Latep.pdf

LAPORAN TETAP PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI UMUM

OLEH KELOMPOK XI

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI PANGAN DAN AGROINDUSTRI UNIVERSITAS MATARAM 2018

i

HALAMAN PENGESAHAN

Laporan tetap ini merupakan salah satu syarat telah menyelesaikan Praktikum Mikrobiologi Umum pada Semester Ganjil Tahun Ajaran 2018/2019 di Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Mataram, 7 Januari 2019 Mengetahui, Praktikan, Co. Asisten Praktikum Mikrobiologi Umum Ade Irma Juliana NIM. J1A016001

Ainun Habibah NIM. J1A017002

Ferdion Oktonogroho Putra NIM. J1A016036

Arista DwiJayati NIM. J1A017006

Ghalib Rifaldi Darmita NIM. J1A016038

Arya Gunadi NIM. J1A017008

M. Farras Abiyyuddin NIM. J1A016057

Astri Noviatami NIM. J1A017010

Ni Made Neni Parmiutari NIM. J1A016077

Aulia Islamiyati Yusuf NIM. J1A017014

Rita Hidayati NIM. J1A016092 Wiwik Pratiwi NIM. J1A 015 097 Zahrah Khaerani NIM. J1A016105 Zikratun Zainatun NIM. J1A016106 Zohratul Aini NIM. J1A 015 103 Menyetujui, Koordinator Praktikum Mikrobiologi Umum

Tri Isti Rahayu, S.TP., M.Si

ii

KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena dengan rahmat, karunia, dan hidayah-Nya kami dapat menyelesaikan Laporan Tetap Praktikum Mikrobiologi Umum ini tepat pada waktunya. Laporan tetap Praktikum Mikrobiologi Umum ini terdiri dari 9 acara yakni Acara 1 Pengenalan Alat-alat Praktikum, Acara 2 Medium dan Cara Pembuatan Medium, Acara 3 Teknik Isolasi Mikroba, Acara 4 Morfologi Koloni Bakteri, Acara 5 Perhitungan Jumlah Mikroba, Acara 6 Morfologi Jamur Benang, Acara 7 Morfologi Khamir dan Spora Khamir, Acara 8 Pengecatan dan Morfologi Bakteri, dan Acara 9 Pengaruh Faktor Lingkungan Terhadap Pertumbuhan Bakteri. Terima kasih yang sebesar-besarnya kami ucapkan kepada pihak-pihak yang telah membantu kami, terutama kepada koordinator praktikum dan para Koordinator

Assisten

Praktikum

Mikrobiologi

Umum

yang

telah

banyak

membimbing kami dengan baik selama praktikum maupun dalam penyusunan laporan ini. Kami sadar bahwa di dalam laporan tetap ini terdapat kekurangan dan jauh dari kata sempurna. Oleh sebab itu, kami berharap adanya kritik, saran dan usulan demi perbaikan laporan praktikum di masa yang akan datang, mengingat tidak ada sesuatu yang sempurna tanpa saran yang membangun. Semoga laporan tetap praktikum ini dapat dipahami bagi siapapun yang membacanya. Sekiranya laporan yang telah disusun ini dapat bermanfaat bagi kami sendiri dan para pembaca. Mataram, 2 Januari 2018

Penyusun

iii

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ..............................................................................................i HALAMAN PENGESAHAN .............................. Error! Bookmark not defined. KATA PENGANTAR ........................................................................................... iii DAFTAR ISI .......................................................................................................... iv DAFTAR TABEL............................................................................................... viiii ACARA I PENGENALAN ALAT – ALAT PRAKTIKUM ............................. 1 PENDAHULUAN ............................................................................................... 2 TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................................... 3 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ....................................................................... 4 HASIL PENGAMATAN .................................................................................... 5 PEMBAHASAN................................................................................................ 16 KESIMPULAN ................................................................................................. 19 ACARA II MEDIUM DAN CARA PEMBUATAN MEDIUM ...................... 20 PENDAHULUAN ............................................................................................. 21 TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 23 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ..................................................................... 25 HASIL PENGAMATAN .................................................................................. 29 PEMBAHASAN................................................................................................ 30 KESIMPULAN ................................................................................................. 33 ACARA III TEKNIK ISOLASI MIKROBA ................................................... 34 PENDAHULUAN ............................................................................................. 35 TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 37 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ..................................................................... 39 HASIL PENGAMATAN .................................................................................. 43 PEMBAHASAN................................................................................................ 47 KESIMPULAN ................................................................................................. 53 ACARA IV MORFOLOGI KOLONI BAKTERI ........................................... 54 PENDAHULUAN ............................................................................................. 55

iv

TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 57 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ..................................................................... 59 HASIL PENGAMATAN .................................................................................. 62 PEMBAHASAN................................................................................................ 66 KESIMPULAN ................................................................................................. 72 ACARA V PERHITUNGAN JUMLAH KOLONI MIKROBA..................... 73 PENDAHULUAN ............................................................................................. 74 TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 76 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ..................................................................... 78 HASIL PENGAMATAN .................................................................................. 80 PEMBAHASAN................................................................................................ 83 KESIMPULAN ................................................................................................. 87 ACARA VI MORFOLOGI JAMUR BENANG............................................... 88 PENDAHULUAN ............................................................................................. 89 TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 91 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ..................................................................... 93 HASIL PENGAMATAN .................................................................................. 94 PEMBAHASAN.............................................................................................. 118 KESIMPULAN ............................................................................................... 121 ACARA VII MORFOLOGI KHAMIR DAN SPORA KHAMIR................ 122 PENDAHULUAN ........................................................................................... 123 TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................. 124 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ................................................................... 126 HASIL PENGAMATAN ................................................................................ 132 PEMBAHASAN.............................................................................................. 135 KESIMPULAN ............................................................................................... 138 ACARA VIII PENGECATAN DAN MORFOLOGI BAKTERI ................. 139 PENDAHULUAN ........................................................................................... 140 TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................. 142 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ................................................................... 144 HASIL PENGAMATAN ................................................................................ 147 v

PEMBAHASAN.............................................................................................. 149 KESIMPULAN ............................................................................................... 152 ACARA IX PENGARUH FAKTOR LINGKUNGAN TERHADAP ................ PERTUMBUHAN BAKTERI...................................................... 153 PENDAHULUAN ........................................................................................... 154 TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................. 156 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ................................................................... 158 HASIL PENGAMATAN ................................................................................ 159 PEMBAHASAN.............................................................................................. 160 KESIMPULAN ............................................................................................... 163 DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 164

vi

DAFTAR TABEL

Tabel 1.1 Hasil Pengamatan Pengenalan Alat – Alat Praktikum. ........................... 5 Tabel 2.1 Hasil Pengamatan Medium Dan Cara Pembuatan Medium.................. 29 Tabel 3.1 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba. .......................................... 43 Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri. ...................................... 62 Tabel 5.1 Hasil Pengamatan Jumlah Koloni Mikroba Medium Plate Counte Agar ( PCA) ................................................................................................................... 80 Tabel 6.1 Hasil Pengamatan Morfologi Jamur Benang ........................................ 94 Tabel 7.1 Hasil Pengamatan Morfologi Khamir dan Spora Khamir ................... 133 Tabel 8.1 Hasil Pengamatan Pengecatan dan Morfologi Bakteri Gram ............. 147 Tabel 9.1 Hasil Pengamatan Pengaruh Suhu Terhadap Pertumbuhan Bakteri ... 159

vii

ACARA I PENGENALAN ALAT – ALAT PRAKTIKUM

1

ACARA I PENGENALAN ALAT – ALAT PRAKTIKUM

PENDAHULUAN

Latar belakang Mikrobiologi merupakan salah satu cabang ilmu yang mempelajari tentang mikroba. Mikroba merupakan makhluk hidup berukuran kecil dan tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Mikroba ada yang bersifat menguntungkan ada yang bersifat merugikan (patogen). Mikroba termasuk kelompok organisme mikroskopik yang terdapat sebagai sel tunggal maupun kelompok sel, seperti bakteri, alga protozoa, dan virus (Prahatomaputro, 2009) Hal laboratorium.

yang

menjadi

Laboratorium

penunjang digunakan

pembelajaran sebagai

tempat

mikrobiologi untuk

yaitu

melakukan

penelitian maupun percobaan guna memahami hal – hal berkaitan dengan mikroorganisme. Dalam laboratorium terdapat berbagai macam peralatan dengan fungsi dan cara pemakaian yang berbeda – beda. Bekerja di laboratorium tanpa mengetahui fungsi dan cara pemakaian dari alat

–

alat tersebut dapat

menimbulkan bahaya dengan resiko tinggi. Pengenalan alat praktikum bertujuan untuk mengetahui cara pemakaian dan fungsi dari perlatan di dalam laboratorium. Alat – alat praktikum yang terdapat di laboratorium memiliki spesifikasi, cara pemakaian dan fungsi yang berbeda. Alat – alat praktikum juga dapat menyebabkan bahaya jika cara pemakaian tidak sesuai dengan petunjuk. Oleh karena itu perlu dilakukan pengenalan alat agar dapat mengurangi resiko budaya. Tujuan praktikum Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui alat – alat yang digunakan

dalam

laboratorium

mikrobiologi

beserta

fungsi

dan

cara

penggunannya yang benar serta spesifikasi masing – masing alat tersebut.

2

TINJAUAN PUSTAKA

Mikrobiologi merupakan ilmu yang mempelajari jasad hidup kecil dan sulit diamati dengan mata telanjang. Jasad hidup yang sangat kecil ukurannya disebut mikroba. Mikroba dapat ditemukan di dalam tubuh manusia, hewan, tanaman dan lingkungan. Mikroba meliputi bakteri, jamur, virus dan khamir. Mikroorganisme ada yang merugikan dan ada yang bersifat menguntungkan (simbion) (Muwardi, 2015). Pembelajaran

mikrobiologi tidak

terlepas

dari adanya laboratorium.

Laboratorium merupakan suatu ruangan atau tempat riset ilmiah, eksperimen dan pengukuran

atau

pelatihan

ilmiah.

Laboratorium biasanya digunakan untuk

memungkinkan dilakukannya kegiatan – kegiatan tersebut secara terkendali. Dalam pendidikan, labortorium merupakan tempat untuk belajar mengajar melalui metode

praktikum

yang

menghasilkan

praktikum

hasil

pengamatan

atau

pengalaman belajar bagi siswa (Syakbania & Wahyuningsih, 2017). Bekerja dalam laboratorium, praktikan harus mengenal dan memahami fungsi dan cara kerja dari alat – alat dalam laboratorium. Pengenalan alat ini merupakan faktor penting guna mendukung keberhasilan percobaan. Dengan mengenal dan mengetahui fungsi dari alat maka dapat mengurangi resiko bahaya pada saat melakukan percobaan. Selain itu, dengan mengenal alat – alat di laboratorium, maka dapat memperkecil kesalahan data pada saat membaca data, karena setiap alat telah dirancang dengan spesifikasi yang berbeda – beda (Laila, 2009). Peralatan yang biasanya terdapat dalam laboratorium mikrobiologi antara lain, incubator, waterbath, colony counter, hot plate, dan lain sebagainya. Peralatan tersebut merupakan sebagian kecil dari peralatan yang terdapat di laboratorium. Selain itu, terdapat pula alat lainnya seperti mikroskop. Mikroskop merupakan alat yang sering kita gunakan dan jumpai dalam laboratorium mikrobiologi. Alat ini berfungsi untuk memberikan dan mempermudah mahasiwa untuk dapat melihat struktur organisme yamg tidak dapat terlihat dengan mata telanjan (Lay, 2008)

3

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 13 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram Alat dan bahan praktikum Adapun alat – alat yang digunakan pada praktikum ini adalah alat glassware dan non glassware. Alat alat glassware terdiri dari bunsen,cawan petri, corong,

drigalski, erlenmeyer, gelas ukur, jarum ent, jarum ose, jarum

preparat,labu ukur, mortal dan palu, spatula dan tabung reaksi. Sedangkan alat non glassware terdiri dari autoclave, colony counter, digital orbital and shaker, hot plate, incubator, Laminar Air Flow, magnetic stirrer, micropipet, mikroskop, minus centrifuge, neraca analitik, rak tabung reaksi, shaking incubator, stomacher, waterbath/microwaterbath dan yellowtip atau bluetip. Prosedur kerja Disiapkan alat – alat praktikum

Diamati bentuk dan fungsi alat – alat praktikum

Digambar alat – alat praktikum serta ditulis fungsi dan keterangannya

4

HASIL PENGAMATAN Tabel 1.1 Hasil Pengamatan Pengenalan Alat – Alat Praktikum. No Nama alat dan gambar Fungsi Glassware 1. Bunsen Digunakan untuk a memanaskan larutan dan dapat digunalan untuk sterilisasi alat – alat praktikum. Bagian- bagiannya: a. Tutup bunsen b. Sumbu bunsen c. Tabung bunsen d. Bahan bakar berupa spiritus

Keterangan Bahan bakar: Gas atau etanol Bahan: Boronsilikat

b c d 2

Cawan Petri

Digunakan untuk menyimpan media dan sebagai wadah pembiakan sel bakteri dan jamur

Bahan: Boronsilikat Ukuran: 9cm

3

Corong

Digunakan untuk memasukkan cairan ke dalam botol, dari botol yang memiliki permukaan besar ke dalam botol yang permukaannya kecil.

Merk: Herma

4

Drigalski

Digunakan untuk meratakan biakan pada suatu media, terutama penambahan dengan metode sebar.

