Aislamiento Y Caracterización De Dna: Instittuto Politécnico Nacional Escuela Nacional De Ciencias Biologicas

INSTITTUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS LABORATORIO DE GENÉTICA MICROBIANA PRÁCTICA 1.

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE DNA EQUIPO 3 BENÍTEZ BECERRIL ROCÍO B E LT RÁ N C O RT É S J O S É Á N G E L

Ácidos nucleicos Polímeros lineales formados por nucleótidos que están compuestos por un azúcar, un grupo fosfato y bases nitrogenadas.

Purinas  Están formadas por de dos anillos heterocíclicos fusionados

PURINA

Pirimidinas  Formados por un anillo heterocíclico de seis miembros

Pirimidina

Azúcares

Ribosa

Desoxirribosa

Nucleósido Monómeros que están compuestos de bases nitrogenadas y un azúcar enlazado a un nitrógeno de anillo de una purina y pirimidina. o Las pentosas están unidas a las bases nitrogenadas por medio de un enlace glucosídico, que en las purinas se la en el N-9 y en las pirimidinas en el N-1.

Timidina

Nucleótido Son nucleósidos fosforilados con uno o mas grupos fosfato

Enlaces de la estructura del DNA  Las pares de bases se mantienen juntos por puentes de hidrógeno, que aunque son interacciones débiles estabilizan la hélice debido a su gran número.  las bases de pares apiladas se atraen mutuamente mediante fuerzas de Van der Waals, la energía asociada a una única interacción es muy débil, sin embargo, en la doble hélice es sustancial.

Estructura primeria, secundaria y terciaria.  Primaria: colocación ordenada de nucleótidos uno tras otro unidos por grupos fosfato.

 Secundaria: tiene una disposición helicoidal que caracteriza la doble hélice del DNA.

Estructura terciaria.

Está constituida por plegamientos complejos que permiten el empaquetamiento del DNA. Un tipo de estructura terciaria es el superenrollamiento, el cual puede ser positivo o negativo.

Propiedades fisicoquímicas del DNA. Estabilidad, vicosidad

Propiedades del DNA. "Artículo" "En el aislamiento del ADN una gran dificultad es mantener físicamente intacta una molécula rígida de este tipo."

"Un método para aislar ADN casi libre de proteína y ARN fue publicado, por ejemplo, por Marmur. Las paredes de las células bacterianas se digieren con la enzima lisozima o se rompen con un detergente. Se utiliza perclorato sódico para disociar la proteína y el ácido nucleico, y se desproteiniza la solución agitando con una mezcla de cloroformo e alcohol isoamilico. " "Un procedimiento alternativo para aislar el ADN polimerizado alto de tejidos animales es el método de extracción de fenol de Kirby"

"En general, la estructura secundaria del ADN nativo depende de su contenido de las bases guanina y citosina (G + C). Cuanto mayor es el contenido de G + C, más fuertes son las fuerzas que mantienen unidas las dos cadenas. "

"Hay además el hipercromismo residual, que está presente incluso en los polímeros monocatenarios medidos separadamente y que sólo se hace evidente cuando el polímero se descompone en mononucleótidos. Incluso y los trinucleótidos muestran hipercromismo residual. Se debe presumiblemente a una interacción entre bases vecinas unidas entre sí como oligo-nucleótidos o polinucleótidos " "Para describir cuantitativamente el efecto hipercrómico, podemos definirlo en términos de una temperatura � � en la que el proceso está medio completo. El valor de � � es característico para una especie particular de ADN y depende, en una primera aproximación, del contenido de G + C en ese ADN a un pH y una fuerza iónica especificados." "� � = 69.3 + 0.41(� + �)"

"Si por otra parte la muestra de solución de ADN calentada se enfría extremadamente lentamente, tomando quizá 3 h para enfriar de 91ºC a 48ºC, la absorbencia del ADN retorna casi a su valor original a 25ºC; Esto equivale a decir que la estructura helicoidal doble con su emparejamiento exacto de la base es en gran parte, si no completamente restaurada. "

"La renaturalización del ADN es un proceso notable, teniendo en cuenta la gran longitud de las dos hebras aleatoriamente enrolladas de ADN desnaturalizado que hace que encuentren su posición de coincidencia exacta para poder reformar una doble hélice precisa. La renovación funciona mejor con las moléculas de ADN del fago más cortas y casi con el ADN muy largo de los organismos superiores"

"La facilidad de la renaturalización está relacionada con la probabilidad de que cualquier parte de una cadena de nucleótidos de cadena sencilla encuentre susecuencia complementaria y se registre en ella. Una vez que esto se ha logrado, el resto de los hilos renaturalizan rápidamente. La probabilidad de esta iniciación de renaturalización aumenta mucho si el ADN se retícula químicamente antes de la desnaturalización o si las hebras permanecen íntimamente entrelazadas después de la desnaturalización "

Conceptos:

oDesnaturalización: Cambio estructural por rompimiento de enlaces o puentes de hidrogeno, esta se puede dar en condiciones drásticas como un pH elevado, altas temperaturas o por compuestos que interfieren con la formación de puentes de hidrógeno

o Degradación: o Efecto hipercrómico: Aumento en la intensidad de absorción o Efecto hipercrómico residual: https://books.google.com.mx/books?id=7XAlCgAAQBAJ&pg=PA48&dq=DEGRADACION+de+dna&hl =es-419&sa=X&ved=0ahUKEwjxr9324YngAhUNIqwKHc0CAfgQ6AEIQTAE#v=onepage&q=DEGRADACION %20de%20dna&f=false https://books.google.com.mx/books? id=FXDiqLK6GmAC&pg=PA835&dq=efecto+hipercromico&hl=es-419&sa=X&ved=0ahUKEwjjN_t4ongAhVQR6wKHSabCRcQ6AEISDAG#v=onepage&q=efecto%20hipercromico&f=true