Brucelosis Bovina

MAESTRÍA: MEDICINA PREVENTIVA CONTROL DE ENFERMEDADES

BRUCELOSIS: EPIDEMIOLOGÍA, SALUD PÚBLICA NUEVAS TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS

ALFREDO J. SÁNCHEZ-VILLALOBOS Profesor titular- FCV LUZ [email protected] 0416 2682253 MARZO, 2009

BRUCE DESCRIBE LA ENFERMEDAD EN EL HUMANO EN 1884, EN MALTA. ZAMMIT AISLÓ B. melitensis DE LECHE DE CABRAS ABORTADAS EN 1897. BANG AISLÓ B. abortus DE UNA VACA ESE MISMO AÑO. WRIGHT Y SMITH PROPONEN EL TEST DE SEROAGLUTINACIÓN (1897). BUCK EN 1930, REPORTÓ RESULTADOS MUY PROMISORIOS CON UNA VACUNA DENOMINADA BACTERIUM ABORTUS STRAIN 19.

¿PORQUÉ VAMOS A DISCUTIR SOBRE UNA ENFERMEDAD PREHISTÓRICA?

GOAT MILKING STREET MALTASE, 1810

UN PRODUCTOR ÉLITE DEL MUNICIPIO MIRANDA PLANTEA SU INCONFORMDAD RESPECTO A LOS RESULTADOS DE UNA PRUEBA DIAGNÓSTICA PARA BRUCELOSIS QUE SEÑALA 4,12% DE POSITIVIDAD EN SU REBAÑO. INFIERE QUE UN NUEVO ANÁLISIS SÓLO IDENTIFICA 4 VACAS POSITIVAS Y NO 35 COMO SE LE IMPUTAN. LOS ANTECEDENTES REFIEREN POSITIVIDAD DEL 1% ANUAL A LA PRUEBA OFICIAL E ÍNDICES REPRODUCTIVOS ACEPTABLES. LAS PÉRDIDAS POR ABORTO NO SUPERAN EL 5% ANUAL.

ESPECIE

HOSPEDADORES CABALLOS, BÚFALOS, AN. SILVESTRES

abortus (8)

BOVINOS

suis (5)

PORCINOS

melitensis (3)

CAPRINOS / OVINOS

canis (1)

CANINOS

ovis (1)

OVINOS

neotomae (1)

Rata del desierto

maris (2)

Mamíferos marinos

?

