Expocision Laboratorio Bioquimica.docx

REACCIONES DE CARACTERIZACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS Se determinará la presencia de proteínas en muestras biológicas, determinados aminoácidos generalmente triptófano y tirosina. REACCION DE NIHIDRINA: Reacciona con el grupo amino de aminoácidos libres y los grupos amino de las proteínas para generar un compuesto azul-violeta. La prolina y la hidroxiprolina también reacciona con nihidrina, pero en este caso no da un color azul-violeta si no amarillo. 

Procedimiento:

1ml de las proteínas preparadas

Baño maría durante 10 min   

1ml glicina 1ml metionina 1ml prolina

REACCION DE BIURET Contiene enlaces peptídicos tales como el biuret, se añade sulfato cúprico se forman sales complejas de color violeta. Cuando se calienta la urea se libera amoniaco, la reacción es cuantitativa y permite valorar la presencia de proteínas con bastante exactitud e independientemente del tipo de proteína.

3 gotas de sulfato cúprico al 1%

1ml solución de proteína

2ml de hidróxido de sodio al 30% 1ml de glicina Indica la presencia de enlaces peptídicos

AMINOACIDOS AZUFRADOS EN LAS PROTEINAS Se realiza mediante un hidrolisis de la proteína de un medio alcalino, que conlleva a la destrucción de los aminoácidos sulfurados liberando el azufre precipitando el sulfuro de plomo de color negro.

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Proteína y glicina Metionina Cisteína y cistina

Acetato de plomo al 5%

1ml de hidróxido de sodio al 30%

Baño maría 10 min

PREPARACION DE LAS MUESTRAS 1

Calentar baño maría con agua del grifo

Leche de soya

500ml

Diluirla en agua

Clara de huevo Vaso de precipitado 250ml Agua destilada

REACCION XANTOPROTEICA

1ml de la Solución de la proteína

Ácido nítrico concentrado -

Glicina fenilamina Tirosina triptófano

1 ml

La solución o el precipitado se tiñen de amarillo

Baño maría Calentar durante 5 min

REACCION DE MILLON

Solución de proteína 1ml

Nitrito sódico

Reactivo de millón -

Glicina Tirosina triptófan o

O,5ml

0.5 ml

Baño maría

Tirosina y proteínas

5 min

Color rojo

RECONOCIMIENTO DE ARGININA

Hidróxido de sodio 30% 0.1 ml

-

Proteínas Arginina glicina Naftol 0.05 0.3 ml

Urea 40% 0.3 ml Hipodromito sódico 1N 2 gotas Baño de hielo

RECONOCIMIENTO DE TRIPTOFANO A. Reacción de Hopkins - cole

-

Glicina Triptófano Metionina Glicina 1ml

Hopkins – cole 1ml

Proteína 1ml

Ácido sulfúrico concentrado 1.5 ml

B. Reacción de ácido glioxilico

-

Arginina Glicina Metionina Triptófano 1ml

Proteína 1ml

Ácido acético glacial 1ml

Ácido sulfúrico concentrado 1ml hasta formar 2 fases