Diameter: +- 0,5cm

a

5

Bagian – bagian: a. Ujung berbentuk segiitiga b. Gagang

5

b Erlenmeyer a b

Digunakan sebagai tempat penyimpanan medium, membuat medium dan memanaskan medium serta mencampurkan zat. Bagian- bagian: a. Leher erlenmeyer b. Badan erlenmeyer c. Dasar erlenmeyer

Volume: ± 10 ml – 2500 ml

Digunakan untuk wadah guna mengukur volume larutan yang tidak membutuhkan ketelitian tinggi

Ukuran: 5 ml – 12 ml Merk: Pyrex

Digunakan untuk mengambil mikroba atau memindahkan kultur asli atau biakkan ke dalam medium embiakan. Bagian – bagian: a. Ujung berbentuk L b. Gagang

Terbuat dari jarum yang ujungnya dibengkokkan Ukuran: 1mm x 1 mm

Digunakan ntuk

Terbuat dari :

c 6

Gelas Ukur

7

Jarum ent a

b 8

Jarum ose

6

a

9

B Jarum preparat a

memindahkan suspensi dalam bentuk cair untuk diletakkan pada media dengan metode gores. Bagian – bagian: a. Ujung berbentuk bulat b. Gagang

kawat chrom Ukuran: ± 0,5 – 0,75 mm

Digunakan untuk menipiskan gumpalan objek untuk suspensi biakkan terutama objek yang mengandung misellium jamur. Bagian – bagian: a. Ujung berbentuk lurus b. Gagang

Terbuat dari : jarum Ukuran: ±1 – 1,5 mm

Digunakan untuk menghancurkan atau menghaluskan bahan. Bagian – bagian: a. Pestle/palu b. Mortal c. Mulut mortal

Bahan: Porselin Merk: Roswo

b 10

Mortal dan palu a

b

c 11

Spatulla

Digunakan untuk Merk: Iwaki mengaduk larutan dan mengambil obyek padat

12

Tabung reaksi

Digunakan sebagai tempat untuk merekasikan bahan kimia, dan dapat

Ukuran: 10 x 75mm 12 x 100mm Merk: AGL

7

Non glassware 13 Autoclave f

e a d

c g b

digunakan untuk pembiakan mikroorganisme dalam medium cair

Iwaki CT

Digunakan untuk mensterilkan alat – alat dan bahan yang telah digunakan dengan menggunakan uap air dengan tekanan tinggi, biasanya suhu yang digunakan ± 121 0 C dalam waktu 15 menit. Bagian – bagian: a. Tombol on/off untuk menghidupkan atau mematikan mesin autoclave b. Sekrup pengaman untuk menjaga besaran dan tekanan uap yang ada di dalam autoclave c. Lempeng sumber panas, membantu mengubah energi listrik menjadi energi kalor saat proses sterilisasi berlangsung d. Termometer, untuk mengetahui dan mengamati suhu yang dibutuhkan e. Pengatur tekanan, untuk mengetahui tekanan uap yang ada dalam autoclave f. Cover plate g. Chamber (ruang). untuk meletakkan

Merk: Hiramaya Volt: 120V 50 – 60 Hz

8

14

Colony counter

a c

b d

15

Digital orbital and shaker

d

a

b

c

benda yang akan disterlkan Digunakan untuk menghitung jumlah koloni mikroba secara otomatis setelah dilakukan inkubasi. Bagian – bagian: a. Monitor angka, untuk menampilkan keterangan jumlah angka b. Tombol reset , untuk memulai hitungan dari awal c. Kaca pembesar untuk memberikan bayang yang kecil menjadi besar d. Worfugel Disk , untuk tempat meletakkan cawan petri yang dilengkapi garis – garis kotak untuk mempermudah pembacaan Digunakan untuk menghomogenisasi campuran larutan dan mempercepat proses pendinginan larutan serta menjaga aserasi tetap merata dan optimal dalam keperluan inkubasi sampel. Bagian –bagian: a. Tombol start – stop, untuk memulai dan menghentikan proses b. Pengaturan kecepatan, untuk mengatur kecepatan putaran

Merk: Funke Gerber Kapasitas: 0,999985 Daya: 230Volt Diameter: 110mm

Merk: Heidolp pH Unirox 100 AC: 230 – 240V 50 – 60 Hz

9

16

Hot plate a

c b 17

Incubator

a

b

c

c. Layar, untuk menunjukkan waktu dan kecepatam saat proses berlangsung d. Tempat meletakkan wadah seperti erlenmeyer dan gelas beaker Digunakan untuk proses pemanasan dan untuk membantu proses homogenisasi larutan. Bagian – bagian: a. Pelat, untuk meletakkan wadah sampel yang akan dipanaskan b. Pengatur kecepatan, untuk mengatur putaran pelat c. Pengatur suhu, untuk mengatur tinggi renddahya suhu yang digunakan selama proses pemanasan berlangsung Digunakan untuk menginkubasi atau menumbuhkan mikroorganisme yang ingin ditumbuhkan atau dibiakan. Suhu yang diunakan ± 37 0 C dan dengan jangka waktu yang telah diatur. Bagian – bagian: a. Tombol panel, terdiri dari tombol power, untuk menghidupkan dan mematikan incubator b. Tombol suhu, digunakan untuk mengatur suhu yang

Merk: Heidolph MRHeistandart Max power: 0,820 kw Suhu: 300 derajat C Max speed: 1400 rpm Diameter plate: 145mm

Merk: Memmert Suhu: 5 0 C – 80 0C Volume:230V, 50/60Hz/apptok, 1800 w

10

18

Laminar Air Flow

a

c

19

Magnetic strirer

b

digunakan dan tombol timer untuk mengatur waktu c. Pintu incubator, untuk membuka dan menutup incubator, bagian dalam incubatr terdiri dari rak incubator yang digunakan sebagai tempat meletakan bahan yang akan diinkubasi Digunakan sebagai tempat bekerja secara aseptis. Sebelum digunakan dibersihkan terlebih dahulu, kemudian disterilkan dengan alkohol dan ditutup. Bagian – bagian: a. Tombol blower speed, untuk mengatur kecepatan aliran dari laur ke dalam selama proses berlangsung b. HEPA Filter, untuk memfilter atau menyaring udara c. Tombol sinar ultraviolet, untuk menyalakan atau mematikan penggunaan radiasi UV Digunakan untuk homogenisasi dan pengadukan larutan kimia

Merk: ESC O Daya: 200 watt High intesity: >800 lux Produsen: CHC-2AB-CO, 2td

Merk: DLAB Produsen: USA

11

20

Micropipet

a

c b

21

Mikroskop

Digunakan untuk memindahkan cairan berukuran (bervolume) cukup kecil, biasanya kurang dari 100 𝜇m Bagian – bagian: a. Tombol penyemprot, untuk mengambil ( tekan 1x ) dan menyemprot (tekan 2x) atau mengeluarkan cairan atau suspensi b. Tombol ejector tip, untuk melepas tip dari mikropipet setellah diperoleh 3 nuzzle yang berfungsi untuk menggabungkan bagian ujung micropipet yang akan dihubungkan dengan tip Digunakan untuk memperbesar bayangan benda, terutama benda yang tidak dapat dilihat oleh mata telanjang. Bagian – bagian: a. Lensa okuler, untuk membentuk bayangan yang dan lensa obyektif b. Skrup dapat dihasilkan dari lensa obyektif c. Tubus, untuk mengatur focus dan sebagai pegangan serta penghubung antara lensa okuler d. Skrup pengatur tubus halus, untuk menurunkan Tabung

Merk: Eppendof Research Plus

Merk: Olympus Pencahayaan: 6V/20w.100240v,500/160 Hz

12

a

d

b

c

g

i

f

22

Minus Centrifuge

23

Neraca analitik

mikroskop dengan lambat e. Skrup pengatur tubus kasa, untuk menurunkan tabung dengan cepat f. Meja benda, sebagai tempat untuk menempatkan obyek yang akan diamati g. Konsensor, untuk h menumpullkan cahaya h. Skrup pengatur kodensor, untuk mengatur kumpulan cahya yang masuk ke dalm mikroskop i. Revoler, untuk memutar lensa obyektif sehingga dapat merubah perbesaran j. Lensa obyektif, untuk membentuk bayanngan yang dapat dilihat melalui okuler Digunakan untuk sentrifugasi atau untuk memisahkan mikroba dengan larutan atau medium. Prinsip kerja, yaitu dengan cara memutar bahan dalam tabung reaksi dengan suhu yang telag diatur

Digunakan untuk menimbang bahan yang akan digunakan dengan ketelitian tinggi bahka mencapai 4 angka

Merk: Prismr

Merk: Kern ABJ

13

a

dibelakang koma. Bagian – bagian: a. Piringan timbangan b. Tare c. LCD

c

b 24

Rak tabung reaksi

Digunakan sebagai tempat untuk meletakkan tabung reaksi

Bahan: Kayu atau besi Merk: Roswo

25

Shaking incubator

Digunakan untuk mengocok suatu bahan kimia dengan suhu dan tekanan yang tetap. Biasanya digunakan untuk maserasi dan inkubasi mikroba. Bagian – bagian: a. Pintu shaking incubator b. Shaker, untuk meletakkan wadah

Merk: Labnet Daya: 220 VAC/600W

a b 26

Stomacher a

Digunakan untuk menghancurkan sampel dengan cara ditekan dengan menggunakan satu lempeng yang dinamakan pedal. b Bagian – bagian: a. Pembuka stomacher b. Pedal

Merk: Big Mixer

14

27

Waterbath/mikrowaterbath

28

Vortex a

29

Yellow tip atau blue tip

Digunakan untuk memanaskan media atau sterilisasi dn inkubasi dengan menggunakan air pada suhu tinggi. Selain itu, dapat juga digunakan untuk mempertahankan suhu agar media tidak membeku pada waterbath suhu dapat diatur Digunakan untuk menghomogenisasikan larutan yang lebih berat dalam tabung reaksi Bagian – bagian: a. Driver shaft untuk tempat meletakkan tabung reaksi yang isinya akan dihomogenkan b. Tombol power c. Pengatur kecepatan

Merk: GFL Data: 110V Suhu: 40 – 45 C

Digunakan sebagai tempat menampung larutan yang akan dihisap oleh micropipet. Bluetip digunakan untuk micropipet 1ml dan yellowtip untuk micropipet 0,1ml

Merk: Eppendarf

Merk: Heildorph Daya: 220 – 23-V/110 – 120V

15

PEMBAHASAN

Mikrobiologi merupakan ilmu yang mempelajari tentang mikroorganisme. Mikroorganisme merupakann jasad hidup berukuran kecil dan sulit diamati dengan mata telanjang. Mikroorganisme dapat hidup dimana – mana, dan dapat bersifat patogenik ataupun bersifat simbion. Mikroorganisme dapat ditemukan dalam tubuh manusia, hewan, dan tumbuhan. Contoh dari mikroorganisme antara lain, bakteri, jamur/kapang, khamir dan virus – virus merupakan mikroorganisme yang berisfat patogenik. Sedangkan bakteri, jamur dan khamir bersifat simbion namun terdapat beberapa jenis yang bersifat patogenik (Muwardi, 2015). Mempelajari ilmu

biologi tidak

terlepas dari praktikum.

Praktikum

dilakukan disebuah laboratorium. Laboratorium merupakan satu ruangan yang berbentuk seperti gedung namun ada beberapa yang terdapat di alam liar. Laboratorium percobaan

digunakan

percobaan

untuk dan

melakukan

pengukuran

riset

atau

ilmiah,

pelatihan

eksperimen ilmiah.

atau

Di dalam

laboratorium terdapat banyak alat – alat yang memiliki fungsi dan cara pemakaian yang berbeda

–

beda.

Selain itu, laboratorium harus dapat memberikan

kenyamanan dan keamanan serta kesehatan kepada semua orang yang melakukan aktifitas di dalamnya (Syakbania & Wahyuningsih, 2017) Bekerja dalam laboratorium harus selalu aseptis. Aspetis dapat diartikan bebas dari mikroba atau mikroorganisme. Aspetis mengacu pada praktek yang digunakan unttuk menghindari kontaminasi dengan mikroba, terutama mikroba yang bersifat patogen. Bekerja secara aseptis penting dilakukan agar dapat terlindungi dari kontaminasi mikroba patogen selama penelitian atau percobaan sedang berlangsung. Alat – alat yang terdapat di dalam laboratorium terdapat dalam dua jenis yaitu, alat glassware dan non glassware. Alat glassware terbuat dari kaca yang mudah pecaah, bersifat tahan panas dan apabila dipanaskan dengan menggunakan api tidak menjadi kusam. Sedangkan alat non glassware yaitu alat yang tidak terbuat dari kaca melainkan terbuat dari besi, kayu, alumuniu plat dan stainless. Alat non glassware tidak mudah pecah dan memiliki ukuran yang lebih besar.

16

Alat – alat yang termasuk glassware antara lain, cawan petri, jarum ent, jarum ose, jarum preparat, erlenmeyer, dan lain sebagainya. Sedangkan alat yang termasuk alat nonglassware yaitu autoclave, colony counter, digital orbital and shaker, incubator, laminar air flow, dan lain sebagainya. Cawan petri termasuk alat glassware yang berbentuk bundar yang digunakan sebagai wadah untuk pembiakan sel. Prinsip kerja dari alat ini yaitu medium dituang kedalam cawan yang ukurannya lebih kecil, sedangkan cawan yang ukurannya lebih besar digunakan sebagai penutup. Selain itu juga terdapat jarum ent, jarum ose, jarum preparat yang terbuat dari kawat. Jarum ent ujung dari kawat di bengkokkan sehingga membentuk huruf L. Jarum ent digunakan untuk mengambil atau memindahkan kultur asli atau biakan kedalam medium. Prinsip kerja alat ini yaitu, sebelum jarum ent digunakan, terlebih dahulu disterilakan dengan cara memanaskan ujung jarum hingga berpijar, kemudian didinginkan lalu digunakan untuk memindahkan biakan. Jarum ose, terbuat dari kawat yang ujungnya dibuat seperti lingkaran. Jarum ose digunakan untuk memindahkan suspensi berupa larutan atau biakan dalam medium cair. Prinsip kerja dari jarum ose sama dengan prinsip kerja jarum ent,

namun jarum ose

digunakan untuk pembiakan dengan mengguunakan

metose gores. Sedangkan jarum preparat digunakan untuk menipiskan gumpalan objek, dengan metode tusuk. Prinsip kerja dari jarum preparat sama dengan prinsip kerja dari jarum ent dan jarum ose. Erlenmeyer berfungsi sebagai wadah atau tempat penyimpanan, pembuatan dan pemanasan larutan atau medium. Prinsip kerja dari alat ini yaitu, menuangkan larutan kimia atau melartkan bahan bahan yang digunakan untuk pembuatan medium. Alat non glassware juga termasuk peralatan yang terdapat di dalam laboratorium. Alat yang termasuk alat non glassware,

contohnya, autoclave,

colony counter, digital orbital and shaker dan lain sebagainya. Autoclave merupakan alat yang berfungsi untuk mensterilkan alat – alatt praktikum dengan suhu yang tinggi. Prinsip kerja dari alat ini yaitu, memasukkan alat yang akan disterilkan, kemudian ditutup dan skrup dikencangkan dan kran pengatur tempat keluarnya uap air dibiarkan terbuka, agar udara terdesak keluar. Colony counter,

17

bertujuan untuk menghitung jumlah koloni mikroba secara otomatis. Prinsip kerja dari alat ini yaitu menghitung jumlah koloni dengan perbesaran menggunakan luv atau dengan menandai koloni yang terdapat pada cawan petri dengan bolpoint yang terdapat pada alat dan menggunakan tombol check. Digital orbital shaker digunakan untuk menghomogenisasi campuran larutan dan mempercepat proses pendinginan serta menjaga aserasi agar tetap optimal dan merata untuk keperluan inkubasi sampel. Prinsip kerja dari alat ini yaitu menggunakan goyangan ( memutar ) orbital dengan kecepatan yang telah diatur untuk menghomogenisasikan larutan. Incubator berfungsi untuk inkubasi atau menumbuhkan mikroba. Prinsip kerja alat ini yaitu menginkubasi dengan menggunakan suhu tertentu dalam keadaan diam. Lamiar Air Flow berfungsi untuk tempat bekerja secara aseptis. Prinsip kerja alat ini adalah mensterilisasi dengan menggunakan sinar UV dan aliran udara dengan arah horizontal. Penggunaan alat – alat laboratorium harus selalu dalam keadaan steril. Sterilisasi alat bertujuan untuk menghindari kontaminasi terhadap lingkungan dan akan menimbulkan bahaya apabila dibiarkan. Kebersihan alat yang penting dilakukan untuk kelancaran praktikum. Alat yang selalu disterilkan tidak akan cepat rusak karena dilakukan perawatan yang baik dan benar. Oleh karena itu, sebelum digunakan terlebih dahulu alat – alat tersebut disterilkan.

