Informe Htq - Hrl.docx

Informe de Práctica

Integrantes:  Anacleto Irene Juan Aldheir.  Arteaga Requejo José Joel.  Davila Santur Jherson.  Díaz Barboza James Eduardo.  Diaz Ygnacio Loida Eunice.  Dominguez Rondoy Patricia del Pilar.  Medina Gonzales Maycol Alexi.  Perales Delgado Mayte Gianella.  Torres del Castillo Nadia.

INFORME DE PRÁCTICA – VISITA AL HOSPITAL REGIONAL LAMBAYEQUE (HRL)

I.

INTRODUCCIÓN

En la Sección de Inmunohistoquímica proporcionamos información complementaria al estudio histopatológico convencional mediante técnicas basadas en el uso de anticuerpos sobre muestras de tejidos o citologías. Los anticuerpos se unen a determinados productos celulares o gérmenes de forma específica gracias a reacciones antígeno-anticuerpo que se manifiestan por señales de color visibles al microscopio. Los datos de alta especificidad que proporciona el análisis inmunohistoquímico son de gran importancia para el diagnóstico final. Hoy en día se utiliza para la valoración de la mayor parte de los factores pronósticos en tumores malignos. Las técnicas más usadas son las de inmunohistoquímica indirecta, con polímeros conjugados con anticuerpos y agentes reveladores, y las técnicas de inmunofluorescencia directa. La mayor parte de los métodos que utilizamos están automatizados mediante sistemas de tinción

robotizados

que

aplican

los

anticuerpos

específicos

previamente seleccionados y el resto de reactivos sobre las distintas preparaciones de los cortes de tejidos. En nuestra visita al HRL hicimos un reconocimiento del laboratorio de inmunohistoquímica, repasamos la parte teórica y finalmente realizamos el procedimiento manual de inmunohistoquímica indirecta y de una tinción directa (por congelación) de Hematoxilina – Eosina.

II.

OBJETIVOS:  Reconocimiento del laboratorio de inmunohistoquímica y su estructura así mismo de los materiales y equipos que son utilizados para los diversos procesos.

 Conocer y aprender la técnica de procesamiento de tejido en fresco y tejido fijado en formalina al 10%.  Conocer el uso de cada equipo para la selección de procesamientos de tejidos.  Conocer e identificar los distintos marcadores y su aplicación dentro del procesamiento inmunohistoquímico. III.

MATERIALES:

1. Muestra Biológica: Hígado de pollo 2. Materiales de Laboratorio:  Guantes.  Marcador para Láminas.  Láminas y laminillas.  Solución Xilol.  Gel de Entellan.  Bisturí.  Pinza de disección con punta curva fina.  Criostato.  Pincel.  Plumón hidrofóbico.  Equipo de recuperación antigénica.  Hematoxilina.  Eosina.

IV.

PROCEDIMIENTO: A. TINCIÓN DIRECTA (H&E POR CONGELACIÓN): 1. Selección de la muestra constituido por un cilindro de tejido de 0.5 cm de diámetro y 0.5 a 1 cm de longitud.

2. Una vez obtenida la muestra colocar en el pin y para la fijación colocamos el gel congelante e inmediatamente llevamos al criostato por 10 minutos.

3. Pasado los 10 minutos aseguramos y fijamos las cuchillas para proceder al desbastado que realiza a 20 micras y luego se realiza cuidadosamente el corte a 4 micras.

4. Una vez realizado el corte retiramos el tejido con cuidado con ayuda del pincel y luego colocamos en una lámina portaobjetos.

5. Una vez fijado en la lámina se lleva a la batería de tinción de H&E a. Hematoxilina 1munuto. b. Sumergir en agua corriente 30 veces. c. Eosina 1 minuto. d. Sumergir en agua corriente 30 veces. e. Sumergir 30 veces en alcohol (96°) I. f. Sumergir 30 veces en alcohol (96°) II. g. Sumergir 30 veces en alcohol (96°) III.

h. Colocar por 10 minutos en la estufa.

6. Una vez pasado los 10 minutos en la estufa procedemos a realizar el montaje de la lámina, colocando entellan en la laminilla y una gota de xilol en la lámina portaobjetos, luego se hace presión para eliminar las burbujas que se pueden encontrar.

7. se realiza la observación de nuestras láminas.

B. Procedimiento para recuperación antigénica: 1. Realizar el corte histológico y colocar en el corte en una lámina. 2. Colocar los portaobjetos con el corte en el racks para recuperación antigénica.

3. Verificar el panel de temperatura y tiempos del equipo.

4. Aperturar el equipo. Dentro del equipo se observa dos contenedores para la solución recuperadora, en donde se va a colocada el racks, colocar el racks y cerrar el equipo.

Solución recuperadora de antígenos

5. En el monitor el equipo verificar el grafico de temperatura.

6. Cuando la temperatura haya descendió se podrá aperturar el quipo para extraer el racks. Una vez retirado el racks, éste se pondrá en un contenedor lleno de buffer.

Procedimiento para coloración IHQ: 1. Delimitar con plumón hidrofóbico el corte para contener los reactivos sobre el corte del tejido. 2. Colocar las láminas en una cámara húmeda para realizar la coloración. 3. Lavado con buffer por 2 minutos 30 segundos. 4. Agregar Peroxidasa por 5 minutos. 5. Lavado con buffer por 5 minutos 6. Agregar el Anticuerpo especificado en la lámina por 20 minutos 7. Dos lavados con buffer por 2 minutos y 30 segundos 8. Agregar el Linker por 10 minutos. Solo cuando la marca especifica con que anticuerpo se añade. 9. Dos lavados con buffer por 2 minutos y 30 segundos. 10. Agregar el HRP por 20 minutos. 11. Lavado con buffer por 2 minutos y 30 segundos. 12. Lavado con buffer por 7 minutos. 13. Agregar el Cromógeno por 10 minutos. 14. Lavado con buffer 15. Sumergir en Hematoxilina por 1 minutos para dar contrate. 16. Sumergir 30 veces en agua corriente. 17. Colocar por 10 minutos en la estufa. 18. Montaje.

V.

CONCLUCIONES:

 Logramos

reconocer cada área del laboratorio de inmunohistoquímica, así como los distintos materiales y equipos que son utilizados para los procesamientos de los tejidos.

 Aprendimos y pusimos en práctica cada una de las técnicas de procesamiento de tejidos de tal forma que fortalecimos nuestros conocimientos teóricos a través de la práctica.

 Aprendimos la importancia de realizar un buen procesamiento así como de los cuidados que debemos tener ya que un simple descuido puede terminar con todo nuestro procesamiento.