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RESUMEN

En esta práctica se realizó la Prueba de Coombs Directo e Indirecto, en la cual la Prueba de Coombs Directo consiste en determinar la sensibilización de los hematíes por anticuerpos no aglutinantes (IgG) o fracciones del complemento, específicamente C3d, por lo cual detecta la presencia de anticuerpos sobre la superficie eritrocitaria a través de la antiglobulina de Coombs. La Prueba de Coombs Indirecta permite detectar glóbulos rojos sensibilizados. El suero en estudio es incubado con los glóbulos rojos por el tiempo adecuado, luego se lavan para eliminar anticuerpos y otras inmunoglobulinas que no se han fijado en el eritrocito. Asi mismo los objetivos planteados son: Determinar la existencia de glóbulos rojos recubiertos con inmunoglobulinas y/o complemento in vivo, en particular IgG y C3d (Coombs directo), Determinar la presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor (Coombs indirecto) y Determinar la compatibilidad entre la sangre del donante y el receptor a transfundir (Coombs cruzado).

MARCO TEORICO FUNDAMENTO La prueba de Coombs (también conocida como prueba de antiglobulina) es un examen de sangre que se usa en inmunología y hematología. Este análisis puede detectar la presencia de anticuerpos en suero que reaccionan con antígenos en la superficie de los glóbulos rojos. Hay dos tipos distintos de la prueba de Coombs: el directo y el indirecto. La prueba de Coombs directa detecta anticuerpos ya unidos a la superficie de los glóbulos rojos, y la prueba de Coombs indirecta detecta anticuerpos libres que pueden reaccionar in vitro con glóbulos rojos que tienen antígenos específicos.(1) Forma en que se realiza la prueba de Coombs La sangre se extrae típicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano. El sitio se limpia con un desinfectante (antiséptico). El médico envuelve una banda elástica alrededor de la parte superior del brazo con el fin de aplicar presión en el área y hacer que la vena se llene de sangre. Luego, el médico introduce suavemente una aguja en la vena y recoge la sangre en un frasco hermético o en un tubo pegado a la aguja. La banda elástica se retira del brazo. Una vez que se ha recogido la muestra de sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de punción para detener cualquier sangrado. En bebés o en niños pequeños, se puede utilizar un instrumento puntiagudo llamado lanceta para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en un tubo pequeño de vidrio llamado pipeta, en un portaobjetos o en una tira reactiva. Finalmente, se puede colocar un vendaje sobre el área si hay algún sangrado.(2) Resultados normales Un resultado normal se conoce como un resultado negativo. Esto significa que no hubo agrupación de células y que usted no tiene anticuerpos para los glóbulos rojos. Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Algunos laboratorios utilizan diferentes mediciones o analizan muestras diferentes. Hable con su proveedor acerca del significado de los resultados específicos de su examen. SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES Una prueba de Coombs directa anormal (positiva) significa que usted tiene anticuerpos que actúan contra sus glóbulos rojos, lo cual puede deberse a:  

Anemia hemolítica autoinmune Leucemia linfocítica crónica u otro trastorno similar

     

Enfermedad en la sangre en recién nacidos llamada eritroblastosis fetal (también conocida como enfermedad hemolítica del recién nacido) Mononucleosis infecciosa Infección por micoplasma Sífilis Lupus eritematoso sistémico Reacción a una transfusión, como la ocasionada por unidades de sangre cotejadas de manera impropia

El resultado de esta prueba también puede ser anormal sin una causa clara, especialmente entre las personas mayores. Una prueba de Coombs indirecta anormal (positiva) significa que usted tiene anticuerpos que actuarán contra los glóbulos rojos que el cuerpo interpreta como extraños. Esto puede sugerir la presencia de:  

Eritroblastosis fetal Incompatibilidad sanguínea (cuando se utiliza en bancos de sangre)

RIESGOS Hay poco riesgo al extraer sangre. Las venas y las arterias varían de tamaño de una persona a otra y de un lado del cuerpo a otro. Extraer una muestra de sangre de algunas personas puede ser más difícil que de otras. (3) PRUEBA DE COOMBS DIRECTA: Esta prueba se usa para determinar si hay complemento o anticuerpos ya fijados a glóbulos rojos tomados directamente del paciente. Estas células, alcanzadas de una venopunción, se lavan y se incuban con reactivo de Coombs. Los anticuerpos del reactivo se unen a IgG, IgM, o complemento que está unido a la superficie de los glóbulos rojos. Se emplea la antiglobulina para la detección de anticuerpos incompletos antieritrocitarios, que ya se encuentran unidos "in vivo" a los hematíes. Estos se aglutinan, produciendo grupos de células que indican un resultado positivo.       