18

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan, maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut : 1. Mikrobiologi merupakan ilmu yang mempelajari tenyang mikroorganisme yang dimana mikroorganisme merupakan jasad hidup berukuran kecil dan tidak dapat terlihat oleh mata telanjang, contohnya bakteri, jamur, khamir, dan virus. 2. Laboratorium merupakan tempat yang digunakan untuk melakukan percobaan atau eksperimen dan riset ilmiah. 3. Bekerja di laboratorium harus selalu aseptis, agar terhindar dari kontaminasi mikroba patogen yang dapat membahayakan. 4. Alat – alat dalam laboratorium dibagi menjadi dua yaitu alat glassware dan non glassware, contoh alat glassware antara lain, cawan petri, jarum ent , jarum ose, jarum preparat dan lain sebagainya. Sedangkan alat non glassware¸antara lain incubator, laminar air flow, autoclave, digital orbital and shaker, dan sebagainya. 5. Peralatan

dalam

laboratorium

harus

selalu

disterilkan

agar

tidak

terkontaminasi terhadap lingkungan yang akan mengakibatkan bahaya bila dibiarkan.

19

ACARA II MEDIUM DAN CARA PEMBUATAN MEDIUM

20

ACARA II MEDIUM DAN CARA PEMBUATAN MEDIUM

PENDAHULUAN

Latar Belakang Medium pertumbuhan adalah media yang digunakan dalam pertumbuhan mikroorganisme untuk keperluan penelitian dalam bidang ilmu mikrobiologi. Mikroorganisme yang akan diamati akan ditumbuhkembangkan dalam media seperti, Nutrient Agar (NA), Potato Dekstrose Agar (PDA). Dalam pembuatan medium pertumbuhan, alat maupun bahan yang akan digunakan haruslah steril dan tidak dalam keadaan kontaminasi. Berhasil atau tidaknya pembuatan medium pertumbuhan dipengaruhi oleh tahap yang disebut sterilisasi. Tahap sterilisasi adalah tahap dimana semua alat dan bahan yang akan digunakan melalui proses pertumbuhan dan pencegahan mikroorganisme yang tidak diharapkan tumbuh pada media yang akan digunakan (Natsir & Sartini, 2006). Semua pertumbuhan

makhluk dan

hidup

membutuhkan

reproduksinya.

Untuk

nutrient

menelaah

untuk

melakukan

mikroorganisme

di

laboratorium, kita harus dapat menumbuhkan mikroba tersebut. Mikroorganisme dapat berkembangbiak dengan alami atau dengan bantuan manusia. Media yang terdiri atas campuran nutrisi dapat digunakan untuk menumbuhkan mikroba. Media harus mengandung semua unsur hara dan nutrient yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroba agar mikroba dapat tumbuh dan berkembangbiak.

Nutrient

termasuk

bahan

baku

yang

digunakan

untuk

membangun komponen komponen baru dan untuk menghasilkan energi yang dibutuhkan dalam proses kehidupan sel. Sterilisasi yang baik dapat mencegah tumbuhnya mikroba lain yang tidak diharapkan dalam bahan yang disterilisasi. Teknik sterilisasi yang digunakan berbeda antara satu dengan lainnya,

tergantung dari jenis material yang

digunakan. Alat-alat yang digunakan harus dalam keadaan steril dan bebas dari kuman serta bakteri, virus dan jamur. Bentuk mensterilkannya diperlukan pula

21

pengetahuan tentang cara-cara dan teknik sterilisai. Hal ini dilakukan karena alatalat yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi memiliki teknik sterilisasi yang berbeda. Oleh karena itu, penting dilakukan praktikum ini untuk mengetahui cara pembuatan medium. Tujuan Praktikum Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui jenis medium, cara

pembuatan

medium,

dan

fungsi

medium

yang

digunakan

dalam

menumbuhkan mikroorganisme.

22

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroorganisme sebagai makhluk hidup sama dengan organisme hidup lainnya,

sangat membutuhkan energi dan bahan bahan untuk membangun

pertumbuhannya. Seperti dalam sintesis protoplasma dan bagian bagian sel yang lainnya. Bahan bahan tersebut disebut nutrient, untuk memanfaatkan bahan bahan tersebut

maka

sel

memerlukan

sejumlah

kegiatan

sehingga

menyebabkan

perubahan kimia di dalam selnya. Semua reaksi yang terarah yang berlangsung di dalam sel ini disebut metabolisme.

Metabolisme yang melibatkan berbagai

macam reaksi di dalam sel tersebut hanya dapat berlangsung atas bantuan dari suatu senyawa organik yang disebut katalisator organik atau biasa disebut biokatalisator yang dinamakan enzim. Untuk dapat memahami tentang nutrisi dan metabolisme ini, pengetahuan dasar biokimia sangat dibutuhkan (Natsir & Sartini, 2006). Medium pembiakan yang digunakan untuk mengembangbiakan bakteri di laboratorium dapat dibedakan menjadi medium pembiakan dasar,

medium

pembiakan penyubur, dan medium pembiakan selektif, serta cara mendapatkan biakan murni. Medium pembiakan dasar adalah medium pembiakan sederhana yang

mengandung

zat-zat

yang

umum

diperlukan

oleh

sebagian

besar

mikroorganisme, dan dipakai juga sebagai komponen dasar untuk membuat medium pembiakan lain. Medium pembiakan penyubur dibuat dari medium pembiakan

dasar

dengan

penambahan

zat

zat

lain

untuk

mempersubur

pertumbuhan bakteri tertentu yang pada medium pembiakan dasar tidak dapat tumbuh dengan baik. Medium pembiakan selektif digunanak untuk menyeleksi bakteri yang diperlukan dari campuran campuran dengan bakteri lain yang terdapat dalam bahan pemeriksaan. Medium yang terakhir merupakan medium untuk mendapatkan biakan murni. Biakan murni diperlukan untuk mempelajari ciri-ciri

koloni,

sifat-sifat

biokimia,

morfologi,

reaksi

pengecatan,

reaksi

imunobiologi, dan kerentanan bakteri terhadap zanti antibakteri (Irianto, 2006). Medium Nutrient Agar (NA) berfungsi untuk membiakkan bebagai macam mikroorganisme serta kultur bakteri. Untuk membiakan suatu mikroba,

23

terlebih dahulu harus mengetahui bagaimana melakukan teknik inokulasi biakan mikroorganisme pada medium steril sehingga dapat mendefinisikan bahwa teknik inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium lama ke medium baru dengan tingkat ketelitian sangat tinggi dan dituntut untuk bekerja secara aseptik . Aseptik yaitu bebas dari pengaruh kontaminan mikroorganisme yang lain. Teknik aseptik dilakukan dengan penyediaan alat-alat yang steril dan bekerja didekat api bunsen agar terhindar dari kontaminan udara. Jarum yang digunakan untuk

memindahkan mikroba harus dipijarkan didekat api. Pemanasan ini

menghancurkan semua bentuk kehidupan yang ada pada permukaan jarum atau alat pemindahan, setelah diinonukasi biakan bakteri disimpan dan diinkubasi dalam lingkungan yang sesuai untuk pertumbuhan (Dwidjoseputro, 2010). Medium

Nutrient

Agar

(NA)

merupakan

medium agar

miring.

Pembatasan medium ini dilakukan dengan melarutkan 23 gr NA dalam 1 liter aquades lalu dipanaskan dan diaduk menggunakan magnetic stirrer, sampai homogen. Larutan tersebut kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditutup dengan kapas dan aluminium foil kemudian disterilkan dengan autoclave. Tabung reaksi dimiringkan sebelum mengeras dan dibiarkan selama 24 jam. Medium ini untuk pertumbuhan bakteri, cara pembuatan medium cair Nutrient Broth (NB) sama dengan cara pembuatan medium Nutrient Agar (NA). Perbedaannya terletak pada bahan yang digunakan yang diganti dengan 13 gram Nutrient Broth (NB) dan setelah proses sterilisasi dengan autoclave tidak dilakukan pemiringan dari alat yang digunakan yaitu erlenmeyer, karena medium ini merupakan medium cair yang tidak akan memadat seperti medium Nutrient Agar (NA) (Naimah & Ermawati, 2006).

24

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Pelaksanaan Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari selasa, 13 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Alat-alat dan Bahan Praktikum a. Alat-alat praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini antara lain botol uc, cawan petri, drigalski, gelas beaker, , hot plate, jarum ose, jarum preparat, lampu bunsen, mikropipet, corong, rak tabung reaksi, spatula, tabung reaksi, vortex, yellowtip, talenan, pisau, plastik, aluminium foil, magnetic stirrer, timbangan analitik b. Bahan-bahan yang digunakan Adapun bahan-bahan praktikum yang digunakan dalam praktikum ini adalah agar- agar , aquades, ekstrak daging, glukosa, kentang, Nutrient Agar (NA) instant, pepton, Potato Dekstrose Agar (PDA) instant, Prosedur Kerja a. Nutrient Agar (NA) Racik Aquades 100ml

Dipanaskan

Ditambahkan ekstrak daging 0.3 gr

Ditambahkan pepton 1.5 gr

Ditambahkan Agar 1.5 gr

Dimasukkan ke dalam botol uc

25

b. Nutrient Agar (NA) Instant Aquades 100 ml

Dipanaskan

Ditambahkan Nutrient Agar (NA) Instant 2 gr

Dimasukkan ke botol uc

c. Potato Dekstrose Agar (PDA) Racik Kentang

Dicuci dan dibersihkan

Dipotong dadu

Ditimbang 40 gr

Ditambahkan aquades 100 ml

Dipanaskan ± 30 menit

26

Disaring 100 ml

Ditambahkan Dextrose 2 gr

Ditambahkan Agar 1,5 gr

Dimasukkan ke dalam botol uc d. Potato Dekstrose Agar (PDA) Instant Aquades 100 ml

Dipanaskan

Ditambahkan PDA Instant 3,9 gr

Dimasukkan ke dalam botol uc

27

e. Nutrient Broth (NB) Racik Aquades 100 ml

Ditambahkan ekstrak daging 0,3 gr

Ditambahkan Agar 1,5 gr

Dimasukkan ke dalam botol uc

28

HASIL PENGAMATAN

Tabel 2.1 Hasil Pengamatan Medium Dan Cara Pembuatan Medium Perubahan Warna Nama Klp Perlakuan Medium Sebelum Sesudah 11 Nutrient + 100 ml Bening Bening Agar (NA) aquades Racik + Pepton 0,5 gr Bening Bening Kekuningan + Agar 1,5 gr Bening Putih keruh Kekuningan kekuningan + Ekstrak Putih keruh Putih keruh daging 0,3 gr kekuningan kekuningan 12 Nutrient + 100 ml Bening Bening Agar (NA) aquades Instant + Nutrient Agar Bening Bening (NA) Instant Kecokelatan 2 gr 13

14

15

Potato Dekstrose Agar (PDA) Racik Potato Dekstrose Agar (PDA) Instant Nutrient Broth (NB) Racik

+ aquades 100 ml + Glukosa

Bening

Bening

Bening

Bening Keruh

+ aquades 100 ml + 3,9 gr PDA Instant

Bening

Bening

Bening

Cokelat Kekuningan

+ aquades 100 ml + Ekstrak daging 0,3 gr + Pepton 0,5 gr

Bening

Bening

Bening

Kuning Bening Kuning Bening

Kuning Bening

Fungsi Medium Untuk menumbuhkan mikroba berupa bakteri

Sebagai media pertumbuhan bakteri

Untuk tempat atau medium pertumbuhan mikroba berupa jamur Untuk media guna menumbuhkan jamur Untuk menumbuhkan mikroba berupa bakteri

29

PEMBAHASAN

Medium merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi atau zat-zat hara (nutrient) yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme. Media penting untuk mikroorganisme, media digunakan sebagai tempat tinggal, sumber makanan dan menyediakan nutrisi bagi mikroorganisme yang akan dibiakkan. Selain itu, medium juga berfungsi untuk perhitungan jumlah mikroba, isolasi, dan perbanyakan diri. Medium juga dapat digunakan untuk menguji sifatsifat fisiologis suatu mikroorganisme (Waluyo L. , 2008). Medium yang digunakan untuk pertumbuhan mikroba dapat dibedakan berdasarkan bentuk, fungsi, dan konsentrasinya. Medium berdasarkan bentuk terdiri dari medium padat, medium cair, dan medium semi padat atau semi cair. Medium padat memiliki bentuk yang padat dan berfungsi untuk menumbuhkan bakteri. Medium cair memiliki bentuk cair dan berfungsi untuk pertumbuhan mikroba. Sedangkan medium semi padat atau semi cair berbentuk tidak padat dan tidak cair, memiliki tekstur kenyal, medium ini berfungsi untuk pertumbuhan mikroba yang hidup anaerobik dan digunakan untuk melihat pergerakan mikroba. Berdasarkan fungsinya medium terdiri dari medium diperkaya, medium ini

berfungsi

untuk

menumbuhkan

mikroba

heterotrof

yang

pada

saat

pembuatannya ditambahkan zat-zat tertentu, medium deferensial, medium ini berfungsi untuk pertumbuhan mikroba, namun mikroba yang tumbuh berbeda dan memiliki ciri khusus sehingga dapat dibedakan. Media penguji (Assaymedium), medium ini digunakan untuk pengujian vitamin, asam amino, dan lain-lain. Selain itu, terdapat medium untuk perhitungan mikroba, medium ini digunakan untuk perhitungan mikroba pada suatu bahan. Dan yang terakhir yaitu medium khusus, medium ini digunakan untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroba. Klasifikasi medium berdasarkan konsistensinya terdiri dari media cair, media padat, dan media semi padat. Media cair digunakan untuk pengenceran berseri pada tahap isolasi mikroba. Media padat digunakan untuk menumbuhkan biakan

dan

mengamati morfologi koloni.

