Terapia Biologica En Cancer

Dr. Luis M. Zetina Toache Oncología Clínica. Oncomedica

ANTICUERPOS MONOCLONALES PRESENTACION DE CASO Dr. Luis Miguel Zetina Toache Oncomédica

Anticuerpos Monoclonales

Dr. Luis M. Zetina-Toache Dr. LUIS M. ZETINA TOACHE Oncomedica. Multimedica MULTIMEDICA. ONCOMEDICA

De la BiotecnologiaAntigua a la Doble Hélice y a la Medicina Genómica Nuevas fronteras Terapéuticas en Cancer

“ It is much more important to know what kind of patient has a disease, than to know what kind of disease a patient has” Caleb Parry. 18th Century physician, Bath.

“We used to think our fate was in our stars. Now we know, in large measure, our fate is in our genes” J.D Watson. Time Magazine 20 March 1989

Cá nc er

cu la r

1.2% io

1.2%

Ho m ici d

1.4%

HI V

2.2%

át ica

3.7%

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4.0%

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Su ici di o

Ce re br ov as E cu nf la . r Ac cid en te s EN cr f, ón . ica Ob pu stru lm cti on va ar Ne u In mo flu ní en a e za Di ab et es

En f. Ca rd io va s

PRINCIPALES CAUSAS DE MORTALIDAD

33.5%

% DEL TOTAL DE MUERTES

23.5%

6.7% 1.2%

US data/Adapted from Cancer Journal for Clinicians, 1994.

CARGA MUNDIAL DE CASOS DE CANCER

9.1 MILLONES DE NUEVOS CASOS 6.2 MILLONES DE MUERTES 22.4 millones viviendo con Cáncer Almzr J. National Cancer Institute. 2004. 204-209

RAZONES DEL INCREMENTO EN INCIDENCIA FACTORES PERSONALES

FACTORES HEREDITARIOS

ANCESTROS

TABACO

EXPOSICION AL SOL O VIRUS RADIACION PARASITOS

FACTORES AMBIENTALES

DIETA

CONSUMO DE ALCOHOL

ESTILO DE VIDA

INCIDENCIA CANCER MUJERES tasa por 100,000 Todos los sitios, en mujeres Tasa de incidencia cruda x 100,000

99x100,000

INCIDENCIA DE CANCER HOMBRE Tasa por 100,000 Todos los sitios , Hombres Tasa cruda por 100,000

92x100,00

8

Cambios en el tratamiento del cancer



       

Prevención: Diagnóstico: Conocimiento: - Biología Molecular Tumoral Tratamiento: - Cirugia. - Radioterapia: AE, FMod - Radio quimioterapia - Hormonoterapia - Quimioterapia - Inmunoterapia - Drogas efectos secundarios - Terapias Blanco Biológicas

PROGRESO ES POSIBLE POR EL ADELANTO REVOLUCIONARIO EN LA BIOLOGIA MOLECULAR

CANCER DESCUBRIMIENTO Genética Biología Molecular Ingeniería Genética DNA recombinate Mecanismos de activación celular

ACTIVACION DE LA CELULA TUMORAL POR DIFERENTES FACTORES DE CRECIMIENTO Y TK

VEGF

EGFR

bevacizumab

cetuximab imatinib erlotinib sunetinib

INHB TK HER-2

trastuzumab

CD-20

Rituximab ibritumomab

Agentes Biologicos dirijidos a blancos moleculares específicos involucrados en la formación y desarrollo del tumor Avastin

Cetuximab

Receptor VEGF (control de angiogenesis) VEGF PTK/ZK (TKI)

r

HER1/EGFR

Tarceva TKIs

Control celular De crecimiento y multiplication HER1/EGFR = epidermal growth factor receptor; TKI = tyrosine kinase inhibitor; VEGF = vascular endothelial growth factor

Dimero transmembrana de Receptor HER 2 vias de transduccion de señales Factor Crecimiento Sitio de Union Membrana Plasmatica Señales de transduccion Al nucleo

Citoplasma

Actividad Tirosina Kinasa (TK)

Nucleo

activation genetica

Division Celular

Inhibidor de tirosis Kinasa Especifico (imatinib)

Mejoría Diagnostico

ARMAS PARA LA DESTRUCCION, CONTROL Y PREVENCION DEL CANCER QUIMIO TERAPIA

RADIOTERAPIA

CIRUGIA Tumor

Vasos sanguineos

metastasis Apoptosis HORMONO TERAPIA

Adaptado Hong, MDACC

Proliferacion

TERAPIA BIOLOGICA

OPINION PUBLICA PESIMISTA............ A PESAR DE LA EVIDENCIA CIENTIFICA DE MEJORIA EN: SOBREVIDA, PREVENCION, CONTROL Y PROBABLE CURACION HASTA EN FORMAS AGRESIVAS.............