Trastornos asociados con un resultado positivo Anemias hemolíticas inducidas por fármacos Anemias hemolíticas inmunitarias Reacciones a transfusión Enfermedad hemolítica del recién nacido Trastornos linfoproliferativos, como leucemia linfocítica crónica Mononucleosis infecciosa ANEMIA HEMOLÍTICA AUTOINMUNE

Los anticuerpos del paciente que reaccionan con sus propios glóbulos rojos provocan destrucción eritrocitaria in vivo. REACCIONES TRANSFUSIONALES HEMOLÍTICAS Los anticuerpos del paciente que reaccionan con los glóbulos rojos transfundidos, provocan destrucción eritrocitaria in vivo. ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RECIÉN NACIDO Los anticuerpos IgG de la madre que atraviesan la placenta, provocan destrucción in vivo de los glóbulos rojos fetales. (4) PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA: Se detectan anticuerpos específicos de ciertos antígenos que no necesariamente están presentados en los glóbulos rojos del paciente, pero puede estar en glóbulos rojos de otras personas. Si se mezcla suero tomado de un paciente que contiene estos anticuerpos con glóbulos rojos que sí muestran estos antígenos específicos, los glóbulos rojos se van a cubrir con anticuerpo. Una vez cubiertas, las células se van a aglutinar después de una exposición al reactivo de Coombs. Por ejemplo, en el diagnóstico de eritroblastosis fetal, el suero tomado de la madre Rh- no reacciona con su propia sangre, sino con la de su feto Rh+. Se emplea la antiglobulina para la detección de anticuerpos incompletos antieritrocitarios no unidos "in vivo" a los hematíes. Por ello se realiza en dos fases, en la primera se enfrentan los anticuerpos frente a hematíes de antigeinicidad conocida para provocar su unión, y posteriormente se añade al antiglobulina hemaglutinante. (4) Resultados Falsos Positivos   

Presencia de polvo o partículas en los tubos. Contaminación de un tubo a otro. Centrifugación muy rápida o muy prolongada.

Resultados Falsos Negativos     

Lavado inadecuado de los glóbulos rojos. Tubos sucios. Presencia de coágulos en el suero o las células. Solución salina de pH incorrecto. Centrifugación a velocidad inapropiada.

RESULTADOS COOMBS DIRECTO 

Se realiza el lavado de los glóbulos rojos para el Grupo Sanguíneo “A” y “B” y para el Grupo Sanguíneo “O”, este procedimiento se repetirá por 3 veces

Extraemos 50 ul. de sangre de ambos tubos y lo colocamos en dos tubos de ensayo.

Luego agregamos a los tubos ¾ partes de solución salina fisiológica.

Centrifugamos a 2500 RPM por 1 minuto.

Retiramos los tubos de la centrifuga y desechamos la parte liquida.

Preparamos una suspensión al 5% de glóbulos rojos lavados tanto para el Grupo Sanguíneo “A” y para el Grupo Sanguíneo “O” en estudio (50 ul. De Glóbulos Rojos Lavados + 950 ul. De Cloruro de Sodio).

Una vez obtenidos la suspensión de Glóbulos Rojos al 5% del Grupo Sanguíneo “A” y “O”, en dos tubos respectivamente rotulados se le agrega 100 ul de Glóbulos Rojos al 5% a cada uno de ellos y luego le agregamos 100 ul del reactivo de Coombs.

Centrifugamos a 2500 RPM por 1 minuto.

Retiramos los tubos de la centrifuga y se realiza la lectura.

• En el tubo con el Grupo Sanguíneo “O”, se le agrega 100 ul de células control para corroborar si la prueba esta validada. Centrifugamos el tubo del Grupo Sanguíneo “O” con las células control y al Grupo Sanguíneo “A” a 2500 RPM por 1 minuto y leemos el resultado

RESULTADOS DE COOMBS INDIRECTO • Teniendo ya estos tubos a cada uno se le debe agregar 100 ul de Glóbulos Rojos lavados al 5 % más 100 ul de la muestra (suero o plasma) de acuerdo a su grupo sanguíneo.