Sedangkan medium semi padat

digunakan untuk menguji pergerakan sel.

30

Media yang dibuat pada praktikum ini yaitu Nutrient Agar, Nutrient Broth, Potato Dextrose Agar. Nutrient Agar dibuat dengan dua cara yaitu, Nutrient Agar (NA) racik dan Nutrient agar (NA) instant. Pada pembuatan Nutrient Agar (NA) racik menggunakan ekstrak daging, pepton, dan agar. Penggunaan ekstrak daging dan pepton berfungsi sebagai bahan dasar karena mengandung protein, nitrogen, vitamin serta karbohidrat yang diperlukan oleh mikroorganisme. Agar berfungsi sebagai pemadat karena agar mudah membeku dan mengandung galaktan yang tidak mudah terurai oleh mikroorganisme. Ketiga bahan tersebut dilarutkan menggunakan air kemudian dipanaskan. Penggunaan aquades karena mengandung kadar ion kalsium dan magnesium yang tinggi sedangkan fungsi dari pemanasan yaitu untuk menghomogenkan larutan sehingga larutan

dapat

menyatu.

Medium Nutrient

Agar

(NA)

digunakan

untuk

menumbuhkan bakteri. Potato Dextrose Agar (PDA) berfungsi untuk menumbuhkan jamur atau kapang dan khamir. Medium ini terbuat dari kentang, dextrose dan agar-agar. Penggunaan kentang berfungsi sebagai sumber energi, nitrogen organik, karbon dan vitamin. Sedangkan penggunaan dextrose berfungsi sebagai sumber karbon. Ketiga bahan tersebut dilarutkan menggunakan aquades yang berfungsi sebagai bahan pelarut. Untuk menghomogenkan medium dan sumber O 2 dilakukan pemanasan. Pembuatan medium instant seperti medium nutrient agar instant dan Potato Dextrose Agar (PDA) hanya menggunakan bahan-bahan yang diperlukan. Contohnya Nutrient Agar (NA) instant, Nutrient Agar (NA) mengandung ekstrak daging dan pepton serta agar. Sehingga cara pembuatannya hanya perlu dilarutkan dengan aquades kemudian dipanaskan. Pemanasan bertujuan untuk medidihkan dan menghomogenkan larutan. Hal tersebut sama dengan pembuatan medium Potato Dextrose Agar (PDA). Perbedaan yang terlihat pada Nutrient Agar (NA) dan Nutrient Broth (NB) diantaranya yaitu Nutrient

Agar (NA) berbentuk padat yang merupakan

perpaduan antara bahan alamiah dan senyawa senyawa kimia. Nutrient Agar (NA) dibuat dari campuran ekstrak daging dan pepton dengan menggunakan agar

31

sebagai pemadat. Sedangkan Nutrient Broth (NB) berbentuk cair dengan bahan dasar yang sama namun tidak menggunakan agar. Perbedaan lainnya yaitu pertumbuhan mikroorganisme denganmenggunakan nutrient agar dapat dilakukan dalam tiga bentuk yaitu bentuk lempeng, bentuk miring dan bentuk tegak. Sedangkan Nutrient Broth (NB) hanya memiliki satu bentuk yaitu bentuk tegak dalam tabung reaksi.

32

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut: 1. Media adalah Medium merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi atau zat-zat hara (Nutrient) yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme 2. Nutrient agar dapat dibuat dengan dua cara yaitu nutrient agar racik dan nutrient agar instant yang berfungsi untuk menumbuhkan bakteri 3. Nutrient Broth dapat digunakan untuk menumbuhkan bakteri namun berbentuk cair 4. Potato dextrose agar dibuat dengan dua cara yaitu PDA Racik dan PDA instant yang berfungsi untuk menumbuhkan jamur berupa kapang dan khamir 5. Perbedaan yang terlihat jelas antara Nutrient Agar dan Nutrient Broth adalah Nutrient Agar berbentuk padat dan Nutrient Broth berbentuk cair.

33

ACARA III TEKNIK ISOLASI MIKROBA

34

ACARA III TEKNIK ISOLASI MIKROBA

PENDAHULUAN

Latar Belakang Mikroba atau mikroorganisme atau jasad renik, dapat diartikan sebagai suatu material yang mempunyai ukuran sangat kecil, sehingga tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Mikroba ada dimana-mana, di setiap bagian biosfer, dalam tubuh manusia, hewan, tanaman, maupun lingkungan. Sebagian besar mikroba mempuyai peran yang penting dalam memecahkan masalah kehiduan dan kesejahteraan habitat dunia. Mikroba menjaga keseimbangan makhluk hidup dan bahan kimiawi di lingkungan (Muwardi, 2015). Keberadaan mikroba di alam bebas atau lingkungan masih tercampur dengan populasi lainnya atau dalam populasi campuran. Oleh karena itu, proses mengidentifikasi menjadi sulit dilakukan secara tepat. Supaya sifat-sifat mikroba tampak jelas, maka bakteri perlu dibiakkan pada suatu medium dengan cara isolasi bakteri. Isolasi sendiri merupakan proses pengambilan atau pemisahan mikroorganisme dari habitat aslinya untuk diperoleh biakan murni. Proses ini bertujuan untuk mempermudah kegiatan identifikasi bakteri. Teknik isolasi mikroba yang dapat dilakukan yaitu dengan metode tegak (stab culture), metode sebar (pour plate), metode gores (streak plate), dan metode miring (slant culture). Mikroba yang dibiakkann di laboratorium pada medium yang terdiri dari bahan nutrient. Pemilihan medium yang dipakai biasanya bergantung

pada

jenis

mikroorganisme

yang

akan

ditumbuhkan.

Misalnya

medium Nutrient Agar (NA) dan Nutrient Broth (NB) yang berfungsi untuk menumbuhkan mikroorganismeberupa bakteri. Sedangkan untuk menumbuhkan mikroorganisme berupa jamur, media yang dipakai adalah Potato Dextrose Agar (PDA). Selain pemilihan medium yang tepat, hal yang harus diperhatikan untuk melakukan isolasi adalah memastikan adanya nutrisi yang dibutuhkan, pH, suhu serta sterilisasi lingkungan tempat isolasi bakteri atau mikroba lainnya. Oleh

35

karena itu, praktikum teknik isolasi mikroba ini perlu dilakukan agar saat melakukan

isolasi mikrobadapat

dilakukan sesuai ketentuan sehingga hasil

pengisolasian maksimal atau sesuai dengan yang diharapkan. Tujuan Praktikum Adapun tujuan praktikum ini adalah untuk

mengetahui dan dapat

melakukan beberapa cara dalam mengisolasi mikroba.

36

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroba atau mikroorganisme atau jasad renik, dapat diartikan sebagai suatu material yang mempunyai ukuran sangat kecil, sehingga tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Mikroba ada dimana-mana, di setiap bagian biosfer, dala tubuh manusia, hewan, tanaman, maupun lingkungan. Sebagian besar mikroba mempunyai peran yang penting dalam memecahkan masalah kehidupan dan kesejahteraan habitat dunia. Mikroba menjaga keseimbangan makhluk hidup dan bahan kimiawi di lingkungan yang menjadikan isolasi mikroba penting (Muwardi, 2015). Populasi bakteri di alam merupakan populasi campuran dari berbagai jenis bakteri sehingga untuk mendapatkan suatu jenis bakteri yang dikehendaki untuk suatu tujuan tertentu dilakukan isolasi jenis bakteri tersebut. Oleh karena itu untuk mendapatkan isolat bakteri perlu dilakukan isolasi. Isolasi bakteri merupakan proses memisahkan suatu bakteri dari habitatnya di alam dan menumbuhkannya sebagai bakteri dari medium lama ke medium yang baru. Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam isolasi bakteri yaitu ketelitian dan sterilisasi alat-alat yang digunakan agar tidak terjadi kontaminasi (Handayani, Moenir, Setianingsih, & Malik, 2016). Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan menumbuhkannya dalam suatu medium buatan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran

bermacam-macam

mikroba.

Hal

ini

dapat

dilakukan

dengan

menumbuhkannya dalam media padat. Sel-sel mikroba akan membentuk suatu koloni sel yang tetap pada tempatnya. Isolasi bakteri atau biakan yang terdiri dari satu jenis bakteri dikenal dengan biakan murni atau biakan aksenik. Biakan yang berisi lebih dari satu jenis bakteri atau mikroba dikenal sebagai biakan campuran (Alam, 2013). Kelebihan mikroba yang diisolasi dari lingkungan adalah memiliki potensi yang lebih handal namun juga memiliki kelemahan. Kelemahan dari mikroba yang di isolasi adalah memerlukan waktu yang cukup lama untuk dimurnikan.

37

Isolasi mikroba dapat dilakukan dengan tiga teknik yaitu teknik gores (streak plate), teknik tuang, dan teknik sebaran (spread plate). Setelah mendapat isolat yang diinginkan, selanjutnya dilakukan pemeliharaan agar tetap terjaga kemurnian dan aktivitasnya selama dalam penyimpanan serta terhindar dari kontaminasi (Istianah, Wardani, & Heppy S, 2018). Pentingnya mengisolasi suatu mikroba dari lingkungan, seperti pada makanan (substrat padat), minuman (substrat cair), dan pada diri sendiri karena banyaknya mikroba dari lingkungan yang sulit untuk diamati pada diri sendiri karena banyaknya mikroba dari lingkungan yang sulit untuk diamati atau dibedakan secara langsung menggunakan panca indera.

Jadi isolasi akan

memudahkan untuk melihat dan mengamati bentuk-bentuk pertumbuhan mikroba. Teknik isolasi yang juga dikenal yaitu inokulasi.

Inokulasi merupakan suatu

teknik pemindahan suatu biakan tertentu dari medium yang lama ke medium yang baru untuk mendapatkan biakan murni tanpa adanya kontaminasi mikroba yang tidak diinginkan (Ghoni, 2013)

38

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 13 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan, Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Alat dan Bahan Praktikum a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan pada praktikum ini diantaranya cawan petri, drigalski, jarum ose, jarum preparat, lampu bunsen, micropipet, tabung reaksi, vortex, dan yellow tip. b. Bahan-bahan Praktikum Adapun bahan-bahan yang digunakan pada praktikum ini diantaranya biakan Bacillus cereus, biakan Escherichiacoli, biakan Pseudomonas sp., medium Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), medium Nutrient Agar (NA), medium Nutrient Agar Tegak, dan medium Nutrient Broth (NB). Prosedur Kerja a. Teknik Isolasi Bakteri Metode Sebar Disiapkan alat dan bahan

Dihomogenkan biakan dengan vortex

Diambil biakan sebanyak 0,1 ml

39

Dimasukkan ke dalam media EMBA dan NA

Diratakan menggunakan drigalski

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37ᵒC

Diamati pertumbuhannya b. Teknik Isolasi Bakteri Metode Tusuk Disiapkan alat dan bahan

Disterilkan jarum preparat

Dihomogenkan biakan dengan vortex

Diambil biakan dengan jarum preparat

Ditusukkan menggunakan jarum preparat pada medium NA tegak

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37ᵒC

Diamati pertumbuhannya

40

c. Teknik Isolasi Bakteri Metode Gores Disiapkan alat dan bahan

Disterilkan jarum ose

Dihomogenkan biakan dengan vortex

Diambil biakan dengan jarum ose

Digores cara zig-zag pada medium NA cawan dan NA miring

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37ᵒC

Diamati pertumbuhannya d. Teknik Isolasi Medium Cair Disiapkan alat dan bahan

Disterilkan jarum ose

Dihomogenkan biakan dengan vortex

41

Diambil biakan dengan menggunakan jarum ose

Diinokulasikan ke dalam medium Nutrient Broth (NB)

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37ᵒC

Diamati pertumbuhannya

42

HASIL PENGAMATAN

Tabel 3.1 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba. Klp Sampel Nutrient Agar (NA) Metode tegak Metode sebar Metode gores

11

Kultur A

12

Kultur B

Pertumbuhan : atas Bentuk koloni : tak teratur Permukaan: datar Bentuk tepi: licin Bentuk struktur : halus Pertumbuhan : tengah Bentuk koloni: Beaded Permukaan: rata Bentuk tepi: berombak Bentuk

Pertumbuhan : dalam Bentuk koloni : titik-titik Permukaan: cembung Bentuk tepi : berbenang Bentuk struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: bundar Permukaan: berombak Bentuk tepi: rata Bentuk

Pertumbuhan : atas Bentuk koloni : tak teratur Permukaan: rata Bentuk tepi : keriting Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: berbenang Permukaan : berbenang Bentuk tepi : timbul datar Bentuk

Metode miring

Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: berupa pedang Permukaan: melengkung Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : seperti wol Bentuk tepi: datar Bentuk

Eosin Methylene Blue Agar (EMBA)

Nutrient Broth (NB) Metode tegak

Tidak mengalami pertumbuhan karena suhu yang terlalu tinggi saat proses pengisolasian biakan

Memiliki endapan berwarna putih dan warnanya sedikit keruh

Pertumbuhan : atas Bentuk koloni : titik-titik Permukaan: tak teratur Bentuk tepi : berupa kawah Bentuk

Berwana Keruh

43

13

Kultur A

14

Kultur B

15

Kultur A

struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : tidak teratur Bentuk tepi: kasar Bentuk struktur: kasar

struktur: halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: rata Permukaan : timbul datar Bentuk tepi : bergerigi Bentuk struktur: kasar

struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: Rhizoid Permukaan : melengkung Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur: kasar

struktur: kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: berduri Permukaan: timbul datar Bentuk tepi: tak teratur Bentuk struktur: kasar

Pertumbuhan: ditengah Bentuk koloni: serupa pedang Permukaan: licin Bentuk tepi : Rhizoid Bentuk struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: bulat Permukaan : melengkung

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : licin Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: Rhizoid Permukaan : licin Bentuk tepi : berbenang Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: bulat Permukaan : rata

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: berduri Permukaan : licin Bentuk tepi: berlekuk Bentuk struktur : halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: bulat Permukaan : timbul datar

struktur: kasar Pertumbuhan: tidak ada Bentuk koloni: tidak ada Permukaan : tidak ada Bentuk tepi: tidak ada Bentuk struktur: tidak ada Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tidak teratur Permukaan : licin Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: bulat Permukaan : timbul datar