Opinión Pública Pesimista.......... Factores emocionales Prejuicios Retardo en el tratamiento Nociones preconcebidas por parte de médicos, familiares y amigos.



“ To him who devotes his life to sciencie, nothing can give more happiness than increasing the number of discoveries, but his cup of joy is full when the results of his studies inmediately find practical applications”  Louis Pasteur

Historia de Biotecnologia 50 ANIVERSARIO DE DNA

Farmacogenómica

1950. Descubrimiento de la estructura del DNA. Watson y Crick. 1960. Código genético, demostrándose cómo la secuencia de bases de DNA 1970. Insercion genes foráneos en bacterias y tecnología para secuenciarde manera eficiente y rápida el DNA. 1975. Producción de anticuerpos monoclonales. 1977. Primera proteína humana obtenida en un microorganismo fue somatostatina 1982. Se comercializa el primer fármaco desarrollado mediante tecnología de DNA recombinante fue la insulina humana. 1986. Desarrollo de la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) . 1990. Introducción en clínica de medicamentos biotecnológicos.

Gregor Mendel. 1866 Leyes y “factores“ de la herencia.

Versuche über Pflanzen-Hybriden von Gregor Mendel. Brun.4,3-47, 1866 Experimentos en hibridizacion con plantas

Buscando anticuerpos monoclonales

Paul Erlich Premio Nobel . 1908 “Magic Bullet”

Estructura del DNA Watson y Crick. 1953 Cristalografía Rx. Rosalind Franklin. 1950

Doble Hélice

Ceremonia de Premios Nobel. Suecia. 1962

EXPLICA FACILMENTE •MUTACION, VARIACION •CAMBIOS, EVOLUCION •DIVERSIDAD DE ESPECIES •HERENCIA

Polimerasa Chain Reaction PCR

Karry. Mullis. 1993. Premio Nobel

1990

1.Amplifica secuencia de DNA y RNA 2.Identifica mutaciones puntuales en genes específicos 3.Análisis pequeñas muestras 4.Util en medicina forense , genética e infecciosa

Ingenieria Genética y DNA recombinante

Stanley Cohen Premio Nobel. 1986

Cesar Mielstein Premio Nobel. 1984 )

Medicamentos disponibles por DNA recombinante rG-CSF Filgrastim, rG-CSF Lenograstim, rGM-CSF Molgramostim

Neutropenias post-quimioterapia

rEPO Eritropoyetina

Díalisis , IRC prediálisis, Anemia postquimio

Interferon alfa 2a Interferon alfa 2b

Hepatitis C

Interferon beta

Esclerosis múltiple

Interleukina-2

Carcinoma renal metastásicp

Factor VIIr Factor VIIIr

Hemofilia

TPA

Trombolisis post-infarto

Hormonas

Insulina, Hormona de crecimiento, FSF

Vacunas

Hepatitis B

Terapia anticancer “ideal”

AGENTE IDEAL anticancer

Beneficio Sobrevida Alta actividad antitumoral Control de Sintomas Mejoria QoL No toxicidad irreversible No efectos sec. corto plazo Administracion conveniente Costo-efectividad

La terapia ideal debe atacar solo a las celulas neoplasicas

Terapia Blanco 1.Características especificas de las células 2. 3.Diferencias entre célula normal y cáncer 1. 2.Terapia dirigida 3.Disminuir efectos secundarios

Terapia Blanco 

Componentes internos de la célula 

Pequeñas moléculas (TK)





Receptores en la superficie de la célula 

Anticuerpos moleculares (MoAb)





Vasos sanguíneos 

Terapia antiangiogenica (VEGF)

