Rafiuddin O1a114179.pdf

Skripsi AKTIVITAS ANTIHIPERLIPIDEMIA EKSTRAK ETANOL BATANG GALING (Cayratia trifolia Domin.) PADA MENCIT JANTAN

Untuk memenuhi sebagian persyaratan mencapai derajat sarjana (S-1)

Oleh : RAFIUDDIN O1A1 14 179

PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS HALU OLEO KENDARI 2016

ii

PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Kendari,

September 2016

Penulis

iii

KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh Alhamdulillah, puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulisan hasil penelitian yang berjudul

“AKTIVITAS

ANTIHIPERLIPIDEMIA

EKSTRAK

ETANOL

BATANG GALING (Cayratia trifolia Domin.) PADA MENCIT JANTAN ”dapat terselesaikan. Melalui kesempatan ini secara khusus penulis haturkan terima kasih yang tak terhingga kepada orang tua penulis ibunda dan almarhum ayah atas segala doa, restu, semangat, bimbingan, arahan, dan nasehat, serta ketabahannya dalam membesarkan dan mendidik penulis. Semoga Allah SWT selalu melindungi dan melimpahkan rahmat-Nya kepada ibu tercinta dan almarhum ayah Terima kasih penulis haturkan kepada ibu Wahyuni S.Si., M.Si., Apt. selaku pembimbing pertama dan bapak Muh. Ilyas Yusuf, S.Farm, M.Imun, Apt. selaku pembimbing kedua yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran dalam mengarahkan dan membimbing penulis mulai dari penulisan proposal hingga proses penyelesaian hasil penelitian ini. Penulis juga menyampaikan terima kasih kepada : 1. Prof. Dr. Ir. H. Usman Rianse, M.S. selaku Rektor Universitas Halu Oleo. 2. Prof. Dr.Sahidin, M.Si. selaku Dekan Fakultas Farmasi UHO. 3. Suryani, S. Farm., M.Sc., Apt. selaku Wakil Dekan I Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo. iv

4. Dr. Ruslin, S.Pd.,M.Si. selaku Wakil Dekan II Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo. 5. Sunandar Ihsan, S.Farm., M.Sc., Apt. selaku Wakil Dekan III Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo 6. Nur Illiyyin Akib, S.Si., M.Si., Apt. selaku Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo. 7. Rini Hamsidi, S.Farm., M.Farm., Apt. selaku Kepala Laboratorium Farmasi yang telah memberikan izin penelitian. 8. Mesi Leorita, S.Si.,M.Sc., Apt. selaku penguji yang telah memberikan banyak masukkan dan pikiran untuk penyelesaian penelitian ini. 9. Bapak dan Ibu dosen di lingkungan Universitas Halu Oleo, khususnya Jurusan Farmasi, terima kasih atas ilmu yang telah diberikan kepada penulis. 10. Agung Wibawa Mahatva Yodha, S.Si dan Hajrul Malaka, S.Si., M.Si. yang telah membantu dan memberi arahan dalam penelitian ini. 11. Hanari, Ak.,S.P.,M.Kes. terima kasih untuk semangat, bantuan dan arahannya selama ini. 12. Pak Hardin yang telah membantu dan memberi arahan dalam penelitian. 13. Seluruh staf di Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, khususnya Ibu Ati atas segala fasilitas dan pelayanan yang telah diberikan. 14. Yayasan Bina Husada dan rekan-rekan kerja Ibu Francisca Pandean, Ibu sernita, Kak Bonni Rubak, Ibu

Nur Sa’adah Daud, Pak Muh. Azdar Setiawan,

v

Kak Wening Winarti, Yani Zari, Adi Rianto, Kadek Darmayanto dan Hasnawati terima kasih atas perhatiannya. 15. Teman-teman penelitian kelompok galing : Nopi, Dwi, Feri, Rodenk, dan Hikmah terima kasih telah membantu dalam penyelesaian penelitian. 16. Teman-teman seperjuangan dalam menuntut ilmu di Fakultas Farmasi, mahasiswa angkatan 2014 berbeda-beda umur tetapi tetap satu: Pak Sulwan, Kak Ahmad, Kak Enda, Sultan, Ibu Feby, Ibu Jeni, Ibu Astria Sawu, Kak delfy, Kak Ima, Kak Ririn, Kak Gita, Kak Katrin, Kak Anti, Kak Yus, Kak Uci, Rohan, Teti, Ayu, Munarni, Fosa, Rilla, Amaliah, Jetti dan yang namanya tidak disebutkan satu persatu, semoga Allah SWT selalu merahmati langkah kita kedepannya. Akhirnya penulis menyampaikan penghargaan yang setinggi-tingginya kepada semua pihak dan berharap tulisan ini dapat bermanfaat. Semoga Allah SWT selalu memberi kesadaran kepada kita semua untuk selalu menjunjung tinggi ilmu pengetahuan, amalan yang shalih dan memberikan ridho balasan yang sebaik-baiknya. Sebagaimana firman Allah SWT dalam Q.S. Al-Mujadalah ayat 11 yang artinya: “Sesungguhnya Allah akan meninggikan orang-orang yang beriman diantaramu dan orang-orang yang diberi ilmu pengetahuan beberapa derajat”.

Kendari,

Oktober 2016

Penulis

vi

DAFTAR ISI Halaman KATA PENGANTAR ........................................................................................... iv DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii DAFTAR TABEL ................................................................................................... x DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. xi DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... xi ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN ............................................................. xiii ABSTRAK ............................................................................................................ xv BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1 A. Latar Belakang ............................................................................................... 1 B. Rumusan Masalah .......................................................................................... 3 C. Tujuan Penelitian ........................................................................................... 4 D. Manfaat Penulisan .......................................................................................... 4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................. 6 A. Tumbuhan Galing (Cayratia trifolia Domin.) ............................................... 6 1. Klasifikasi ................................................................................................. 6 2. Morfologi .................................................................................................. 6 3. Kandungan Kimia..................................................................................... 7 4. Khasiat dan Kegunaan ............................................................................. 8 B. Lipid ............................................................................................................... 9 1. Lipoprotein ............................................................................................. 10 a. Kilomikron ......................................................................................... 11 b. VLDL ................................................................................................. 11 c. LDL .................................................................................................... 12 d. HDL ................................................................................................... 12 2. Kolesterol ............................................................................................... 12 3. Trigliserida ............................................................................................. 13 C. Hiperlipidemia.............................................................................................. 13 1. Definisi ................................................................................................... 13 2. Terapi farmakologi hiperlipidemia ........................................................ 20 vii

3. Atrovastatin ............................................................................................ 20 4. Induksi hipelipidemia ............................................................................. 22 D. Metabolit sekunder ....................................................................................... 23 1. Flavonoid ................................................................................................ 23 2. Alkaloid .................................................................................................. 24 3. Saponin ................................................................................................... 25 4. Tanin ....................................................................................................... 26 E. Metode ekstraksi ............................................................................................ 26 F. Skrining fitokimia dengan Kromatografi lapis tipis (KLT) ........................... 29 1. Fase diam ................................................................................................ 30 2. Fase gerak ............................................................................................... 30 3. Penotolan sampel .................................................................................... 31 4. Pengembangan ........................................................................................ 31 5. Deteksi .................................................................................................... 32 G. Hewan uji ...................................................................................................... 32 H. Kerangka konsep ........................................................................................... 35 BAB III METODE PENELITIAN........................................................................ 36 A. Tempat dan Waktu Penelitian ...................................................................... 36 B. Jenis Penelitian ............................................................................................. 36 C. Bahan Penelitian........................................................................................... 36 D. Alat Penelitian .............................................................................................. 37 E. Variabel ........................................................................................................ 37 F. Definisi Operasional..................................................................................... 37 G. Prosedur Penelitian....................................................................................... 38 1. Determinasi Tumbuhan .......................................................................... 38 2. Preparasi Sampel .................................................................................... 39 3. Ekstraksi ................................................................................................. 39 4. Skrining Fitokimia .................................................................................. 39 5. Pengujian Aktivitas Antihiperlipidemia ................................................. 40 a. Penentuan hewan uji ........................................................................ 40 b. Penyiapan hewan uji ........................................................................ 41

viii

c. Penyiapan Bahan ............................................................................. 44 H. Analisis Data (Hasil) .................................................................................... 48 BAB IV HASIL DAN PEMBAHAS2AN ............................................................ 50 A. Determinasi Bahan ....................................................................................... 50 B. Rendemen Ekstrak Etanol Batang Galing ................................................... 50 C. Skrining Fitokimia ....................................................................................... 50 D. Pengujian Aktivitas Antihiperlipidemia ....................................................... 53 BAB V PENUTUP ................................................................................................ 65 A. Kesimpulan .................................................................................................. 65 B. Saran ............................................................................................................. 65 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 65 LAMPIRAN ......................................................................................................... 73

ix

DAFTAR TABEL Nomor 1. 2.

Teks

Halaman

Jenis-jenis lipoprotein

10

Klasifikasi kolesterol total, kolesterol LDL, kolesterol HDL

14

dan

trigliserida menurut NCEP ATP III 2001 mg/dL.

3.

Efek-efek terapi obat pada lipid dan lipoprotein

20

4.

Data biologis Mencit (Mus muculus L.)

34

5.

Kelompok penyiapan hewan uji

43

6.

Jumlah akuades, sampel plasma, standar kolesterol total dan

45

reagen kit kolesterol total yang dibutuhkan untuk pengukuran kadar kolesterol total. 7.

Jumlah akuades, sampel plasma, standar kolesterol total dan

46

reagen kit kolesterol total yang dibutuhkan untuk pengukuran kadar kolesterol total. 8.

Jumlah akuades, standar HDL, sampel plasma dan reagen kit

47

kolesterol total yang dibutuhkan untuk pengukuran kadar kolesterol total. 9.

Hasil skrining

fitokimia ekstrak etanol batang galing

51

mengguanakan KLT 10.

Rata-rata (mg/dL) ± SD kolesterol total, Trigliserida, LDL

53

dan HDL 11.

Presentasi penurunan kadar kolesterol total, kadar LDL dan

60

peningkatan kadar HDL

x

DAFTAR GAMBAR Nomor

Teks

Halaman

1.

Tumbuhan Galing (Cayratia trifolia Domin.)

6

2.

Komponen lipid plasma

9

3.

Struktur flavonoid

24

4.

Struktur alkaloid

25

5.

Struktur saponin

26

6.

Struktur tanin

26

7.

Mus musculus L.

33

8.

Kerangka konsep

35

9.

Hasil skrining fitokimia metode KLT

51

10.

Diagram batang kadar rata-rata kolesterol total.

56

11.

Diagram batang kadar rata-rata trigliserida.

57

12.

Diagram batang kadar rata-rata HDL.

57

13.

Diagram batang kadar rata-rata LDL.

58

xi

DAFTAR LAMPIRAN Nomor

Teks

Halaman

1.

Pembuatan induksi MDLT dan PTU

73

2.

Perhitungan Dosis ekstrak

74

3.

Pembuatan sediaan pembanding Atorvastatin

75

4.

Pembuatan Na CMC 0,5%

76

5.

Ektraksi dan rendemen ekstrak batang galing

77

6.

Pembuatan reagen skrining fitokimia

78

7.

Tabel Konversi Perhitungan Dosis Antar Jenis Subjek Uji

80

8.

Tabel Volume Maksimal Pemberian Larutan Untuk Hewan

81

9.

Data Statistik SPSS

82

10

Determinasi Tumbuhan

98

11.

Keterangan Penelitian

101

12.

Hasil Penelitian

102

13.

Dokumentasi

104

14.

Surat Kelaikan Etik ( Ethical Clereance)

106

xii

ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN Lambang/Singkatan

Arti Lambang dan Keterangan

PTU

: Propiltiurasil

LDL

: Low Density Lipoprotein

HDL

: Hight Density Lipoprotein

IDL

: Intermediate density Lipoprotein

TG

: Trigliserida

TC

: Total Cholesterol

VLDL

: Very Low Density Lipoprotein

LCAT

: Lecithin Cholesterol Acyl Transferase

ACAT

: Acetyl Coenzyme Acetyltransferase

FFA

: Free Fatty Acid

Asetil CoA

: Asetyl Coenzyme A

NADPH

: Nikotinamida Adenosin Dinukleotida Hidrogen

Asil-CoA

: Asil Coenzyme A

HMG CoA

: 3-Hidroksi 3-Metilglutaril-Coenzim A

NCEP

: National Cholesterol Education Program

EDTA

: Ethylenediaminetetraacetic acid

ANOVA

: Analysis of variance

O2

: Oksigen

ATP

: Adenosin triphosphate

Cm

: Sentimeter

cm2

: Sentimeter persegi

FeCl3

: Ferii III Chlorida, jenis pereaksi

G

: Gram

g/kgBB

: Gram per kilogram berat badan

GF 254

: Gips fluorosensi 254

KLT

: Kromatografi Lapis Tipis

mg/dL

: Milligram per desiliter

Mg

: Milligram

xiii

mg/kgBB

: Miligram per kilogram berat badan

Na CMC

: Natrium carboxymethylcellulose

MDLT

: Makanan Diet Lemak Tinggi

SD

: Standar deviasi

Sig (α) p

: Signifikansi (alfa), tingkat kesahalan

UV

: Ultraviolet

Rf

: Faktor Retardasi

v/v

: Volume (mL) per volume (mL)

o

: Derajat selsius, menunjukkan derajat suhu

±

: Lebih kurang

% b/b

: Persen bobot (gram) per bobot (gram)

C

xiv

AKTIVITAS ANTIHIPERLIPIDEMIA EKSTRAK ETANOL BATANG GALING (Cayratia trifolia Domin.) TERHADAP MENCIT JANTAN

Rafiuddin O1A1 14 179 ABSTRAK Batang galing (Cayratia trifolia Domin.) memiliki senyawa flavonoid, Saponin, dan tanin yang bersifat sebagai antioksidan yang berperan terhadap mekanisme perbaikan profil lipid. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas ekstrak etanol batang galing terhadap penurunan kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan peningkatan HDL darah mencit jantan. Mencit diberi induksi makanan diet lemak tinggi dengan komposisi kuning telur 80%, Sukrosa 15%, lemak hewan 5% dan propiltiurasil (PTU) 25 mg. Sebanyak 24 ekor mencit jantan dibagi dalam enam kelompok yang terdiri dari kontrol normal, kontrol negatif induksi MDLT, kontrol pembanding (Atorvastatin), kontrol dosis (400 mg/kgBB), kontrol dosis (500 mg/kgBB) dan kontrol dosis (400 mg/kgBB). Mencit diterapi sesuai dosis masingmasing perlakuan satu kali sehari selama 7 hari. Kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan HDL diukur menggunakan photometer 5010V5+. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ketiga dosis memiliki efek, dan dosis 500 mg/kgBB ekstrak etanol batang galing memiliki potensi sebagai antihiperlipidemia terhadap penurunan kolesterol total, trigliserida, LDL dan peningkatan HDL yang memberikan hasil berbeda signifikan (p < 0,05) dibandingkan dengan kontrol induksi makanan diet lemak tinggi dan konrtol normal berdasarkan hasil uji statsitik. Kata kunci : Batang Galing, antihiperlipidemia, kolesterol total, trigliserida, HDL, LDL.

xv

ACTIVITY OF ANTIHIPERLIPIDEMIC ETHANOL EXTRACT STEM GALING (Cayratia trifolia DOMIN.) ON MALE MICE

Rafiuddin O1A1 14 179 ABSTRACT

Stem galing (Cayratia trifolia Domin.) has flavonoids, saponins and tannins which act as antioxidants that contribute to improvements in lipid profiles mechanisms. This research aims to determine the activity of the ethanol extract of the stem galing towards decreased levels of total cholesterol, triglycerides, LDL and increased HDL blood of male mice. Mice were given a high fat diet food induced with composition of egg yolk 80%, sucrose15%, animal fat 5% and propiltiurasil (PTU) 25 mg. A total of 24 male mice were divided into six groups of normal control, negative control induction MDLT, control positive (Atorvastatin), the control dose (400 mg/kgBB), control dose (500 mg/kgBB) and control dose ( 600 mg/ KgBB). Mice treated with appropriate doses of each treatment once a day for 7 days. Total cholesterol, triglycerides, LDL and HDL were measured using a photometer 5010V5+. The results showed that all three doses have an effect, and a dose of 500 mg/ kgBB ethanol extract stem galing has potential as antihiperlipidemia to the decrease in total cholesterol, triglycerides, LDL and increase HDL that deliver results significantly different (p <0.05) compared to control induction high fat diet food and normal control subset of the statistics based on test results. Keywords : Stem Galing, antihiperlipidemia, total cholesterol, triglycerides, HDL, LDL

xvi

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Penyakit kardiovaskular merupakan salah satu penyebab kematian di dunia. Pada tahun 2012 diperkirakan 17,5 juta orang meninggal dikarenakan penyakit kardiovaskular (WHO, 2015). Penyakit kardiovaskular disebabkan oleh gangguan pada jantung dan pembuluh darah termasuk penyakit jantung koroner, stroke, hipertensi, arteri perifer, jantung rematik, jantung bawaan dan gagal jantung. Kadar kolesterol dalam serum merupakan salah satu faktor resiko penyebab aterosklerosis dan penyakit jantung koroner (WHO, 2013). Dislipidemia adalah kelainan metabolisme lipid yang ditandai dengan peningkatan kolesterol total, kolesterol LDL, trigliserida diatas nilai normal serta penurunan kolesterol HDL di dalam darah. Menurut US National Cholesterol Education

Program, dikatakan dislipidemia apabila serum trigliserida ˃ 150

mg/dL (1,7 mmol/L), kolesterol HDL ˂ 40 mg/dL (1,0 mmol/L) dan kolesterol LDL ˃ 100 mg/dL (2,4 mmol/L). Suatu penelitian menyebutkan bahwa pengobatan dislipidemia dapat mengurangi resiko penyakit kardiovaskular sebesar 30% selama 5 tahun (Wijayanti dan Rahayuni, 2014). Saat ini pemilihan bahan-bahan alami untuk pengobatan didasarkan pada bukti penelitian, sehingga penggunaan bahan-bahan alami diharapkan dapat lebih tepat sasaran dalam dunia pengobatan. Tumbuhan berkhasiat obat mempunyai nilai lebih ekonomis dan efek samping yang lebih kecil dibandingkan dengan obat-obat sintesis (Wasitaatmadja, 1997) dan memiliki kompabilitas yang baik

1

sehingga meningkatkan toleransi pasien bahkan pada penggunaan jangka panjang (Ochani dan D’Mello, 2009). Salah satu tumbuhan yang memiliki khasiat untuk pengobatan adalah Cayratia trifolia Domin. atau dikenal dengan tumbuhan galing

merupakan

tumbuhan asli dari India, Asia dan Australia biasanya ditemukan di daratan rendah daerah tropis. Beberapa penelitian sebelumnya melaporkan bahwa ekstrak etanol batang galing mempunyai potensi sebagai antibakteri, antifungi, antiprotozoa, antiviral, hipoglikemik, antikanker, antioksidan, antiinflamasi dan diuretik (Ragasa, 2014). Tumbuhan galing berkhasiat sebagai obat bahan alam karena mengandung alkaloid, flavonoid, senyawa fenolik, asam amino, protein, karbohidrat, kardioglikosid, saponin, terpenoid dan steroid (Sowmya dkk, 2015). Penelitian yang dilakukan oleh (Ragasa dkk, 2014; Wurdianing dkk, 2014; Wijayanti dan Rahayuni,

2014)

Senyawa

bioaktif

yang

memiliki

efek

farmakologi

antihiperlipidemia adalah flavonoid, saponin, fitosterol dan stigmasterol. Senyawa bioaktif

flavonoid dan saponin bersifat sebagai antioksidan yang

berperan terhadap mekanisme perbaikan profil lipid. Menurut (Wilcox dkk, 2001 dalam Rofida dkk, 2015) flavonoid dapat mempengaruhi proses metabolisme kolesterol LDL untuk terikat pada reseptornya. LDL yang terikat pada reseptor akan termetabolisme menjadi kolesterol ester di jaringan. HDL akan mengikat kolesterol ester yang terdapat pada jaringan dan kemudian diekskresikan ke usus halus.

