Medios De Cultivo

Medios de cultivo de bacterias Preparación y colonias de bacterias

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Tipos de medios Los medios de cultivo se dividen acorde a sus características en generales, selectivos o diferenciales. Generales: permiten el crecimiento de cualquier tipo de bacteria. Selectivos: sólo permiten crecer un cierto tipo, p.ej. sólo un género. Diferenciales: permiten distinguir entre dos o mas bacterias por características coloniales. 2-sep-05

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Medios generales • Agar Soya Tripticasa (TSA)* • Agar marino 2216 o Zobell • Agar Nutritivo** * añadir 2.0 % NaCl ** añadir 2.5 % NaCl 2-sep-05

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Medios selectivos • Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS): Vibrio • Agar Cetrimida: Pseudomonas

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Medios diferenciales • Agar Eosina Azul de Metileno: coliformes y E. coli

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Preparación de medios • Siempre preparar los medios con agua destilada (salvo el Marino). • Es necesario ajustar simpre el pH. • Todos los utensilios deben estar perfectamente limpios. • Todos los medios deben esterilizarse de alguna forma. 2-sep-05

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• Los medios se preparan en matraces cónicos con tapa • Se pesa la cantidad de medio requerida, se disuelve o suspende en el agua. • Se ajusta el pH. • Se esteriliza a 121°C por 20 min • Se espera a que enfrie (42°C o hasta que se pueda sostener el recipiente sin quemarse la mano) • Servir 20 ml Aprox. en cada caja de Petri

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Esterilización Es el proceso mediante el cual se destruyen o remueven todos los microrganismos

• Tipos de esterilización – Húmeda, autoclave – Seca, horno – Gaseosa: óxido

etileno, formaldehído o H2O2.

– Filtración:

membranas de 0.45 y 0.22 µm.

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Esterilización húmeda • No colocar recipientes completamente cerrados en la autoclave. • El vapor debe entrar en contacto con todo lo que se quiere esterilizar • No esterilizar solventes o químicos corrosivos • Si se esterilizan líquidos, bajar la presión lentamente y dejar enfriar los recipientes dentro de la autoclave • Se esterilizan mejor los líquidos si se dividen en pequeños recipientes que en uno grande (> 1 lt) 2-sep-05

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Esterilización húmeda (Cont.) • Temperatura: 121 -123°C (250-254°F) • Presión: 15 psi • Tiempo: 10-15 min instrumentos* 20 -30 min líquidos* * el tiempo depende de que tan llena este la cámara de la autoclave, muy llena mas tiempo.

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Agar TCBS

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agar Marino y TSA

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Colonias en agar TCBS

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Purificación de vibrios

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Colonias en agar Marino

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Vibrios en TSA

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