Anticuerpos Monoclonales (desarrollo histórico) Dr. Luis Miguel Zetina Toache Unidad de Hemato-Oncología Hospital Roosevelt Guatemala

Fabricacion de Aps. Monoclonales Hipoxantina Guanina fosforibosil transferasa

HER-2 EGRF VEGF

PEG Linfos B ( HGPRT+) SV corta :7d

Inmortales Hipoxantina Aminopterina Timidina

HIBRIDOMA Antigen

Ovarian cancer ascitic fluid

Anticuerpos monoclonales (tipos) 

Desnudos Radio Conjugados  Inmunotoxinas 



Lista completa de nomenclatura Aps. Monoclonales Prefijo

Blanco

Fuente

Sufijo

varia

-ci(r)- cardiovascular

-u- humano

mab

-co(l)-colonic tumor

-o- raton (murino)

-me(l)-melanoma

-a- rata

-ma(r)-mammary tumor

-e- hamster

-go(t)-testicular tumor

-i- primate

-go(v)-ovarian tumor

-xi- quimerico

-pr(o)-prostate tumor

-zu- humanizado

-tu(m)-miscellaneous tumor

-mu- humano

Anticuerpos Monoclonales Terminología

 MURINO: “monomab”  QUIMERICO: “ximab”  HUMANIZADO: “zumab”  HUMANO: “mumab”

Aps Monoclonales tipos 

 Murino: Aps de ratón. Móléculas extrañas. Reacciones alérgicas serias. Aps neutralizantes. HAMA Human Anti Mouse Antibodies.   Quiméricos: (Tifón y equidna: cabeza de león, cuerpo de cabra y cola de serpiente). Mantiene regiones variables murinas, acopladas a regiones constantes humanas.   Humanizados:Contiene sólo regiones Hipervariables de ApMo. Murino original. 

 Humanos: Estructura de ApsMo  Ig G2 completa humana 

 

Herceptin® (trastuzumab): Anticuerpo monoclonal humanizado anti-HER2

•Alta afinidad (Kd=0.1nM) y especificidad •95% humano, 5% murino –potencial de

inmunogenicidad disminuído

Ejemplos de nomenclatura • •Abciximab: Aps contra agregacion plaquetaria ab- + -ci(r)- + -xi- + -mab Anticuerpo monoclonal quimerico sistema cardiovascular •Trastuzumab: Aps contra Her-2 en cancer de mama tras- + -tu(m)- + -zu- + -mab Anticuerpo monoclonal humanizado contra tumor miscelaneo •Bevacizumab: Aps contra VEGF en cancer de colon Beva- + -ci(r)- + -zu- + -mab Anticuerpo monoclonal humanizado sistema cardiovascular •Rituximab: Aps contra CD 20 en linfomas no hodgkin Ri- + -tu(m)- + -zu- + -mab Anticuerpo Monoclonal quimerico contra tumor miscelaneo •Panitumumab: APs contra EGFR en Ca. colon Pani- + -tu(m)- + -mu- + -mab Anticuerpo Monoclonal humano contra tumor miscelaneo

Aps Monoclonales Aprobados por FDA Anticuerpo

Marca Registrada

Fecha Aprobacion

Tipo

Blanco

Tratamiento

Alemtuzumab MabCampth 2001

Humanizado

CD 52

LLC

Bevacizumab

Avastin

2004

Humanizado

VEGF

Ca. Colon

Cetuximab

Erbitux

2004

Quimerico

EGFR

Colon, CyC

Trastuzumab

Herceptin

1998

Humanizado

HER-2

Ca. mama

Rituximab

Mabthera

1997

Quimerico

CD 20

No-Hodgkin

Panitumumab Vectibix

2006

Humano

EGFR

Ca. colon

Tositumomab

Bexxar

2003

Murino

CD 20

No-Hodgkin

Gemtuzumab ozogamicin

Mylotarg

2006

Humanizado

CD 20

LMA

Aps Monoclonales Aprobados por FDA Anticuerpo

Marca Registrada

Fecha Aprobacion

Tipo

Blanco

Tratamiento

Abciximab

ReoPro

1994

Quimerico

Gly IIb/IIIa

Cardiovasc.

