Tutorial Para Pruebas 1-2test

TUTORIAL PARA HACER PRUEBAS DE 1-2 TEST

D I A G R A M A D E 1–2 T E S TAPA T BLANCA

MENISC O CÁMARA DE MOVILIDAD (Medio Sim)

TAPA NEGRA

CÁMARA DE INOCULACIÓN (Caldo Tetrationato)

PRE-ENRIQUECIMIENTO DE LA MUESTRA

A. PARA TODAS LA MUESTRAS EXCEPTO ALIMENTOS CRUDOS Y ALTAMENTE CONTAMINADOS 1. PREPARAR CALDO LACTOSADO • Pesar 3 g de Caldo Lactosado y ponerlos en un Matraz Erlenmeyer de 250 ml. • Agregar 225 ml de Agua destilada o de garrafón. • Calentar hasta ebullición con mechero o en plancha. • Esterilizar en Autoclave a 121°C (15 lb. de presión) durante 20 min.

2. AGREGAR LA MUESTRA • Pesar 25 g de muestra y agregarla al mechero con Caldo Lactosado en condiciones de asepsia (con mechero a un lado). 3. INCUBAR • Meter el matraz en la incubadora a 35-37 °C por 24 + 2 horas.

• Seguir con el “Procedimiento de la Prueba”

PRE-ENRIQUECIMIENTO DE LA MUESTRA B. PARA ALIMENTOS CRUDOS Y ALTAMENTE CONTAMINADOS

1. PREPARAR SOLUCIÓN YODO-YODURO 0.1 % • Yodo

6.0 g

• Yoduro de Potasio • Agua purificada

5.0 g

20 ml

• Disolver el Yodo y el Yoduro de Potasio en el agua purificada. • NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE

2. PREPARAR SOLUCIÓN VERDE BRILLANTE 0.1 % • Tinte Verde Brillante • Agua purificada

0.1 g 100 ml

• Disolver el tinte verde brillante en el agua purificada. • NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE

3. PREPARAR CALDO TETRATIONATO • Disolver 46 g de Base de Caldo Tetrationato en 1 L de agua destilada. • Calentar en mechero hasta ebullición (1 min) • NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE • Enfriar aproximadamente a 45°C y agregar 10 ml de la Solución Verde Brillante 0.1% • Mezclar bien y separar en alícuotas de 10 ml en tubos estériles con tapón. • Guardar en refrigeración si no se va a utilizar en las próximas 12 horas.

• El día que se va a realizar la prueba agregar a cada tubo 2 ml de la Solución Yodo-Yoduro • Transferir 1 ml del pre-enriquecimiento incubado. • Mezclar con 9 ml de solución Caldo Tetrationato Verde Brillante activado con Yodo-Yoduro. • Agitar suavemente. • Incubar 6-8 horas a 24°C + 0.5°C en baño- maría • Seguir con el Procedimiento de la Prueba

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 1. AGREGAR SOLUCIÓN YODO-YODURO (Para todas las muestras excepto los alimentos crudos o altamente contaminados) • Posicionar el 1-2 Test con la tapa negra para arriba y destapar. • Agegar 1 gota del Reactivo #1 (Solución de Yodo-Yoduro) a la cámara de inoculación. • Tapar y agitar suavemente. NOTA: Este paso no se hace para alimentos crudos y altamente contaminados porque la incubación del caldo tetrationato se

2. REMOVER EL PLUG (TAPA) DE ESTA CÁMARA • Reposicionar 1-2 Test con la tapa negra PARA ARRIBA y destapar. • Remover el plug de la cámara usando una pinza estéril y descartar el plug.

NOTA: Si este plug no se saca, la bacteria no es capaz de moverse desde la cámara de inoculación hacia la cámara de movilidad.

3. INOCULACIÓN Antes de la inoculación asegurese de agitar bien el caldo de enriquecimiento con la muestra. PARA TODAS LAS MUESTRAS CON EXCEPCIÓN DE PRODUCTOS CRUDOS Y ALTAMENTE CONTAMINADOS • Transferir 0.1 ml de muestra y caldo para la cámara de inoculación PARA PRODUCTOS CRUDOS Y ALTAMENTE CONTAMINADOS • Transferir 1.5 ml de Caldo Tetrationato de la incubación 42°C para la cámara de inoculación previamente vacía.

4. CORTAR LA PUNTA DE LA TAPA BLANCA • Posicionar el 1-2 Test con la tapa blanca PARA ARRIBA y destapar. • Cortar la punta (o piquito blanco de plástico) de esta tapa con unas tijeras estériles y descartar la punta. • Se debe cortar donde la punta se junta con la base de la tapa.

5. PREPARACIÓN Y ADICIÓN DEL ANTICUERPO • En el orificio que queda en el gel, agregar una gota del Reactivo #2 para el pocillo formado en el gel por la punta de la tapa en la cámara de movilidad (tapa blanca). • Una gota del Reactivo #2 debe llenar uniformemente las dos terceras partes mas bajas del pocillo en el gel de movilidad. • No agregar mas de una gota del Reactivo #2.

6.

INCUBACIÓN

• Colocar 1-2 Test inoculados con la tapa blanca PARA ARRIBA en incubadora. Incubar de 14 a 30 hrs a 35°C.

LECTURA DE RESULTADOS • Con la tapa blanca PARA ARRIBA, colocar 12 Test cerca de una fuente de luz. • Observar atentamente el gel en la cámara de movilidad girando 360° al 1-2 Test enfrente a fuente de luz.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POSITIVO S positivo es indicado por la presencia • Un resultado de una banda blanca (Inmunobanda) en forma de U o de menisco. • La banda puede estar completa o puede estar en un lado del gel y se observa en la mitad más alta de la cámara de movilidad. • El resultado positivo indica de forma presuntiva que la muestra contiene Salmonella. • En caso de que no se quiera hacer confirmación del resultado inmediatamente, mantenga las pruebas positivas en refrigeración (2-8°C).

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS NEGATIVO • Si no haySformación de la banda después del tiempo de incubación mínimo de 14 horas, la prueba es negativa. • 1-2 Test negativos pueden presentar turbidez uniforme en la cámara de movilidad como resultado del movimiento de otras bacterias en el gel.

CONFIRMACIÓN

• Confirmar las muestras presuntivas positivas siguiendo el procedimiento de AOAC Internacional, obteniendo a la Salmonella desde al Caldo Tetrationato en la cámara de inoculación.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

1-2 Test POSITIVO es indicado por la presencia de la inmunobanda en forma de “U”.

1-2 Test NEGATIVO es indicado por la ausencia de la inmunobanda.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Ejemplo de Inmunbanda en forma de Menisco.

Ejemplo de Inmunbanda de forma Asimétrica.

Ejemplo de Inmunobanda asimétrica hacia la derecha.

Ejemplo de Inmunbanda asimétrica hacia la izquierda.

CONDICIONES DE ALMACENAJE Refrigerar de 2-8°C. NO CONGELAR

DESCARTE • Las unidades 1-2 Test no se pueden reutilizar. • 1-2 Test inoculados pueden tener organismos patógenos y se debe manipular con cuidado. • Todas las tapas deben estar firmemente cerradas. • Después del uso todas las unidades deben ser esterlizadas a 121°C por un mínimo de 30 minutos.

Para cualquier duda o aclaración favor de comunicarse con el Soporte Técnico de Serco Comercial con la Q.F.B. Cristy Martínez González al Tel. 01 81 83 43 12 14 Ext. 209 o escribir al e-mail: