa, pero está formada por una aldosa y una cetosa razón por la cual el resultado también es positivo, Adquiriendo un precipitado de color rojo. La reacción con el jugo de naranja no presento ningún cambio de color, por lo que se dedujo que la solución no es una cetosa porque no arrojo los resultados esperados.

Prueba de Fehling. En la disolución de la leche nos arroja un Precipitado de color rojo (Azúcar reductor) que nos indica una coloración rojo ladrillo a diferente nivel de coloración ya que esto se debe a la concentración de azúcar en cada solución, estableciendo que se produjo la reducción y que la prueba fue positivo. Al someter la solución de la remolacha a la reacción de Fehling, nos proporciona un resultado negativo. No presentó un precipitado rojo ladrillo característico de un azúcar reductor. Con la miel, se formaron dos fases, la superior de tono amarillo verdoso, y la inferior de tono naranja, luego del baño caliente, su tonalidad final fue de naranja oscuro. Para la fructosa, su tono inicial fue azul oscuro, luego de someterla al baño caliente, cambio su tonalidad a un rojo. Al realizar la prueba con el jugo de naranja en el baño de agua calienteal cabo de unos minutos la sustancia se tornó de color naranja, la prueba no dio el resultado esperado siendo una prueba negativo. Para la reacción con la papa, se aplico temperatura con ayuda del baño caliente, dando finalmente un tono azul aguamarina. La sacarosa es un azúcar no reductor, debido a que no se formó un precipitado de color rojo ladrillo, por lo cual la prueba es negativa.

figura 3. reacción con fructosa. figura 4. reacción con glucosa

Prueba de Barfoed. La muestra de leche no cambia su color inicial después de 10 minutos al calentarlo en el baño de agua caliente, por lo que sepuede inferir que es un disacárido. La sacarosa no nos dio el precipitado rojo ladrillo, en un tiempo muy prolongado mayor a 5 minutos, generando una prueba negativa. En la sustancia de la remolacha la prueba nos dio positiva ya que se dio un precipitado de color rojo ladrillo debido a que es un monosacárido. Para la reacción de la papa no se aplico temperatura, dando una coloración azul y en el fondo presentó un tono azul verdoso. Con la miel, con el reactivo inicialmente era verde oscuro, luego de calentar a baño caliente dio una tonalidad verde con un precipitado blanco. Para la fructosa, su tono inicial fue de verde oscuro, luego de calentarla, cambio su color a café. El jugo de naranja al hacer la reacción con el reactivo nos arrojó un color azul claro que al finalizar con el baño de agua caliente se tornó en un azul turquesa, dando como resultado negativo.

En la prueba con la leche nos arroja un resultado negativo por lo cual no hay presencia del furfural producido en medio ácido por las pentosas. La reacción con la solución de la remolacha nos suelta un resultado positivo ya que se dio la aparición de color azul-verdoso al hacer la prueba. La reacción con la sacarosa nos arroja un resultado negativo ya que no se realizó la aparición de precipitado. Para la fructosa, su tono inicial es traslucido, al calentar no ocurrió ningún cambio en su color original. Con la miel, se obtuvo un color inicial café, luego de calentar, dio un naranja claro. Para la reacción con la papa, se aplico temperatura con ayuda del baño caliente, formando así dos fases, la del fondo de tono amarillo pálido y la superior de Tono beige. Al someter el jugo de naranja con el reactivo de bial se obtuvo un color café al cabo de unos minutos en el agua caliente, diferente a los resultados esperados se causó un resultado falso por el exceso de calor.

figura 6. reacción de Bial.

figura 5. reacción con fructosa

Prueba con Lugol.

Prueba con Bial.

En la reacción de la leche y el jugo naranja no arroja cambios en coloración, por lo que se adopta posibilidad de que hay un margen

de su la de

error en la prueba ya que la leche y el jugo de naranja contienen almidón y el Lugol detecta la presencia del mismo. En la reacción de la remolacha la prueba dio positivo debido al cambio de coloración a un rojo. Para la fructosa, se obtiene inicialmente una coloración roja, al calentar la muestra, su tono cambio a naranja. Con la miel, se obtiene una coloración café y al realizar el baño caliente no cambia su tonalidad inicial. Para la reacción de la papa, no se aplico calor, su cambio de tonalidad se dio naturalmente a marrón con un color negro al fondo del tubo de ensayo. En la reacción de la sacarosa la disolución después de varios minutos al fuego no cambia de coloración, obteniendo una prueba negativa.

figura 7. reacción de almidón

DISCUSION En la prueba de Molish arrojan resultados positivos y negativos ya que Según (Ruiz 2016) Los disacáridos son azucares formados por la unión de dos monosacáridos mediante el enlace glucosúrico. Si este enlace se efectúa entre dos carbonos anoméricos, el disacárido no tendrá el potencial aldehído o cetona libre, por lo tanto, no dan positivas aquellas pruebas que involucren la participación de estos

grupos, recibiendo el nombre de azúcar no reductor. Para Harris (2004) la reacción que se dio al formar el anillo morado se basa en la reacción hidrolizante y deshidratante del ácido sulfúrico sobre los hidratos de carbono; en dicha reacción el ácido sulfúrico cataliza la hidrolisis de los enlaces glusidicos de las muestras y la deshidratación a furfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas). La Prueba de Benedict da en algunas reacciones positivo porque Según (Epdfcoke 2016) El fundamento de esta reacción radica en que, en un medio alcalino, el ion cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O). El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que el azúcar en solución forma un anillo de piranósico o furanósico. Una vez que el azúcar está lineal, su grupo aldehído puede reaccionar con el ion cúprico en solución. Al arrojar un resultado negativo se debe a que es un disacárido formado por glucosa y fructosa, que se une por medio de sus carbonos anoméricos, es decir nos poseen sus carbonos anoméricos libres. En la prueba de Seliwanoff las sustancias arrojaron un resultado positivo porque son cetosas y la sacarosa al ser un compuesto formado por la glucosa y la fructosa también da positivo. La cetosa deshidratada reacciona con el resorcinol para generar un color rojizo medio anaranjado. Según (Ipiales 2017) Si el azúcar contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si contienen un grupo aldehído, es una aldosa. Esta prueba está basada