Adalimumab

Humira

2002

Humano

TNF a

Auto inmune

Basiliximab

Simulect

1998

Quimerico

IL-2 receptor

Trasplante

Ranibizumab

Lucentis

2006

Humanizado

VEGF

Deg.macular

Infliximab

Remicade

1998

Quimerico

TNF a

Auto inmune

Muromonab

Orthoclone

1986

Murino

Tcel CD 3

Trasplante

Omalizumab

Xolair

2004

Humanizado

IgE

Asma

Efalizumab

Raptiva

2002

Humanizado

CD 11ª

Psoriasis

Palivizumab

Synagis

1998

Humanizado

Epitope VSR VSR

Eculizumab

Soliris

2007

Humanizado

Comp C5

HPN

APLICACIONES DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES 1.- Investigación biomédica Identificación y clonaje de genes Identificación y aislamiento de proteínas Activación de enzimas Arquitectura molecular, morfogénesis

2.- Diagnóstico Hormonas, vitaminas, citocinas, factores tisulares, etc. Monitorización de drogas Enfermedades infecciosas, microbiología Alergia Hematología Trazadores de tumores e infartos de miocardio Inmunoescintografía Aplicaciones forenses Técnicas (ELISA, EIA, citometría, inmunohistoquímica, inmufluorescencia, etc.)

3.- Catálisis 4.- Biosensores 5.- Terapia Enfermedades autoinmunes Trasplantes (órganos, médula ósea) Enfermedades infecciosas (virales, bacterianas y parasitarias) Cáncer·

6.- Otras aplicaciones: Degradación del colesterol Modulación de hormonas Modulación de receptores Reversión de sobredosis de drogas

Table 2. Strategies for In Vivo Use of Monoclonal Antibodies as Anticancer Therapy Antibody Alone Complement mediated cytotoxicity (CMC) Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) Regulatory (ligand/receptor) interactions Anti-idiotype vaccine Immunoconjugates Radiolabeled Antibodies Immunotoxins Chemotherapy-Antibody Conjugates Cytokine Immunoconjugates Cellular Immunoconjugates

mabthera

Cel.t Cel.t ronc ronc oo

preprepre pre cel. cel. BB

Diferenciación cel. B y marcadores de sup. prepreBB prepre-preprecell cellBBcel cel BBcel cel

TDT

imm imm ad. ad. BB cell cell

CD 19

mad mad ura ura BBcel cel

activ activ ada ada BB cell cell

plas plas ma ma cell cell

CD 20 CD 22 CD 21 CD 38

Cel.precursoras leucemias

Linfomas cel. B

mieloma múltiple

Binding of Herceptin to HER2 ®

Rates and Durations of Responses

Slamon D et al. N Engl J Med 2001;344:783-792

HERA Trial Herceptin HERA (Randomization after chemotherapy) Arm A Arm B Arm C

No Herceptin (1 yr) (2 yr)

Only Arms 1 and 2 analyzed in this interim analysis n = 3,307, median follow-up ~ 1 year

ONCOMEDICA, ISTHMIAN MEDICAL RESEARH. GUATEMALA Investigador Principal. Dr. Luis M. Zetina Toache. El Pilar

Combined Analysis for DFS of NSABP B-31 / NCCTG – N9831 ACTH 87%

85%

ACT 75%

%

67% N Events ACT 1679 261 ACTH 1672 134

HR=0.48, 2P=3x10-12

Years From Randomization

Novel triple combo provides added benefit in advanced breast cancer. CHAT report. Zetina,L. Otero D, Huggis R, et al Meeting report . ESMO. Istambul. European Society of Medical Oncology Inpharma Weekly. (1559):15-16, October 14, 2006.

Abstract:

The addition of capecitabine [Xeloda] to the combination of trastuzumab [Herceptin] and docetaxel [Taxotere] provides women with HER2-positive advanced breast cancer substantial benefits, according to late-breaking data presented at the 31st Congress of the European Society for Medical Oncology (ESMO) [Istanbul, Turkey; September-October, 2006]. The novel triple combination therapy significantly increased the median time to progression, compared with trastuzumab plus docetaxel alone; these results provide the first evidence to support the addition of a third chemotherapeutic agent to the most frequently used first-line regimen of trastuzumab and a taxane, and paths the way for further investigations into triple combination therapies. Copyright 2006 Adis Data Information BV