Terbentuk endapan, keruh

Terbentuk endapan, keruh

Terbentuk endapan, keruh

44

16

Kultur B

17

Kultur B

18

Kultur A

Bentuk tepi : utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: berduri Permukaan : tak teratur Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: serupa pedang Permukaan: rata Bentuk tepi : berbenang Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : timbul

Bentuk tepi : utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: berduri Permukaan: berombak Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : datar Bentuk tepi : ikal rambut Bentuk struktur: licin Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata

Bentuk tepi : utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan: timbul datar Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : datar Bentuk tepi: tak teratur Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : di atas Bentuk koloni: bulat Permukaan: rata

Bentuk tepi : utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : tidak rata Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata Bentuk tepi: berombak Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : di atas Bentuk koloni: berduri Permukaan: kasar

Bentuk tepi : utuh Bentuk struktur : halus Pertumbuhan : di bawah Bentuk koloni: bundar Permukaan: rata Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : timbul Bentuk tepi: tak teratur Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : rata

Terbentuk endapan, keruh

Terbentuk endapan, keruh

Terbentuk endapan, tidak keruh

45

19

Kultur B

20

Kultur A

Bentuk tepi: licin Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : rata Bentuk tepi: berbenang Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan: melengkung Bentuk tepi: utuh Bentuk struktur: kasar

Bentuk tepi: keriting Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : datar Bentuk tepi: keriting Bentuk struktur : licin Pertumbuhan : di bawah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan: datar Bentuk tepi: bergerigi Bentuk struktur: kasar

Bentuk tepi: berbenang Bentuk struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata Bentuk tepi: bergerigi Bentuk struktur: halus Pertumbuhan :atas Bentuk koloni: bulat Permukaan: rata Bentuk tepi: utuh Bentuk struktur : kasar

Bentuk tepi: berombak Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tasbih Permukaan : rata Bentuk tepi: berombak Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: serupa tasbih Permukaan: timbul datar Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur : kasar

Bentuk tepi: utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata Bentuk tepi: berombak Bentuk struktur: licin Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: berbenang Permukaan: melengkung Bentuk tepi : percabangan Bentuk struktur : kasar

Terbentuk endapan, keruh

Kuning keruh, terdapat endapan (putih) tidak ada gelembung

46

PEMBAHASAN

Teknik

isolasi mikroba

adalah

suatu

usaha

yang dilakukan untuk

menumbuhkan mikroba di luar dari lingkungannya. Jenis mikroba dapat berupa bakteri, khamir, jamur dan lainnya yang dapat ditemukan dari lingkungan air, tanah, udara, substrat berupa bahan pangan, tanaman maupun hewan. Prinsip dari teknik isolasi mikroba sendiri ialah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroorganisme. Isolasi mikroba paling sering dilakukan pada media padat, karena pada media padat sel-sel mikroba akan membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya. Biakan murni yang diperoleh dari teknik isolasi mikroba sangat diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis,

antara lain digunakan untuk megidentifikasi

karakteristik suatu mikroorganisme. (Muniarti, 2002). Beberapa metode yang dapat digunakan pada teknik isolasi mikroba untuk memperoleh biakan murni, metode yang sering digunakan adalah metode cawan gores dan teknik cawan tuang. Metode yang digunakan pada praktikum ini adalah metode tusuk, metode sebar dan metode gores. Metode tusukan adalah metode yang dilakukan dengan cara suspensi biakan murni ditusukkan pada medium tegak di dalam tabung reaksi dengan menggunakan jarum preparat. Metode sebar adalah tekni dengan menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara menuangkan secara merata suspensi biakan di atas media agar yang telah memadat menggunakan alat yang dinamakan drigalski. Setelah diinkubasi dalam cawan petri dalam waktu dan suhu tertentu maka akan terlihat koloni-koloni yang tersebar merata di permukaan medium. Sedangkan metode gores merupakan metode yag menggunakan jarum ose sebagai alat utamanya untuk menggoreskan suspensi biakan pada permukaan medium agar dalam cawan petri steril atau dalam tabung reaksi (medium agar miring). Dari setiap metode isolasi menghasilkan morfologi yang berbeda-beda karena perlakuan yang berbeda-beda. Media yang digunakan dalam praktikum ini adalah medium Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), Nutrient Agar (NA) cawan petri, Nutrient Agar (NA) tegak, Nutrient Agar (NA) miring, Nutrient Broth (NB). Media EMBA

47

merupakan

media

selektif untuk

menumbuhkan bakteri gram negatif dan

umumnya digunakan untuk isolasi diferensiasi bakteri nonfecalcoliform dan fecalcoliform. Nutrient Agar (NA) merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak daging, pepton, dan agar. Nutrient Agar (NA) merupakan salah satu media yang umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air, sawage, produk pangan, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri dan untuk mengisolasi mikroorganisme dalam kultur murni. Perbedaan Nutrient Agar (NA) tegak dan Nutrient Agar (NA) miring adalah keduanya menggunakan tabung reaksi sebagai tempat media sedangkan Nutrient Broth (NB) merupakan jenis medium yang berfungsi untuk menumbuhkan bakteri. Nutrient Broth (NB) tidak mengandung agar sehingga termasuk ke dalam medium cair. Melalui

praktikum

ini,

diperoleh

hasil

dengan

beberapa

metode

pengisolasian mikroba. Metode yang pertama ialah metode tusuk Nutrient Agar (NA) tegak, dimana pada percobaan pertama kultur A diperoleh pertumbuhan di atas medium dengan bentuk koloni tidak teratur dan menyebarm permukaan yang datar, bentuk tepi licin dan bentuk strukturnya halus. Percobaan kedua mengan menggunakan kultur A dengan medium Nutrient Agar (NA) tegak diperoleh hasil pertumbuhan koloni berada di tengah medium dengan bentuk koloni titik-titik, permukaan melengkung, bentuk tepi tidak teratur dan bentuk strukturnya kasar. Kemudian pada percobaan ketiga diperoleh kultur A dengan pertumbuhan di atas medium, bentuk koloni bulat, permukaan melengkung, bentuk tepi utuh, dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaat keempat diperoleh pertumbuhan koloni berada di tengah medium dengan bentuk koloni berduri, permukaan melengkung, bentuk tepi tidak teratur dan bentuk struktur yang kasar. Kemudian pada percobaan kelima diperoleh hasil yang sama dengan percobaan kedua serta percobaan keenam untuk kultur A metode tusuk diperoleh hasil pertumbuhan koloni di tengah, bentuk koloni bulat-bulat, permukaan melengkung, bentuk tepi utuh dan bentuk struktur kasar. Hasil dari percobaan kultur B menggunakan meode tusuk Nutrient Agar (NA) tegak diantaranya ialah pada percobaan pertama kultur B menghasilkan pertumbuhan di tengah medium dengan koloni beaded, permukaan rata, bentuk

48

tepi berombak dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kedua diperoleh pertumbuhan koloni berada di tengah medium, bentuk koloni serupa pedang, permukaan yang licin, bentuk tepi serupa akar dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada di tengah medium, bentuk koloni serupa pedang dengan permukaan yang rata, bentu tepi berbenang dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan keempat diperoleh pola pertumbuhan koloni berada di tengah medium dengan bentuk koloni seperti titiktitik, permukaan rata, bentuk tepi berbenang, dan bentuk struktur yang kasar. Percobaan yang dilakukan menggunakan metode sebar dengan medium NA cawan pada kultur A diperoleh beberapa hasil pada percobaan yang berbeda. Percobaan pertama didapatkan bahwa koloni mengalami pertumbuhan di bawah medium dengan bentuk koloni titik-titik, permukaan yang cembung, bentuk tepi berbenang, dan bentuk struktur yanng halus. Pada percobaan kedua pertumbuhan koloni berada di atas medium, bentuk koloni yang tidak teratur, permukaan datar, bentuk tepi bergerigi dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan ketiga didapatkan pertumbuhan koloni yang berada di bawah medium dengan bentuk koloni tidak teratur, permukaan rata, bentuk tepi utuh dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan keempat diperoleh pertumbuhan koloni berada di bawah medium dengan bentukkoloni tidak teratur, permukaan timbul datar, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan kelima didapatkan hasil bahwa pertumbuhan koloni berada di tengah medium dengan bentuk koloni tidak teratur, permukaan rata, bentuk tepi keriting dan bentuk struktur yang kasar. Untuk percobaan keenam diperoleh hasil yang tidak berbeda signifikan dengan yang lainnya, yaitu pertumbuhan koloni berada di bawah medium dengan bentuk koloni titik-titik, permukaan datar, bentuk tepi bergerigi dan bentuk struktur yang kasar. Percobaan kultur B dengan menggunakan metode sebar pada medium NA cawan diperoleh hasil percobaan pertama yaitu pertumbuhan koloni berada di atas medium, bentuk koloni bundar dengan permukaan yang rata, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kedua diperoleh pola pertumbuhan koloni berada di atas medium dengan bentuk

dan bentuk struktur

49

halus. Pada percobaan ketiga diperoleh pertumbuhan koloni berada di atas medium dengan bentuk koloni titik-titik, permukaan licin, bentuk tepi berombak tidak beraturan dan menyebar, permukaan rata, bentuk tepi berbenang dan bentuk struktur kasar. Pada percobaan keempat didapatkan pertumbuhan koloni berada di tengah medium, bentuk koloni titik-titik, permukaan rata, bentuk tepi berbenang dan bentuk struktur yang kasar. Percobaan menggunakan metode sebar pada medium Nutrient Agar (NA) cawan dengan menggunakan kultur A diperoleh hasil yang berbeda pada setiap percobaannya. Untuk percobaan pertama pertumbuhan koloni berada di atas medium dengan bentuk koloni yang tidak teratur, permukaan rata, bentuk tepi keriting dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan kedua didapatkan bahwa pertumbuhan koloni berada di atas medium dengan bentuk koloni serupa akar, permukaan melengkung, bentuk tepi berombak, dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan ketiga, diperoleh pola pertumbuhan berada di atas medium dengan bentuk koloni bulat, permukaan rata, bentuk tepi utuh dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan keempat pertumbuhan koloni berada di atas medium dengan bentuk koloni tidak teratur, permukaan timbul datar, bentuk tepi berombak dan bentuk

struktur yang kasar. Pada percobaan kelima diperoleh hasil

pertumbuhan berada di atas medium dengan bentuk koloni bulat, permukaan rata, bentuk tepi berbenang, dan bentuk struktur yang halus. Kemudian pada percobaan keenam diperoleh hasil yang sama dengan percobaan ketiga. Percobaan menggunakan metode sebar pada medium Nutrient Agar (NA) cawan dengan menggunakan kultur B diperoleh hasil yang pertama yaitu pertumbuhan berada di atas medium dengan bentuk koloni berbenang, permukaan timbul datar, bentuk tepi berbenang dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kedua diperoleh pola pertumbuhan berada di atas medium dengan bentuk koloni serupa akar, permukaan licin, bentuk tepi berbenang dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan ketiga diperoleh pola pertumbuhan

koloni

berada di atas medium, bentuk koloni tak beraturan dan menyebar serta permukaan datar dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan keempat

50

diperoleh pola pertumbuhan berada di atas medium, bentuk koloninya serupa tasbih, permukaan rata, bentuk tepi bergerigi dan bentuk struktur yang halus. Lain halnya dengan menggunakan metode gores pada Nutrient Agar (NA) miring. Pada percobaan menggunakan kultur A diperoleh hasil pertama yaitu pertumbuhan berada di atas medium dengan bentuk koloni serupa pedang, permukaan melengkung, bentuk tepi berombak, dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kedua diperoleh hasil pertumbuhan koloni berada di atas medium dengan bentuk koloni berduri, permukaan timbul datar dan bentuk tepitak beraturan serta bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan ketiga diperoleh pola pertumbuhan koloni berada di atas medium, bentuk koloni serupa tasbih, permukaan timbul datar, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan keempat didapatkan pertumbuhan berada di atas medium, bentuk koloni tak teratur, permukaan tidak rata dan licin, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kelima diperoleh pola pertumbuhan berada di atas medium dengan bentuk koloni berduri, permukaan kasar, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan keenam diperoleh hasil yang sama dengan percobaan ketiga. Percobaan menggunakan metode gores pada Nutrient Agar (NA) miring. Pada percobaan menggunakan kultur B diperoleh hasil percobaan pertama yaitu pertumbuhan berada di atas medium, bentuk koloni tidak teratur, permukaan datar, bentuk tepi seperti wol dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan kedua dihasilkan pola pertumbuhan di atas medium dengan bentuk koloni berduri, permukaan bertekuk, bentuk tepi berlekuk, serta bentuk struktur yang halus. Pada percobaan ketiga diperoleh hasil pertumbuhan koloni berada di atas permukaan medium dengan bentuk koloni tak beraturan, permukaan rata, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan keempat diperoleh pola pertumbuhan koloni berada di atass medium dengan bentuk koloni serupa tasbih, permukaan rata, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Percobaan pada kultur A dengan metode gores pada medium EMBA dihasilkan pola percobaan pertama yang gagal atau tidak membentuk koloni. Hal ini dikarenakan jarum ose yang terlalu panas saat menggoreskan biakan hingga

51

menyebabkan biakan-biakan tersebut mati. Percobaan kedua dihasilkan pola yang sama dengan percobaan pertama. Pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada di atas medium, bentuk koloni bulat, permukaan timbul atas, bentuk tepi utuh dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan keempat dihasilkan pola pertumbuhan koloni berada di bawah medium dengan bentuk koloni bundar, permukaan rata dan tidak berlendir, bentuk tepi utuh, dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kelima dihasilkan pertumbuhan berada di atas medium dengan bentuk koloni berupa titik-titik, permukaan rata, bentuk tepi utuh, dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan keenam dihasilkan pertumbuhan berada di atas medium dengan bentuk koloni berbenang, permukaan melengkung, bentuk tepi mengalami percabangan dan struktur halus. Percobaan pada kultur B dengan metode gores pada medium EMBA, pada percobaan pertama dihasilkan pola pertumbuhan berada di atas medium, bentuk koloni titik-titik, permukaan berupa kawah, bentuk tepi tidak teratur, dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan kedua dihasilkan pertumbuhan atas, bentuk koloni tidak teratur, permukaan licin, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur kasar. Pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada si atas medium, bentuk koloni tak teratur, permukaan rata dan tidak berlendir, bentuk tepi utuh, dan bentuk struktur kasar. Pada percobaan keempat dihasilkan pertumbuhan atas, bentuk koloni tak teratur, permukaan rata dan tidak berlendir, bentuk tepi utuh, dan bentuk struktur kasar. Pada percobaan keempat dihasilkan pertumbuhan atas, bentuk koloni tidak teratur dengan bentuk tepi berombak serta bentuk struktur yang licin. Perbedaan pola pertumbuhan yang berbeda disebabkan oleh perbedaan sudut perkiraan

saat mengamati. Selain itu pola pertumbuhan dan bentuk-bentuk

bakteri bermacam-maca ada yang berbentuk bulat, batang, serupa pedang, dan lain-lain. Oleh karena itu, jika dilihat dari sudut yang berbeda akan mempengaruhi pola pertumbuhan yang berbeda. Dalam pengisolasian juga dilakukan inkubasi terbalik. Hal ini bertujuan agar uap air dari medium tidak terjatuh ke permukaan medium yang akan dapat menyebabkan kerusakan pada medium tersebut.