ABORTOS ORQUITIS EPIDIDIMITIS

INFERTILIDAD SIGNOS CLÍNICOS CRÍAS DÉBILES

LESIONES ARTICULARES RETENCIÓN DE M. FETALES

GRAN IMPACTO PRODUCTIVO Y ECONÓMICO

REPERCUSIÓN SOBRE LA SALUD PÚBLICA DISMINUCIÓN EN LA PRODUCCIÓN DE CARNE

DISMINUCIÓN EN LA PRODUCCIÓN DE LECHE

INCREMENTO DE GASTOS PARA EL CONTROL DE LA ENFERMEDAD

PÉRDIDAS POR BRUCELOSIS

DISMINUCIÓN EN EL NÚMERO DE NACIMIENTOS

66 MILLONES € / AÑO

DISMINUCIÓN EN EL INVENTARIO DE VIENTRES

PÉRDIDAS POR EL VALOR GENÉTICO PÉRDIDA DE LOS MERCADOS INTERNACIONALES

RESERVORIO SALVAJE LIEBRE, RATA, JABALÍ

CONTACTO DIRECTO DE PIEL Y MUCOSAS CON SECRECIONES DE ABORTOS U OTRAS

RESERVORIO DOMESTICO

VÍA

DIGESTIVA

VERDURAS, AGUA

VACA, CABRA, CERDA, OVEJA, BUFALA

CONTACTO INDIRECTO

HOMBRE

CONTAMINACIÓN DEL AMBIENTE

VÍA INHALATORIA POLVO, AEROSOLES

LECHE Y DERIVADOS

INGESTIÓN

CONSUMO ALIMENTOS MANEJO ANIMALES MANEJO LABORATORIO TRANSFUSIÓN MÉDULA

Ig G

SRE Ig M

LINFOCITOS T : CITOQUINAS : MACRÓFAGOS

INMUNIDAD NUTRICIÓN

ABSORCIÓN INTESTINAL

NEUROBRUCELOSIS

ESCALOFRIOS

CEFALEAS

OSTEOARTICULARES CARDIOVASCULARES

HIPOREXIA ASTRALGIAS

HEMATOLÓGICAS DIAFORESIS MIALGIAS

GENITOURINARIAS

FIEBRE

MÉTODOS DIAGNÓSTICOS DIRECTOS: A- AISLAMIENTOS: CULTIVOS BACTERIOLÓGICOS CULTIVOS CELULARES B- DETECCIÓN DE ANTÍGENOS: INMUNOHISTOQUÍMICA INMUNOFLUORESCENCIA ELISA DE CAPTURA OTROS C- DETECCIÓN DE MATERIAL GENÓMICO: PCR

INDIRECTOS: DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ESPECÍFICOS

PRUEBAS USADAS COMO TAMIZ ANTÍGENO BUFERADO EN PLACA

@

ROSA DE BENGALA (CARDTEST) RAP AUTOMATIZADA PRUEBA RÁPIDA EN PLACA

FUENTE: OIE, 2006

PRUEBAS CONFIRMATORIAS LENTA EN TUBO 2 MERCAPTO ETANOL FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

?

ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA) FLUORESCENCIA POLARIZADA

@

REGLAMENTO PARA EL CONTROL Y ERRADICACIÓN DE BRUCELOSIS (SEPTIEMBRE 2003)

EL DIAGNÓSTICO OFICIAL SE BASA EN LA DEMOSTRACIÓN DE ANTICUERPOS MEDIANTE LA PRUEBA DE CARD TEST (ROSA DE BENGALA) Y POSTERIOR CONFIRMACIÓN MEDIANTE OTROS ANÁLISIS.

DEBEN INCLUIRSE TODAS LAS HEMBRAS MAYORES DE 20 MESES DE EDAD Y MACHOS REPRODUCTORES DESDE LOS SEIS MESES.

EL DIAGNÓSTICO DEBERÁ EJECUTARSE EN UNA UNIDAD DE TIEMPO

BRUCELOSIS ELISA-C / FPA CARDTEST

ENFERMO

+

1

1

2

-

7

387

394

8

Sn = 12,5%

SANO

388

396

VP+ = 50,0% J DE YOUDEN = 0,12

Es = 99,7%

VP- = 98,2% PREV. Ap = 0,51%

PREV. Ve = 2,02%

BRUCELOSIS

FLUORESCENCIA POLARIZADA

FLUORESCENCIA POLARIZADA FUNDAMENTO

MUESTRA NEGATIVA

LUZ POLARIZADA

CONJUGADO OPS

LUZ DESPOLARIZADA

ANTICUERPO BRUCELLA

INMUNOCOMPLEJO

FLUORESCENCIA POLARIZADA FUNDAMENTO

MUESTRA POSITIVA

DESPOLARIZACIÓN INCOMPLETA

LUZ POLARIZADA

CONJUGADO OPS

ANTICUERPO BRUCELLA

INMUNOCOMPLEJO

EL DIAGNÓSTICO PROVIENE DE INTERPRETACIÓN DE LOS DATOS DEL LABORATORIO Y DEL ANÁLISIS EPIDEMIOLÓGICO DE LOS ASPECTOS QUE ENVUELVEN LA PROBLEMÁTICA. EN ESTA ENFERMEDAD ES DE VITAL IMPORTANCIA EL CONOCIMIENTO EPIDEMIOLÓGICO DE LA MISMA POR PARTE DEL MÉDICO VETERINARIO ASESOR Y DEL LABORATORIO QUE PROCESA LAS MUESTRAS. EL VETERINARIO ASESOR DEBE CONOCER LOS PUNTOS CRÍTICOS DE LA CADENA EPIDEMIOLÓGICA PARA PLANTEAR UNA ESTRATEGIA DESDE DONDE ATACAR PARA PODER INTERRUMPIR EL CONTAGIO DE LOS ANIMALES EN LAS FUENTES DE INFECCIÓN. ES OBLIGATORIO E IMPERIOSO QUE AMBOS ENTIENDAN Y CONOZCAN LA UTILIDAD Y LIMITACIONES DE CADA ENSAYO (CT, BPA, PLT, 2 ME, ELISA I FPA, ELISA DE COMPETENCIA,) A LOS EFECTOS DE INDICAR LA PRUEBA QUE CORRESPONDA DE ACUERDO A LA SITUACIÓN EPIDEMIOLÓGICA PLANTEADA O LA URGENCIA EN LA OBTENCIÓN DE LOS RESULTADOS.