CHAT study 1st-line therapy for HER2-positive MBC or LABC (majority MBC) H: 8 mg/kg loading dose → 6 mg/kg q3w T: 75 mg/m2 q3w

Until PD

X: 950 mg/m2 bid Days 1-14 q3w HER2-positive MBC / LABC (FISH+ and / or IHC 3+) (n=225)

R H: 8 mg/kg loading dose → 6 mg/kg q3w T: 100 mg/m2 q3w

HER2, human epidermal growth factor receptor 2; LABC, locally advanced breast cancer; MBC, metastatic breast cancer; FISH, fluorescence in situ hybridisation; IHC, immunohistochemistry; R, randomisation; PD, progressive disease; H, trastuzumab; T, docetaxel; X, capecitabine

Until PD

Time to progression 95% CI p value Events HR 0.697 0.488, 0.995 0.045 55 HTX 68 HT

Probability 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 13.8

0.0 0

5

10

18.2 15 20 25 30 35 Months from randomisation

HR, hazard ratio; CI, confidence interval

40

45

50

Overall survival Probability 1.0 0.8 0.6 0.4 Events 0.2

HTX HT

25 30

HR 95% CI p value 0.82 1.39, 0.48 0.459

0.0 0

5

10

15 20 25 30 35 Months from randomisation

HR, hazard ratio; CI, confidence interval

40

45

50

Participating countries Finland Sweden

Canada

Poland

UK France Spain

Italy

Greece

Mexico Guatemala Costa Rica

Panama

Brazil Australia

Acknowledgements Sweden Australia Inger Andreasson Italy Richard Bell France Lena Malmberg Mario Bari Jane Beith David Coeffic UK Andrea Bonetti Guy Van Hazel Veronique Dieras John Le Vay Armando Santoro Ken Pittman Pierre Kerbrat Andreas Makris Mexico Michael M Slancar Xavier Pivot Timothy Perren Cesar Gonzales Guy Toner Veronique Tillet-Lenoir Flavia Morales-Vasquez Christopher Price Brazil Patrice Viens Peter Simmonds Tirzo Suarez Maria de Fátima Dias Guai Finland Denis Talbot Panama José Luiz Pedrini Seppo Pryhönen Juan Carlos Alcedo Artur Malzyner Greece Poland Canada Vassilios Georgoulias Jacek Jassem Stanley Gertler Haralambos Kalofonos Spain Costa Rica Dimosthenis Skarlos Antonio Antón Douglas Otero Guatemala Miguel Angel Segui Luis Miguel Zetina Toache José Baselga Serafin Morales

FDA Approval

BEVACIZUMAB used in combination with intravenous 5-FU– based chemotherapy, is indicated for first-line treatment of patients with metastatic carcinoma of the colon or rectum.

Phase III study ongoing: XELOX ± bevacizumab vs FOLFOX4 ± bevacizumab (NO16966C) 

Factorial study 2 x 2

Dr. Luis M. Zetina T IMR Guatemala . PI. 16 ptes.

viously untreated metastatic CRC

Bevacizumab FOLFOX4 (n=300)

(n=1920)

Placebo (n=330) Bevacizumab



5 mg/kg every 2 weeks (n=330) PRO

XELOX (n=300)

PRO

7,5 mg/kg every 3 weeks (n=330) PRO

Placebo (n=330)

PRO

Primary endpoints Time to progression with XELOX (± bevacizumab) equivalent to FOLFOX4 (± bevacizumab) Time to progression with bevacizumab + XELOX/FOLFOX superior to XELOX/FOLFOX+placebo

Cassidy J.; ESMO 2006; Saltz LB ASCO GI 2007

Ongoing phase III trial of XELOX ± Avastin vs FOLFOX4 ± Avastin (NO16966C): preliminary data Cassidy J. ESMO 2006 ; Saltz LB ASCOGI 2007



The study met both primary endpoints: 





XELOX = FOLFOX4 as similar activity in terms of PFS – Bevacizumab + XELOX or FOLFOX4 significantly improved PFS

compared with chemotherapy alone

1.0

HR = 0.70



[ 97.5% CI 0.58–0.83 ] 0.8

p < 0.0001



0.6

PFS estimate

0.4 0.2 0.0

8.5 0

5

11.5 10

15

20

25

XELOX / FOLFOX + bevacizumab 289 events XELOX / FOLFOX + placebo

347 events

55 YEARS-OLD WOMAN RECTAL ADENOCARCINOMA DIC 12; 2004

MLA

CT SCAN JAN 22; 2005

CT SCAN AUG 22, 2005

TREATMENT. NO RADIOTHERAPY XELOX + BEVACIZUMAB

JUL 9; 2005 PATH0LOGY NEGATIVE

MLA JUN 05; 2006 SMALL HEPATIC PROGESSION

MLA AG 21, 2006

TREATMENT CETUXIMAB + IFL METASTASECTOMY?

