Anexo-2-1.docx

Anexo 2: Cálculos para el ensamblaje de la PCR Tabla 1.- Información sobre los volúmenes de reacción del ensayo Concentración Concentración Volumen Master Mix Reactivos Stock (Cs) inicial (Ci) Inicial (Vi) (____Rx) Buffer GoTaq 5X 1X dNTPs 20mM 0,4mM MgCl2 25mM 1,5mM 30μM 0,3μM Primer Forward 30μM 0,3μM Primer Reverse 5U/μL 1,25U/μL Taq Polimerasa Agua ultra pura ------15ng/μL 1,5ng/μL ADN Vf= 50 μL VMM=_______ Calcular los Volúmenes por reacción con la fórmula: 𝐶𝑠 ∗ 𝑉𝑓 = 𝐶𝑖 ∗ 𝑉𝑖

Figura 1.- Distribución de volúmenes por reacción Tabla 2.- Programa para el termociclador Denaturación Inicial Denaturación Annealing Extensión Extensión Final Conservación

Temperatura (°C) 94 94 63 72 72 4

Tiempo (min) 4 1 1 1 4 ∞

Ciclos 1 40 1 1