52

KESIMPULAN

Berdasarkan pembahasan dan hasil pengamatan yang telah dilakukan, maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut: 1. Teknik isolasi mikroba adalah suatu teknik atau usaha untuk menumbuhkan mikroba di luar dari lingkungan alamiahnya. 2. Metode yang digunakan dalam teknik isolasi mikroba adalah metode gores menggunakan jarum ose, metode sebar menggunakan jarum drigalski dan metode tusuk menggunakan jarum preparat. 3. Media yang digunakan dalam teknik isolasi ini adalah media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), Nutrient Agar (NA), Nutrient Agar (NA) miring, Nutrient Agar (NA) tegak dan Nutrient Broth (NB). 4. Isolasi bakteri Bacillus cereus mempunyai bentuk koloni bulat, tepian koloni berombak, dan permukaan koloni datar. Isolasi bakteri Escherichia coli mempunyai bentuk bulat, permukaan halus dan tepian rata. 5. Faktor-faktor yang mempengaruhi isolasi mikroba antara lain suhu, sifat dan jenis mikroba yang akan diisolasi, tempat hidup dan asal mikroba, medium untuk pertumbuhan yang sesuai, faktor lingkungan tempat inkubasi dan cara menanam mikroba.

53

ACARA IV MORFOLOGI KOLONI BAKTERI

ACARA IV

54

MORFOLOGI KOLONI BAKTERI

PENDAHULUAN

Latar Belakang Bakteri merupakan golongan prokariotik.Bakteri memiliki bentuk dan struktur yang berbeda antara satu dengan yang lainnya atau disebut juga morfologi bakteri.Salah satu factor yang dapat mempengaruhi morfologi bakteri adalah tempat hidupnya.Bakteri merupakan jenis mikroorganisme yang dapat hidup dimana-mana, seperti udara, diantara rambut, disela-sela gigi, didalam tanah dan tubuh manusia.Tiga bentuk bakteri yang berbeda diantaranya bentuk coccus atau bulat, bacil atau silinder, dan spiral.Sifat morfologi suatu bakteri sangat

penting

kaitannya

dengan

bahan

pangan

seperti

bentuk

dan

pengelompokkan sel, susunan dinding sel, pembentukan kapsul dan endospore, struktur bakteri dan sifat lainnya. Koloni bakeri tiap spesies berbeda, koloni bakteri sendiri merupakan kumpulan bakteri sehingga berbentuk suatu kelompok.Pada saat ini, bakteri sering digunakan sehingga penting untuk mempelajari morfologi koloni bakteri.Bila morfologi bakteri sudah diketahui, maka sel-sel bakteri dapat dipisahkan sehingga sel tumbuh menjadi koloni pada mediumnya masing-masing.Pada percobaan yang dilakukan morfologi yang diamati adalah jenis bakteri parameter yang diamati adalah pertumbuhan, bentuk koloni, pergerakan kilat, topografi, warna koloni, dan warna pigmen (Jimmo, 2008) Pengamatan morfologi koloni bakteri dilakukan setelah mendapatkan biakan

murni

atau

setelah

dilakukannya

isolasi

suatu

mikroba

(bakteri).Pengamatan yang dilakukan meliputi warna, bentuk, tepian koloni, evalasi atau permukaan koloni dan struktur dalam koloni.Untuk mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi, mula-mula harus diamati morfologi sel secara

mikroskopik

melalui

pengecatan

atau

pewarna.

Bakteri

yang

diinokulasikan dan ditumbuhkan pada medium akan menunjukkan sifatkhasnya,

55

karena koloni bakteri tiap spesies berbeda-beda. Oleh karena itu, perlu dilakukan praktikum ini untuk

mengetahui morfologi suatu

bakteri,

sehingga

dapat

ditumbuhkan menjadi koloni pada masing- masing mediumnya. Tujuan Praktikum Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengamati pertumbuhan bakteri, mengamati bentuk-bentuk koloni bakteri

dan sifat serta karakteristiknya

jika ditumbuhkan pada suatu medium.

56

TINJAUAN PUSTAKA Istilah bakteri berasal dari kata “bakterion” (bahasa yunani) yang berarti tongkat atau cabang.

Istilah ini banyak digunakan untuk mikroba bersel

satu.Bentuk morgologi bakteri dapat dibagi menjadi tiga bagian, yang pertama ialah bentuk bacil (Bacillus) yaitu bentuk bakteri menyerupai tongkat pendek dan silindris.Bentuk bakteri yang kedua ialah coccus.Bentuk coccus adalah bentuk bakteri seperti bola-bola kecil.Bentuk bakteri yang ketiga ialah berbentuk spiral atau panjang berbengkok-bengkok. Bentuk spiral ini kemudian dibagi menjadi dua macam, yaitu bentuk vibrio (koma) dan bentuk spirocheate (Ahmad, 2017). Koloni mikroorganisme merupkan kumpulan mikroorganisme sejenis hasil reproduksi yang mengumpul pada suatu tempat di medium kultur. Koloni mikroorganisme dapat juga diartikan kumpulan bakteri pada medium kultur yang berasal dari hasil pertumbuhan atau keturunan dari suatu mikroorganisme. Bentuk koloni berbeda– beda tiap spesies dan merupakan ciri khas bagi suatu spesies tertentu. Sifat-sifat yang diperlukan dalam menentukan identifikasi suatu spesies misalnya seperti besar kecilnya koloni, mengikat tidaknya, halus kasarnya permukaan dan warna koloninya. Kebanyakan bakteri mempunyai warna keputihputihan, kelabu kekuning kuningan, atau hampir bening, tapi ada juga spesies yang mempunyai pigmen warna yang lebih tegas (Ghoni, 2013). Pengamatan

koloni

bakteri

dilakukan

berdasarkan

kriteria

warna,

permukaan dan tepian koloni. Kriteria-kriteria yang sama dianggap sebagai isolate yang

sama

dan

sebaliknya,

kriteria-kriteria

yang

menunjukkan

perbedaan

dianggap sebagai isolate yang berbeda. Pengamatan morfologi dilakukan kembali setelah inkubasi selama 5-7 hari, apabila masih ditemukan pertumbuhan koloni yang

berbeda,

maka

harus dipisahkan kembali samapi diperoleh isolate

murniyang hanya mengandung satu bentuk morfologi koloni yang sama (Fardiaz, 2008). Pengamatan tentang karakteristik morfologi bakteri perlu dilakukan. Hal ini adalah untuk mempermudah praktikan dalam melakukan proses identifikasi jenis bakteri. Berdasarkan ciri morfologi koloni bakteri dan biakan murni, maka

57

dapat dilakukan proses identifikasi jenis-jenis mikroorganisme. Namun, untuk memproleh hasil identifikasi yang sempurna, maka harus dilanjutkan dengan proses biokimia (Fitri, 2011)

58

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari Sabtu, 17 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Alat dan Bahan Praktikum a.

Alat –alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum antara lain drigalski, jarum ose, jarum preparat, tabung reaksi, cawan petri, rak tabung reaksi, lampu Bunsen, vortex, pipet tets dan pipet mikro.

b.

Bahan - bahan Praktikum Adapun bahan –bahan yang digunakan dalam praktikum antara lain alkohol, medium Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) , medium Nutrient Agar (NA), medium Nutient Broth (NB) kultur Bacillus cereus dan kultur Escherichia coli.

Prosedur Kerja a. Identifikasi Morfologi Mikroba Metode Tusuk Biakan

Divortex

Ditusukkan

Dimasukkan ke medium tegak

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C

Diamati morfologi biakan

59

b. Identifikasi Morfologi Mikroba Metode Sebar Biakan

Diambil biakan 0,1 ml

Dimasukkan ke dalam medium NA

Disebar dengan drigalski

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C

Diamati morfologi bakteri c. Identifikasi Morfologi Mikroba Metode Gores Biakan

Di vortex

engan jarum ose Diambil biakan dengan jarum ose

Digores zig-zag pada NA cawan dan NA miring

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C

Diamati morfologi bakteri

60

d. Identifikasi Morfologi Bakteri pada Medium NB Biakan

Di vortex engan jarum ose Diambil biakan dengan jarum ose

Diinokulasikan kedalam media Nutrient Broth (NB)

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C

Diamati morfologi bakteri

61

HASIL PENGAMATAN

Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri. Klp Sampel Nutrient Agar (NA) Metode tegak Metode sebar Metode gores

11

Escherichia coli

12

Bacillus cereus

Pertumbuhan : atas Bentuk koloni : tak teratur Permukaan: datar Bentuk tepi: licin Bentuk struktur : halus Pertumbuhan : tengah Bentuk koloni: Beaded Permukaan: rata Bentuk tepi: berombak Bentuk struktur : halus

Pertumbuhan : dalam Bentuk koloni : titik-titik Permukaan: cembung Bentuk tepi : berbenang Bentuk struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: bundar Permukaan: berombak Bentuk tepi: rata Bentuk struktur: halus

Pertumbuhan : atas Bentuk koloni : tak teratur Permukaan: rata Bentuk tepi : keriting Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: berbenang Permukaan : berbenang Bentuk tepi : timbul datar Bentuk struktur : halus

Eosin Methylene Metode Blue Agar miring (EMBA) Pertumbuhan : Tidak atas mengalami Bentuk koloni: pertumbuhan berupa pedang karena suhu Permukaan: yang terlalu melengkung tinggi saat Bentuk tepi : proses berombak pengisolasian Bentuk biakan struktur : halus Pertumbuhan: Pertumbuhan : atas atas Bentuk koloni: Bentuk koloni tak teratur : titik-titik Permukaan : Permukaan: seperti wol tak teratur Bentuk tepi: Bentuk tepi : datar berupa kawah Bentuk Bentuk struktur: kasar struktur: kasar

Nutrient Broth (NB) Metode tegak Memiliki endapan berwarna putih dan warnanya sedikit keruh

Berwana Keruh

62

13

Escherichia coli

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : tidak teratur Bentuk tepi: kasar Bentuk struktur: kasar

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: rata Permukaan : timbul datar Bentuk tepi : bergerigi Bentuk struktur: kasar

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: Rhizoid Permukaan : melengkung Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur: kasar

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: berduri Permukaan: timbul datar Bentuk tepi: tak teratur Bentuk struktur: kasar

14

Bacillus cereus

15

Escherichia coli

Pertumbuhan: ditengah Bentuk koloni: serupa pedang Permukaan: licin Bentuk tepi : Rhizoid Bentuk struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: bulat Permukaan : melengkung Bentuk tepi :

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : licin Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata Bentuk tepi :

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: Rhizoid Permukaan : licin Bentuk tepi : berbenang Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: bulat Permukaan : rata Bentuk tepi :

Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: berduri Permukaan : licin Bentuk tepi: berlekuk Bentuk struktur : halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: bulat Permukaan : timbul datar Bentuk tepi :

Pertumbuhan: tidak ada Bentuk koloni: tidak ada Permukaan : tidak ada Bentuk tepi: tidak ada Bentuk struktur: tidak ada Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tidak teratur Permukaan : licin Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: bulat Permukaan : timbul datar Bentuk tepi :

Terbentuk endapan, keruh

Terbentuk endapan, keruh

Terbentuk endapan, keruh

63

16

Bacillus cereus

17

Bacillus cereus

18

Escherichia coli

utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: berduri Permukaan : tak teratur Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: serupa pedang Permukaan: rata Bentuk tepi : berbenang Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : timbul Bentuk tepi:

utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: berduri Permukaan: berombak Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : datar Bentuk tepi : ikal rambut Bentuk struktur: licin Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata Bentuk tepi:

utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan: timbul datar Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : datar Bentuk tepi: tak teratur Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : di atas Bentuk koloni: bulat Permukaan: rata Bentuk tepi:

utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : tidak rata Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata Bentuk tepi: berombak Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : di atas Bentuk koloni: berduri Permukaan: kasar Bentuk tepi:

utuh Bentuk struktur : halus Pertumbuhan : di bawah Bentuk koloni: bundar Permukaan: rata Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : timbul Bentuk tepi: tak teratur Bentuk struktur : kasar Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : rata Bentuk tepi:

Terbentuk endapan, keruh

Terbentuk endapan, keruh

Terbentuk endapan, tidak keruh

64

19

Bacillus cereus

20

Escherichia coli

licin Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan : rata Bentuk tepi: berbenang Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan : di tengah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan: melengkung Bentuk tepi: utuh Bentuk struktur: kasar

keriting Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : datar Bentuk tepi: keriting Bentuk struktur : licin Pertumbuhan : di bawah Bentuk koloni: titik-titik Permukaan: datar Bentuk tepi: bergerigi Bentuk struktur: kasar

berbenang Bentuk struktur : halus Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata Bentuk tepi: bergerigi Bentuk struktur: halus Pertumbuhan :atas Bentuk koloni: bulat Permukaan: rata Bentuk tepi: utuh Bentuk struktur : kasar

berombak Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: tasbih Permukaan : rata Bentuk tepi: berombak Bentuk struktur: kasar Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: serupa tasbih Permukaan: timbul datar Bentuk tepi : berombak Bentuk struktur : kasar

utuh Bentuk struktur: halus Pertumbuhan : atas Bentuk koloni: tak teratur Permukaan : rata Bentuk tepi: berombak Bentuk struktur: licin Pertumbuhan: atas Bentuk koloni: berbenang Permukaan: melengkung Bentuk tepi : percabangan Bentuk struktur : kasar