2

Penelitian yang dilakukan oleh Batra (2013) akar tumbuhan galing mengandung senyawa flavonoid berkhasiat sebagai antihiperlipidemia yang dapat memperbaiki

profil

lipid.

Namun

penggunaan

batang

galing

sebagai

antihipelipidemia belum dilakukan pengujian secara ilmiah. Berdasarkan uraian diatas, peneliti tertarik melakukan penelitian aktivitas antihiperlipidemia ekstrak etanol batang galing pada mencit jantan mengenai khasiat serta efek farmakologi terhadap kolesterol total, trigliserid, HDL dan LDL sehingga perlu dilakukan penelitian ini, diharapkan dapat memberikan pengetahuan mengenai efek pemberian

ekstrak etanol batang galing sebagai antihiperlipidemia dan

selanjutnya dapat dikembangkan lebih lanjut menjadi obat herbal terstandar dan fitofarmaka untuk mengatasi hiperlipidemia. A. Rumusan Masalah Masalah yang dikaji dalam penelitian ini berdasarkan latar belakang di atas antara lain sebagai berikut: 1. Senyawa bioaktif apakah yang terkandung dari ekstrak etanol batang galing ? 2. Bagaimana efek pemberian ekstrak etanol batang galing terhadap penurunan kadar kolesterol total pada mencit ? 3. Bagaimana efek pemberian ekstrak etanol batang galing terhadap penurunan kadar LDL kolesterol pada mencit ? 4. Bagaimana efek pemberian ekstrak etanol batang galing terhadap penurunan kadar trigliserid pada mencit ? 5. Bagaimana efek pemberian ekstrak etanol batang galing terhadap peningkatan kadar HDL kolesterol pada mencit ?

3

6. Berapa dosis ekstrak etanol batang galing yang paling efektif terhadap aktivitas perbaikan profil lipid pada mencit ? B. Tujuan Penelitian Tujuan yang ingin dicapai dalam penelitian ini adalah sebagai berikut: 1. Mengetahui senyawa bioaktif ekstrak etanol batang galing 2. Mengetahui efek pemberian ekstrak etanol batang galing terhadap penurunan kadar kolesterol total pada mencit. 3. Mengetahui efek pemberian ekstrak etanol batang galing terhadap penurunan kadar LDL kolesterol pada mencit. 4. Mengetahui efek pemberian ekstrak etanol batang galing terhadap penurunan kadar trigliserid pada mencit. 5. Mengetahui efek pemberian ekstrak

etanol

batang galing terhadap

peningkatan kadar HDL kolesterol pada mencit. 6. Mengetahui dosis ekstrak etanol batang galing yang paling efektif terhadap aktivitas perbaikan profil lipid pada mencit.

C. Manfaat Penelitian Manfaat penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi antara lain sebagai berikut : 1. Bagi diri sendiri, menambah ilmu pengetahuan dan keahlian dalam penelitian praklinis pada tumbuhan yang berpotensi untuk pengobatan menggunakan hewan uji. 2. Bagi

ilmu

pengetahuan,

dapat

memberikan

informasi

yang

dapat

dipertanggungjawabkan secara ilmiah mengenai efek dan manfaat ekstrak 4

etanol batang galing sebagai antihiperlipidemia sehingga diharapkan dapat memberikan kontribusi untuk mengatasi hiperlipidemia. 3. Bagi institusi, mewujudkan peranan Universitas Halu Oleo dalam mengkaji permasalahan yang terjadi di masyarakat. 4. Bagi masyarakat, memberikan informasi ilmiah kepada masyarakat terhadap tumbuhan galing sebagai antihiperlipidemia.

5

B AB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Tumbuhan Galing (Cayratia trifolia Domin.) Tumbuhan galing merupakan tumbuhan asli yang berasal dari India, Asia dan Australia. Di wilayah Inggris umumnya dikenal dengan nama Fox grape, di wilayah India dikenal dengan nama Amlabel dan Ramchana (Kumar dkk, 2011). Di wilayah Indonesia dikenal dengan nama galing, yang telah diidentifikasi menggunakan buku Flora of Java, volume I, II, III (spermatophyta Only) Backer dan Bathuizen Van de Brink (1963, 1965, 1968) (Restiani dkk, 2013). 1.

Klasifikasi Klasifikasi tumbuhan Galing (Cayratia trifolia Domin.) yaitu sebagai

berikut (Kumar dkk, 2012) : Regnum

: Plantae

Divisi

: Spermatophyta

Sub Divisi

: Angiospermae

Kelas

: Dicotyledoneae

Ordo

: Vitales

Famili

: Vitaceae

Genus

: Cayratia

Spesies

: Cayratia trifolia Domin.

2.

Morfologi

Gambar 1. Tumbuhan Galing (Dok. Pribadi, 2016)

Tumbuhan galing termasuk dalam jenis tumbuhan semak dan tumbuhan ini juga memiliki sulur. Batangya merambat, daun terdiri dari 3 selembaran

6

berwarna hijau, berbentuk bulat telur, bagian tepinya bergerigi kasar. Buah berbentuk agak bulat dan berwarna hijau ketika masih muda, ketika matang warnanya menjadi agak kehitaman. Tumbuhan ini memiliki bunga yang kecil berwarna putih kehijauan (Alfaida dkk, 2013). C. trifolia Domin adalah tumbuhan merambat pendek, batangnya berair, mampat dan padat. Daun berdaun tiga dengan panjang tangkai daun 2-3 cm. Daunnya berbentuk bulat telur kelonjong-lonjongan, panjang 2-8 cm, lebar 1,5-5 cm, dan tajam di bagian ujung. Bunganya kecil berwarna putih kehijauan sepanjang 2,5 mm. Buahnya berdaging, banyak mengandung air, berwarna ungu gelap atau hitam, hampir bulat dan berukuran sekitar 1 cm. Bijinya berbentuk segitiga kebulat-bulatan (Kumar dkk, 2012). 3.

Kandungan Kimia Seluruh tumbuhan galing telah dilaporkan mengandung steroid/terpenoid,

flavonoid dan tanin. Daunnya mengandung stilbenes (piceid, resveratrol, viniferin, ampelopsin) dan flavonoid seperti cyanidin. Batang, daun, akar dilaporkan memiliki asam hidrosianat dan delphinidin. Tumbuhan ini juga mengandung senyawa kaempferol, myricetin, quercetin, triterpen dan epifriedelanol (Sowmya dkk, 2015). Daun tumbuhan galing mengandung stilbenes seperti piceid, reveratrol, viniferin dan ampelopsin. Batang, daun dan akar dilaporkan memiliki asam hidrosianat dan delphinidin. Beberapa senyawa flavonoid seperti cyanidin juga teridentifikasi dalam daun.

Buah dan biji menunjukkan adanya senyawa

7

sianogen. Buahnya juga mengandung kalsium oksalat yang menyebabkan iritasi parah di daerah mulut (Kumar dkk, 2011). 4.

Khasiat dan Kegunaan Secara empiris, di Filipina rebusan daun atau jus segar tumbuhan galing

digunakan untuk menyembuhkan penyakit kudis, masyarakat Thailand dan Semenanjung Malaysia menggunakannya untuk meringankan peradangan dan demam tinggi, sedangkan di Jawa tumbuhan ini digunakan untuk mencegah kepala gatal dan ketombe, serta masyarakat maluku biasa memanfaatkannya sebagai sayuran. Akarnya digunakan sebagai penangkal terhadap gigitan ular, diabetes mellitus dan antihiperlipidemia. Daun galing memiliki aktivitas sebagai antibakteri yang disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus, sebagai penangkal larvasida terhadap Culex quinquefasciatus, sebagai antioksidan dan memiliki aktivitas sebagai anti-ulcerogenik (Ragasa dkk, 2014). Daunnya digunakan untuk menghentikan pendarahan luka. Kulit akar digunakan untuk mengurangi nyeri otot (Gupta dkk, 2012). Akarnya digunakan untuk mengurangi kondisi anemia, sakit perut dan penangkal gigitan ular. Akarnya juga dapat digunakan sebagai tapal pada bisul (Kumar dan Singh, 2012). Tumbuhan ekstrak etanol batang galing memiliki aktivitas penangkal radikal bebas yang tinggi yang mungkin disebabkan karena adanya alkaloid dan flavonoid

yang

memiliki

aktivitas

antivirus,

antibakteri,

antiprotozoal,

hipoglikemik, antikanker dan aktivitas diuretik (Singh dkk, 2012 ; Sowmya dkk, 2015).

8

B. Lipid Lipid adalah sekelompok senyawa heterogen yang terdiri dari lemak, minyak, steroid, malam (wax) dan senyawa terkait, yang berikatan lebih karena sifat fisiknya dari pada sifat kimianya. Lipid secara relatif tidak larut dalam air dan dapat larut dalam pelarut nonpolar (eter dan kloroform). Lipid dibagi menjadi lipid sederhana (lemak dan wax) lipid kompleks (fosfolipid, glikolipid, dan lipid kompleks lainnya), dan prekursor serta turunan lipid (asam lemak, gliserol, steroid, alkohol lain, aldehida, lemak, keton, hidrokarbon, vitamin larut lemak dan hormon (Murray, Granner dan Rodwell, 2009). Lemak (fat) yang diserap dari makanan dan lipid disintesis di hati dan jaringan adiposa harus diangkut ke berbagai jaringan dan organ untuk digunakan dan disimpan. Karena lipid tidak larut dalam air, maka untuk mengangkut lipid dalam plasma darah diperlukan penggabungan lipid nonpolar (trigliserida dan ester kolesterol) dengan lipid amfipatik (fosfolipid dan kolesterol) serta protein untuk menghasilkan lipoprotein yang dapat bercampur dengan air (Murray, Granner dan Rodwell, 2009).

Gambar 2 . Komponen lipid plasma (Muray dkk, 2009)

Lipid diangkut dalam plasma sebagai lipoprotein. Lipid plasma terdiri dari trigliserida (14%), fosfolipid (30%) kolesterol (14%) dan ester kolesterol (34%),

9

serta sedikit asam lemak rantai panjang tak teresterifikasi (asam lemak bebas atau free fatty acid) (4%) merupakan lemak plasma yang paling aktif secara metabolik (Murray, Granner dan Rodwell, 2009). 1. Lipoprotein Lipoprotein merupakan kompleks antara lipid dengan protein. Liporotein mengangkut lipid dari usus sebagai kilomikron dan dari hati sebagai lipoprotein berdensitas sangat rendah atau VLDL (Very Low Density Lipoprotein) ke sebagian jaringan untuk dioksidasi dan

jaringan adipose untuk disimpan.

Kelainan metabolisme lipoprotein dapat menyebabkan hipo/hiperlipoproteinemia. Terdapat empat kelompok utama lipoprotein plasma yang telah diketahui, penting secara fisiologis dan penting dalam diagnosa klinis meliputi : kilomikron, VLDL (Very Low Density Lipoprotein), LDL (Low Density Lipoprotein) dan HDL (High Density Lipoprotein) (Murray, Granner dan Rodwell, 2009). Tabel 1. Jenis-jennis Lipoprotein

Lipoprotein

Densitas mg/mL

ApoLipoprotein

Konstituen lemak utama

Sumber

Fungsi

Kilomikron

<0,940

B-48

Trigliserida

Usus

VLDL

0,940-1,004

B-100

Trigliserida

Hati

LDL

1,004-1,043

B-100

Kolesterol ester

Hati

HDL

1,043-1,210

A-I

Fosfolipid

Usus

Mengangkut lemak menuju hati Diuraikan mejadi LDL Mengangkut lemak kolesterol ke sel-sel tubuh mengangkut

Hati

kolesterol ke hati

10

a. Kilomikron Kilomikron adalah lipoprotein yang diproduksi oleh usus halus dan bertugas mengangkut terigliserida dari makanan ke dalam jaringan. Pembersihan kilomikron dari darah berlangsung sangat cepat, dengan waktu paruh kurang dari satu jam pada manusia. Asam-asam lemak dari triasilgliserol kilomikron terutama terdistribusi 80% ke jaringan adipose, jantung, otot dan 20% ke hati (Murray, Granner dan Rodwell, 2009). b. Lipoprotein Densitas sangat Rendah (VLDL) VLDL (Very Low Density Lipoprotein) atau pra-β-lipoprotein yang berasal dari hati yang membawa trigliserida ke jaringan ekstrahepatik. Reseptor VLDL berperan penting dalam distribusi asam lemak dari trigliserida VLDL ke adoposit dengan mengikat VLDL dan membawanya berkontak dengan lipoprotein lipase. Kilomikron dan VLDL dimetabolisme melalui hidrolisis triasilgliserolnya, dan sisa lipoprotein ini diabsorbsi oleh hati, tetapi sebagian sisa (IDL) yang berasal dari VLDL membentuk LDL yang diabsorbsi oleh hati ke jaringan lain melalui reseptor LDL (Murray, Granner dan Rodwell, 2009). Faktor-faktor yang meningkatkan sintesis trigliserida dan VLDL oleh hati meliputi, keadaan kenyang, mengkonsumsi induksi karbohidrat terutama sukrosa dan fruktosa yang meningkatkan lipogenesis dan esterifikasi asam lemak, tingginya kadar asam lemak bebas dalam darah, konsumsi alkohol dan adanya insulin yang tinggi dan kadar glucagon yang rendah sehingga meningkatkan sintesis dan esterifikasi asam lemajk serta menghambat oksidasinya (Murray, Granner dan Rodwell, 2009).

11

c. Lipoprotein Densitas Rendah (LDL) LDL (Low Density Lipoprotein) atau β-lipoprotein merupakan lipoprotein berdensitas rendah yang menggambarkan suatu tahap akhir metabolisme VLDL. LDL bertugas mendistribusikan kolesterol ke jaringan. Setelah di metabolisme menjadi IDL, VLDL kemudian dapat diserap oleh hati secara langsung melalui reseptor LDL (apo B-100 E) atau dapat diubah menjadi LDL. Hanya terdapat satu molekul apo B-100 di masing-masing partikel lipoprotein dan dipertahankan selama transformasi sehingga setiap partikel LDL berasal dari partikel VLDL prekursor. d. Lipoprotein Densitas Tinggi (HDL) HDL (High Density Lipoprotein) atau α-lipoprotein disintesis di hati dan di ekskresikan ke dalam usus. HDL berperan dalam tranpor kolesterol bebas keluar jaringan yang dikenal sebagai transport kolesterol balik (reverse Cholesterol Transport) pada metabolisme VLDL dan kilomikron. 2. Kolesterol Kolesterol terdapat di jaringan dan plasma sebagai kolesterol bebas atau dalam bentuk simpanan, yang berkaitan dengan asam lemak rantai panjang sebagai ester kolesteril. Kolesterol merupakan lipid amfipatik dan merupakan komponen struktural esensial pada membran dan lapisan luar lipoprotein plasma. Senyawa ini disintesis di banyak jaringan dari asetil-CoA dan sebagai prekursor semua steroid di dalam tubuh. Kolesterol adalah unsur pokok batu empedu dan sebagai faktor

utama pembentukan aterosklesrosis arteri-arteri vital, yang

menimbulkan penyakit pembuluh darah perifer, koroner dan serebrovaskuler.

12

Peningkatan kadar kolesterol yang terdapat di VLDL, IDL dan LDL menyebabkan aterosklerosis, sedangkan HDL dalam kadar tinggi memberikan efek protektif (Murray, Granner dan Rodwell, 2009). 3. Trigliserida Trigliserida (triasilgliserol) merupakan ester trihidrat alkohol gliserol dengan asam lemak dan merupakan bentuk simpanan utama asam lemak. Mono dan diasilgliserol, juga ditemukan di jaringan. Simpanan trigliserida di jaringan adipose terus menerus mengalami lipolisis (hidrolisis) dan reesterifikasi. Manfaat dari trigliserida adalah sebagai sumber energi dan dalam jumlah kecil untuk pembentukkan membran. Sintesis trigliserida terjadi di hati dan sejumlah kecil di jaringan adipose. Tahap biosintesis trigliserida berawal dari molekul asil-CoA yang dibentuk dari pengaktifan asam lemak oleh asil-CoA sintase, berikatan dengan gliserol 3-fosfat untuk membentuk fosfatidat (1,2-diasilgliserol fosfat) yaitu perkursor dalam biosintesis triasligliserol. Fosfatidat ini akan diubah oleh fosfatidat fosfohidrolase asiltrasferase (DGAT) menjadi 1,2 diasilgliserol dan kemudian menjadi triasilgliserol (Murray, Granner dan Rodwell, 2009). C. Hiperlipidemia 1. Definisi Hiperlipidemia atau hiperlipoproteinemia adalah gangguan metabolisme yang melibatkan peningkatan konsentrasi lipoprotein pada plasma. Hiperlipidemia merupakan suatu keadaan tingginya 3 konsentrasi lipid yang ditandai dengan meningkatnya konsentrasi trigliserida, LDL, dan kolesterol darah melebihi batas normal (pada manusia > 200 mg/dL) (Ganong, 2001). Faktor yang mempengaruhi

13

hiperlipidemia adalah obesitas, usia, kurang olahraga, stres, gangguan metabolisme, gangguan genetik, dan pola konsumsi makanan sehari-hari yang dapat meningkatkan konsentrasi lipid atau kolesterol. Makanan yang kaya akan kolesterol dan asam lemak jenuh dapat menekan pembentukan reseptor LDL, sehingga meningkatkan kolesterol di dalam darah (Grundy 1991). Tabel 2. Klasifikasi kolesterol total, kolesterol LDL, kolesterol HDL dan trigliserida menurut NCEP ATP III 2001 mg/dL. Koleterol Total <200 200-239 ≥240 Koleterol LDL <100 100-129 130-159 140-189 ≥190 Kolesterol HDL <40 ≥40 Trigliserida <150 150-199 200-499 ≥500

Optimal Diinginkan Tinggi Optimal Mendekati optimal Diinginkan Tinggi Sangat tinggi Rendah Tinggi Optimal Diinginkan Tinggi Sangat tinggi

(Sumber : Dipiro, 2005) Hiperlipidemia

dapat

meningkatkan

resiko

aterosklerosis,

yaitu

penyumbatan pembuluh darah arteri akibat penumpukan lipid pada dinding aorta. Jika aterosklerosis terjadi pada pembuluh darah aorta yang mensuplai O2 ke jantung, maka dapat menyebabkan penyakit jantung koroner (PJK). Faktor yang mempengaruhi patogenesis aterosklerosis adalah hiperkolesterolemia yang disebabkan oleh peningkatan konsentrasi lipoprotein densitas rendah (Schwart dkk, 1993 dalam Taher 2003).