Llevar los tubos a centrifugar a 2500 RPM por 1 minuto y leemos.



Se obtuvo como resultado NEGATIVO de estos tres tubos, para lo cual agregamos 100 ul de albumina al 22 %.

Luego centrifugamos los tubos a 2500 RPM por 1 minuto y leemos

Al realizar la respectiva lectura nos dio como resultado NEGATIVO el cual nos dio a entender que no hubo presencia de anticuerpos fríos

Después estos tubos son llevados a incubar por 15 minutos a 37 C°, se realiza este procedimiento para ver la presencia de Anticuerpos calientes (IgM).

Al retirar los tubos de la incubadora, estos se agitan, pudiendo notar que no se produjo ninguna aglutinación, entonces decimos que el resultado es NEGATIVO

Estos tubos se los lleva a centrifugar a 2500 RPM por 1 minuto

• Después de la centrifugación estos tubos serán lavados por tres veces donde nuevamente se llevara a centrifugar por las mismas revoluciones que ya se mencionaron anteriormente.

Obtuvimos como resultado NEGATIVO, para lo cual agregamos 100 ul de Reactivo de Coombs.



Luego centrifugamos a 2500 RPM por 1 minutos y leemos, en esta prueba se obtuvo como resultado NEGATIVO

Para corroborar que la prueba estuvo correctamente realizada se le agrega a los tres tubos células control, se los lleva a centrifugar y se realiza la lectura. Finalmente dio como resultado POSITIVO el cual significa que el procedimiento realizado es correcto

REPORTE DE RESULTADOS

FECHA

16/11/ 18 16/11/ 18 16/11/ 18

HORA

5:00 pm 5:00 pm 5:00 pm

NOMBRES Y APELLIDOS

CÓDIGO

0001

FASE Séri térmi ca ca  

RESULTADO

Coombs 

Negativo

0002







Negativo

0003







negativo

DISCUSION Las pruebas de Coombs nos permite detectar anticuerpos y/o complemento unidos al hematíe, como tal es el caso para la Prueba de Coombs Directo, mientras que para la Prueba de Coombs Indirecto nos permite detectar la presencia de anticuerpos irregulares presentes en el plasma o suero de la muestra a estudiar. Es necesario saber en qué enfermedades suele darse un resultado positivo para ambas pruebas. Sabiendo el fundamento de que cada prueba, como grupo, hemos procedido a la realización de todo el procedimiento, para que finalmente los resultados nos dieran negativos. Teniendo ya estos resultados y sabiendo el fundamento de las pruebas empezamos a discutir los resultados y del porque nos había salido negativo. En primer lugar estos resultados nos salieron negativos, debido a que no existe la presencia de anticuerpos y/o complemento, no presenta ninguna reacción de Ag – Ac, lo cual se evidenciará mediante las aglutinaciones y en segundo lugar podemos decir que las muestras eran de pacientes que no presentaban ninguna enfermedad y al no existir alguna patología no provocará ninguna reacción. Es de esta manera que como grupo de trabajo damos nuestras propias discusiones en base a estas pruebas, teniendo en cuenta todos los conocimientos necesarios para poder realizar un buen procedimiento y a su vez dar buenos resultados. CONCLUSIONES  Determinamos la posible existencia de glóbulos rojos recubiertos con inmunoglobulinas y/o complemento, en particular IgG y C3d – Prueba de Coombs Directo.  Determinamos la posible presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor – Prueba de Coombs Indirecto.

BIBLIOGRAFÍA 1 BUENAS TAREAS. [Online]. [cited 2018 noviembre 30. Available . from: https://www.buenastareas.com/ensayos/Test-DeCoombs/46392696.html. 2 clinicadam. [Online]. [cited 2018 diciembre 01. Available from: . https://www.clinicadam.com/salud/5/003344.html. 3 [Online]. [cited 2018 noviembre 30. Available from: . http://kelseyseyboldse3.adam.com/content.aspx?productId=118& pid=5&gid=003344. 4 [Online]. [cited 2018 diciembre 1. Available from: . https://es.pdfcoke.com/document/155234118/PRUEBA-DECOOMBS-Directa-e-Indirecta-doc.