Kuliah Ii Teknik Aseptik

Bagian II

Teknik Aseptik

Definisi & Ruang Lingkup „

„

Usaha untuk membebaskan lingkungan dari kontaminasi mikroorganisme Sumber Kontaminan : „ „ „ „ „

Eksplan Mikroba Alat Kultur Lingkungan kerja Kecerobohan Pelaksanaan

Apa Saja yang perlu disterilkan ? „ „ „

Lingkungan Kerja Media dan Alat Kultur Bahan Tanam (Eksplan)

TEKNIK ASEPTIK MACAM BENTUK STERILISASI : PANAS BASAH PANAS KERING KIMIAWI UV

STERILISASI PANAS BASAH …..DENGAN MENGGUNAKAN UAP AIR AUTOCLAVE HAMPIR SEMUA MIKROBA MATI PADA SUHU 121 derajat WAKTU TERGANTUNG VOLUME

Sterilisasi Media dan Alat JENIS

WAKTU

SUHU

20 – 75 ML

15-20 MENIT

121 C

75 – 100 ML

20-25 MENIT

121 C

500 – 5000 ML

25-35 MENIT

121 C

ALAT GELAS/KERTAS

30 MENIT

121 C

STERILISASI PANAS KERING MENGGUNAKAN OVEN

ALAT YANG TAK MUDAH TERBAKAR (BAHAN GELAS) (LAMA PEMANASAN 45 MENIT SUHU 160 C)

STERILISASI MEMAKAI NYALA „

„

ALAT DICELUPKAN KE DALAM ALKOHOL 70 % KEMUDIAN DIBAKAR DIGUNAKAN SELAMA KEGIATAN INOKULASI

BAHAN KIMIA „

„

DIPAKAI UNTUK MENSTERILKAN PERMUKAAN SAJA EX. MATERIAL TANAMAN, INSTRUMEN, TANGAN PEKERJA DAN RUANG ATAU KOTAK TRANSFER BAHAN KIMIA YANG BIASA DIGUNAKAN ADALAH ALKOHOL, KALSIUM HYPOCHLORIDA, NATRIUM HYPOCHLORIDA, HIDROGEN PEROKSIDA, SUBLIMAT DAN CHLOROX

CAHAYA „

„

DIGUNAKAN PADA RUANG DAN KOTAK TRANSFER MEMAKAI SINAR ULTRAVIOLET

Sterilisasi Lingkungan Kerja „

Ruang Penabur „

„

Sebelum dimanfaatkan disterilisasi dengan sinar UV selama 1 – 1,5 jam

Entkas Diberi formalin tablet terlebih dulu sebelum digunakan „ Dilakukan penyemprotan dengan formalin 10 % dan alkoho 70 % (perbandingan : 1 : 1) selama 10 menit „

Sterilisasi Lingkungan Kerja „

R. Laminair air Flow „ „

Disemprot dengan alkohol 70 % Disinari lampu UV selama ½ - 1 jam sebelum penggunaan

Sterilisasi Media dan Alat „

Dissecting set & Glass Ware : Autoclave (121 C) sekitar 20 – 30 menit „ Dissecting set lalu disimpan di oven dengan suhu 106 C selama beberapa menit Dissecting set (pinset & Gunting) „ Dicelupkan dalam alkohol 96% lalu dibakar terlebih dulu sebelum digunakan „

„

Sterilisasi Eksplan „

Sterilisasi Secara Mekanis „ „

„

Digunakan untuk eksplan yang keras Dengan membakar di atas bunsen

Sterilisasi secara Kimiawi „ „

Digunakan untuk eksplan yang lunak (jar. Muda) Ex : daun, petiole, node, dll

Despatch Oven Company --- genus Bacillus

Rentang suhu yang mematikan : 120 C (40’) hingga 140 C (180’)

Saran : 160 C selama 40 – 60 menit

Respon Kontaminan „

„

Umumnya : „ Bakteri : 2 x 24 jam „ Fungi : 1 x 24 jam Kontaminan Internal : hingga 1 bulan

Kontaminan „

Bakteri „ „

„ „

Jenis kontaminan yang sangat umum dijumpai Umumnya terbawa melalui eksplan dan mampu bertahan pada saat sterilisasi (surface sterilization) Umumnya berada di dalam interior jaringan eksplan Spora bakteri mungkin masih bisa survive meski berada di permukaan eksplan

Bakteri dapat muncul setelah proses induksi berjalan lama

Kontaminan „

„

Contoh Bakteri : „ Agrobacterium, Bacillus, Corynebacterium, Enterobacter, Lactobacillus, Pseudomanas, Staphylococcus, and Xanthomonas Karakteristik dalam media : „ Membentuk gumpalan lumpur berwarna di permukaan media, putih, kuning, pink

Kontaminan „

Fungi „ Umumnya terbawa dengan eksplan atau spora yang beterbangan lalu masuk ke dalam media saat inokulasi „ Terbawa dengan eksplan : sebagai patogen „ Penampakan berupa bulubulu halus yang tampak kabur „ Bermacam warna

Jenis Kontaminan „

Initial Contaminant „ „ „ „ „

„

Latent Contamination „ „ „

„

Terjadi karena proses sterilisasi yang kurang optimal Atau karena material kultur yang terlalu kotor Eksplan berasal dari lapang / greenhouse Akan muncul beberapa hari setelah inokulasi Bakteri : gumpalan lumpur ; fungi : bulu halus Umumnya dari golongan bakteri Terdeteksi dalam waktu yang lama Keberadaannya bersifat endogen dalam jaringan eksplan

Introduced Contamination „ Lingkungan kerja yang tidak steril

Laminair Air Flow „

HEPA (High Efficiency Particulate Air) : „

partikel < 0,3 micrometer

Alat Kultur dari Plastik „

„

Ada yang tidak tahan terhadap panas dan tekanan tinggi Bahan Plastik tahan sterilisasi : „ „ „ „

„

Polypropilene Polymetilpentane Polyallomer Polycarbonat (selama 20 menit)

Bahan Plastik yg sama sekali tidak tahan : „ „ „ „

Polystyrene Polyvinyl Chlorida Arcilic Polyetilen