14

Lemak yang berupa trigliserida atau kolesterol berasal dari bahan makanan masuk ke dalam tubuh dan dicerna dalam usus halus. Selanjutnya diangkut oleh kilomikron dan dihidrolisis oleh lipoprotein lipase menghasilkan asam lemak bebas. Hasil tersebut disimpan di jaringan adiposa dan otot. Akibat dari reaksi tersebut kilomikron akan mengecil dan disebut kilomikron sisa. Kilomikron sisa akan bersirkulasi membawa kolesterol ke hati, kemudian diserap oleh reseptor khusus melalui mekanisme spesific receptor-mediated endocytosis. Kilomikron dan kilomikron sisa merupakan lipoprotein yang mengangkut lemak dan kolesterol yang berasal dari makanan (eksogen). Selain berasal dari makanan, lemak, dan kolesterol juga dapat di sintesis oleh hati. Kolesterol dan trigliserida diangkut dari hati ke jaringan tubuh lainnya dengan cara hati memproduksi VLDL (very low density lipoprotein). Awalnya partikel VLDL mengangkut trigliserida dari hati ke jaringan adiposa. Seperti halnya kilomikron, selanjutnya VLDL mengalami hidrolisis oleh lipoprotein lipase dalam pembuluh darah dan menghasilkan IDL (Intermediate density lipoprotein), hidrolisis lebih lanjut menghasilkan LDL (low density lipoprotein). Lalu partikel LDL akan diendositosis oleh hepatosit setelah terlebih dahulu diikat oleh reseptor LDL (Voet dan Voet 1995). Reseptor LDL merupakan glikoprotein yang merentangkan membran sel dan daerah pengikatan B-100 terletak pada ujung terminal yang tersusun. LDL akan berikatan dengan reseptor dalam keadaan utuh melalui endositosis. Kemudian LDL dipecah di dalam lisosom yang melibatkan hidrolisis apoprotein dan ester kolesteril yang diikuti oleh translokasi kolesterol ke dalam sel. Reseptor

15

tersebut tidak dihancurkan tetapi kembali ke permukaan sel. Aliran masuk kolesterol ini menghambat kerja HMG-CoA sintase serta HMG-CoA reduktase dengan cara yang terkoordinasi, dan dengan menghambat sintesis kolesterol serta menstimulasi aktivitas ACAT dan mengurangi sintesis reseptor LDL. Peningkatan konsentrasi lipid peroksida dalam tubuh dapat disebabkan oleh kondisi hiperkolesterolemia. Saat kondisi tersebut jumlah LDL meningkat sehingga dapat memperbesar kemungkinan terjadinya oksidasi, sebab ketersediaan substrat yang dapat dioksidasi lebih banyak. Fungsi kolesterol salah satunya sebagai prekursor pembentukan asam empedu yang disintesis di dalam hati. Tahap pertama dari biosintesis asam empedu adalah reaksi 7α- hidroksilasi terhadap kolesterol yang dikatalisis oleh enzim mikrosomal, yaitu 7α-hidroksilase. Reaksi ini memerlukan oksigen, NADPH, dan sitokrom P-450 oksidase. Semakin besar konsentrasi kolestrol plasma dalam tubuh hiperkolesterolemia, maka semakin banyak asam empedu yang disintesis, sehingga semakin meningkat pula oksigen dan NADPH yang dibutuhkan serta peningkatan aktivitas sitokrom P-450 oksidase (Murray dkk, 2001). Sitokrom P-450 oksidase merupakan enzim yang berperan dalam memperantarai metabolisme retikulum endoplasmik yang menghasilkan radikal superoksida (O2-) (Dhaunsi dkk, 1992 dalam Wresdiyati 2005). Oleh sebab itu, semakin meningkatnya sitokrom P-450 oksidase, maka radikal bebas yang dihasilkan semakin meningkat pula. Jika produksi radikal bebas terjadi secara berlebihan maka enzim antioksidan dalam tubuh khususnya di organ hati seperti

16

superoksida dismutase (SOD) tidak mampu mengatasinya. Hal ini akan menimbulkan kondisi stres oksidatif, yaitu suatu keadaan yang dapat menyebabkan terjadinya beberapa kerusakan atau kelainan baik proses biokimia maupun fisiologi di dalam sel akibat dari proses peroksidasi lipid. Metabolisme kolesterol merupakan komponen terpenting membran sel pada hewan. Umumnya kebutuhan kolesterol sehari-hari dapat terpenuhi secara sempurna oleh tubuh melalui sintesis di dalam tubuh (endogen). Pada konsumsi makanan yang beraneka ragam, kurang lebih setengah dari kolesterol berasal dari biosintesis tubuh sendiri yang berlangsung di dalam usus, kulit, dan terutama dalam hati (kira-kira 50%), selebihnya kolesterol diambil dari bahan makanan (eksogen) 4 (Koolman, 2000). Pada manusia, secara keseluruhan kolesterol yang digunakan setiap harinya kurang lebih 1 gram (Koolman, 2000). Biosintesis kolesterol dimulai dengan asetil-CoA. Biosintesis kolesterol dapat dibagi menjadi empat bagian, antara lain pembentukan mevalonat, pembentukan isopentenil difosfat, pembentukan skualen, dan pembentukan kolesterol (Koolman, 2000). Selain itu, kolesterol yang berasal dari makanan akan dialirkan melalui darah. Jika kolesterol dihidrolisis lebih lanjut maka akan menjadi asam empedu dan garam-garamnya (dalam hati) dan menjadi hormon steroid (dalam kelenjar endokrin) (Marks dkk, 2000). Awalnya biosintesis kolesterol dimulai dari perubahan asetil CoA menjadi asetoasetil CoA kemudian berubah menjadi 3-hidroksi 3-metilglutaril-CoA (3-HMG-CoA). Peristiwa ini terjadi bukan di mitokondria melainkan pada retikulum endoplasma (Koolman, 2000).

17

Selanjutnya 3-HMG-CoA akan direduksi menjadi mevalonat dengan cara melepaskan CoA. Enzim yang berperan dalam tahap ini adalah HMG-CoA reduktase. Tahap selanjutnya, mevalonat akan didekarboksilasi menjadi isopentenil difosfat dengan menggunakan ATP (adenosin trifosfat). Dengan demikian akan dihasilkan komponen yang membentuk isoprenoid. Isopentenil difosfat akan dibentuk menjadi dimetilalil difosfat melalui isomerisasi. Kedua molekul C5 ini akan berkondensasi menjadi geranil difosfat dan melalui adisi satu isopentenil difosfat lainnya menjadi farnesil difosfat. Farnesil difosfat akan berubah menjadi skualen. Selanjutnya skualen dapat diubah bentuk menjadi siklik dan akan menghasilkan lanosterol. Kemudian langkah selanjutnya, lanosterol akan melepaskan gugus metil sebanyak tiga gugus secara oksidatif, sehingga akan terbentuk suatu produk akhir, yaitu kolesterol. Tahap lebih lanjut dari perombakan kolesterol atau katabolisme kolesterol akan menghasilkan asam empedu dan hormon steroid. Kolesterol memiliki sifat tidak larut dalam air. Oleh sebab itu, zat ini akan diangkut dalam darah sebagai komponen lipoprotein darah. Kolesterol dalam makanan diserap dari garam empedu ke dalam sel epitel usus. Kolesterol terkemas dalam kilomikron di usus dan dalam VLDL di hati (Mark dkk, 2000). Kilomikron di usus akan dibawa ke darah melalui limfe. Selanjutnya kilomikron akan berubah menjadi asam lemak dan gliserol dengan bantuan enzim lipoprotein lipase serta menghasilkan sisa kilomikron. Kilomikron sisa akan berikatan dengan reseptor di sel hati dan mengalami internalisasi melalui endositosis. Setelah dibentuk di hati akan berubah menjadi VLDL yang akan disekresikan ke dalam darah selanjutnya akan berubah menjadi IDL dan hidrolisis

18

lebih lanjut dari IDL akan menghasilkan LDL. LDL yang terbentuk akan menyediakan kolesterol bagi jaringan (Koolman, 2000). Jika terjadi kelebihan kolesterol di jaringan maka HDL akan membawa kembali ke hati. Obat Penurun Kolesterol Hipolipidemik adalah obat yang digunakan untuk menurunkan kadar lipid plasma (Syarif dkk, 2003). Tindakan menurunkan lipid plasma merupakan salah satu tindakan yang ditujukan untuk menurunkan risiko aterosklerosis. Obat-obatan penurun kolesterol yang dijual secara komersial sudah banyak jenisnya di pasaran. Obat penurun kolesterol tersebut dapat dibagi menjadi empat golongan, yaitu a) resin pengikat empedu yang bekerja dengan cara mengikat asam empedu di usus dan meningkatkan pembuangan LDL dari aliran darah, contoh obat ini adalah kolesteramin dan kolestipal, b) penghambat sintesis lipoprotein yang bekerja dengan cara mengurangi kecepatan pembentukan VLDL dan meningkatkan HDL, contoh obat ini adalah niasin, c) penghambat HMG-CoA reduktase atau golongan statin yang bekerja dengan cara menghambat secara kompetitif enzim HMG-CoA reduktase, contoh obat ini adalah fluvastatin, lovastatin, pravastatin, simvastatin, dan atorvastatin, yang terakhir d) derivat asam fibrat yang bekerja dengan cara meningkatkan aktivitas lipoprotein lipase, contoh obat ini adalah siprofibrat, simfibrat, bezafibrat, klofibrat, fenofibrat, dan gemfibrosil. 2. Terapi Farmakologi Hiperlipidemia Obat-obat penurun lipid dapat dikelompokkan menjadi agen yang menurunkan sintesis VLDL dan LDL, agen yang meningkatkan klirens VLDL,

19

agen yang meningkatkan katabolisme LDL, agen yang menurunkan absorbsi kolesterol, agen yang meningkatkan HDL atau beberapa kombinasi. Tabel 3. Efek-efek terapi obat pada lipid dan lipoprotein

Kolestiramin,

Mekanisme Kerja ↑Katabolisme LDL

Kolestipol

↓Absorbsi kolesterol

Obat

Efek pada lipid ↓ kolesterol

Efek pada Lipoprotein ↓ LDL ↑ VLDL

Kolsevelam

Niasin

↓Sintesis LDL

↓Trigliserida dan kolesterol

↓VLDL ↓LDL ↑ HD

Probukol Gemfibrozil

↑ Klirens LDL ↑ Klirens VLDL

↓ kolesterol ↓Trigliserida

↓ LDL ↓ HDL ↓VLDL

Klorfibrat

↓Sintesis VLDL

dan kolesterol

↓LDL

↓Klirens VLDL menghambat sintesis LDL

↓ kolesterol

↑ HDL ↓LDL

Menghambat sintesis absorbsi kolesterol

↓ kolesterol

↓LDL

Fenofibrat Lovastatin Pravastatin Flufastatin Atorvastatin Resuvastatin Ezetimibe

3.

Keterangan Bermasalah dengan kepatuhan pasien , mengikat kebanyakan obat-obat asam yang diberikan sebagai tambahan Bermasalah dengan kepatuhan pasien , baik dikombinasikan dengan resin dan asam empedu Klorfibrat menyebabkan batu empedu koleterol -

Beberapa Efek samping dan efek tambahan pada obat lain

Atorvastatin Obat golongan statin ini dapat menurunkan biosintesis kolesterol dengan

cara menghambat secara kompetitif enzim HMG-CoA reduktase. Enzim ini merupakan enzim yang mengkatalisis konversi HMG-CoA menjadi mevalonat, suatu prekursor sterol, termasuk kolesterol. Efek tersebut dapat meningkatkan katabolisme fraksional LDL maupun ekstraksi prekursor LDL oleh hati, sehingga mengurangi simpanan LDL plasma. Oleh sebab itu, ekstraksi lintas pertama oleh

20

hati dari obat tersebut cukup besar, maka efek utamanya terjadi di hati (Katzung 2002). Enzim HMG-CoA reduktase memperantarai langkah awal biosintesis sterol. Bentuk aktif penghambat reduktase merupakan analog struktural HMGCoA Analog

yang dibentuk oleh reduktase HMG-CoA dalam sintesis mevalonate. tersebut menyebabkan hambatan parsial pada enzim sehingga dapat

merusak sintesis isoprenoid semacam ubiquinone dan dolichol, dan prenylasi protein, namun belum diketahui apakah terbukti mempunyai aktifitas biologi yang bermakna (Katzung, 2002). Penghambat HMG-CoA reduktase menghambat sintesis kolesterol di hati dan hal ini akan menurunkan kadar LDL plasma. Hasilnya terjadi penurunan kadar kolesterol dan peningkatan reseptor LDL, sehingga kadar LDL di dalam sirkulasi menurun. Penurunan produksi LDL menyebabkan penghambatan sintesis VLDL di hati, yang merupakan prekursor LDL (Suyatna dan Handoko,1995). Efek tersebut meningkatkan baik kecepatan katabolisme fraksional LDL sehingga mengurangi simpanan LDL plasma. Penurunan yang sedikit dalam trigliserida plasma dan sedikit peningkatan kadar HDL terjadi pula selama pengobatan (Katzung, 2003). Rupanya obat ini melangsungkan efeknya dalam menurunkan kolesterol dengan cara merangsang peningkatkan regulasi reseptor LDL di hati dan meningkatkan uptake (serapan) LDL, sehingga katabolisme kolesterol terjadi semakin banyak. Dengan demikian maka obat

ini dapat menurunkan kadar

kolesterol (LDL) (Suyatna dan Handoko,1995 dan Katzung, 2003).

21

Atorvastatin merupakan salah satu obat antihiperlipidemia yang paling efektif dan aman. Obat ini terutama efektif dalam menurunkan kolesterol. Atorvastatin menurunkan kadar kolesterol plasma dan lipoprotein dengan menghambat HMG-CoA reduktase dan sintesis kolesterol pada hati dengan meningkatkan jumlah reseptor LDL hati pada permukaan sel untuk memperbaiki pengambilan dan katabolisme LDL (Ganiswara 2009). 4. Induksi Hiperlipidemia Induksi hiperlipidemia dapat dilakukan secara endogen dan eksogen. Induksi eksogen dilakukan dengan memberikan propiltiurasi yang merupakan antitiroid golongan tionamid. Hormon tiroid berperan dalam mengaktifkan hormon sensitif lipase yang berjanggungjawab terhadap proses katabolisme lipid dalam tubuh sehingga hewan hipertiroid laju katabolisme lipid di dalam tubuh menjadi

tinggi.

Karena propiltiurasil

merupakan antitiroid

yang dapat

menurunkan kadar hormon tiroid, maka pemberian propiltiurasil pada hewan uji dapat menurunkan hormon tiroid sehingga terjadi penurunan laju katabolisme lipid (Tisnadjaja dkk, 2010). Sedangkan induksi secara eksogen dilakukan dengan pemberian makanan diet lemak tinggi kolesterol dan lemak yang terdiri dari campuran kuning telur, sukrosa dan lemak hewani. Kuning telur dan lemak hewan yang merupakan sumber lemak dan kolesterol hewani, sedangkan mengkonsumsi karbohidrat terutama sukrosa dan fruktosa yang meningkatkan lipogenesis dan esterifikasi asam lemak dan memicu peningkatan sintesis trigliserida dan VLDL (Juheini, 2002 dan Dipiro, 2005).

22

D. Metabolit Sekunder Metabolit sekunder adalah senyawa metabolit turunan dari metabolit primer melalui berbagai jalur metabolisme yang disesuaikan dengan tujuan dan kondisi lingkungan tumbuhan tersebut tumbuh (Sahidin, 2012). Menurut Wink (2010) metaboli sekunder berfungsi sebagai molekul isyarat untuk menarik rangsangan serangga penyerbuk, hewan penyebar benih dan sebagai senyawa isyarat dalam hubungan tumbuhan-tumbuhan, tumbuhan-binatang, tumbuhanmikroorganisme. Dengan kata lain, metabolit sekunder berperan dalam pertahanan diri tumbuhan dari lingkungan maupun serangan organisme lain (Sahidin, 2012). 1. Flavonoid Flavonoid adalah salah satu golongan senyawa metabolit sekunder yang banyak terdapat pada tumbuh-tumbuhan. Kandungan senyawa flavonoid relatif sangat rendah, yaitu sekitar 0,25%. Senyawa-senyawa tersebut pada umumnya dalam keadaan terikat/konjugasi dengan senyawa gula. Senyawa flavonoid terdistribusi secara luas pada bagian-bagian tumbuhan, baik pada akar, batang, daun, maupun buah. Senyawa flavonoid untuk obat mula-mula diperkenalkan oleh seorang Amerika bernama Gyorgy

yang sekaligus sebagai pionir (pembuka)

penggunaan senyawa tersebut di bidang terapeutik. Gyorgy menemukan senyawa yang disebut sebagai senyawa bioflavonoids atau vitamin P yang dinyatakan sebagai antihemorrhage (pendarahan) (Mardisadora, 2010).

23

OH

O

O

Gambar 3. Struktur flavonoid (Robinson, 1995) Senyawa flavonoid adalah kelompok senyawa fenol terbesar yang ditemukan di alam. Senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu, biru dan kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan. Golongan flavonoid memiliki kerangka karbon yang terdiri atas dua cincin benzen tersubstitusi yang disambungkan oleh rantai alifatik tiga karbon. Pengelompokkan flavonoid dibedakan berdasarkan cincin heterosiklik-oksigen tambahan dan gugus hidroksil yang tersebar menurut pola yang berlainan pada rantai C3, sesuai struktur kimianya yang termasuk flavonoid yaitu flavanol, flavon, flavanon, katekin, antosianidin dan kalkon (Robinson, 1995). 2. Alkaloid Alkaloid adalah suatu golongan senyawa organik yang terbanyak ditemukan di alam. Hampir seluruh senyawa alkaloid berasal dari tumbuhtumbuhan dan tersebar luas dalam berbagai jenis tumbuhan. Semua alkaloid mengandung paling sedikit satu atom nitrogen yang bersifat basa dan sebagian besar atom nitrogen ini merupakan bagian dari cincin heterosiklik (Lenny, 2005). Penggolongan alkaloid digolongkan berdasarkan sistem cincinnya (Robinson, 1995).

24

N H

Gambar 4. Struktur inti alkaloid (Robinson, 1995) Alkaloid umumnya mencakup senyawa-senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen. Alkaloid adalah suatu golongan senyawa organik yang terbanyak ditemukan di alam. Hampir seluruh alkaloid berasal dari tumbuh-tumbuhan dan tersebar luas dalam berbagai jenis tumbuhan tingkat tinggi. 3. Saponin Saponin berasal dari bahasa latin sapo yang berarti sabun, karena sifatnya menyerupai sabun. Saponin adalah senyawa aktif yang kuat, menimbulkan busa jika dikocok dengan air dan pada konsentrasi yang rendah sering menyebabkan hemolisis sel darah merah. Saponin juga berpotensi sebagai anti mikroba, dapat digunakan sebagai bahan baku sintesis hormon steroid. Dua jenis saponin yang dikenal yaitu glikosida triterpenoid alkohol dan glikosida struktur steroid. Aglikonnya disebut sapogenin, diperoleh dengan hidrolisis dengan asam atau menggunakan enzim (Robinson, 1995).

O

Gambar 5. Struktur saponin (Robinson, 1995)

25

4. Tanin Tanin merupakan golongan senyawa fenol yang terdapat pada daun, buah yang belum matang, merupakan golongan senyawa aktif pada tumbuhan. Secara kimia tanin dibagi menjadi dua golongan, yaitu tanin terkondensasi atau tanin katekin dan tanin terhidrolisis (Robinson, 1995).

O

n

Gambar 6. Struktur senyawa tanin (Sahidin, 2012) E. Metode Ekstraksi Ekstraksi merupakan proses penarikan atau pemisahan komponen atau zat aktif suatu simplisia dengan menggunakan pelarut tertentu (Harborne, 1987). Pemilihan pelarut dan metode ekstraksi akan mempengaruhi hasil kandungan senyawa metabolit sekunder yang dapat terekstraksi. Pemilihan pelarut ekstraksi umumnya mengunakan prinsip like dissolves like, dimana senyawa yang nonpolar akan larut dalam pelarut non polar sedangkan senyawa yang polar akan larut pada pelarut polar (Seidel, 2008). Tujuan ekstraksi adalah untuk menarik komponen-komponen kimia yang terdapat dalam suatu sampel dengan menggunakan pelarut tertentu (Harborne, 1987). Hasil ekstraksi diperoleh ekstrak. Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani dengan menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir

26

semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI, 1995). Ekstrak dikelompokkan atas dasar sifatnya, yaitu (Voight, 1995): 1. Ekstrak kental adalah sediaan yang dilihat dalam keadaan dingin dan tidak dapat dituang. Kandungan airnya berjumlah sampai 30%. Tingginya kandungan air menyebabkan ketidakstabilan sediaan obat karena cemaran bakteri. 2. Ekstrak kering adalah sediaan yang memiliki konsistensi kering dan mudah dituang, sebaliknya memiliki kandungan lembab tidak lebih dari 5%. 3. Ekstrak cair, ekstrak yang dibuat sedemikiannya sehingga 1 bagian simplisia sesuai dengan 2 bagian pelarut. Proses ekstraksi dapat melalui tahap menjadi: pembuatan serbuk, pembasahan, penyarian, dan pemekatan. Sistem pelarut yang digunakan dalam ekstraksi harus dipilih berdasarkan kemampuannya dalam melarutkan jumlah yang maksimum dari zat aktif dan yang seminimum mungkin bagi unsur yang tidak diinginkan (Depkes RI, 2000). Beberapa metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut yaitu (Depkes RI, 2000): 1. Cara dingin a. Maserasi Maserasi adalah proses perendaman simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar).