Terbentuk endapan, keruh

Kuning keruh, terdapat endapan (putih) tidak ada gelembung

65

PEMBAHASAN

Bakteri adalah mikroorganisme bersel satu prokariotik yang hidup bebas dan dapat ditemukan di beberapa lingkungan seperti udara, tanah, debu, air, serta hidup di dalam tubuh hewan, tumbuhan, atau manusia. Nama bakteri berasal dari bahasa yunani dari kata bacterion yang berarti batang kecil. Bakteri merupakan organism

mikroskopis

yang

mempunyai

ciri-ciri

tubuh

uniseluler,

tidak

berklorofil, bereproduksi dengan membelah diri, diameternya 0,1-0,2µm, dan aktif bergerak pada kondisi lembab. Beberapa bentuk bakteri ,yaitu basil, kokus, dan spirilum. Bentuk-bentuk tersebut dapat menunjukan karakteristik spesies bakteri, tetapi tergantung pada kondisi pertumbuhannya.Hal ini dipengaruhi oleh keadaan lingkungan, medium, dan jenis bakteri (Dwidjoseputro, 2010). Morfologi merupakan cabang biologi yang mempelajari tentang tata bentuk luar atau struktur dari suatu mikroorganisme.Dengan demikian, morfologi koloni bakteri berarti mempelajari mangenai struktur dan bentuk dari suatu koloni bakteri.Suatu organisme perlu di identifikasi melalui bentuk serta strukturnya agar mudah dekenali.Selain itu morfologi juga digunakan untuk menentukan fungsi dari suatu bagian dari organisme.Koloni bakteri adalah kumpulan dari bakteri yang membentuk suatu kelompok.Sifat-sifat yang diperlukan dalam menentukan identifikasi suatu spesies, misalnya besar kecilnya koloni, bentuk, susunan, permukaan, pengkilatan, dan warna koloni. Bakteri yang digunakan sebagai sampel pada praktikum ini adalah bakteri Bacillus cereus dan bakteri Eschechia coli. Bacillus cereus merupakan bakteri gram positif dengan sel batang berukuran 0,3-22 x1,27-7 µm, aerob fakultatif, dan dapat membentuk spora (endospora). Baktari ini dapat ditemukan ditanah, pada sayuran,maupun produk pangan. Bacillus cereus memiliki beberapa karakter morfologi diantaranya gram positif dengan lebar sel 0,9-1,2 µm dan panjang 3-5 µm, tidak memiliki kapsul, biasanya muncul dalam bentuk rantai

tipe R, dan

bentuk koloni irregular. Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif, berbentuk batang pendek sampai kokus, berukuran 0,4-0,7 µm x1-3 µm. bakteri ini bersifat pathogen dan banyak ditemukan pada saluran pencernaan manusia,

66

tetapi saat berada di lingkungan bakteri ini berfungsi sebagai pengurai dan penyedia nutrisi bagi tumbuhan. Escherichia coli merupakan anggota famili Enterobacteriacea.Kedua bakteri tersebut dibiakkan pada medium agar tegak, agar miring, Nutrient Agar cawan, EMBA, dan Nutrient Broth. Berdasarkan

hasil

pengamatan

dengan

sampel

Bacillus

cereus

menggunakan medium Nutrient Agar (NA) metode tusuk diperoleh hasil pertumbuhan tengah bentuk koloni

beaded,

permukaannya licin, bentuk tepinya

berombak, dan bentuk steruktur yang halus. Padapercobaan kedua menggunakan sampel dan metode yang sama, dihasilkan pertumbuhan koloni berada ditengah medium dengan bentuk koloni serupa pedangmpermukaan licin, bentuk tepi serupa akar,

dan bentuk

struktur halus.pada percobaan ketiga dihasilkan

pertumbuhan koloni berada ditengah medium,bentuk koloni serupa pedang, permukaan rata, bentuk tepi berbenang dan bentuk struktur yang kasar. Kemudian, pada percobaan keempat dihasilkan pertumbuhan Bacillus cereus berada ditengah medium, bentuk koloni titik-titik,permukaan rata,bentuk tepi berbenang dengan bentuk struktur yang kasar. Berdasarkan hasil dari percobaan pertama mengggunakan sambel bakteri Escherichia coli dengan metode tususk, didapatkan pertumbuhan koloni berada diatas medium dengan bentuk koloni tidak teratur, permukaan datar, bentuk tepi licin

danbentuk

struktur

yang

halus.

Pada

percobaan

kedua

dihasilkan

pertumbuhan tengah, bentuk koloni titik-titik, permukaan melengkung, bentuk tepi tidak teratur dan bentuk struktur yang kasar.Untuk percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bentuk koloni bulat, permukaan melengkung dan bentuk tepi yang utuhserta bentuk struktur yang halus. Percobaan keempat dengan sampel yang sama didapatkan pertumbuhan koloni berada ditengah medium, bentuk koloni berduri, permukaan melengkung, bentuk tepi tidak teratur dan bentuk struktur yang kasar. Percobaan kelima dihasilkan pertumbuhan koloni berada ditengah medium, bentuk koloni titik-titik, permukaan timbul, bentuk tepi licin dan bentuk struktur yang kasar.Pada percobaan keenam dihasilkan karakteristik morfologi yangsama dengan percobaan ketiga.

67

Pengamatan morfologi menggunakan metode sebar pada sampel Bacillus cereus dengan media Natrium Agar (NA) cawan, dihasilkan pada percobaan pertama yaitu pertumbuhan koloni berada diatas medium dengan bentuk koloni bundar dan permukaan yang rata, bentuk tepi berobak dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kedua dihasilkan prtumbuhan koloni berada diatas medium dengan bentuk koloni titik-titik, permukaan licin, bentuk tepi berombak, dan bentuk struktur yang halus.Pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium dengan bentuk koloni tidak teratur dan menyebar, permukaan rata, bentuk tepi berbenang dan bentuk struktur yang kasar.Percobaan keempat didapatkan pertumbuhan berada ditengah medium dengan bentuk koloni tidak teratur, permukaan datar, bentuk tepi keriting dan bentuk struktur yang licin. Pengamatan morfologi dengan sampel Escherichia coli menggunakan metode sebar pada medium Natrium Agar (NA) cawan didapatkan pertumbuhan koloni berada dibawah medium, bentuk koloni titik-titik, permukaan cembung, bentuk tepi berbenangdan bentuk strukturyang halus. Pada percobaan kedua dihasilkan pertumbuhan berada diatas medium dengan bentuk koloni tidak teratur, permukaaan timbul datar dan bentuk tepi yang bergerigi.Pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada dibawah medium, bentuk koloni tidak teratur,

permukaan

kasar.Percobaan

rata,

bentuk

keempat

tepi

dihasilkan

utuh

dan

pertumbuhan

bentuk koloni

struktur

berada

yang

ditengah

medium, bentuk koloni tidak teratur, permukaan rata, bentuk tepi keriting dan bentuk struktur yang kasar.Pada percobaan kelima dan keenam dihasilkan pertumbuhan dibawah medium, bentukkoloni titik-titik, permukaan datar, bentuk tepi bergerigi dan bentuk struktur kasar. Percobaan dengan sampel Bacillus cereus metode gores didapatkan hasil pertama

yaitu

pertumbuhan

koloni berada diatas medium,

bentuk

koloni

berbenang, permukaan timbul datar, bentuk tepi berbenang dan bentuk strruktur ynag halus. Pada percobaan kedua dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium dengan bentuk koloni serupa akar, permukaan licin, bentuk tepi berbenang pertumbuhan

dan

bentuk

struktur

koloni berada

yang

diatas

halus.

medium,

Percobaan bentuk

ketiga dihasilkan

koloni tidak

teratur,

68

permukaan rata, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. percobaan keempat didapatkan pertumbuhan koloni berada diatas medium dengan bentuk koloni tidak teratur, permukaan rata, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Percobaan dengan sampel Escherichia coli dengan metode gores pada medium Nutrient Agar (NA) cawan didapatkan pada percobaan pertama yaitu pertumbuhan berada diatas medium, bentuk koloni tidak teratur, permukaan rata, bentuk tepi keriting, dan bentuk struktur halus. Pada percobaan kedua dihasilkan pertumbuhan berada diatas medium dengan bentuk koloni serupa akar, permukaan lengkung,bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. pada percobaan ketiga dan keempat dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bentuk koloni bulat, permukaan rata,bentuk tepi utuh, dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kelima dan keenam dihasilakan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bentuk koloni berduri, permukaan kasar, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Percobaan dengan sampel Bacillus cereus pada medium Nutrient Agar (NA) dengan metode gores didapatkan hasil pada percobaan pertama yaitu pertumbuhan berada diatas medium, bentuk koloni tidak teratur, permukaan datar, bentuk tepi seperti wol danbentuk struktur yang kasar. pada bercobaan kedua dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bentuk koloni berduri, permukaan berlekuk, bentuk tepi berlekuk, dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium dengan bentuk koloni tidak teratur,permukaan rata, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan keempat dihasilkan pertumbuhan berada diatas medium dengan bentuk koloninya serupa tasbih, permukaan rata, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Hasil dari percobaan dengan sampel Bacillus cereus dengan metode goren dan pada medium Nutrient Agar (NA) miring didapatkan percobaan pertama dengan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bentuk koloni serupa pedang, permukaan melengkung, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan kedua dihasilkan pertumbuhan berada diatas medium, bentuk

69

koloni berduri, permukaan timbul datar, bentuk tepi tidak teratur dan bentuk struktur yang kasar.pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium dengan bentuk koloni serupa tasbih., permukaan timbul datar, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang halus. Pada percobaan keemapat dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bentuk koloni tidak teratur, permukaan tidak rata dan licin, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang halus.Pada

percobaan

kelima

dihasilkan

bakteri

Escherichia

coli

dengan

pertumbuhan diatas medium, bentuk koloni berduri, permukaan kasar, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar.pada percobaan keenam dihasilakan pertumbuhan koloni diatas medium, bentuk koloni serupa tasbih, perukaan timbul datar, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang halus. Percobaan dengan sampel Bacillus cereus pada medium Eosin Methylene Blue

Agar

(EMBA) dan pada metode gores dihasilkan data pertama yaitu

pertumbuhan kkoloni diatas medium, bentuk koloni titik-titik, permukaan berupa kawah, bentuk tepi tidak teratur dan bentuk struktur yang kasar. pada percobaan kedua dihasilkan pertumbuhan berada diatas medium dengan bnetuk koloni tidak teratur, permukaan licin, bentuk tepi berombak dan bentuk struktur yang kasar. Pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bnetuk koloni tidak teratur dan bentuk struktur yang kasar.pada percobaan keempat dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bentuk koloni tidak teratur, permukaan timbul, bentuk tepi tidak teratur dan bentuk struktur yang kasar. Percobaan dengan sampel bakteri Escherichia coli pada medium Eosin Methylene Blue Agar

(EMBA) dan pada metode gores dihasilkan percobaan

pertama dan kedua yang tidak menghasilkan pertumbuhan koloni dan tidak pula menujukkan sifat morfologi lainnya. Hal ini dikarenakan alat jarum ose yang digunakan pada saat menggoreskan biakan terlalu panas sehingga menyebabkan biakan-biakan tersebut mati.Pada percobaan ketiga dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium, bentuk koloni bulat, permukaan timbul datar, bentuk tepi utuh dan bentuk struktur yang halus.Pada percobaan keempat dan kelima dihasilkan pertumbuhan koloni berada dibawah medium, bentuk koloni bundar,

70

permukaan rata dan tidak berlendir, bentuk tepi utuh dan bentuk struktur yang halus.Pada percobaan keenam dihasilkan pertumbuhan koloni berada diatas medium,

bentuk

koloni

berbenang,

permukaan

melengkung,

bentuk

tepi

bercabang dan bentuk struktur yang halus. Berdasarkan

hasil

pengamatan,

praktikum yang

dilakukan

terdapat

beberapa persamaan dan perbedaan dengan literature yang ada. Menurut (Elfidasari, Saraswati, Nurfaidianti, Samiah, & Setiawati, 2011), morfologi koloni Bacillus cereus mempunyai bentuk koloni bulat, tepian koloni berombak, dan mengkilap. Berdasarkan hasil pengamatan yang dilakukan, bentuk morfologi bakteri Bacillus

cereus

yang sesuai adalah berbentuk bulat, tepian koloni

berombak, dan mengkilap ditemukan pada medium Nutrient Morfologi setiap

bakteri mempunyai bentuk

Agar

(NA).

dan karakteristik yang

berbeda.Perbedaan tersebut umumnya sangat bergantung dan dipengaruhi oleh factor lingkungan.Perubahan faktor lingkungan dapat mengakibatkan perubahan sifat morfologi dan fisiologi.Hal ini dikarenakan selain menyediakan Nutrient yang

sesuai

untuk

kultivasinya

juga

diperlukan

faktor

lingkungan

yang

memungkinkan pertumbuhan optimumnya.Mikroba tidak hanya bervariasi dalam persyaratan nutrisinya tetapi juga menunjukkan respon yang berbeda-beda.Untuk berhasilnya kultivasi berbagai tipe mikroba diperlukan suatu kombinasi yang sesuai.

Faktor kimiawi yang mempengaruhi antara lain senyawa toksik atau

senyawa kimia lainnya. Faktor biotik mencakup semua adanya asosiasi atau kehidupan bersama antara mikroorganisme, dapat berupa bentuk simbiose, sinergisme, antibiose, dan sintropisme.

71

KESIMPULAN

Berdasarkan pembahasan dan hasil pengamatan yang telah dilakukan maka dapat ditarik beberapa kesimpulan sebagai berikut: 1. Bakteri adalah mikroorganisme bersel satu prokariotik yang hidup bebas dan dapat ditemukan beberapa lingkungan seperti udara, tanah, debu, air, serta hidup di dalam tubuh hewan, tumbuhandan manusia. 2. Morfologi koloni bakteri berarti mempelajari mengenai struktur dan bentuk dari suatu koloni bakteri agar bakteri tersebut mudah dikenali. 3. Bakteri Bacillus cereus mempunyai bentuk bulat, tepian koloni berombak dan mengkilap. 4. Bakteri Escherichia coli mempunyai bentuk bulat, permukaan halus, tepian rata dan mengkilap. 5. Perbedaan morfologi dapat disebabkan oleh faktor lingkungan, faktor kimiawi, dan faktor biotik.

72

ACARA V PERHITUNGAN JUMLAH KOLONI MIKROBA

73

ACARA V PERHITUNGAN JUMLAH KOLONI MIKROBA

PENDAHULUAN

Latar Belakang Mikroorganisme

banyak

ditemukan

dimana

saja,

dapat

ditemukan

diudara,air,dan tanah. Mikroba hidup secara koloni atau kelompok dengan satu spesies

yang

sama.