Protocolos actuales Genentech AVF3694g: A multicenter, phase III, randomized, placebo-controlled trial evaluating the efficacy and safety of bevacizumab in combination with chemotherapy regimens in subjects with previously untreated metastatic breast cancer TRIAL S.A: Dr. Luis M. Zetina T. Principal Investigator recruitment 8 ptes on going… Close: Dec. 2007.

La Carga de Metástasis óseas DOLOR

Discapacidad

Anemia

Compresión Medular

Hipercalcemia

Fracturas

Estructura de los bifosfonatos

Clodronato (oral + i.v)

= H2N

OH OH

GENERICO

2

Acido Zoledronico (i.v.) = P

N HO

1

c

P

O

OH OH OH OH

R2: potencia R1: fijacion

Ibandronato (i.v. + oral) CH3

OH

OH P OH OH O

HO

P O

O-P-O-P-O Pirofosfato

O P

N

=

N

R

P

=

R

=

O

OH

OH P OH OH O

HO

OH

O

P

=

O

OH

=

P

O

=

CI

P

=

CI

=

O

Pamidronato (i.v.)

hidroxiapatita

OH OH OH OH

Participating countries Argentina Australia Belgium Brazil Canada Chile France Germany Greece Guatemala

Hungary Mexico Panama Poland Puerto Rico Russia Switzerland UK USA

Further information on the metastatic bone pain trials is also available @ www.bonepain.com or by calling 1-877-860-BONE (1-877-860-2663)

Otros estudios ToGA study- A Study of Herceptin (Trastuzumab) in Combination With Chemotherapy Compared With Chemotherapy Alone in Patients With HER2-Positive Advanced Gastric Cancer. IMR. Guatemala. 3 ptes. Status: recruiting 



Erlotinib (Tarceva) in non stage IIIb-IV non small cell lung disease free survival and QoL. 5 ptes. TRIAL.S:A status: Closed FACT (faslodex and combination treatment) with arimidex in first relapsed breast cancer. Hormono positve. Status: recruiting



Panitumub in Advaced colon cancer failure to complete remision with chemotherapy and bevacizumab. Status: recruiting

Nuevas armas Aldara (imiquimod)

Ca. Basocelular

Sutent /Sunitinib)

Ca. Renal

Sorafenib

Renal avanzado

Revlimid

Mielodisplasia

Velcade

Mieloma Multiple

Nuevas Terapias Blanco en Oncologia

Metastas es Inhibitors AntiAngiogen esis

EGFR inhibitors

HIF inhibito r Raf inhibito r

Death Receptor s

IGF-1R inhibitors

HER2-R inhibitors

mTOR inhibitor s MEK inhibito rs

Proteas ome inhibitor Tubulininteracti ng agents

Src inhibitor

HSP90 inhibito rs Mdm2 inhibito r

Cell Cycle inhibitor s Proapoptot ic drugs HDAC Inhibito rs

MUC-1 Directed antibodie s Farnesyl Transfer ase Inhibitor s Aurora Kinase inhibitor

Kinesi ns

Molecular characterisation will enable more individualised treatment Tumour type

Tumour genotype Radiotherapy

Hormonal therapy

Molecular phenotype

Treatment Biological therapies l Herceptin l Tarceva l Avastin l Omnitarg TM

T M

TM

Chemotherapy l

®

Disease stage

Factors driving treatment decisions Efficacy

Convenience

Tolerability

Patient’s preferences

Impact on QoL

Patient characteristics influence treatment decisions Performanc e status

Patient preference

Age

Patient history Sit es Previ

Comorbidities e.g. diabetes, impaired cardiac function

ous thera py Renal/he patic function

Pace of relap se Fitn ess Cardi ac funct ion