FLUORESCENCIA POLARIZADA PROCEDIMIENTO

LECTURA 2

LECTURA 1

MUESTRA + CONJUGADO

MUESTRA O BLANCO

LUZ POLARIZADA

CONJUGADO OPS

LUZ DESPOLARIZADA

LUZ POLARIZADA

ANTICUERPO BRUCELLA

LUZ PARCIALMENTE POLARIZADA

INMUNOCOMPLEJO

LABORATORIO DE MORFOFISIOLOGÍA PVU

COMPONENTES DEL KIT PARA FPA

SENTRY 100: EQUIPO PORTÁTIL PARA FPA

BRUCELOSIS

FLUORESCENCIA POLARIZADA

VALIDACIÓN Y PUESTA EN PRÁCTICA

FPA

ELISA-C

COMPARACIÓN FDA - ELISA-C

J DE YOUDEN = 0,986

POSITIVOS NEGATIVOS FPA

ELISA-C

VENTAJAS COMPARATIVAS F P A vs. ELISA-C

RÁPIDO La prueba puede completarse en 5 minutos y produce resultados cuali cuantitativos. No requiere pasos de lavados o tiempos prolongados de incubación.

PRECISO La sensibilidad y especificidad son equivalentes o superiores a ELISA competitivo y Fijación de Complemento. El test permite distinguir entre animales vacunados y enfermos.

FÁCIL Y EFICAZ La prueba puede ser realizada a campo o en el laboratorio y requiere de pocos reactivos e insumos.

CONFIABLE La técnica está recomendada por la OIE (Organización Mundial de Sanidad Animal) desde el año 2004. En el 2008, es incorporada como prueba de referencia en el diagnóstico de brucelosis.

**EXCELENTE RELACIÓN COSTO BENEFICIO**

HACIA DÓNDE DEBEMOS IR:

ES IMPORTANTE AVANZAR EN LA IMPLEMENTACIÓN DE ENSAYOS DE LECTURA EN EQUIPOS: ELISA, FPA. EXISTEN VARIAS RAZONES: 1- ESTANDARIZACIÓN DE RESULTADOS. 2- UTILIZACIÓN CONTINUA DE CONTROLES POSITIVOS Y NEGATIVOS 3- REGISTRO ESCRITO Y ELECTRÓNICOS DE LOS ENSAYOS. 4- EMISIÓN DE REPORTE EPIDEMIOLÓGICOS EN FORMA RÁPIDA. 5- DISMINUCIÓN DE LA CANTIDAD DE PUNTOS CRÍTICOS. 6- DISMINUCIÓN DE REACTIVOS Y SOLUCIONES. 7- DISMINUCIÓN DE ERRORES (PIPETEADAS). 8- ESTABLECIMIENTO DE UMBRALES DIAGNÓSTICOS PROPIOS.

CONCLUSIONES LA BRUCELOSIS REPRESENTA AÚN DESARROLLO DE NUESTRA GANADERÍA.

UNA

GRAN

LIMITANTE

AL

FLUORESCENCIA POLARIZADA POSEE UNA CAPACIDAD DIAGNÓSTICA SIMILAR O SUPERIOR A ELISA-c CON LA VENTAJA DE SER MÁS RÁPIDA, FÁCIL, CONFIABLE Y DE MEJOR RELACIÓN COSTO BENEFICIO. ES NECESARIO REALIZAR UN LLAMADO A LA REVISIÓN ACTUALIZACIÓN DEL PROGRAMA OFICIAL DE CONTROL ERRADICACIÓN DE BRUCELOSIS EN NUESTRO PAÍS.

Y Y

LA UTILIZACIÓN DEL MÉTODO FP ES UNA EXCELENTE ELECCIÓN, YA DISPONIBLE EN VENEZUELA. SE DEBE TRABAJAR EN ADAPTARLA PARA UTILIZARLA COMO PRUEBA DE BARRIDO Y DE ESTA FORMA OPTIMIZAR LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PARA BRUCELA.