27

b. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetasan/penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan. 2. Cara panas a. Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna. b. Soxhlet Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang sesuai umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin baik. c. Digesti Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50oC.

28

d. Infusa

Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 94-98oC) selama waktu tertentu (15-20 menit). e. Dekok Proses penyarian dengan metoda ini hampir sama dengan infusa, perbedaanya terletak pada lamanya waktu pemanasan yang digunakan. Dekokta membutuhkan waktu pemanasan yang lebih lama dibanding metoda infusa, yaitu 30 menit dihitung setelah suhu mencapai 90oC. Metoda ini jarang digunakan karena proses penyarian kurang sempurna dan tidak dapat digunakan untuk mengekstraksi senyawa yang termolabil. F. Skrining Fitokimia Skrining fitokimia merupakan pengujian kandungan senyawa-senyawa di dalam tumbuhan. Tumbuhan umumnya mengandung senyawa bioaktif dalam bentuk metabolit sekunder seperti flavonoid, tanin, alkaloid, terpenoid, steroid, saponin, dan lain-lain. Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa kimia yang umumnya mempunyai kemampuan bioaktivitas dan berfungsi sebagai pelindung tumbuhan tersebut dari gangguan penyakit hama untuk tumbuhan itu sendiri atau lingkungannya (Lenny, 2005) Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan metode kromatografi yang paling sering digunakan untuk analisis fitokimia. Teknik pemisahan yang didasarkan atas berpedaan distribusi dari komponen-komponen campuaran tersebut diantara dua fase, yaitu fase gerak dan fase diam. Fase gerak akan

29

membawa zat terlarut melalui media hingga terpisah dari zat terlarut lainnya (Harmita, 2004). Dalam penelitian dan pengembangan kimia tumbuhan, KLT dapat digunakan dalam menentukkan pelarut yang optimum untuk ekstraksi, memisahkan ekstrak kasar tumbuhan tanpa pemurnian terlebih dahulu, mengidentifikasi senyawa yang diketahui dan tidak diketahui serta memilih senyawa yang aktif secara biologi (Waksmunda dkk, 2008) KLT dapat mengandung indikator fluorosensi yang ditambahkan untuk membantu penampakan bercak tak berwarna pada lapisan yang telah dikembangkan. Lapisan yang mengandung indikator fluorosensi akan berpendar jika disinari pada panjang gelombang 254 nm dan 344 nm (Gritter, 1991). 1. Fase diam Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30 µm. Semakin kecil ukuran rata- rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensi dan resolusinya. Penjerap yang paling sering digunakan adalah silika, alumina dan serbuk selulosa, mekanisme utama pada KLT adalah adsorpsi dan partisi (Ganjar dan Rohman, 2007). 2. Fase gerak Fase gerak pada KLT yang paling sederhana ialah campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak : a. Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT

30

merupakan teknik yang sensitif. b. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan. c. Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silika gel, polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solute yang berarti juga menentukan nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzene akan meningkatkan harga Rf secara signifikan. d. Solut-solut ionik dan solut-solut polar lebih baik digunakan campuran pelarut sebagai fase geraknya, seperti campuran air dan metanol dengan perbandingan tertentu. Penambahan sedikit asam etanoat atau ammonia masing-masing akan meningkatkan solut-solut yang bersifat basa dan asam. 3. Penotolan sampel Pemisahan KLT yang optimal akan diperoleh jika menotolkan sampel dengan ukuran bercak sekecil dan sesempit mungin. Jika sampel digunakan terlalu banyak maka akan menurunkan resolusi (Gandjar dan Rohman, 2007). 4. Pengembangan Bila

sampel

telah

ditotolkan

maka

tahap

selanjutnya

adalah

mengembangkan sampel dalam bejana kromatografi yang sebelumnya telah dijenuhi dengan uap fase gerak. Tepi bagian bawah lempeng tipis yang telah ditotoli sampel dicelupkan kedalam fase gerak kurang lebih 0,5-1 cm. Tinggi fase gerak dalam bejana harus dibawah lempeng yang telah berisi totolan sampel. Bejana kromatografi harus tertutup rapat dan sedapat mungkin volume fase gerak

31

sedikit mungkin akan tetapi harus mampu mengelusi lempeng sampai ketinggian lempeng yang telah ditentukan, untuk melakukan penjenuhan fase gerak biasanya bejana dilapisi dengan kertas saring . Jika fase gerak telah mencapai ujung dari kertas saring, maka dapat dikatakan bahwa fase gerak telah jenuh. 5. Deteksi Deteksi bercak pada KLT dapat dilakukan secara kimia dan fisika. Cara kimia yang biasa digunakan adalah dengan mereaksikan bercak dengan suatu pereaksi melalui cara penyemprotan sehingga bercak menjadi jelas. Cara fisika yang dapat digunakan untuk menampakkan bercak adalah dengan cara pencacahan radioaktif dan fluorosensi sinar

ultraviolet.

Fluorosensi sinar

ultraviolet terutama untuk senyawa yang dapat berfluorosensi, membuat bercak akan terlihat jelas. Jika senyawa tidak dapat berfluorosensi maka bahan penyerapnya diberi indikator yang berfluorosensi (Gandjar dan Rohman, 2007). G. Hewan Uji Mencit (Mus musculus) sering digunakan sebagai subjek penelitian biomedis, penelitian dan pendidikan. Diantara spesies hewan uji lainnya, mencitlah yang paling banyak digunakan untuk tujuan penelitian medis (40-80%) (Kusumawati, 2004). Hal tersebut karena kelengkapan organ, kebutuhan nutrisi, metabolisme dan biokimianya cukup dekat dengan manusia (Hariadi, 2012). Mencit merupakan hewan yang paling umum digunakan pada penelitian laboratorium sebagai hewan uji percobaan, yaitu sekitar 40-80%. Mencit memiliki banyak keunggulan sebagai hewan percobaan, yaitu siklus hidup yang relatif pendek, jumlah anak setiap kelahiran banyak, dan terdapat kemiripan sistem

32

fisiologi tubuh dengan manusia (Moriwaki, 1994). Mencit putih memiliki bulu pendek halus berwarna putih serta ekor berwarna kemerahan dengan ukuran lebih panjang dari pada badan dan kepala. Berat badan bervariasi, tetapi umumnya pada umur empat minggu berat badan mencapai 18-20 g (Nafiu, 1994). Menurut Arrington, (1972) klasifikasi dari mencit adalah sebagai berikut: Kingdom

: Animalia

Phylum

: Chordata

Class

: Mamalia

Ordo

: Rodentia

Family

: Muridae

Genus

: Mus

Species

: Mus musculus L.

Gambar 7. Mus musculus L.

33

Tabel 4. Data biologis Mencit (Mus muculus ) Kriteria

Nilai

Berat Badan Dewasa : Jantan

20-30 g

Betina

25-45 g

Berat lahir

0,5-1,5 g

Temperature tubuh

34,4-38oC

Harapan hidup

1,5-3 tahun

Konsumsi makanan

15g/100g/hari

Konsumsi air

15 ml/100g/hari

Mulai dikawinkan : Jantan

50 hari

Betina

50-40 hari

Siklus birahi

4-5 hari

Lama hamil

19-21 hari

Jumlah anak perkelahiran

10-12 ekor

Umur sapih

21-28 hari

Produksi anak

8/bulan

Penggunaan oksigen

1,43-28 hari

Detak jantung

325-780/menit

Volume darah

74-80 ml/kg BB

Tekanan darah

113-148/81-104 mmHg

Butir darah merah

7,0 12,5 × 105 mm3

Hematokrit

39-49 %

Hemoglobin

10,2-14,4 mg/dl

Glukosa dalam darah

42-175 mg/dl

Kolesterol serum

24,0-82,4 mg/100 ml

(Sumber : Pramono dan Malole : 1989)

34

H. Kerangka Konsep Antihiperlipidemia

Bahan Alam Batang galing dilaporkan mengandung beberapa senyawa bioaktif antara lain flavonoid dan saponin (Sowmya dkk, 2015) Skrinning fitokimia

Senyawa Sintesis Atorvastatin

Tumbuhan galing (Cayratia trifolia Domin.)

Ekstrak etanol batang galing Cayratia trifolia Domin.

Statin adalan obat penurun lipid yang paling efektif untuk menurunkan kolesterol LDL dengan menghambat kerja HMG-CoA Reduktase (PERKI, 2013).

Senyawa bioaktif flavonoid dan saponin berperan terhadap mekanisme perbaikan profil lipid (Wurdianing dkk, 2014).

Photometer Efek Antihiperlipidemia Kolesterol total

Trigliserida

HDL

LDL

ANOVA .

: Variabel bebas : Variabel terikat : Senyawa pembanding

Gambar 8 . Kerangka Konsep 35

BAB III METODE PENELITIAN

A. Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian skrining fitokimia dilakukan di Laboratorium Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo dan penelitian antihiperlipidemia dilakukan di Rumah Sakit Palang Merah Indonesia (PMI) Kendari pada bulan April - Juni 2016.

B. Jenis Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan mengukur pengaruh ekstrak etanol batang galing (C. trifolia Domin.) terhadap penurunan kadar kolesterol, kadar trigliserida, kadar LDL dan Penigkatan HDL.

C. Bahan Penelitian Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah batang galing (C. trifolia Domin.), Atorvastatin (Generik®), Propiltiurasil (Generik®) , mencit jantan (Mus musculus) berat 20-30 gram, etanol 96%, aquades, Na-CMC 0,5 %, pakan mencit,

plat KLT GF254 (Merck®), N-Heksan (Merck®), etil asetat

(Merck®), methanol (Merck®), amoniak (Merck®), pereaksi Dragendorff, pereaksi Lieberman-Buchard, FeCl3 (Merck®) , H2SO4 (Merck®), kloroform (Merck®), EDTA, aluminium foil (Lispap Rayasentosa®), kertas saring, makanan diet lemak tinggi (MDLT) yang terdiri dari lemak sapi (RPH) dan kuning telur (Ras) dan sukrosa (Merck®) EDTA, reagen kit kolesterol (Human), reagen kit trigliserida

36

(Human), reagen kit HDL (Human), reagen standar kolesterol (Human), reagen standar trigliserida (Human), reagen standar HDL (Human). D. Alat Penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu timbangan analitik (Precisa XB 220A®), kandang mencit, botol minum mencit, pencacah elektrik (Miyako®), kain hitam, gunting bahan, toples maserasi, penguap vakum/vacum rotary evaporator (IKA-Werke RV 05 Germany®), water bath, gelas ukur (Pyrex®), gelas kimia (Pyrex®), spatula, corong, pinset, cawan porselin, spoit, kanula (Sonde), pipet tetes, botol flakon/vial, photometer 5010V5+, kuvet (Plastibrand), tabung ependorf, sentrifuge, chamber, pipa kapiler (Laboratory Glasswarwe Germany®), chamber. E. Variabel Variabel dalam penelitian ini terdiri atas dua variabel yaitu variabel bebas dan variabel terikat: 1. Variabel Bebas Variabel bebas dalam penelitian ini adalah adalah pemberian dosis ekstrak etanol batang galing. 2. Variabel Terikat Variabel terikat dalam penelitian ini adalah efek penurunan kadar kolesterol total, kadar Trigliserida, kadar LDL serta peningkatan kadar HDL pada mencit hiperlipidemia setelah diberikan ekstrak etanol batang galing selama 1 minggu.

37

F. Defenisi Operasional Defenisi operasional dalam penelitian ini adalah : 1.

Ekstrak etanol batang galing (C. trifolia Domin.) yang dimaksud dalam penelitian ini adalah ekstrak kental yang diperoleh dengan mengekstrak senyawa bioaktif batang galing (C. trifolia Domin.) menggunakan pelarut etanol dengan metode maserasi,

yang kemudian diuapkan dengan

menggunakan rotary vacum evaporator dan water bath. 2.

Skrining

fitokimia

merupakan

metode

yang

digunakan

untuk

mengidentifikasi golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol batang galing (C. trifolia Domin.) 3.

Uji antihiperlipidemia merupakan uji yang dilakukan untuk melihat penurunan kadar kolesterol total, kadar trigliserida, kadar LDL serta peningkatan kadar HDL setelah pemberian ekstrak etanol batang galing (C. trifolia Domin.) pada hewan uji dengan waktu dan dosis yang ditentukan.

4.

Mencit (Mus musculus) merupakan hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini.

G. Prosedur Penelitian 1. Determinasi Tumbuhan Determinasi yaitu untuk mencocokkan suatu tumbuhan dengan tumbuhan lain yang sudah dikenal sebelumnya untuk mendeterminasi tumbuhan dengan mempelajari sifat morfologi tumbuhan tersebut (seperti posisi, bentuk, ukuran, dan jumlah bagian daun, bunga, buah dan lain-lainnya (Tjitrosoepomo, 1993).

38

Determinasi dilakukan di Laboratorium Program

Studi Biologi Fakultas

Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Halu Oleo Kendari. 2. Preparasi sampel Sampel batang galing diperoleh di jalan Latsitarda Kec. Poasia, Andonohu Kota Kendari Provinsi Sulawesi Tenggara. Sampel batang tumbuhan yang telah diambil dipisahkan dari daun dan bersihkan dengan air menjadi bentuk yang

mengalir, dirajang

lebih kecil dengan ukuran 2-4 cm dan dikeringkan

mengunakan kain berwarna hitam dibawah sinar matahari dengan tujuan agar tidak terjadi degradasi sehingga dapat menyebabkan hilang dan rusaknya senyawa bioaktif dari sampel. Setelah kering sampel dihaluskan mengunakan mesin pencacah

menjadi serbuk halus. Serbuk yang diperoleh tersebut kemudian

ditimbang dan disimpan dalam wadah kaca (toples kaca) untuk pengerjaan selanjutnya. 3. Ekstraksi Metode ekstraksi yang digunakan yaitu menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96 %. Serbuk batang galing dimasukkan ke dalam wadah tertutup dan direndam dengan menggunakan pelarut etanol. Pemisahan residu dan filtrat dilakukan setiap 3 x 24 jam dengan penggantian pelarut yang sama. Filtrat dikumpulkan dan dipekatkan dengan menggunakan vacum rotary evaporator pada suhu 50oC hingga diperoleh ekstrak kental etanol batang galing. 4. Skirining Fitokimia Skrining fitokimia KLT dilakukan dengan menggunakan plat silika gel GF254 dengan masing-masing plat beukuran 1 × 10 cm2. Ekstrak batang galing

39

ditotolkan pada jarak ± 1 cm dari tepi bawah plat dengan menggunakan pipa kapiler kemudian dikeringkan dan dielusi dengan masing-masing fase geraknya. Setelah gerakan fase gerak sampai pada garis batas, elusi dihentikan. Noda-noda pada permukaan plat diperiksa dibawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 344 nm, kemudian diamati pada masing-masing hasil nodanya. Adapaun pengembang dan reagen penguji masing-masing golongan senyawa yang digunakan adalah sebagai berikut (Harborne, 1987). a. Golongan alkaloid : pereaksi Dragendorff akan menunjukkan bercak coklat jingga berlatar belakang kuning. b. Golongan flavonoid : pereaksi yang digunakan amonia, hasil positif bila timbul noda berwarna hijau kuning terang, atau coklat pudar. c. Golongan tanin : pereaksi yang digunakan FeCl3 1%. Hasil positif tanin bila terjadi perubahan warna menghasilkan warna hijau kehitaman atau biru tua. d. Golongan saponin: pereaksi yang digunakan asam sulfat. Hasil positif jika timbul noda berwarna merah jambu sampai lembayung. e. Golongan terpenoid: pereaksi yang diguanakan lieberman-burchard. Jika timbul noda warna merah ungu atau ungu maka menunjukkan adanya senyawa terpenoid. 5. Pengujian Aktivitas Antihiperlipidemia a.

Penentuan jumlah dan pengelompokkan hewan uji Hewan uji dibagi menjadi 6 kelompok, pengelompokkan hewan uji

dilakukan secara acak lengkap dengan jumlah mengikuti rumus Federer tahun 1963 (Syam dkk, 2011) yaitu:

40

( n – 1 ) ( t – 1 ) ≥ 15 Ket:

n = banyaknya pengulangan tiap perlakuan/kelompok uji t = banyaknya perlakuan atau kelompok uji

(n - 1) (6 - 1) ≥ 15 (n - 1) (5) ≥ 15 (5n ≥ 15 + 5 n≥ n≥ 4 Sehingga jumlah minimum hewan uji yang digunakan ialah 4 ekor tiap kelompok. Pada percobaan ini digunakan 24 ekor mencit yang dibagi ke dalam 6 kelompok dapat dilihat pada tabel 5, masing-masing terdiri dari 4 ekor. Kelompok tersebut terdiri dari kelompok normal, kelompok negatif (induksi MDLT), kelompok positif dan kelompok dosis. Kelompok kontrol normal bertujuan untuk mengetahui kadar lipid plasma mencit yang tidak mengalami hiperlipidemia, sedangkan kontrol positif digunakan sebagai kelompok pembanding untuk melihat perbadingan pengaruh ekstrak dengan obat, yang telah diketahui efektif dalam menurunkan kadar lipid plasma. Kelompok dosis dibuat dalam 3 varian dosis untuk mengetahui dosis yang secara signifikan dapat menurunkan kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan meningkatkan HDL. b. Penyiapan hewan uji Hewan uji diaklimatisasi selama satu minggu dengan tujuan untuk mengadaptasikan hewan uji dengan lingkungannya yang baru dan mengurangi stres pada mencit yang dapat mempengaruhi metabolisme dan mengganggu

41

penelitian, setiap mencit diberi makan dan minum. Hewan dianggap sehat dengan ciri-ciri mata jernih, bulu tidak berdiri, warna putih bersih, aktif, tingkah laku normal dan mengalami penigkatan berat badan. Hewan uji yang dikelompokkan dan diberi perlakuan, juga dilakukan pengamatan berat badan dengan cara menimbang semua hewan uji pada setiap kelompok perlakuan. Pengamatan peningkatan berat badan dilakukan perminggu atau pada hari ke-7, ke-14, ke-21 dan 28. Pengelompokkan hewan uji setelah 1 minggu tahap adaptasi, kemudian secara acak 4 ekor mencit diambil untuk mewakili kelompok kontrol normal yang selanjutnya dilakukan pengambilan darah dan pengukuran kadar plasma dengan photometer, sisa 20 ekor mencit tersebut diberi induksi MDLT selama 14 minggu, pada hari ke-15 secara acak 4 ekor mencit diambil untuk mewakili kelompok kontrol negatif yang selanjutnya dilakukan pengambilan darah dan pengukuran kadar plasma dengan photometer, kemudian 16 ekor mencit dibagi 4 kelompok yaitu kelompok kontrol positif diberi atorvastatin, kelompok dosis I, dosis II dan dosis III diberi ekstrak etanol selama 7 hari, pada hari ke-8 dilakukan pengambilan darah dan pengkuran kadar plasma dengan photometer.

42

Tabel 5. Kelompok Perlakuan hewan uji Jumlah mencit (ekor)

No

Kelompok

1

Kontrol normal

2

Kontrol negatif (induksi MDLT)

Perlakuan

4

Diberikan makanan standar (pelet)

4

Diberikan penginduksi MDLT

Kontrol positif (Atorvastatin)

4

Diberikan penginduksi MDLT dan diberikan suspensi Atorvastatin 1,46 mg.

Dosis I 400 mg/kgBB

4

5

Dosis II 500 mg/kgBB

4

6

Dosis III 600 mg/kgBB

4

Diberikan pendinduksi MDLT dan diterpi dengan suspensi ekstrak etanol batang galing 400 mg/kg BB. Diberikan pendinduksi MDLT dan diterapi dengan suspensi ekstrak etanol batang galing 500 mg/kgBB. Diberikan pendinduksi MDLT dan diterapi dengan suspensi ekstrak etanol batang galing 600 mg/kg BB.

3

4

Berdasarkan

Tabel 5

kelompok kontrol normal diberikan makanan

standar (pelet), sedangkan kontrol negatif (induksi MDLT), kontrol positif, dosis I, II III diberikan Induksi MDLT selama 14 hari, pada hari ke 15 dilakukan pengambilan darah dan pengukuran plasma kontrol negatif (induksi MDLT), selanjutnya kontrol positif dan kelompok dosis diberikan ekstrak etanol batang galing selama 7 hari, pada hari ke 8 dilakukan pengambilan darah dan pengkuran plasma. c.