en el hecho de que, al calentar las cetosas son deshidratadas más rápido que las aldosas. Esta prueba es específica para identificar la presencia de cetosas. Las cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas, dando furfurales (aldehído aromático con estructura en anillo). Estos se condensan con el resorcinol produciendo un complejo coloreado. Si el tiempo de calentamiento es demasiado esta reacción pude dar un resultado positivo para cualquier azúcar, ya que debido al excesivo calor las aldosas terminan deshidratándose (Macarulla y Goñi, 2002). En la prueba de Fehling según (Aguilar 2016) dan positivo porque Reacciona principalmente con los aldehídos debido a que tienen un grupo carbonilo más expuesto, que le da el carácter reductor, y existe la presencia del precipitado rojo ladrillo (óxido cuproso) y da negativo porque es un azúcar constituido por una molécula de glucosa y de fructosa, tiene un enlace entre el primer carbono de la glucosa y el segundo carbono de la fructosa, y no queda grupos reductores disponibles. por lo que se intuye, no posee el grupo carbonilo apto y libre, necesario como para reaccionar con el reactivo Fehling.

En la remolacha no presentó un precipitado rojo ladrillo característico de un azúcar reductor, debido a que es un disacárido formado por glucosa y fructosa, que se une por medio de carbonos anoméricos, es decir no poseen carbonos anoméricos libres. Se comprueba de una forma práctica que la sacarosa, es un disacárido que en reacciones de oxidación como la de Fehling, no presenta evidencia de un precipitado de color rojo y no es un azúcar reductor por las razones ya explicadas (Macarulla y Goñi, 2002). En la prueba de Barfoed Según (Murray 2007) La lactosa contiene dos monosacáridos diferentes. Dglucosa y Dgalactosa unidos por un enlace βD. Glicosidico entre el C1 de la galactosa y el C4 de la glucosa. La lactosa es un azúcar reductor que posee el hidroxilo hemiacetilico por lo que permite la reacción. La reacción en la remolacha se procede siempre y cuando se adicione calor proveniente del baño maría en este caso se forma el gluconato de cobre o gluconato cúprico que es una salorgánica, depositándose en el fondo del recipiente el óxido cuproso de color rojizo y la solución sobrante es el agua.Esta prueba plantea la reacción de identificación de monosacáridos, debido a que el reactivo de Barfoed es débilmente ácido y solo puede ser reducido por monosacáridos(Macarulla y Goñi, 2002). La prueba de bial arroja positivo ya que El reactivo de Bial contiene orcinol disuelto en HCl concentrado. El ácido provoca la formación del furfural y el orcinol se condensa con este último para producir cromógenos de color verde-azul. (Pavía 1976)

En la prueba con Lugol, Cuando la reacción da negativason monosacáridos o Disacáridos no reductores. Según (Fernández 2015) el lugolidentifica polisacáridos como los almidones, glucógeno y ciertas dextrinas, formando un complejo de inclusión termolábil que se caracteriza por formar un color azul oscuro a negro.El glucógeno forma una coloración parda rojiza, debido a que es parcialmente hidrolizada. CONCLUSIONES La reacción de Molish es un método cualitativo la cual se utiliza para poderobservar la presencia de carbohidratos en una muestra desconocida y a su vez poder determinar si en la muestra se forma de manera inmediata el precipitado con el óxido cúprico (Cu2O) tendríamos un monosacárido y si se tarda un tiempo más prolongado en formar el precipitado se trataría de un disacárido. Mediante la reacción de Benedict podemos identificar azúcares reductores y comprobar que la reducción que se lleva a cabo es por el efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) en forma de Cu+ y el nuevo ion se observa a modo de precipitado de color rojo anaranjado o amarillo ladrillo que corresponde al óxido cuproso (Cu2O) Se analizó e identificó las características de la reacción de Seliwanoff, ya que esta reacción sólo reconoce cetosas y se produce una coloración dependiendo de la cantidad de concentración del azúcar. Las muestras de glucosa, fructosa, maltosa y galactosa son azúcares reductores, ya que se formó un precipitado de color rojo ladrillo (óxido cuproso) en la muestra de Fehling.

BIBLIOGRAFIA.

Harrys (2004). Metabolismo glusidico I. Principales rutas metabolics y su control. En devlin TM. Bioquímica 4 edición. Editorial reverte (Barcelona, España) Macarulla, J; y Goñi, F; (2002). “Biomoléculas, lecciones de bioquímica estructural”. Barcelona: Reverté S.A. Murray (2017) manual de métodos para determinar carbohidratos. Recuperado de: https://es.slideshare.net/mobile/Leidy Cristancho/manual-de-mtodosgenerales-para-determinacin-decarbohidratos Pavía (1976) reacción de bennedict escuela de bioquímica.recuperado de: https://sites.google.com/site/laboratori osbioquimica/bioquimicai/carbohidratos/reaccion-de-benedict Fernández (2015) reactivo de fehling Universidad CEU. Recuperado de: https://www.google.com/amp/s/blog.uchc eu.es/eponimos-cientificos/reactivo-defehling/amp/ Ipiales (2017) prueba de barfoed, identificación de azúcares Universidad de alcantar . Recuperado de: a bioquimicaidentificacion-de-azucares PDF