Osnove Farm. Biotehn. - Izpit-28-2-2007

OSNOVE FARM. BIOTEHNOLOGIJE IZPIT 28. 2. 2007 1.Pri pripravi bioloških zdravil z rekombinantnimi proteini uporabljamo v formulaciji človeški albumin. a) Zakaj? b) Česa se bojimo pri uporabi človeškega albumina? c) Ali obstajajo alternativni viri za pripravo človeškega albumina (brez bojazni točke b)? 2. Naštej bistveno razliko pri pripravi mišjih in humanih monoklonskih protiteles? 3. Za proizvodnjo paklitaksela (Taxola) so pred 15 leti uporabljali skorjo drevesa Taxus brevifolia. To drevo je ogroženo, za terapijo enega bolnika so uporabili do 30 dreves, zato so izolacijo paklitaksela opustili. Kakšno alternativno biotehnološko metodo predlagaš? Kako bi pripravil sistem? 4. Naštej vsaj 4 procesne nečistote, ki spremljajo procese v farm. biotehnologiji! 5. Zakaj moramo v celici proizvajalki rekombinantnega retrovirusnega vektorja izvesti dvojno okužbo? Nazorno in razumljivo opiši! 6. Kdaj dajemo pasivni imunizaciji prednost pred aktivno? 7. Ali z metodo verižne reakcije s polimerazo lahko pomnožimo informacijo, ki se nahaja na RNA molekulah? 8. V projektu sekveniranja humanega genoma smo naleteli na gen TCLA 1. Prav tako smo našli mRNA, ki kodira za TCLA 1 v hepatocitih. Funkcije proteina TCLA 1 ne poznamo. Kako bi z metodami farm. biotehnologije in molekularne biologije ugotovil funkcijo najdenega gena in odgovarjajočega proteina? 9. Katere rastlinske vrste uporabljamo za izolacijo prekurzorjev steroidnih zdravil? Nariši in natančno označi mesta na steroidnem skeletu. 10. Katera sesalska celična linija se največkrat uporablja za izražanje rekombinantnih proteinov? 11. Biotehnološki problem Rekombinantni insulin izdelujemo tudi z izražanjem v navadnih kvasovkah. Pri bioprodukciji lahko nastane do 6% insulina z višjo molsko maso od pričakovane. Razlika 8 kDA je zaradi vezave manoznih enot. Napiši oz. komentiraj: a) V katerih ekspresijskih sistemih običajno izražamo rekombinantni insulin? b) Kako bi odstranil visokomanozni insulin iz pripravka? c) Koliko celokupnih nečistot z višjo molsko maso je lahko v končnem zdravilu z insulinom po Ph. Eur? d) Na osnovi odgovora a) natančno napiši, kako bi sestavil ekspresijski vektor ( napiši vse ključne elemente vektorja za uspešno ekspresijo) za izločanje rekombinantnega insulina v rastni medij, po tehnologiji odgovora a)! e) Kakšne neželjene učinke bi lahko pričakovali, če bi bil v končnem izdelku prisoten visokomanozni insulin? f) V pripravku imamo insulin, insulinski dimer in proteinsko nečistoto, velikosti insulinskega dimera, njena primarna struktura pa nima povezave z insulinom. Napiši primerno analizno metodo (ali več metod), s katero bo detektiral vse tri proteine in določil, kateri pripada insulinski strukturi in kateri ne!