Penyiapan Bahan

i.

Pembuatan Suspensi Na CMC 0,5% Ditimbang Na-CMC sebanyak 0,125 g

ditambahkan 25 mL aquades

kedalam

gelas kimia,

diaduk sambil dipanaskan di atas hot

plate.

43

Didinginkan selama 15 menit hingga diperoleh massa yang transparan, lalu diaduk sampai homogen (Lampiran. 4 ) ii.

Pembuatan dosis ekstrak etanol batang galing Sediaan uji dibuat dengan mensuspensikan ekstrak uji kedalam Na-CMC

0,5 % dengan volume pemberian yang disesuaikan dengan berat badan hewan uji. Suspensi yang telah siap diberikan secara peroral ke hewan uji (Lampiran. 2) iii. Pembuatan Sediaan Pembanding Sediaan pembanding atorvastatin diberikan dalam bentuk suspensi Na CMC 0,5 % sesuai dosis oral efektif manusia 20 mg. Dosis pemberian atorvastatin pada mencit dikonversikan berdasarkan perhitungan konversi dosis. Faktor konversi dosis manusia ke mencit dengan berat badan 20 g adalah 1,46 mg. Suspensi yang telah siap diberikan seacara peroral ke hewan uji (Lampiran. 3) iv. Pembuatan

suspensi

makanan diet lemak tinggi

(MDLT) dan

propiltiurasil (PTU) Makanan Diet Lemak tinggi terdiri dari kuning telur 80% sebanyak 28,8 gram, sukrosa 15% sebanyak 5,4 gram, lemak hewan 5% sebanyak 1,8 gram dimasukkan kedalam lumpang kemudian diaduk homogen. Dosis PTU yang digunakan yaitu 25 mg. Dosis pemberian PTU pada mencit dikonversikan berdasarkan perhitungan konversi dosis. Faktor konversi dosis manusia ke mencit dengan berat badan 28 g adalah 1,82 mg. Suspensi yang telah siap diberikan secara peroral ke hewan uji (Lampiran. 1 )

44

v.

Pengambilan darah Pada akhir pelakuan, mencit diambil darahnya melalui vena aorta pada

bagian leher. Darah hewan uji yang diperoleh disentrifus

dan dipisahkan

plasmanya, selanjutnya dilakukan pengukuran kadar kolesterol total, LDL, trigliserida, dan HDL yang dilakukan menggunakan alat photometer. vi. Prosedur Pengukuran Kadar Kolesterol Total (Purwanti, 2012) Pengukuran kadar kolesterol darah pada mencit jantan dilakukan sesudah perlakuan. Pengukuran kadar kolesterol darah mencit menggunakan metode cholesterol oxidase–phenol (CHOD-PAP). Darah yang diperoleh dimasukkan ke dalam tabung yang berisi antiCoAgulan (EDTA), kemudian disentrifus selama 10 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Sebanyak 0,01 mL plasma dipipet dan direaksikan dengan reagen kolesterol sebanyak 1 mL lalu dikocok diinkubasi pada suhu ruang selama 10 menit sampai terbentuk warna merah muda. Standar dibuat dengan mencampurkan 0,01 standar kolesterol dan

1 mL reagen kit. Blangko

dibuat dari 1 mL reagen kit ditambahkan dengan akuades 0,01 mL, serapan sampel diukur dengan photometer pada panjang gelombang 246 nm. Tabel 6. Jumlah akuades, sampel plasma, standar kolesterol total dan reagen kit kolesterol total yang dibutuhkan untuk pengukuran kadar kolesterol total. Bahan Akuades sampel plasma Standar kolesterol total Larutan Reagen kit Kolesterol total

Balanko (mL) 0,01 -

Standar (mL) 0,01

sampel (mL) 0,01 -

1

1

1

45

vii. Prosedur Pengukuran Kadar trigliserida (Purwanti, 2012) Pengukuran kadar trigliserida pada mencit jantan dilakukan sesudah perlakuan. Pemeriksaan kadar trigliserida menggunakan metode glycerol-3phosfate oxidase-phenol aminophenazone (GPO-PAP). Metode ini menggunakan prinsip oksidasi dan hidrolisis enzimatis. Darah yang diperoleh dimasukkan ke dalam tabung yang berisi antikoagulan (EDTA), kemudian disentrifus selama 10 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Sebanyak 0,01 mL plasma direaksikan dengan reagen trigliserida sebanyak 1 mL lalu dikocok dan diinkubasi pada suhu ruang selama 10 menit sampai terbentuk warna merah muda. Reagen trigliserida yang digunakan ada dua macam, yang pertama adalah reagen enzim dan yang kedua adalah reagen standar. Standar dibuat dengan mencampurkan 0,01 mL standar trigliserida dan 1 mL reagen kit trigliserida. Blanko dibuat dari 1 mL reagen kit pereaksi tanpa penambahan apapun. Serapan sampel diukur dengan photometer pada panjang gelombang 246 nm. Tabel 7. Jumlah akuades, sampel plasma, standar trigliserida dan reagen kit trigliserida yang dibutuhkan untuk pengukuran kadar kolesterol total. Bahan Akuades sampel plasma Standar kolesterol total Larutan Reagen kit trigliserida

Balanko (mL) 0,01 -

Standar (mL) 0,01

Sampel (mL) 0,01 -

1

1

1

viii. Prosedur Pengukuran Kadar HDL (Purwanti, 2012) Pengukuran kadar HDL terlebih dahulu dengan cara sampel dan standar HDL masing-masing dipipet 0,2 mL ke dalam mikrotube dan ditambahkan 0,5 mL reagen kit HDL, di inkubasi selama 10 menit pada temperatur

ruang,

46

kemudian disentrifus, supernatan jernih dipipet dan dilakukan penetapan kadar HDL menggunkan reagen kit kolesterol total. Sampel diukur dengan photometer pada panjang gelombang 246 nm. Tabel 8. Jumlah akuades, standar HDL, sampel plasma dan reagen kit HDL yang dibutuhkan untuk pengukuran kadar kolesterol total. Bahan Akuades sampel plasma Standar kolesterol total Larutan Reagen kit

Balanko (mL) 0,01 -

Standar (mL) 0,01 -

Sampel (mL) 0,01

1

1

1

trigliserida

ix. Penetapan Kadar Kolesterol LDL (MCPherson and pincus, 2001) Pengukuran kadar kolesterol LDL dihitung dengan rumus : Kadar LDL (mg/dL) = Kolesterol total

- HDL

H. Analisis Data Metode analisis data yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metode Analysis of Variance (ANOVA) one-way, dengan taraf kepercayaan 95% dan tingkat signifikansi (tingkat kesalahan) 5% (α = 0,05). Metode ANOVA one way digunakan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh ekstrak etanol batang galing terhadap penurunan kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan HDL. Selain itu, ANOVA pada penelitian ini juga digunakan untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan secara bermakna aktivitas ekstrak dan senyawa pembanding atorvastatin dalam menurunkan kadar kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan peningkatan HDL. Interpretasi data ANOVA yang diamati yaitu nilai signifikansi (sig). Jika data sig yang diperoleh :

47

1. Sig < 0,05, maka data dikatakan tidak signifikan atau ekstrak batang galing (C. trifolia Domin.) tidak memberikan perubahan yang bermakna terhadap penurunan kadar kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan peningkatan HDL. 2. Sig > 0,05, maka data dikatakan signifikan atau ekstrak batang galing (C. trifolia Domin.) memberikan perbedaan yang bermakna terhadap penurunan kadar kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan peningkatan HDL. Analisis data dilanjutkan dengan analisis post hoc Least Significance Difference (LSD). Uji post hoc dilakukan dalam penelitian ini untuk mengetahui konsentrasi efektif ekstrak batang galing (C. trifolia Domin.) yang mampu menurunkan kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan peningkatan HDL. Uji ini dilakukan apabila dari hasil uji statistik ANOVA one way menunjukkan terdapat pengaruh yang nyata (data sig < taraf kesalahan 0,05). Analisis data secara ANOVA dan LSD menggunakan aplikasi Statistical Product and Service Solution (SPSS) versi.19.0 for Windows 8 (Trihendradi, 2011).

48

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tumbuhan Determinasi suatu tumbuhan bertujuan untuk mengetahui kebenaran identitas tumbuhan bahwa tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini sesuai dengan genus dan spesies dari tumbuhan yang akan diteliti. Dengan demikian kesalahan dalam pengumpulan sampel yang akan diteliti dapat dihindari. Tumbuhan galing yang digunakan untuk penelitian ini dilakukan determinasi di Laboratorium Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Halu Oleo Kendari dengan menggunakan buku Taksonomi Tumbuhan dan Flora of Java, volume I, II, III (spermatophyta Only) Backer dan Bathuizen Van de Brink (1963, 1965, 1968)

(Restiani dkk, 2013; Tjitrosoepomo, 2010). Hasil

determinasi tumbuhan batang galing dapat dilihat pada Lampiran 10. Berdasarkan determinasi (1a-2a-3b-4a-5b) tersebut diperoleh kepastian bahwa tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Cayratia trifolia Domin. B. Rendemen Ekstrak Etanol Batang Galing Ekstraksi

batang galing menggunakan

metode maserasi, metode ini

bertujuan untuk menghindari terurainya senyawa dalam sampel yang tidak tahan terhadap pemanasan, cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan,

tetapi metode ini membutuhkan waktu lama dan

membutuhkan cairan penyari yang banyak. Sampel dimaserasi menggunakan etanol 96% selama beberapa hari hingga filtrat yang diperoleh berwarna bening. Pemilihan etanol sebagai pelarut karena relatif kurang toksik dibandingkakn

49

metanol, murah, mudah didapat dan ekstrak tidak mudah ditumbuhi jamur dan bakteri dan umum digunakan dalam pembuatan ekstrak. Kepolaran etanol mengakibatkan pembesaran partikel sampel dan pori-pori dinding sel, sehingga dapat meningkatkan difusi zat yang akan terekstraksi keluar sel. Ekstrak kemudian diuapkan untuk memperoleh ekstrak kental dan dari hasil eksraksi diperoleh rendemen 18,53% dapat dilihat pada Lampiran 5. C. Skrining Fitokimia Skrining fitokimia merupakan tahap pendahuluan dalam suatu penelitian fitokimia yang bertujuan untuk memberikan gambaran tentang golongan senyawa yang terkandung dalam tumbuhan yang sedang diteliti. Pengujian skrining fitokimia dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT). Eluen yang digunakan adalah N-heksan : etil asetat : metanol (8 : 2 : 0,5). Ketiga eluen tersebut memiliki kepolaran yang berbeda sehingga senyawa-senyawa dengan tingkat kepolaran berbeda dapat terpisahkan. Golongan senyawa kimia yang teridentifikasi adalah alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan terpenoid.

(a) Alkaloid

(b) flavonoid

(c) tanin

(d) Saponin

(e) Terpenoid

Gambar 9. Hasil skrining fitokimia metode KLT

50

Tabel 9. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol batang galing KLT

menggunakan

Komponen fitokimia Pereaksi Alkaloid Dragendorff Flavonoid Amonia Saponin H2SO4 Tanin FeCl3 1% Terpenoid Lieberman-burchard Keterangan : (+) positif mengandung senyawa metabolit sekunder

Hasil + + + + +

Tabel 9 menunjukkan bahwa dalam ekstrak batang galing positif memiliki kandungan, flavonoid, saponin, tanin, terpenoid. Identifikasi senyawa alkaloid dideteksi menggunakan pereaksi Dragendorff dengan cara disemprotkan. Setelah lempeng disemprot dengan pereaksi Dragendorff terdapat bercak berwarna jingga yang dapat dilihat secara langsung. Bercak berwarna jingga ini menandakan adanya senyawa golongan alkaloid. Warna jingga yang terbentuk disebabkan karena terbentuknya kompleks antara ion logam dari Dragendorff dengan senyawa alkaloid. Kompleks ini dapat dilihat pada sinar tampak dengan terbentuknya bercak berwarna jingga. Berdasarkan hasil penelitian, batang galing positif mengandung alkaloid. Identifikasi

senyawa

flavonoid

dilakukan

penampakan

bercak

menggunakan uap amonia pada plat KLT yang telah dielusi untuk memberikan suasana basa pada bercak agar dapat terdeteksi pada sinar tampak dengan warna hijau. Warna hijau tersebut disebabkan karena pembentukan struktur kinoid yang mengandung ikatan rangkap terkonjugasi yang lebih panjang dan planar sehingga dapat berfluorosensi. Berdasarkan hasil penelitian, batang galing positif mengandung flavonoid.

51

Identifikasi senyawa tanin menggunakan pereaksi penampakan bercak FeCl3 1%. Tanin ditunjukkan dari adanya perubahan warna biru kehitaman setelah disemprot dengan FeCl3. Warna biru kehitaman ini disebabkan karena FeCl3 bereaksi membentuk kompleks dengan tanin. Batang galing menunjukan hasil positif dimana noda yang ditampilkan berwarna biru kehitaman. Identifikasi senyawa saponin menggunakan penampakan bercak H2SO4 0,1 N. Positif mengandung saponin bila menimbulkan warna ungu. Senyawa saponin positif terlihat pada plat KLT batang galing yang dtunjukkan dengan warna ungu. Warna yang timbul ini disebabkan karena senyawa saponin yang tersusun atas glukosa dan sapogenin akan bereaksi dengan H2SO4 yang kemudian terjadi pemutusan ikatan antara glukosa dan sapogenin, dimana sapogenin akan terhidrolisis oleh pereaksi H2SO4 sehingga menghasilkan bercak ungu gelap. Pengujian

golongan

triterpenoid

menggunakan

pereaksi

semprot

Lieberman-buchard. Positif terpenoid ditandai dengan terbentuknya noda warna merah ungu (violet). Pada penambahan pereaksi Liebermann-Buchard, molekulmolekul asam anhidrida asetat dan asam sulfat akan berikatan dengan molekul senyawa terpenoid/steroid sehingga menghasilkan reaksi yang tampak pada perubahan warna. Dari hasil skrining triterpenoid yang dilakukan, sampel positif mengandung senyawa triterpenoid.

52

D. Aktivitas Antihiperlipidemia 1. Pengukuran kadar kolesterol, kadar trigliserida, kadar HDL dan kadar LDL. Pengukuran kadar kolesterol total, trigliserida, HDL dan LDL dilakukan melalui tiga tahap, yaitu tahap I dilakukan pada kelompok kontrol normal yang hanya diberi pakan standar (pelet), tahap II dilakukan pada kelompok kontrol negatif (induksi MDLT) selama dua minggu, tahap III dilakukan pada kelompok kontrol dosis ekstrak dan kelompok kontrol positif

(atorvastatin) yang telah

di induksi MDLT dan PTU selama dua minggu kemudian diberikan ekstrak etanol batang galing dengan tiga varian dosis yaitu dosis I 11,29 mg, dosis II 14,37 mg, dosis III 17,40 mg dan atorvastatin 1,46 mg diberikan selama satu minggu. Data yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan uji normalitas Saphiro-Wilk, uji Levene (Test of Homogeneity of Variances),

uji ANOVA dan uji Post Hoc

LSD. Hasil kadar rata-rata kolesterol total, trigliserida, HDL dan LDL pada mencit hiperlipidemia dapat dilihat pada tabel 10. Tabel 10. Rata-rata (mg/dL) ± SD kolesterol total, Trigliserida, LDL dan HDL. Kelompok (n = 4) Kontrol Normal Kontrol Negatif Kontrol Positif Dosis Ekstrak 400 mg/kgBB Dosis Ekstrak 500 mg/kgBB Dosis Ekstrak 600 mg/kgBB

Rata-rata (mg/dL) ± SD Kolesterol total 57 ± 4,583 152,25 ± 19,311 71,25 ± 8,014 83,75 ± 7,890 76 ± 3,142 77,25 ± 5,123

Trigliserida 122 ± 12,437 173,75 ± 4,031 121 ± 21,443 142,75 ± 15,044 119,75 ± 17,802 135,25 ± 7,411

HDL 76 ± 2,140 29.25 ± 2,753 73,75 ± 11,147 42 ± 2,140 50,25 ± 4,573 56,25 ± 4,238

LDL 37,77 ± 5,985 96,2675 ± 17,445 21,115 ± 14,214 19,785 ± 11,015 7,325 ± 4,514 9,8825 ± 4,449

53

Berdasarkan Tabel 10 terlihat bahwa rata-rata kolesterol total, trigliserida, HDL dan LDL kelompok normal diperoleh

yaitu 57 mg/dL, 122 mg/dL, 76

mg/dL, dan 37,77 mg/dL; kontrol negatif yaitu 152,25 mg/dL, 173,75 mg/dL, 29,25 mg/dL, dan 96,2675 mg/dL; kontrol positif yaitu 71,25 mg/dL, 121 mg/dL, 73,75 mg/dL, dan 21,115 mg/dL; dosis ekstrak 400 mg/kgBB yaitu 83,75 mg/dL, 142,75 mg/dL, 42 mg/dL dan 19,785 mg/dL; dosis ekstrak 500 mg/kgBB yaitu 76 mg/dL, 119,75 mg/dL, 50,25 mg/dL dan 7,325 mg/dL; dosis ekstrak 600 mg/kgBB yaitu 77,25 mg/dL, 132,25 mg/dL, 56.25 mg/dL dan 9,8825 mg/dL.

Gambar 10. Diagram batang rata-rata kolesterol total 1 = Kontrol normal, 2 = kontrol negatif (induksi MDLT) , 3 = kontrol positif, 4 = Dosis Ekstrak 400 mg/kgBB, 5 = Dosis Ekstrak 500 mg/kgBB dan 6 = Dosis Ekstrak 600 mg/kgBB.

Gambar 13 menunjukkan bahwa kolesterol pada kontrol negatif (induksi MDLT) paling tinggi, dibandingkan dengan dosis ekstrak 400mg/kgBB, dosis ekstak 600 mg/kgBB,dosis ekstrak 500 mg/kgBB, kontrol positif, dan kontrol normal.

54

Gambar 11. Diagram batang rata-rata trigliserida 1 = Kontrol normal, 2 = kontrol negatif (induksi MDLT) , 3 = kontrol positif, 4 = Dosis Ekstrak 400 mg/kgBB, 5 = Dosis Ekstrak 500 mg/kgBB dan 6 = Dosis Ekstrak 600 mg/kgBB.

Gambar 14 menunjukkan bahwa trigliserida kontrol negatif (induksi MDLT) paling tinggi dibandingkan dengan dosis ekstrak 400 mg/kgBB, 600 mg/kgBB, dosis ekstrak 500 mg/kgBB, kontrol normal, dan kontrol positif.

Gambar 12. Diagram batang rata-rata HDL 1 = Kontrol normal, 2 = kontrol negatif (induksi MDLT) , 3 = kontrol positif, 4 = Dosis Ekstrak 400 mg/kgBB, 5 = Dosis Ekstrak 500 mg/kgBB dan 6 = Dosis Ekstrak 600 mg/kgBB.

55

Gambar 12 menunjukkan bahwa kadar LDL kontrol negatif paling tinggi dibandingkan dengan kontrol normal, kontrol positif, dosis ekstrak 400 mg/kgBB, dosis ekstrak 600mg/kgBB dan dosis ekstrak 500 mg/kgBB.

Gambar 13. Diagram batang rata-rata LDL 1 = Kontrol normal, 2 = kontrol negatif (induksi MDLT) , 3 = kontrol positif, 4 = Dosis Ekstrak 400 mg/kgBB, 5 = Dosis Ekstrak 500 mg/kgBB dan 6 = Dosis Ekstrak 600 mg/kgBB.

Gambar 13 menunjukkan bahwa HDL

kontrol normal paling tinggi

dibandingkan kontrol positif, dosis ekstrak 600 mg/kgBB, dosis ekstrak 500 mg/kgBB, dosis ekstrak 400 mg/kgBB dan kontrol negatif (induksi MDLT). Hasil pengujian berdasarkan analisis statistik dengan metode analisis ANOVA dilakukan melalui beberapa tahapan pengujian. Tahap awal ialah pengujian normalitas (Uji Saphiro-Wilk), dimana hasil pengujian normalitas untuk kadar kolesterol total, kadar trigliserida, HDL dan LDL masing-masing diperoleh nilai probabilitas diatas 0,05 (p > 0,05) yang berarti data tersebut terdistribusi secara normal atau dengan kata lain asumsi normalitas terpenuhi.

