Bagan Alir Ot.docx

PROSEDUR PENGUJIAN OBAT TRADISIONAL (61/MI/16 – 66/MI/16) 1. Uji Angka Kapang Khamir pada Obat Tradisional

Homogenisasi Sampel 90 ml LDF pH 7.2 / Letheen Broth

10 ml / 10 g sampel

Uji blanko

1 ml

10-1

1 ml

1 ml

Uji sterilisasi pengencer

9 ml LDF pH 7,2 / Letheen Broth

1 ml

10-210-310-4

Uji sterilisasi media

1 ml pengencer

Lempeng media tanpa suspensi Media : PDA+KL

semua cawan di inkubasi pada 20250C

Amati hari ke-3

Amati hari ke-4

Amati hari ke-5

Koloni kapang : seperti kapas atau bulat dengan berbagai warna dan permukaan kasar. Koloni Khamir : memiliki bentuk bulat kecil, putih, hamper menyerupai bakteri

Hitung jumlah koloni yang teramati

2. Uji Angka Lempeng Total pada Obat Tradisional Sampel Dipipet 10 mL

10-1

1 ml

1 ml

1 ml

10-2

duplo

Ditambah 90 mL LDF pH 7,2 atau Letheen Broth, dihomogenkan

Erlenmeyer 200mL

10-3

Dipipet 1ml

10-4

Dipipet 1ml

Berisi 9 ml LDF pH 7,2 atau Letheen Broth

Dipipet 1ml

+ Kontrol (+) dan (-)

Ditambahkan 15-20 ml media SCDA/TSA + 1% TTC (suhu ± 45°C)

Digoyang dan diputar hingga suspensi tersebar

Inkubasi suhu 30-35°C Selama 48-72 jam (posisi dibalik)

3. Uji Salmonella SPP. dalam Obat Tradisional Bentuk Cair

Homogenisasi Sampel

10mL Cuplikan

90mL Lactose Broth

Inkubasi 30°-37°C, 2-5 jam

10mL

100mL TBBGB

Pengkayaan Selektif

Inkubasi 42°-43°C, 18-24 jam

INOKULASI Inkubasi 35°-37°C, 2448 jam posisi dibalik

Isolasi XLD

BGA

>2 koloni spesifik Inkubasi dengan suhu 35°-37°C selama 24 jam

Konfirmasi

NA / TSA

KONFIRMASI BIO KIMIA

INTERPRETASI HASIL

HASIL POSITIF

a. Konvensional 1. TSIA

Warna merah di permukaan dan kuning di dasar tabung dengan/tanpa pembentukan H2S

2. Pewarnaan Gram

Gram negative berbentuk batang di bawah mikroskop

Dinyatakan positif bila semua hasil konfirmai dengan uji biokimia konvensional menunjukan hasil positif salmonella spp

b. Kit 1. API 20 E

Dinyatakan positif bila diperoleh hasil excellent ID / Very Good / Good ID / Accepttable ID

2. RapID ONE

Dinyatakan positif apabila hasil probability level ≥95%

4. Uji Eschericia Coli dalam Obat Tradisional Bentuk Cair

Dihomogenasi dan inkubasi pada 30-37 °C, 2-5 jam + 90 mL Letheen Broth/ Lactose Broth

Ditimbang secara aseptik

sampel

10 g sampel

Homogenisasi sampel

Inokulasi menggunakan sengkelit

2-3 koloni diinokulasikan

MCA

Pe m me ikr rik os sa ko an pis

Konsentr asi 10%

Pipet 10 mL

100 mL MCB Inkubasi pada 43-45 °C, 18-24 jam

Isolasi

Pengkayaan

TSA/NA

Satu diin sengke oku lasik lit an

Inkubasi pada 35-37 °C, 24 jam

Konfirmasi biokimia

Pewarnaan Gram dan diamati dibawah mikroskop. E. coli merupakan bakteri Gram negatif

Ditambahkan 1 mL pereaksi Indol (Kovac’s), dikocok dan didiamkan beberapa menit

Pengamatan koloni spesifik. Positif E. coli : koloni merah, umumnya tidak berlendir, terkadang dikelilingi zona merah

Warna merah cherry berbentuk cincin pada permukaan biakan menunjukkan reaksi indol positif. E. coli memberikan warna merah cherry

Tryptone Broth Inkubasi pada 43,5-44,5 °C, 24 -48 jam

Biakan E. coli media Tryptone Broth

Uji Indol

Uji biokimia dengan kit API 20E atau RapID ONE atau kit identifikasi lain yang sesuai Dilakukan sesuai petunjuk dalam kit

Uji Pewarnaan Gram Indol MCB MCA Tryptone Broth kit API 20E atau RapID ONE

Keterangan E. coli adalah bakteri gram negatif dengan bentuk batang Positif E. coli cincin pink (Triptofan menjadi indol), negatif tidak berwarna Positif E. coli cincin pink, negatif tidak berwarna Positif E. coli warna pink (fermentasi laktosa), negatif tidak berwarna Positif E. coli cincin pink (Triptofan menjadi indol), negatif tidak berwarna API 20E memiliki 20 sumur dengan pereaksi gula yang berbeda-beda

5. Uji Eschericia Coli dalam Obat Tradisional

100 mL TSB Ditimbang secara aseptik

10 g atau mL sampel

sampel

h

+ 90 mL LDPS atau LDF,homogenisasi

10 mL

Inkubasi pada 30-37 °C, 24-48 jam

Homogenisasi sampel

pengkayaan Inokulasi 1 sengkelit

BPA Inkubasi pada 35-37 °C, 24-48 jam

Pewarnaan Gram

Isolasi TSA/NA Inkubasi pada 32,5±2,5 °C, 24 jam

Dilakukan sesuai petunjuk dalam kit

Konfirmasi Satu sengkelit diinokulasikan

Biakan mikroba + 0,5 mL plasma kelinci

Bila terjadi penjendalan maka uji koagulase positif

Inkubasi pada 35-37 °C, 2448 jam

Uji Koagulase

+ biakan dari BPA Bila terbentuk gas maka uji katalase positif Tetesan H2O2 3%

Uji Katalase

6. Uji Pseudomonas aeruginosa Dalam Obat Tradisional

1H9 I o0 n 0g /mm k 1eL u 0giL b nD a m LisP si aS cu si7, 3 pli S0 6 ka na/ ± mL 1 pD ⁰ elF C 7, , 2 2 − 5 J a m

10 P 11go Is CE Uj BTo U 10 Uj IAII N1 U 0 e se ol TA re to at se ml ijiiA/ nnnK se