Primera Clase

Primera semana: 14-5-09 Injuria tisular Presencia de microorganismo Endotoxina/LPS desencadena Proceso inflamatorio Activación de Macrófagos Síntesis de citoquinas proinflamatorias Quimiotaxis de células del sistema inmune Eliminación del patógeno Reparación del tejido Resolución de la inflamación. Si los mecanismos de defensa son insuficientes para eliminar el agente infeccioso la respuesta inflamatoria se convierte en sistémica, lo que puede llevar a la sepsis o shock séptico. Sepsis: define el estado de pacientes que exhiben una respuesta inflamatoria sistémica causada por una infección, la cual se disemina por la sangre. Shock séptico: cuadro grave resultado de una sepsis, cuyas manifestaciones son la hipotensión y la Falla multiorgánica (MOF). Angiogénesis: formación de nuevos vasos sanguíneos a partir de otros preexistentes. Macrófagos (Mfs): junto con los neutrófilos, forman parte del sistema fagocítico mononuclear y una de las funciones principales es la fagocitosis. Constituyen el principal mecanismo de defensa del organismo frente a agentes extraños como los microorganismos. En base a su estado de activación, los Mfs pueden polarizarse hacia un fenotipo denominado M1 (activación clásica) o M2 (activación alternativa). Los Mfs

polarizados difieren en expresión de receptores, función efectora y producción de citoquinas y quemoquinas. La activación de los Mfs M1 (o activación clásica) se caracteriza por: • • •

alta capacidad para presentar antígenos alta producción de TNF, IL-12 e IL-23 alta producción de intermediarios tóxicos (especies reactivas de oxígeno (ROI), oxido nítrico (NO)).

Basado en esto, los Mfs M1 estimulan une respuesta Th1 y son considerados como potentes células efectoras capaces de lisar microorganismos y de producir grandes cantidades de citoquinas proinflamatorias. Los Mfs denominados M2 (activación alternativa) se caracterizan por: •

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tener una pobre capacidad de presentar antígeno producen factores, como prostaglandinas, IL-10 y TGF-β, que suprimen la proliferación y actividad de células T Aumento de poliaminas

Por lo tanto, los Mfs M2 suprimen la respuesta inmune y regulan la inflamación, están mejor adaptados para la “limpieza” de “deshechos”, promover la angiogénesis, el remodelado y reparación de tejidos. Segunda semana: 21-5-09 En este segundo día, el objetivo fue extraer macrófagos peritoneales de ratones de la cepa Balb/c. Para esto, preparamos medio de cultivo denominado F12 al 10 % de suero fetal bovino. Una vez sacrificado el ratón, se le inyecta 5ml del medio de cultivo en forma intraperitoneal (i.p.). Luego se extrae de nuevo el medio de cultivo recuperando suspensiones celulares que se dejaron adherir al plástico en placas de Petri durante 2 h. a 37°C. Una vez trascurrido ese tiempo se realizan dos lavados con PBS, las células adheridas (macrófagos) se trataron con lipopolisacárido de E. Coli en una concentración de 100 ug/ml durante 24 hs. Al otro día, se obtuvieron los sobrenadantes de cultivo y lisados celulares, de los cuales se dejo una alícuota para medir proteína por Bradford.

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Obtención de macrófagos

i.p.

Ratones Balb/c

sacrificio y obtención de células peritoneales

Adhesión al plástico durante 2 hs a 37ºC. Lavados con PBS

Macrófagos adheridos al plástico