56

Tahap kedua pengujian homogenitas (uji Leneve), hasil yang diperoleh untuk kadar kolesterol total, kadar trigliserida, HDL dan LDL masing-masing memiliki nilai probabilitas diatas

0,05 (p > 0,05) yang berarti data tersebut

memenuhi asumsi homogenitas. Tahap ketiga pengujian one way ANOVA diperoleh hasil untuk kadar kolesterol total nilai F hitung 46.664 dengan nilai probabilitas dibawah 0,05 yang berarti secara keseluruhan kelompok perlakuan berbeda nyata, untuk kadar trigliserida nilai F hitung 8.411 dengan nilai probabilitas juga dibawah 0,05 yang berarti secara keseluruhan kelompok perlakuan untuk pengujian trigliserida berbeda secara nyata, untuk kadar HDL nilai F hitung yang diperoleh sebesar 39.348 dengan nilai probabilitas dibawah 0,05 yang berarti secara keseluruhan kelompok perlakuan berbeda signifikan serta untuk kadar LDL diperoleh nilai F hitung sebesar 37.573 dengan nilai probabilitas juga dibawah 0,05 yang berarti secara keseluruhan kelompok perlakuan berbeda secara signifikan. Tahap akhir dilakukan pengujian post Hoc LSD, untuk kadar kolesterol total antara dosis 400 mg/kgBB terhadap dosis 500 mg/kgBB diperoleh nilai probabilitas diatas 0,05 (p > 0,05) yang berarti tidak terdapat perbedaan yang nyata antar kedua kelompok dosis tersebut, dosis 400 mg/kgBB terhadap dosis 600 mg/kgBB menghasilkan nilai probabilitas diatas 0,05 (p > 0.05) yang berarti tidak terdapat perbedaan yang nyata antar kedua kelompok dosis dan untuk dosis 500 mg/kgBB terhadap dosis 600 mg/kgBB juga diperoleh nilai probabilitas diatas 0,05 (p > 0.05) yang artinya tidak terdapat perbedaan yang signifikan antar kedua kelompok dosis tersebut.

57

Hasil pengujian LSD untuk kadar trigliserida antara dosis 400 mg/kgBB terhadap dosis 500 mg/kgBB diperoleh nilai probabilitas dibawah 0,05 (p < 0,05) yang berarti terdapat perbedaan yang nyata antar kedua kelompok dosis tersebut, dosis 400 mg/kgBB terhadap dosis 600 mg/kgBB nilai probabilitas diatas 0,05 (p > 0,05) yang artinya antar kedua kelompok dosis tidak berbeda secara nyata serta untuk dosis 500 mg/kgBB terhadap dosis 600 mg/kgBB nilai probabilitas diatas 0,05 (p > 0,05) yang juga berarti kedua kelompok dosis tidak berbeda nyata. Pengujian LSD untuk Kadar HDL antara dosis 400 mg/kgBB terhadap dosis 500 mg/kgBB diperoleh hasil nilai probabilitas diatas 0,05 (p > 0,05) yang berarti tidak terdapat perbedaan yang nyata antar kedua kelompok dosis tersebut, dosis 400 mg/kgBB terhadap dosis 600 mg/kgBB diperoleh nilai probabilitas dibawah 0,05 (p < 0,05) yang artinya terdapat perbedaan secara nyata antar kedua kelompok dosis tersebut serta untuk dosis 500 mg/kgBB terhadap dosis 600 mg/kgBB nilai probabilitasnya diatas 0,05 (p > 0,05) yang berarti tidak terdapat perbedaan yang nyata dari kedua kelompok dosis tersebut. Pengujian LSD untuk Kadar LDL antara dosis 400 mg/kgBB terhadap dosis 500 mg/kgBB diperoleh hasil nilai probabilitas diatas 0,05 (p > 0,05) yang artinya tidak terdapat perbedaan yang nyata dari kedua kelompok dosis tersebut, untuk dosis 400 mg/kgBB terhadap dosis 600 mg/kgBB nilai probabilitas yang dihasilkan diatas 0,05 (p > 0,05) yang juga berarti tidak terdapat perbedaan yang nyata serta untuk dosis 500 mg/kgBB terhadap dosis 600 mg/kgBB nilai

58

probabilitas yang diperoleh juga diatas 0,05 (p > 0,05) yang berarti dari kedua kelompok dosis tersebut tidak berbeda secara nyata. Pemberian makanan diet lemak tinggi terdiri dari campuran kuning telur 80%, sukrosa 15%, lemak hewan 5% dan PTU. Pemberian komposisi ini dapat meningkatkan kadar kolesterol total dan trigliserida secara bermakna pada penelitian yang dilakukan oleh Juhaeni (2002). Kuning telur dan lemak hewan (sapi) merupakan sumber kolesterol bagi hewan uji, lemak yang diserap tubuh diubah menjadi asam lemak dan trigliserida, sehingga semakin banyak diberikan akan menyebabkan perubahan peningkatan trigliserida dan mengkonsumsi karbohidrat terutama sukrosa dan fruktosa dapat meningkatkan lipogenesis dan esterifikasi asam lemak dan memicu sintesis trigliserida (Juheini, 2002). Sukrosa akan menigkatkan trigliserida dalam darah melalui

mekanisme perubahan

sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa di dalam tubuh. Selanjutnya glukosa akan mengalami glikolisis menjadi piruvat dan di dalam mitokondria piruvat akan mengalami dekarboksilasi oksidatif menjadi asetil CoA dalam siklus asam sitrat dan menghasilkan energi. Jika kebutuhan energi sudah terpenuhi maka asetil CoA mengalami lipogenesis menjadi lemak dan disimpan sebagai trigliserida. Jika dibutuhkan energi, trigliserida akan dihidrolisis kembali menjadi asam lemak dan dapat dibentuk menjadi kolesterol (Muray dkk, 2004). Selain pemberian lemak hewan, PTU juga dapat meningkatkan kadar kolesterol total. PTU sebagai obat

antitiroid golongan tionamida, dapat

menghambat sintesis hormon tiroid yang berperan dalam mengaktifkan hormon sensitif lipase bertanggung jawab terhadap proses katabolisme lipid dan jika kadar

59

hormon tiroid dalam tubuh rendah maka terjadi penurunan laju katabolisme lipid yang mengakibatkan kadar kolesterol dalam darah menjadi meningkat (Nurcahyaningtyas, 2012). Konsumsi lemak yang berlebih bisa meningkatkan kolesterol total, trigliserida, LDL dan meningkatkan HDL. Organ hati merupakan pusat metabolisme yang berfungsi dalam proses detoksifikasi senyawa toksik, hematologik, sistem imun tubuh, berperan dalam metabolisme biomolekul, sekresi produk akhir metabolisme seperti bilirubin, ammonia dan urea (Kaplan dan Pesce, 1989). Membran-membran mikrosom hati sangat rentan terhadap peroksidasi lipid, karena membran tersebut banyak sekali mengandung asam lemak tak jenuh. Salah satu cara untuk menurunkan kolesterol total, trigliserida, LDL dan menigkatkan

HDL

dengan

mengkonsumsi

makanan

yang

mengandung

antioksidan. Batang galing mengandung senyawa bioaktif seperti alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan terpenoid yang berfungsi sebagai antioksidan. Tabel 11. Persentase penurunan kadar kolesterol total, trigliserida, kadar LDL dan peningkatan kadar HDL Kelompok (n = 4) Kontrol Normal Kontrol Negatif Kontrol Positif Dosis Ekstrak 400 mg/kgBB Dosis Ekstrak 500 mg/kgBB Dosis Ekstrak 600 mg/kgBB

Kadar rata-rata (%) Kolesterol Trigliserida HDL total 0 0 0 0 0 0 52,87 ↓ 17,47 ↓ 152,14 ↑ 44,99 ↓ 10,24 ↓ 43,58 ↑ 50,08 ↓ 17,88 ↓ 71,79 ↑ 49,24 ↓ 12,75 ↓ 58,12 ↑

LDL 0 0 78,04 ↓ 79,44 ↓ 92,39 ↓ 89,73 ↓

Keterangan : ↓ = penurunan dan ↑ = peningkatan Berdasarkan Tabel 11 terlihat persentase penurunan kadar kolesterol total pada dosis 400 mg/kgBB sebesar 44.99%, dosis 500 mg/kgBB sebesar 50.08%

60

dan dosis 600 mg/kgBB sebesar 49.24%, dimana dari kelompok dosis tersebut dapat menurunkan kadar kolesterol total. Hal ini membuktikan bahwa adanya pengaruh efek dari ekstrak etanol batang galing yang memiliki senyawa bioaktif flavonoid. Menurut Holman dkk dan Grasi dkk bahwa senyawa flavonoid dan saponin

bersifat sebagai antioksidan yang berperan terhadap mekanisme

perbaikan profil lipid dan menghambat reaksi peroksida lipid serta menghambat oksidasi lipoprotein yang dapat mencegah risiko aterosklerosis (Wurdianing dkk, 2004). Selain flavanoid senyawa bioaktif seperti saponin juga mampu menurunkan kadar kolesterol, hal ini sejalan dengan pernyataan Wilcox dkk dan Malinow dkk bahwa saponin berperan menghambat penyerapan kolesterol di usus. Konsekuensinya kolesterol dikeluarkan dari tubuh bersama feses yang merupakan lintasan utama untuk mengeluarkan kolesterol. Penurunan kadar trigliserida pada dosis 400 mg/kgBB sebesar 10,26%, dosis 500 mg/kgBB sebesar 17,88% dan dosis 600 mg/kgBB sebesar 12,75%, hal ini membuktikan bahwa senyawa bioaktif yang dimiliki oleh ekstrak batang galing. Menurut Sato dkk bahwa senyawa saponin mampu menghambat aktivitas pancreatic lipase dan menghambat penyerapan asam lemak bebas. Lipase pankreas berfungsi untuk menghidrolisis asam lemak dari semua rantai panjang dari 1 dan 3 gugus gliserol pada triasilgliserol sehingga menghasilkan asam lemak bebas dan 2-monoasilgliserol digabung kembali oleh reaksi enzimatik untuk membentuk triasilgliserol, sehingga penghambatan aktivitas lipase pankreas berdampak pada penurunan kadar triasilgliserol di usus.

61

Peningkatan kadar HDL pada dosis 400 mg/kgBB sebesar 43.58%, dosis 500 mg/kgBB sebesar 71.79% dan dosis 600 mg/kgBB sebesar 58.12%, hal ini menunjukkan bahwa senyawa bioaktif seperti flavonoid yang terkandung dalam ekstrak batang galing terbukti dapat menghambat sekresi apoB dan membantu meningkatkan regulasi reseptor LDL (LDLr) di jaringan serta dapat pula meningkatkan penyerapan kolesterol dalam LDL sehingga kadar kolesterol dalam LDL di darah menurun (Lee dkk, 2005; Borradaile dkk, 2003). Selain menurunkan kadar kolesterol total, ekstrak batang galing mampu meningkatkan kadar HDL. HDL ini berperan mengangkut kolesterol dari jaringan perifer yang selanjutnya dimetabolisme kembali di hati. Penelitian yang dilakuakan oleh Sudhess dkk yang juga menggunakan senyawa flavonoid menunjukkan adanya peningkatan aktivitas lecithin cholesterol acyl transferase (LCAT). LCAT merupakan enzim yang mengubah kolesterol dan sangat penting untuk meningkatkan metabolisme HDL. Ester kolesterol yang dikumpulkan oleh HDL diangkut kembali ke hati (Musa dkk, 2007). Penurunan kadar LDL pada dosis 400 mg/kgBB sebesar 43.58%, dosis 500 mg/kgBB sebesar 71.79% dan dosis 600 mg/kgBB sebesar 58.12%. Hasil tersebut membuktikan bahwa ekstrak batang galing mampu menurunkan kadar LDL karena mengandung senyawa saponin. Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Messina dkk, (1999) dan Lee dkk (2005) bahwa senyawa seperti saponin akan berikatan dengan asam empedu dan meningkatkan ekskresi asam empedu

di dalam feses dan sterol netral, sehingga menyebabkan konversi

kolesterol menjadi asam empedu dalam jumlah yang besar guna mempertahankan

62

depot asam empedu. Sehingga reseptor LDL dari hati meningkat sehingga terjadi pula peningkatan uptake (serapan) LDL yang disertai penurunan kadar kolesterol plasma. Gangguan sintesis kolesterol akan mengakibatkan menurunnya reseptor kilomikron VLDL. Kilomikron VLDL ini mengikat trigliserida di dalam hati dan mengangkutnya menuju darah dan jaringan lemak. Terjadi penurunan trigliserida karena berkurangnya reseptor kilomikron VLDL tersebut mengakibatkan trigliserida dalam darah juga berkurang (Celik, dkk 2011). Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan maka secara keseluruhan dapat diinformasikan bahwa ekstrak batang galing memiliki aktivitas serta khasiat farmakologi sebagai antihiperlipidemia. Aktivitas tersebut dapat dilihat dari empat indikator yaitu kadar kolesterol total, trigliserida, HDL dan LDL. Dosis ekstrak batang galing mampu menurunkan kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan peningkatan kadar HDL pada kelompok dosis 400 mg/kgBB, 500 mg/kgBB dan dosis 600 mg/kgBB. Dosis 500 mg/kgBB memiliki efek penurunan kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan peningkatan HDL yang paling efektif. Hal ini didukung dengan penelitian (Batra dkk, 2013) dimana dosis ekstrak etil asetat akar

(C. trifolia Domin) 400 mg/kgBB lebih optimal menurunkan kadar

kolesterol dibandingkan dengan dosis 400 mg/kgBB dan 600 mg/kgBB. Hasil penelitian ini juga menunjukkan bahwa semakin meningkatnya dosis tidak diikuti dengan peningkatan efektivitas, hasil ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Halliwel dkk, 2005 ekstrak daun sirsak memiliki senyawa bioaktif yang sama dengan ekstrak etanol batang galing yaitu flavonoid.

63

Kadar senyawa antioksidan tertentu pada dosis yang berlebihan dapat berubah menjadi prooksidan, sehingga dapat memperparah terjadinya kerusakan akibat radikal bebas. Menurut penelitian Maulida 2010 menyatakan bahwa Vitamin C diketahui dapat berubah menjadi prooksidan dengan mengkatalisis pembentukkan radikal hidroksil melalui reaksi Fenton. Adanya radikal hidroksil ini dapat menginisiasi terjadinya peroksidasi lipid dengan cepat. Begitu juga dengan vitamin E jika diberikan dalam jumlah yang berlebih maka sifat antioksidannya berubah menjadi prooksidan (Hudiyono, 2004). Menurut Halliwel dkk, 2005 melaporkan bahwa flavonoid dapat diserap oleh saluran pencernaan maksimal tidak lebih dari 1 µmol/L. Bertambahnya dosis tidak dapat meningkatkan efek namun dapat memberikan efek yang diinginkan. Wang dkk, 2011 menunjukkan bahwa dosis rendah

tidak mampu

memberikan efek protektif, namun dosis tinggi memberikan efek hepatotoksik. Sehingga bertambahnya pemberian dosis 600 mg/kgBB ekstrak etanol batang galing

kemungkinan

terjadi

prooksidan

dan

menyebabkan

peningkatan

konsentrasi peroksidasi lipid yang menjadi awal rusaknya sel hati dan neksrosis hati. Menurut Yagi dkk apabila konsentrasi lipid peroksida di hati meningkat, maka lipid peroksida ini dapat merusak sel hati sehingga peroksida akan keluar dari hati menuju pembuluh darah dan dapat merusak organ atau jaringan lain. Peningkatan peroksidasi lipid yang meningkat pada jaringan dan organ dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit degeneratif, seperti penyakit jantung koroner (PJK) dan sroke.

64

BAB V PENUTUP

A. Kesimpulan Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, diperoleh kesimpulan yaitu : 1. Ekstrak etanol batang galing mengandung senyawa biokatif golongan

alkaloid, saponin, terpenoid, tanin dan flavonoid 2. Pemberian ekstrak etanol batang galing memiliki efek terhadap penurunan kadar kolesterol total pada mencit. 3. Pemberian ekstrak etanol batang galing memiliki efek terhadap penurunan kadar trigliserida pada mencit. 4. Pemberian ekstrak etanol batang galing memiliki efek terhadap peningkatan kadar HDL pada mencit. 5. Pemberian ekstrak etanol batang galing memiliki efek terhadap penurunan kadar LDL pada mencit. 6. Aktivitas dosis 500 mg/kgBB ekstrak etanol batang galing efektif terhadap perbaikan profil lipid pada mencit.

B. Saran Saran dari penelitian ini yaitu : 1. Perlu dilakukan pengembangan ilmu pengetahuan dengan melakukan penelitian mengenai efektivitas tumbuhan galing terhadap beberapa penyakit.

65

2. Perlu dilakukan formulasi sediaan ekstrak etanol batang galing (C. trifolia Domin.) yang dapat dikembangkan lebih lanjut menjadi obat herbal terstandar.

66

DAFTAR PUSTAKA

Alfaida, Samsurizal M. Suleman, Hj. Musdalifah Nurdin., 2013, Jenis-Jenis Tumbuhan Pantai di Desa Pelawa Baru Kecamatan Parigi Tengah Kabupaten Parigi Moutong dan Pemanfaatannya sebagai Buku Saku, e-Jipbiol, Vol. 1 : 19-32. Arrington, L., 1972, Introductory Laboratory Animal. The Breeding, Care, and Management of Experimental Animal Science, New York: The Interstate Printers and Publishing, Inc. Brenesel M.D. dkk., 2013. Hipolipidemic and antioxidant effects of buckhwet leaf and flower mixture in hiperlipidemic rats, Bosn J Basic Med SCI, 13 (2). Batra, Shikha., Nikhil Batra, dan Badri Prakash Nagori., 2013, Preliminary Phytochemical Studies and Evaluation of Antidiabetic Activity of Roots of Cayratia trifolia (L.) Domin in Alloxan Induced Diabetic Albino Rats, Journal of Applied Pharmaceutical Science, Vol. 3 (03). Christiana, 2008, Formulasi Gel Antioksidan Ekstrak Buah Buncis (Phaseolus vulgaris, dengan menggunakan Basis Aqupec 505 hv., Universitas Padjajaran, Bandung. Departemen Kesehatan Jakarta.

RI, 1978, Materia Medika Indonesia II, Depkes RI,

Dahlan, M.S., 2011, Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Salemba Medika, Jakarta. Depkes RI., 1995, Materia Medika, Jilid VI, Diktorat Jenderal POM, Jakarta. Depkes RI., 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Diktorat Jenderal POM, Jakarta. Dipiro, 2008, Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach Sevent edition, The Mc Graw-Hill Companies, New York. Ditjen POM, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Jakarta, Depkes RI. Ditjen POM, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Depkes RI, Jakarta. Gandjar, I.G., dan Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta : Pustaka Pelajar.

67

Gupta, A., Abhishek Bhardwaj, Jyoti Gupta dan Anindya Bagchi, 2012, Antiimplantation Activity of Petroleum Ether Extract of Leaves of Cayratia trifolia Linn. on Female Albino Rat, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, Himachal institute of Pharmacy. suppl. 2, S197S199 Ganiswara SG. 1995. Farmakologi dan Terapi. Edisi IV. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. Grassi D, Desideri G And Feri C. Flavonoid: Antioxidans Againts Atheroschlerosis. Nutrien. 2010. Gritter, R.J.,Bobbit, J.M., dan Swharting,A.E. 1991. Pengantar Kromatografi. Edisi ke-2. Penerbit ITB. Bandung. Grundy SM. 1991. Multifactorial etiology of hypercholesterolemia: Implication for prevention of coronary heart disease. Arterioclerosis and thrombosis. Ganong WF. 2001. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Ed-20. Djauhari Widjajakusumah, penerjemah. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Review of Medicinal Physiology. Hariadi. 2012. Peluang Jitu Beternak Tikus Putih. Pustaka Baru Press: Yogyakarta. Harmita dan Maksum. 2008. Buku Ajar Analisis Hayati. Kedokteran EGC. Jakarta. Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, ITB, Bandung. Hudiyono S. Pengaruh Berbagai Kondisi Oksidasi terhadap Kandungan Kolesterol dan Sterol lain dalam Lemak Coklat. Makara, Sains.Vol.8 No.2. Departemen Kimia, FMIPA. Universitas Indonesia. 2004. Hollman P.C. and Katan M.B. Absorbtion, metabolism and health Effects of Dietary Flavonoids in Man. Biomed Pharmacther. 1997; 51(8). Katzung, BG. 2007. Basic and Pharmacology Edisi 10th New York: Mc Graw Hill P. Katzung B.G. 2002. Farmakologi Dasar dan Klinik. Jakarta: Salemba Medika. Terjemahan dari: Basic and Clinical Pharmacology.

68

Kumar, D., Jyoti Gupta, Sunil Kumar, Renu Arya, dan Ankit Gupta, 2011, A Review on Chemical and Biological Properties of Cayratia trifolia Linn. (Vitaceae), Pharmacogn Rev, 5(10). Hal 418-422. Kumar, Dinesh., Jyoti Gupta, Sunil Kumar, Renu Arya, Tarun Kumar, Ankit Gupta, 2012, Pharmacognostic evaluation of Cayratia trifolia (Linn.) leaf, Asian Pac J Trop Biomed, 2(1). Hal 6-10 Kusumawati, D. 2004. Bersahabat Dengan Hewan Coba. Gajah Mada University Press: Yogyakarta. Koolman J, Rohm KH. 2000. Atlas Berwarna dan Teks Biokimia. Wanandi S, penerjemah. Jakarta: Hipokrates. Terjemahan dari: Color Atlas of Biochemistry. Lee S, Simons AL, Murphy P A and Hendrich S. Soyasaponins Lowered Plasma Cholesterol and Increased Fecal Bile Acids in Female Golden Syrian Hamsters. Experimental Biology and Medicine. 2005. Lenny, S. 2006, Senyawa Flavonoida, Fenilpropanolamida dan Alkaloida, Karya Ilmiah, Departemen Kimia FMIPA. Universitas Sumatera Utara, Medan. Moriwaki, K. 1994, Genetic in Wild Mice, Research. Tokyo: Karger.

Its Application to Biomedical

Malole, MB, dan Pramono, SU, 1989, Penggunaan Hewan-Hewan Percobaan Laboratorium, Penelaah Maskudi Pertadireja, Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Direktotar Jendral Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas IPB, Bogor. Marks DB, Marks AD, Smith CM. 2000. Biokimia Kedokteran Dasar: Suatu Pendekatan Klinis. Pendit Bu, penerjemah; Suyono J, Sadikin V, Mandera LI, editor. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Basic Medical Biochemistry: A clinical Approach. Mardisadora O. 2010. Identifikasi dan Potensi Antioksidan Flavonoid Kulit Kayu Mahoni (Swietenia macrophylla King). Skripsi Strata 1, Departemen Biokimia. Institusi Pertanian Bogor. McPherson, R.A dan Pincus, M.R, 2007. Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Method, 21th Edition. British : Saunder Elsisevier. Murray RK, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW. 1999. Biokimia Harper. Ed ke-24. Hartanto A, penerjemah. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Harper’s Biochemistry.

69

Nafiu, L. O., 1996, Kelenturan Fenotipik Mencit Terhadap Ransum Berprotein Rendah. IPB, Bogor. Ochani, C.P., D’Mello, P, 2009, Antioxidant antihyperlipidemic activity of Hibiscuc sabdariffa Linn. leaves and calyces extract in rats. Indian Journal of Experimental Biology Vol. 47. Hal 276-282. Perumal, P.C., Sowmya, S., Pratibha, P., Vidya, B., Anosooriya, P., Starlin, T., Vasanth, R., Sharmila, D, J, S., Gopalakrishnan, V,K. 2014, Identification of Novel PPARγ agonist from GC-MS Analisis of Ethanolic Extract of Cayratia trifolia (L.): a Computational Molecular Simulation Study. Journal of Applied Pharmaceutical Science Vol. 4 (09). Purwanti, Septi, 2012, Efek Antihiperlipidemia Ekstrak Etanol 70% Buah Oyong (Luffa acutangula (L.) Roxb) Pada Tikus Putih Jantan yang Diberi Diet Tinggi Kolesterol dan Lemak, Depok, Universitas Indonesia. Ragasa, C. Y., Adiel Inah Buluran, Emelina H. Mandia Dan Chien-Chang Shen, 2014, Chemical constituents of Cayratia trifolia, Der Pharma Chemica, 6(6). Restiani, A,R., Suhadi., Turita, H, 2013, Keanekaragaman Tumbuhan Liana di Hutan Musim Blok Curah Jarak Taman Nasional Baluran. Seminar Nasional XI Pendidikan Biologi. Robinson, 2005, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, ITB, Bandung. Sahidin, I., 2012, Mengenal Senyawa Alami Pembentukkan dan Pengelompokkan Secara Kimia, Unhalu Press, Kendari. Sato M, Ueda T, Nagata K, Shiratake S, Tomoyori H, Kawakami M. Dietary kakrol (Momordica dioica Roxb.) fresh inhibits triacylglycerol absorbtion and lowers the risk for development of fatty liverin rats. experimental Biology and Medicine. 2011. Syam, A.F., Simadibrta, M., Wanandi, S.L., Hernowo, B.S., Sadakin, M., dan rani, A.A. (2011). Gastric ulcers induced by sistemmic hypoxia. Acta Med Indonesia-Indonesia J intern Med, 43. Seidel, V., 2008, Initial and Bulk Extraction, In:Sarker, S. D., Latif, Z. and Gray, A. I., editors, Natural Products Isolation, 2 ndEd., New Jersey, Humana Press. Smith, J.B dan Mangkoewidjojo, S, 1988. Pemeliharaan dan Pembiakan dan Penanganan Hewan Percobaan di Daerah Tropis, Jakarta : UI-Press.

70

Syarif et al. 2003. Farmakologi dan Terapi. Jakarta: UI Press. Suyatna, F. D. and Handoko, T., 1995, Hipolipidemik, Chapter 23, Farmakologi dan Terapi, Edisi 4, 368-369, Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta. Sudheesh S, Presannakumar G, Vijayakumar S and Vijayalakshmi NR. Hypolipidemic Effect of Flavonoids from Solanum Molengena. Plant Foods and Human Nutrition. 1997. Singh, S., Rajinder Mann dan Surendra Kr. Sharma, 2012, Phytochemical Analysis and Pharmacognostical Standardization of Stem of Cayratia trifolia (Linn.) Domin, IJPSR, Vol.3(11), Department of Pharmaceutical Sciences, Guru Jambheshwar University of Science and Technology. Sowmya, S., Palanisamy CP., Palanirajan A., Balasubramanian V., Prabhakaran P., Deivasigamani M., dan Velliyur KG., 2015, Comparative Preliminary Phytochemical Analysis Various Different Parts (Stem, Leaf And Fruit) Of Cayratia trifolia (L.), Indo American Journal of Pharmaceutical Research, Vol 5, Issue 01, Karpagam University. Taher A. 2003. Peran fitoestrogen kedelai sebagai antioksidan dalam penanggulangan aterosklerosis. [tesis]. Bogor: Sekolah Pascasarjana IPB. Tisnadjaja, D, dkk, 2010. Pengkajian Efek Hipokolesteromik Kapsul Monosterol dan Produksi Senyawa Bioaktif Antidiabetes oleh Kapang, endofit dari Tanaman Indonesia. Laporan Akhir Program Intensif Pneliti dan Perekayasa LIPI. Tjitrosoepomo Gembong. 1993. Taksonomi Umum. 1993. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Trihendradi, C. 2011. Langkah Mudah Melakukan Analisis Menggunakan SPSS 19. Yogyakarta: ANDI Yogyakarta.

Statistik

Voet D, Voet JG. 1995. Biochemistry. New York: J Wiley. Vogels G.H., 2008, Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays, Springer-Verlag, New York. Voight, R., 1995, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Alih Bahaasa Drs. Soendani Noerono Soewandhi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta: 577-578. Wasitaatmadja, S. M. 1997. Penuntun Ilmu Kosmetik Medik. Jakarta: Penerbit Universitas Indonesia.

71

Wilcox, L. J., Borradaile, N. M., de Reu, L. E., & Huff , M. W. 2001. Secretion of Hepatocyte apo-B is Inhibited by Flavonoids, Naringenin, and Hesperetin via Reduced Activity and Expression o ACAT2 and MTP. J Lipid Res. 42, 725-734. Wink, M. 2010. Introduction: Biochemistry, Physiology and Ecological Functions of Secondary Metabolites, Vol. 40, Blackwell Publishing Ltd, USA. WHO, 2013, Cardiovascular Desease, New York. Diakses 26 June 2016,Availablefrom:http://www.who.int/Cardoivascular_diseases/preventi on_control/en/index.html. WHO, 2015, Cardiovascular Desease, New York. Diakses 20 Februari 2016,Availablefrom:http://www.who.int/Cardoivascular_diseases/preventi on_control/en/index.html. Wresdiyati T, Astawan M. 2005. Deteksi secara imunohistokimia antioksidan superoksida dismutase (SOD) pada jaringan tikus hiperkolesterolemia yang diberi pakan rumput laut. [laporan penelitian]. Bogor: FKH IPB. Wurdianing, I., Nugraheni, SA., dan Rahfiludin, Z. 2014, Efek Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata Linn.) Terhadap Profil Lipid Tikus Putih Jantan (Rattus novergicus). Jurnal Gizi Indonesia, Vol 3, No.1. Yagi K. 1994. Lipid peroxide and realated radical in clinical medicine. Di dalam Free radical in diagnostic Medicine. Amstrong D, Penyunting. New York: Plenum Pr.

72

73

Lampiran 1. Pembuatan MDLT dan PTU Pembuatan MDLT Volume yang diberikan 1 mL, maka volume yang dibutuhkan adalah: 5 kelompok x 4 ekor x 1 mL = 20 mL Kuning telur = Sukrosa =

16 gram = 3 gram

Lemak Hewan (Sapi) =

= 1 gram

Pembuatan PTU Diketahui : BB rata-rata 20 ekor mencit 28,00 Dosis PTU 25 mg Faktor konversi dosis manusia berat 70 kgBB ke mencit 0,0026 Volume maksimal pemberian oral mencit = 1 mL Penyelesaian : Konversi dosis PTU pada mencit 28,00 g = (25 mg x 0,0026 = 0,065 mg/BB Dosis pemberian = 0,065 mg/BB x 28,00 = 1,82 mg/mL Untuk pemberian induksi 20 ekor mencit jadi, 1,82 mg x 20 = 36,4 mg/20 mL. ditimbang 36,4 mg kemudian dilarutkan dengan Na CMC 0,5% sebanyak 20 mL.

74

Lampiran 2. Perhitungan Dosis Ekstrak Etanol Batang Galing (C. trifolia Domin.) 1. Dosis 400 mg/kgBB, Dik : BB rata-rata mencit 28,23 gram = (400 mg)/(1000 gBB) x berat mencit = (400 mg)/(1000 gBB) x 28,23 g = 11,29 mg/mL. Perkelompok 4 ekor mencit jadi, 11,29 g x 4 = 45,14 mg/4 mL ditimbang 45,14 mg kemudian dilarutkan dengan Na CMC 0,5% sebanyak 4 mL. 2. Dosis 500 mg/kgBB, Dik : BB rata-rata mencit 28,74 gram = (500 mg)/(1000 gBB) x berat mencit = (500 mg)/(1000 gBB) x28,74 g = 14,34 mg/mL. Perkelompok 4 ekor mencit jadi, 14,34 g x 4 = 57,44 mg/4 mL ditimbang 57,44 mg kemudian dilarutkan dengan Na CMC 0,5% sebanyak 4 mL. 3. Dosis 600 mg/kgBB, Dik : BB rata-rata mencit 29,00 gram = (600 mg)/(1000 gBB) x berat mencit = (600 mg)/(1000 gBB) x 29,00 g = 17,40 mg/mL. Perkelompok 4 ekor mencit jadi, 7,40 g x 4= 49,40 mg/gBB ditimbang 49,40 mg kemudian dilarutkan dengan Na CMC 0,5% sebanyak 4 mL.

75

Lampiran 3. Pembuatan sediaan pembanding Atorvastatin Diketahui : BB rata-rata mencit untuk kontrol positif 28,03 Dosis Atorvastatin 20 mg Faktor konversi dosis manusia berat 70 kgBB ke mencit 0,0026 Volume maksimal pemberian oral mencit = 1 mL Penyelesaian : Konversi dosis Atorvastatin pada mencit 28,03 g = 20 mg x 0,0026 = 0,052 mg/gBB Dosis pemberian = 20 mg x 0,0026 = 0,052 mg/gBB x 28,03 gBB = 1,46 mg/mL Untuk perkelompok 4 ekor mencit jadi, 1,46 mg x 4 = 5,84 mg/4 mL ditimbang 5,84 mg kemudian dilarutkan dengan Na CMC 0,5% sebanyak 4 mL.

76

Lampiran 4. Pembuatan Na CMC 0,5% Volume NaCMC 0,5% yang dibuat: Kontrol normal

: pemberian pellet

Kontrol negatif (Induksi MDLT dan PTU)

: 4 ekor x 1 mL = 4 mL

Kontrol Atorvastatin

: 4 ekor x 1 mL = 4 mL

Kontrol Dosis I

: 4 ekor x 1 mL = 4 mL

Kontrol Dosis II

: 4 ekor x 1 mL = 4 mL

Kontrol Dosis III

: 4 ekor x 1 mL = 4 mL

Total volume = 20 mL NaCMC yang akan ditimbang =

x 20 mL = 0,1 gram, setelah ditimbang

kemudian dilarutkan dalam 20 mL akuades, dengan cara diukur akuades 20 mL. Na CMC dilarutkan dengan akuades secukupnya kemudian panaskan diatas hot plate sambil diaduk hingga homogen, setelah homogen dinginkan dan cukupkan volumenya.

77

Lampiran 5. Ekstraksi batang galing dan perhitungan rendemen Proses Ekstraksi batang galing Batang galing (C. trifolia Domin.)

Pengambilan batang

Preparasi sampel

Maserasi (Etanol 95%) selama 3 x 24 jam

Penyaringan dengan kertas saring

Penguapan pelarut dengan rotaryvacum evaporator

Ekstrak Etanol batng galing

Rendemen ekstrak Rumus :

x 100 %

=

x 100 %

= 18,53 %

78

Lampiran 6. Pembuatan Reagen Skrining Fitokimia 1.

2

Pereaksi Dragendorf

Bismuth subdinitrat -Ditimbang 0,6g -Ditambahkan 2 mL HCl P -Ditambahkan 10 mL H2O

Kalium Iodida -Ditimbang 6 g -Ditambahkan 10 mL H2O

Larutan B

Larutan A

Larutan A -Dicampur dengan larutan B -Ditambahkan 7 mL HCl P -Ditambahkan 15 mL H2O

Pereaksi Dragendorf

2. Pereaksi Liebermann-Bunchard 5 mL Asam Asetat - Ditambahkan 5 mL H2SO4 - Ditambahkan 50 mL etanol absolut dalam keadaan dingin

Pereaksi Liebermann-Bunchard

79

2. Pereaksi FeCl3 FeCl3 -Ditimbang 1 g -Dimasukkan dalam labu takar 100 mL -Ditambahkan akuades sampai tanda tera

Pereaksi FeCl3 1 %

3. Pereaksi H2SO4

H2SO4 18 M - Dipipet 0,277 mL - Dilarutkan dalam labu takar 50 mL Pereaksi H2SO4 0,1 M

80

Lampiran 7. Tabel Konversi Perhitungan Dosis Antar Jenis Subjek Uji Tabel 7. Konversi perhitngan dosis antara jenis subjek uji Mencit 20 g

Tikus 200 g

Marmut 400 g

Kelinci 1,2 kg

Kera 4 kg

Anjing 12 kg

Manusia 70 kg

Mencit 20 g

1,0

7,0

12,25

27,8

64,1

124,2

387,9

Tikus 200 g

0,14

1,0

1,74

3,9

9,2

17,8

56,0

Marmut 400 g

0,08

0,57

1,0

2,25

5,2

10,2

31,5

Kelinci 1,2 kg

0,04

0,25

0,44

1,0

2,4

4,5

14,2

Kera 4 kg

0,016

0,11

0,19

0,42

1,0

1,9

6,1

Anjing 12 kg

0,008

0,06

0,10

0,22

0,52

1,0

3,1

Manusia 70 kg

0,0026

0,018

0,031

0,07

0,16

0,32

1,0

(Harmita dan Maksum R., 2008)

81

Lampiran 8. Tabel Volume Maksimal Pemberian Larutan Untuk Hewan Uji Tabel 8. Volume maksimum larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada beberapa hewan uji (Harmita dan Maksum R., 2004).

Volume maksimum (ml) sesuai jalur pemberian Jenis Hewan Uji

i.v.

i.m.

i.p.

s.c.

p.o.

Mencit (20-30 g)

0,5

0,05

1,0

0,5-1,0

1,0

Tikus (200 g)

1,0

0,1

2-5

2-5

5,0

Hamster (50 g)

-

0,1

1-2

2,5

2,5

Marmut ( 250 g)

-

0,25

2-5

5,0

10,0

Kelinci (2,5 kg)

5-10

0,5

10-20

5-10

20,0

Kucing (3 kg)

5-10

1,0

10-20

5-10

50,0

Anjing (5 kg)

10-20

5,0

20-50

10,0

100,0

Keterangan : i. v = Intra Vena i.m = Intra Muscular i.p = Intra Peritoneal s.c = Subkutan p.o = Pemerian Oral

82

Lampiran 9. Data Statistik SPSS Uji statistik kadar kolesterol total hewan uji menggunkan SPSS 1.

Uji normalitas (Uji Saphiro-Wilk)

Tujuan : Untuk mengetahui apakah data

koleterol hewan

uji pada tiap

kelompok terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : H0: Data kolesterol total teridistribusi secara normal Ha: Data kolesterol total tidak terdistribusi secara normal Syarat : H0 diterima jika nilai sig. > 0,05 H0 ditolak jika nilai sig. < 0,05

Tests of Normality Shapiro-Wilk Perlakuan

Statistic

df

Sig.

Kolesterol

Kontrol Normal

.923

4

.552

total

Kontrol Negatif

.980

4

.902

Kontrol Positif

.815

4

.133

Dosis 400 mg/kgBB

.981

4

.908

Dosis 500 mg/kgBB

.940

4

.653

Dosis 600 mg/kgBB

.930

4

.594

a. Lilliefors Significance Correction

Kesimpulan : Dengan melihat data sig. Secara keseluruhan pada tiap kelompok dimana nilai sig. > 0,05 maka dapat dinyatakan bahwa data kolesterol total pada tiap kelompok terdistribusi secara normal.

83

2.

Uji homogenitas (Uji Levene) pada data koleterol total hewan uji tiap kelompok

Tujuan : Untuk mengetahui kesamaan varian data kolesterol total hewan uji pada tiap kelompok. Hipotesis : H0: Variansi data kolesterol total homogen Ha: Variansi data kolesterol tidak homogen Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

Test of Homogeneity of Variances Kolesterol total Levene Statistic

df1 2.305

df2 5

Sig. 18

.087

Kesimpulan : Dengan melihat data sig. Secara keseluruhan pada tiap kelompok dimana nilai sig.

0,087 > 0,05 maka H0 diterima

dengan demikian dapat

dinyatakan bahwa data kolesterol total pada tiap kelompok bervariansi homogen. Sehingga dapat dilanjutkan dengan uji ANOVA.

84

3.

Uji One Way ANOVA pada data kolesterol total hewan kelompok percobaan

Tujuan : Untuk mengetahui apakah ada tidaknya perbedaan secara signifikan ke seluruhan kelompok. Hipotesis : H0: Data kolestero total tidak terdapat perbedaan yang signifikan pada keseluruhan kelompok Ha: Terdapat perbedaan signifikan kolesterol pada keseluruhan kelompok. Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

ANOVA Kolesterol total Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

22515.500

5

4503.100

1737.000

18

96.500

24252.500

23

F 46.664

Sig. .000

Kesimpulan : Nilai sig. 0,000 < 0,05 sehingga H0 ditolak yang artinya terdapat perbedaan signifikan kolesterol total pada keseluruhan data dalam kelompok. Uji ANOVA ini tidak dapat melihat signifikan antar kelompok tetapi melihat signifikan secara keseluruhan. Sehingga untuk melihat signifikan tiap kelompok di lanjutkan dengan uji LDS.

85

4.

Uji Pos Hoc LSD pada data total kolesterol antar kelompok

Tujuan : untuk melihat apakah ada perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan Multiple Comparisons Kolesterol total LSD

Mean (J) perlakuan Difference (I-J) Kontrol Negatif -95.250* Kontrol Positif -14.250 Dosis 400 mg/kgBB -26.750* Dosis 500 mg/kgBB -19.000* Dosis 600 mg/kgBB -20.250* Kontrol Kontrol Normal 95.250* Negatif Kontrol Positif 81.000* Dosis 400 mg/kgBB 68.500* Dosis 500 mg/kgBB 76.250* Dosis 600 mg/kgBB 75.000* Kontrol Kontrol Normal 14.250 Positif Kontrol Negatif -81.000* Dosis 400 mg/kgBB -12.500 Dosis 500 mg/kgBB -4.750 Dosis 600 mg/kgBB -6.000 Dosis Kontrol Normal 26.750* 400 mg/kgBB Kontrol Negatif -68.500* Kontrol Positif 12.500 Dosis 500 mg/kgBB 7.750 Dosis 600 mg/kgBB 6.500 Dosis Kontrol Normal 19.000* 500 mg/kgBB Kontrol Negatif -76.250* Kontrol Positif 4.750 Dosis 400 mg/kgBB -7.750 Dosis 600 mg/kgBB -1.250 Dosis Kontrol Normal 20.250* 600 mg/kgBB Kontrol Negatif -75.000* Kontrol Positif 6.000 Dosis 400 mg/kgBB -6.500 Dosis 500 mg/kgBB 1.250 *. The mean difference is significant at the 0.05 level. (I) perlakuan1 Kontrol Normal

Std. Error 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946 6.946

Sig. .000 .055 .001 .014 .009 .000 .000 .000 .000 .000 .055 .000 .089 .503 .399 .001 .000 .089 .279 .362 .014 .000 .503 .279 .859 .009 .000 .399 .362 .859

95% Confidence Interval Lower Upper Bound Bound -109.84 -80.66 -28.84 .34 -41.34 -12.16 -33.59 -4.41 -34.84 -5.66 80.66 109.84 66.41 95.59 53.91 83.09 61.66 90.84 60.41 89.59 -.34 28.84 -95.59 -66.41 -27.09 2.09 -19.34 9.84 -20.59 8.59 12.16 41.34 -83.09 -53.91 -2.09 27.09 -6.84 22.34 -8.09 21.09 4.41 33.59 -90.84 -61.66 -9.84 19.34 -22.34 6.84 -15.84 13.34 5.66 34.84 -89.59 -60.41 -8.59 20.59 -21.09 8.09 -13.34 15.84

Keterangan : jika terdapat tanda * artinya terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok dan jika tidak ada tanda * maka tidak ada perbedaan yang signifikan.

86

Uji statistik Trigliserida hewan uji menggunkan 1.

Uji normalitas (Uji Saphiro-Wilk)

Tujuan : Untuk mengetahui apakah data trigliserida hewan uji pada tiap kelompok terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : H0: Data trigliserida total secara normal Ha: Data trigliserida tidak terdistribusi secara normal Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

Tests of Normality Shapiro-Wilk Perlakuan Trigliserida

Statistic

df

Sig.

Kontrol Normal

.854

4

.240

Kontrol Negatif

.963

4

.796

Kontrol Positif

.922

4

.548

Dosis 400 mg/kgBB

.933

4

.610

Dosis 500 mg/kgBB

.979

4

.895

Dosis 600 mg/kgBB

.898

4

.419

a. Lilliefors Significance Correction

Kesimpulan : Dengan melihat data sig. Secara keseluruhan pada tiap kelompok dimana nilai sig. > 0,05 maka dapat dinyatakan bahwa data trigliserida pada tiap kelompok terdistribusi secara normal.

87

2.

Uji homogenitas (uji Levene ) pada data trgliserida hewan uji tiap kelompok

Tujuan : Untuk mengetahui kesamaan varian data trigliserida hewan uji pada tiap kelompok. Hipotesis : H0: Variansi data trigliserida homogen H1: Variansi data trigliserida tidak homogen Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

Test of Homogeneity of Variances Trigliserida Levene Statistic

df1 1.462

df2 5

Sig. 18

.251

Kesimpulan : Nilai sig. 0,251 > 0,05 maka dapat dinyatakan bahwa data trigliserida pada tiap kelompok bervariansi

homogen. Sehingga

dapat dilanjutkan dengan uji ANOVA.

88

3.

Uji One Way ANOVA pada data trigliserida hewan kelompok percobaan

Tujuan : Untuk mengetahui apakah ada tidaknya perbedaan secara signifikan ke seluruhan kelompok. Hipotesis : H0: Tidak terdapat perbedaan yang signifikan trigliserida pada keseluruhan kelompok Ha: Terdapat perbedaan signifikan gliserida pada keseluruhan kelompok. Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

ANOVA Trigliserida Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

8623.500

5

1724.700

Within Groups

3691.000

18

205.056

12314.500

23

Total

Kesimpulan : Nilai sig. < 0,05 sehingga H0 ditolak

F 8.411

Sig. .000

yang artinya terdapat

perbedaan signifikan terigliserida pada keseluruhan data dalam kelompok dan tidak perlu dilanjutkan ke uji LSD. Uji ANOVA ini tidak dapat melihat signifikan antar kelompok tetapi melihat signifikan secara keseluruhan.

89

4.

Uji Pos Hoc LSD pada data total kolesterol antar kelompok

Tujuan : untuk melihat apakah ada perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan Multiple Comparisons Trigliserida LSD Mean (I) Perlakuan (J) Perlakuan Difference (I-J) Kontrol Kontrol Negatif -51.750* Normal Kontrol Positif 1.000 Dosis 400 mg/kgBB -20.750 Dosis 500 mg/kgBB 2.250 Dosis 600 mg/kgBB -13.250 Kontrol Kontrol Normal 51.750* Negatif Kontrol Positif 52.750* Dosis 400 mg/kgBB 31.000* Dosis 500 mg/kgBB 54.000* Dosis 600 mg/kgBB 38.500* Kontrol Kontrol Normal -1.000 Positif Kontrol Negatif -52.750* Dosis 400 mg/kgBB -21.750* Dosis 500 mg/kgBB 1.250 Dosis 600 mg/kgBB -14.250 Dosis Kontrol Normal 20.750 400 mg/kgBB Kontrol Negatif -31.000* Kontrol Positif 21.750* Dosis 500 mg/kgBB 23.000* Dosis 600 mg/kgBB 7.500 Dosis Kontrol Normal -2.250 500 mg/kgBB Kontrol Negatif -54.000* Kontrol Positif -1.250 Dosis 400 mg/kgBB -23.000* Dosis 600 mg/kgBB -15.500 Dosis Kontrol Normal 13.250 600 mg/kgBB Kontrol Negatif -38.500* Kontrol Positif 14.250 Dosis 400 mg/kgBB -7.500 Dosis 500 mg/kgBB 15.500 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Std. Error 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126 10.126

Sig. .000 .922 .055 .827 .207 .000 .000 .007 .000 .001 .922 .000 .046 .903 .176 .055 .007 .046 .036 .468 .827 .000 .903 .036 .143 .207 .001 .176 .468 .143

95% Confidence Interval Lower Upper Bound Bound -73.02 -30.48 -20.27 22.27 -42.02 .52 -19.02 23.52 -34.52 8.02 30.48 73.02 31.48 74.02 9.73 52.27 32.73 75.27 17.23 59.77 -22.27 20.27 -74.02 -31.48 -43.02 -.48 -20.02 22.52 -35.52 7.02 -.52 42.02 -52.27 -9.73 .48 43.02 1.73 44.27 -13.77 28.77 -23.52 19.02 -75.27 -32.73 -22.52 20.02 -44.27 -1.73 -36.77 5.77 -8.02 34.52 -59.77 -17.23 -7.02 35.52 -28.77 13.77 -5.77 36.77

Keterangan : jika terdapat tanda * artinya terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok dan jika tidak ada tanda * maka tidak ada perbedaan yang signifikan.

90

Uji statistik HDL hewan uji menggunkan SPSS 1.

Uji normalitas (Uji Saphiro-Wilk)

Tujuan : Untuk mengetahui apakah data HDL hewan uji pada tiap kelompok terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : H0: Data HDL total secara normal Ha: Data HDL tidak terdistribusi secara normal Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

Tests of Normality Shapiro-Wilk Perlakuan HDL

Statistic

df

Sig.

Kontrol Normal

.927

4

.577

Kontrol Negatif

.939

4

.650

Kontrol Positif

.957

4

.761

Dosis 400 mg/kgBB

.927

4

.577

Dosis 500 mg/kgBB

.946

4

.691

Dosis 600 mg/kgBB

.936

4

.630

a. Lilliefors Significance Correction

Kesimpulan : Dengan melihat data sig. Secara keseluruhan pada tiap kelompok dimana nilai sig. > 0,05 maka dapat dinyatakan bahwa data HDL pada tiap kelompok terdistribusi secara normal.

91

2.

Uji homogenitas (uji Levene) pada data HDL hewan uji tiap kelompok

Tujuan : Untuk mengetahui kesamaan varian data HDL hewan uji pada tiap kelompok. Hipotesis : H0: Data HDL homogen Ha: Data HDL tidak homogen Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

Test of Homogeneity of Variances HDL Levene Statistic

df1 1.880

df2 5

Sig. 18

.148

Kesimpulan : Dengan melihat data sig. Secara keseluruhan pada tiap kelompok dimana nilai sig.

0,148 > 0,05 maka H0 diterima

dengan demikian dapat

dinyatakan bahwa data kolesterol total pada tiap kelompok bervariansi homogen. Sehingga dapat dilanjutkan dengan uji ANOVA.

92

3.

Uji One Way ANOVA pada data HDL hewan kelompok percobaan

Tujuan : Untuk mengetahui apakah ada tidaknya perbedaan secara signifikan kelseluruhan kelompok. Hipotesis : H0: Data HDL tidak terdapat perbedaan yang signifikan pada keseluruhan kelompok Ha: Data HDL terdapat perbedaan signifikan pada keseluruhan kelompok. Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

ANOVA HDL Sum of Squares Between Groups

Mean Square

6590.833

5

1318.167

603.000

18

33.500

7193.833

23

Within Groups Total

df

F 39.348

Sig. .000

Kesimpulan : Nilai sig. 0,000 < 0,05 sehingga H0 ditolak yang artinya terdapat perbedaan

signifikan

HDL

pada keseluruhan data dalam

kelompok. Uji ANOVA ini tidak dapat melihat signifikan antar kelompok tetapi melihat signifikan secara keseluruhan. Sehingga untuk melihat signifikan tiap kelompok di lanjutkan dengan uji LDS.

93

4.

Uji Post Hoc LSD pada data HDL antar kelompok

Tujuan : Untuk melihat apakah ada perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan

Multiple Comparisons HDL LSD (I) perlakuan11 Kontrol Normal

Mean (J) perlakuan11 Difference (I-J) Kontrol Negatif 46.750* Kontrol Positif 2.250 Dosis 400 mg/kgBB 34.000* Dosis 500 mg/kgBB 25.750* Dosis 600 mg/kgBB 19.750* Kontrol Kontrol Normal -46.750* Negatif Kontrol Positif -44.500* Dosis 400 mg/kgBB -12.750* Dosis 500 mg/kgBB -21.000* Dosis 600 mg/kgBB -27.000* Kontrol Kontrol Normal -2.250 Positif Kontrol Negatif 44.500* Dosis 400 mg/kgBB 31.750* Dosis 500 mg/kgBB 23.500* Dosis 600 mg/kgBB 17.500* Dosis 400 Kontrol Normal -34.000* mg/kgBB Kontrol Negatif 12.750* Kontrol Positif -31.750* Dosis 500 mg/kgBB -8.250 Dosis 600 mg/kgBB -14.250* Dosis 500 Kontrol Normal -25.750* mg/kgBB Kontrol Negatif 21.000* Kontrol Positif -23.500* Dosis 400 mg/kgBB 8.250 Dosis 600 mg/kgBB -6.000 Dosis 600 Kontrol Normal -19.750* mg/kgBB Kontrol Negatif 27.000* Kontrol Positif -17.500* Dosis 400 mg/kgBB 14.250* Dosis 500 mg/kgBB 6.000 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Std. Error 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093 4.093

Sig. .000 .589 .000 .000 .000 .000 .000 .006 .000 .000 .589 .000 .000 .000 .000 .000 .006 .000 .059 .003 .000 .000 .000 .059 .160 .000 .000 .000 .003 .160

95% Confidence Interval Lower Upper Bound Bound 38.15 55.35 -6.35 10.85 25.40 42.60 17.15 34.35 11.15 28.35 -55.35 -38.15 -53.10 -35.90 -21.35 -4.15 -29.60 -12.40 -35.60 -18.40 -10.85 6.35 35.90 53.10 23.15 40.35 14.90 32.10 8.90 26.10 -42.60 -25.40 4.15 21.35 -40.35 -23.15 -16.85 .35 -22.85 -5.65 -34.35 -17.15 12.40 29.60 -32.10 -14.90 -.35 16.85 -14.60 2.60 -28.35 -11.15 18.40 35.60 -26.10 -8.90 5.65 22.85 -2.60 14.60

Keterangan : jika terdapat tanda * artinya terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok dan jika tidak ada tanda * maka tidak ada perbedaan yang signifikan.

94

Uji statistik LDL hewan uji menggunkan SPSS 19. 1.

Uji normalitas (Uji Saphiro-Wilk)

Tujuan : Untuk mengetahui apakah data LDL hewan uji pada tiap kelompok terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : H0: Data LDL total secara normal Ha: Data LDL tidak terdistribusi secara normal Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05

Tests of Normality Shapiro-Wilk Perlakuan LDL

Statistic

df

Sig.

Kontrol Normal

.993

4

.973

Kontrol Negatif

.969

4

.834

Kontrol Positif

.973

4

.862

Dosis 400 mg/kgBB

.951

4

.724

Dosis 500 mg/kgBB

.809

4

.118

Dosis 600 mg/kgBB

.942

4

.665

a. Lilliefors Significance Correction

Kesimpulan : Dengan melihat data sig. Secara keseluruhan pada tiap kelompok dimana nilai sig. > 0,05 maka dapat dinyatakan bahwa data LDL pada tiap kelompok terdistribusi secara normal.

95

2.

Uji homogenitas (uji Levene) pada data LDL hewan uji tiap kelompok

Tujuan : Untuk mengetahui kesamaan varian data LDL hewan uji pada tiap kelompok. H0: Variansi data homogen, bila nilai sig. > 0,05 H1: Variansi data tidak homogen, bila nilai sig. <0,05

Test of Homogeneity of Variances LDL Levene Statistic

df1 2.124

df2 5

Sig. 18

.109

Kesimpulan : Nilai sig. 0,109 > 0,05 maka H0 diterima dengan demiakian dapat dinyatakan bahwa data LDL

pada tiap kelompok bervariansi

homogen. Sehingga dapat dilanjutkan dengan uji ANOVA.

96

3.

Uji One Way ANOVA pada data LDL hewan kelompok percobaan

Tujuan : Untuk mengetahui apakah ada tidaknya perbedaan secara signifikan kelseluruhan kelompok. Hipotesis : H0: Data LDL Tidak Terdapat perbedaan yang signifikan pada keseluruhan kelompok Ha: Data LDL terdapat perbedaan signifikan pada keseluruhan kelompok. Syarat : H0 diterima bila nilai sig. > 0,05 H0 ditolak bila nilai sig. < 0,05 ANOVA LDL Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

22117.319

5

4423.464

2119.151

18

117.731

24236.470

23

F 37.573

Sig. .000

Kesimpulan : Nilai sig. 0,000 < 0,05 sehingga H0 ditolak dan H1 diterima yang artinya terdapat perbedaan signifikan LDL pada keseluruhan data dalam kelompok. Uji ANOVA ini tidak dapat melihat signifikan antar kelompok tetapi melihat signifikan secara keseluruhan. Sehingga untuk melihat signifikan tiap kelompok di lanjutkan dengan uji LDS.

97

4.

Uji Post Hoc LSD pada data LDL antar kelompok

Tujuan : untuk melihat apakah ada perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan Multiple Comparisons LDL LSD (I) Perlakuan

(J) Perlakuan

Mean Difference (I-J)

Kontrol Negatif -58.498* Kontrol Positif 16.655* Dosis 400 mg/kgBB 17.985* Dosis 500 mg/kgBB 30.445* Dosis 600 mg/kgBB 27.887* Kontrol Kontrol Normal 58.498* Negatif Kontrol Positif 75.153* Dosis 400 mg/kgBB 76.483* Dosis 500 mg/kgBB 88.943* Dosis 600 mg/kgBB 86.385* Kontrol Kontrol Normal -16.655* Positif Kontrol Negatif -75.153* Dosis 400 mg/kgBB 1.330 Dosis 500 mg/kgBB 13.790 Dosis 600 mg/kgBB 11.233 Dosis Kontrol Normal -17.985* 400 mg/kgBB Kontrol Negatif -76.483* Kontrol Positif -1.330 Dosis 500 mg/kgBB 12.460 Dosis 600 mg/kgBB 9.902 Dosis Kontrol Normal -30.445* 500 mg/kgBB Kontrol Negatif -88.943* Kontrol Positif -13.790 Dosis 400 mg/kgBB -12.460 Dosis 600 mg/kgBB -2.557 Dosis Kontrol Normal -27.887* 600 mg/kgBB Kontrol Negatif -86.385* Kontrol Positif -11.233 Dosis 400 mg/kgBB -9.902 Dosis 500 mg/kgBB 2.557 *. The mean difference is significant at the 0.05 level. Kontrol Normal

Std. Error 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672 7.672

Sig. .000 .044 .031 .001 .002 .000 .000 .000 .000 .000 .044 .000 .864 .089 .160 .031 .000 .864 .122 .213 .001 .000 .089 .122 .743 .002 .000 .160 .213 .743

95% Confidence Interval Lower Upper Bound Bound -74.62 -42.38 .54 32.77 1.87 34.10 14.33 46.56 11.77 44.01 42.38 74.62 59.03 91.27 60.36 92.60 72.82 105.06 70.27 102.50 -32.77 -.54 -91.27 -59.03 -14.79 17.45 -2.33 29.91 -4.89 27.35 -34.10 -1.87 -92.60 -60.36 -17.45 14.79 -3.66 28.58 -6.22 26.02 -46.56 -14.33 -105.06 -72.82 -29.91 2.33 -28.58 3.66 -18.68 13.56 -44.01 -11.77 -102.50 -70.27 -27.35 4.89 -26.02 6.22 -13.56 18.68

Keterangan : jika terdapat tanda * artinya terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok dan

jika tidak ada tanda * maka tidak ada

perbedaan yang signifikan.

98

Lampiran 10. Determinasi Tumbuhan

99

100

101

Lampiran 11. Keterangan Penelitian

102

Lampiran 12. Hasil Penelitian

103

Lampiran 13. Dokumentasi Pengumpulan sampel batang galing

Sortasi basah

Pesimasahan batang

perajangan

Pengeringan

Penggilingan

Maserasi

Evaporasi

Ekstrak kental

104

Skrining fitokimia

Adaptasi hewan uji

Penimbangan hewan uji

Pembuatan MDLT dan PTU

Tahapan Induksi

Darah hewan uji

sentrifuge

Reagen kolesterol total

Reagen trigliserida

Reagen HDL

Analisis plasma mencit

Pengambilan darah

105

Lampiran 14. Keterangan Kelaikan Etik (Ethical Clearance)

106