Mirkroba

mengalami

pertumbuhan,

pertumbuhan

mikroorganisme membentuk koloni. Koloni tersebut dapat dianggap koloni yang tumbuh berasal dari sel, maka dengan menghitung jumlah koloni dapat diketahui penyebaran bakteri yang ada pada bahan. Jumlah mikroba pada suatu bahan dihitung dengan berbagai macam cara, tergantung pada bahan dan jenis mikrobanya. Penentuan jumlah mikroba yang hidup dengan menghitung jumlah koloni mikroba. Jumlah koloni mikroba dapat diperkirakan dengan suatu metode perhitungan. Terdapat dua metode perhitungan miktoba atau bakteri, yaitu metode hitung secara langsung ( direct method ) dan metode perhitungan secara tidak langsung ( indirect method ) dengan hitungan cawan, baik dengan metode penyebaran maupun metode penuangan. Sebelum ditumbuhkan pada media, terlebih dahulu dilakukan pengenceran. Hal ini dilakukan agar setelah inkubasi akan terbentuk koloni pada cawan tersebut dalam jumlah yang tepat. Jumlah koloni yang dapat dihitung pada bakteri yaitu 25 – 250 koloni, sedangkan untuk jamur 15-150 koloni (Fardiaz, 2008). Perhitungan

koloni

bertujuan

untuk

mengetahui

perkembangan

dan

pertumbuhan suatu mikroba. Jumlah mikroba dalam suatu bahan dapat ditentukan dengan berbagai cara, tergantung pada jenis bahan dan jenis mikroba. Pada industri pangan yang menggunakan suatu mikroba dalam proses produksinya, penentuan jumlah mikroba sangat penting dilakukan. Penentuan jumlah mikroba penting

dilakukan

karena

bertujuan

untuk

menetapkan

tingkat

kemanan

produknya. Oleh karena itu, praktikum perhitungan jumlah mikroba sangat

74

penting dilakukan untuk mengetahui jumlah koloni suatu mikroba pada suatu medium. Tujuan Praktikum Adapun

tujuan

dari praktikum ini adalah

untuk

mengetahui cara

perhitungan jumlah mikroba.

75

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroorganisme adalah makhluk yang sangat kecil dan hanya dapat dilihat di mikroskop.

Bakteri merupakan mikroorganisme uniseluler yang tumbuh

dengan cara pembelahan biner. Kehadiran mikroba dalam pangan dapat bersifat menguntungkan dan merugikan. Analisis kuantitatif mikrobiologi pada bahan pangan penting dilakukan, karena untuk mengetahui mutu bahan pangan dan proses yang akan diterapkan pada bahan tersebut. Untuk menghitung jumlah koloni terdapat beberapa cara, antara lain dengan hitungan cawan ( plate count ), hitungan

mikroskopis

langsung

dan

ruang

hitung

atau

sampel

tidak

secara

elektronik

menggunakan colony counter (Bagod, 2008). Menghitung

jumlah

bakteri

dalam

mudahm

karena

ukurannya yang sangat kecil. Menghitung mikroba secara langsung dengan menggunakan mikroskop memerlukan banyak waktu dan keahlian. Metode yang mudah digunakan yaitu dengan menyebarkan bakteri di dalam medium dan menghitung jumlah koloni yang tumbuh. Jika bakteri dapat cukup menyebar, setiap sel bakteri dalam sampel asli harus ,menghasilkan koloni tunggal. Sampel bakteri harus diencerkan terlebih dahulu untuk mendapatkan jumlah yang wajar (Umi, 2008). Menentukan jumlah bakteri dapat digunkana dua cara, yaitu metode secara langsung dan metode secara tidak langsung. Metode perhitungan secara langsung dapat digunakan untuk menghitung mikroba, baik yang hidup maupun yang mati. Perhitungan

jumlah

bakteri secara

langsung dapat menggunakan counting

chamber, pengamatan mikroskopik dan filter membran. Sedangkan perhitungan jumlah bakteri secara tidak langsung digunakan untuk mengitung jumlah bakteri secara keseluruhan, baik yang hidup maupun yang mati atau hanya menentukan jumlah mikroba yang hidup saja. Hal ini tergantung dari cara – cara yang akan digunakan. Untuk menentukan jumlah bakteri hidup dapat dilakukan setelah larutan bahan atau biakan bakteri diencerkan dengan faktor pengencer tertentu, tegantung dari macam dan sifat bakterinya (Wibowo & Andriyani, 2016).

76

Metode yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah bakteri, salah satunya yaitu Most probable Number (MPN). Most probable Number (MPN) merupakan metode analisis yang digunakan untuk memperkirakan banyaknya jumlah bakteri dengan pengenceran bertingkat pangkat 10. Analisis MPN bertujuan Menghitung

untuk

menghitung

jumlah

koloni

jumlah

bakteri,

menggunakan

khususnya

MPN

bakteri

berdasarkan

Colifrom.

pada

jumlah

perkiraan terdekat. Perkiraan terdekat yaitu nilai perhitungan dalam range tertentu (Juwita, Haryani, & Jose, 2014). Perhitungan mikroba juga dapat menggunakan Colony Counter. Colony Counter biasanya digunakan untuk menghitung sel individu di dalam volume yang sangat kecil. Colony Counter dapat diatur sedemikian rupa, sehingga kotak kotak yang terdapat yang terdapat pada alat ini sesuai dengan aturan yang baku. Kotak kotak tersebut memiliki luas tertentu, kemudian cairan akan mengalir kedalamnya. Setiap sel mikroba tumbuh sesuai dengan masa inkubasi. Jumlah koloni yang akan dihitung merupakan dugaan dari jumlah mikroba dalam suspensi tersebut (Bibina, 2010).

77

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari sabtu, 17 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram Alat dan Bahan Praktikum a. Alat – alat Praktikum Adapun alat – alat yang digunakan dalam praktikum ini antara lain, cawan petri, bunsen, blue tip,micropipet, rak tabung reaksi, tabung reaksi, vortex, incubator, tissu, plastik steril, botol UC b. Bahan – bahan Praktikum Adapun bahan – bahan yang digunakan dalam praktikum ini antara lain, Bacillus Cereus, Escherichia Coli, dan Media Plate Counte Agar ( PCA). Prosedur Kerja Perhitungan Jumlah Koloni Biakan

Dihomogenkan biakan dengan vortex

Dilakukan pengenceran sebanyak 10 -7

Diambil 1 mL 3 pengenceran terakhir ( 10-5 10 -6 , 10-7 )

78

Dituang ke dalam cawan petri

Dilakukan Secara Duplo

Medium PCA dituang kedalam cawan Petri

Diinkubasi terbalik pada suhu 370 C selama 48 jam

Diamati

79

HASIL PENGAMATAN

Hasil Pengamatan Tabel 5.1 Hasil Pengamatan Jumlah Koloni Mikroba Medium Plate Counte Agar ( PCA) Pengenceran Kelompok Bakteri 10 -5 10-6 10 -7 U1 U2 U1 U2 U1 U2 11 Escherichia Coli >250 41 120 28 >250 >250 12 Bacillus Cereus 15 >250 28 49 29 50 13 Escherichia Coli 156 135 170 >250 >250 >250 14 Bacillus Cereus >250 >250 >250 >250 156 >250 16 Escherichia Coli >250 >250 >250 >250 >250 >250 17 Bacillus Cereus 167 121 97 64 12 200 18 Escherichia Coli 179 >250 121 >250 209 182 19 Bacillus Cereus >250 200 10 10 28 25

Ʃ koloni ( cfu/gr ) 7,4 x 107 CFU / ml 3,85 x 107 CFU / ml 1,45 x 107 CFU / ml >1,0 x 107 CFU / ml >1.0 x 107 CFU / ml 1,44 x 107 CFU / ml 1,95 x 109 CFU / ml 2,65 x 108 CFU / ml

80

Hasil Perhitungan Hasil perhitungan jumlah koloni mikroba medium Plate Counte Agar ( PCA ). a. Kelompok 11 ( Escherichia Coli ) Pengenceran 10-6 Σ koloni

= = =

U1+U2

1

× FP

2 120+28 2 148

1

× 10 −6 1

× 10 −6

2

= 74 ×106 = 7,4 ×107 CFU/gr b. Kelompok 12 ( Bacillus Cereus ) Pengenceran 10-6 Σ koloni

= = =

U1+U2 2 28+49

1

× 10 −6

2 77 2

1

× FP

1

× 10 −6

= 38.5 × 106 = 3,85 ×107 CFU/gr c. Kelompok 13 ( Escherichia Coli ) Pengenceran 10-5 Σ koloni

= = =

U1+U2 2

1

× FP

135+156 2 291 2

×

1

× 10 −5

1 10 −5

= 145,5 ×105 = 1,45 ×107 CFU/gr d. Kelompok 14 ( Bacillus Cereus ) Pengenceran 10-5 Σ koloni

= =

U1+U2 2

1

× FP

>250 +>250 2

×

1 10 −5

81

= >1.0×107 CFU/gr e. Kelompok 16 ( Escherichia Coli ) Pengenceran 10-5 Σ koloni

= =

U1+U2 2

1

× FP

>250 +>250 2

1

× 10 −5

= >1.0×107 CFU/gr f.

Kelompok 17 ( Bacillus Cereus ) Pengenceran 10-5 Σ koloni

= = =

U1+U2 2

1

× FP

167+121 2 288

1

× 10 −5

1

× 10 −5

2

= 144 ×105 = 1,44 ×107 CFU/gr g. Kelompok 18 ( Escherichia Coli ) Pengenceran 10-7 Σ koloni

= = =

U1+U2 2

1

× FP

209+182 2 391 2

1

× 10 −7

1

× 10 −7

= 195,5 ×107 = 1,95 ×109 CFU/gr h. Kelompok 19 ( Bacillus Cereus ) Pengenceran 10-7 Σ koloni

= = =

U1+U2 2 28+25 2 53 2

1

× FP 1

× 10 −7 1

× 10 −7

= 26,5 ×107 = 2,65 ×108 CFU/gr

82

PEMBAHASAN

Mikroorganisme adalah makhluk yang sangat kecil dan hanya dapat dilihat di mikroskop. Bakteri merupakan mikroorganisme uniseluler yang tumbuh dengan cara pembelahan biner. Kehadiran mikroba dalam pangan dapat bersifat menguntungkan dan merugikan. Analisis kuantitatif mikrobiologi pada bahan pangan penting dilakukan, karena untuk mengetahui mutu bahan pangan dan proses yang akan diterapkan pada bahan tersebut. Untuk menghitung jumlah koloni terdapat beberapa cara, antara lain dengan hitungan cawan ( plate count ), hitungan

mikroskopis

langsung

dan

ruang

hitung

atau

secara

elektronik

menggunakan colony counter (Bagod, 2008). Perhitungan koloni bakteri dapat diartikan sebagai salah satu cara yang digunakan untuk menghitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada suatu biakan. Perhitungan jumlah mikroba dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu metode perhitungan langsung dan metode perhitungan tidak langsung. Untuk menentukan jumlah bakteri dapat dilakukan setelah biakan diencerkan. Prinsip dari perhitungan koloni bakteri yaitu, semakin rendah jumlah koloni bakteri.

semakin tinggi tingkat pengenceran, Perhitungan koloni bakteri penting

dilakukan, karena digunakan untuk menetapkan keamanan suatu bahan di bidang farmasi maupun pangan. Satuan perhitungan mikroba adalag CFU ( Colony Foarming Unit ). CFU adalah unit yang digunakan untuk memperkirakan jumlah bakteri yang hidup dalam sampel. CFU juga dapat diartikan sebagai kemampuan untuk berkembang biak melalui pembelahan biner dibawah kondisi yang terkendali. Menghitung dengan unit pembentuk koloni membeutuhkan pembiakan mikroba. Metode yang digunakan pada praktikum ini yaitu, metode cawan petri dengan menggunakan media Plate Counte Agar ( PCA ). Perhitungan koloni bakteri dengan metode cawan dapat dilakukan dengan beberapa teknik. Salah satu teknik yang digunakan yaitu pengenceran. Pengenceran yang digunakan yaitu pengenceran bertingkat. Pengenceran bertingkat yaitu pengenceran yang bertujuan untuk memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam

83

cairan.

Prinsip

pengenceran

adalah

menurunkan jumlah mikroba,

sehingga

semakin banyak pengenceran dilakukan, maka semakin sedikit mikroba yang dapat ditumbuhkan. Pengenceran penting dilakukan untuk membantu memperoleh hasil yang benar, namun pengenceran yang tinggi dapat menghasilkan jumlah koloni yang relatif rendah. Medium yang digunakan pada praktikum ini yaitu, media Plate Counte Agar ( PCA ). Plate Counte Agar ( PCA ) digunakan untuk menghitung jumlah bakteri total yang terdapat pada setiap sampel makanan. Plate Counte Agar ( PCA ) termasuk media padat karena mengandung agar, sehingga setelah dingin media akan menjadi padat. Plate Counte Agar ( PCA ) mengandung nutrisi yang disediakan oleh trypton, vitamin dari ekstrak ragi dan glukosa yang digunakan untuk sumber energi bagi mikroorganisme. PCA bukan termasuk media selektif, karena media ini tidak hanya ditumbuhi oleh satu jenis mikroba tertentu. Kultur yang digunakan dalam praktikum ini yaitu, Escherichia Coli dan Bacillus Cereus. Escherichia Coli atau E. Coli merupakan salah satu bakteri yang termasuk kedalam bakteri gram negatif. Bakteri ini termasuk bakteri heterotrof yang memperoleh makanan berupa zat organik dari lingkungannya. Sedangkan Bacillus Cereus termasuk bakteri gram positif. Bakteri ini berbentuk batang, aerobik,anarob

fakultatif,

motil serta beta homolitik.

Bakteri ini biasanya

ditemukan di tanah dan dimakanan. Langkah – langkah yang digunakan untuk menghitung koloni bakteri pada praktikum ini yaitu, pertama diambil biakan sampel kemudia di vortex. Fungsi vortex yaitu untuk menghomogenkan sampel sehingga saat pengambilan, sampel jumlah bakteri yang diambil intensitasnya relative sama. Pengambilan sampel menggunakan micropipet dan blue tip, blue tip digunakan sebagai wadah atau tempat kultur. Penggunaan blue tip tidak boleh digunakan terlalu lama, perlu dilakukan pergantian tip untuk mencegah adanya kontaminasi pada bakteri. Kemudian dilakukan pengenceran sebanyak 10 -7 , pengenceran sebanyak 10-7 karena sesuai dengan prinsip pengenceran. Semakin kecil jumlah pengenceran, maka jumlah bakteri yang terkandung seharusnya semakin sedikit.

Pengenceran

dilakukan agar memudahkan perhitungan bakteri pada saat setelah di inkubasi dan

84

tidak terjadi penumpukan koloni bakteri. Setelah dilakukan pengenceran, diambil 3 pengenceran terakhir ( 10-5 10-6 dan 10 -7 ). Pengambilan 3 pengenceran terakhir, agar

mempermudah

perhitungan

karena

seharusnya

jumlah

bakteri

yang

ditumbuhkan akan semakin sedikit. Setelah itu dituang kedalam cawan petri dan ditambahkan media PCA. Penambahan media Plate Counte Agar ( PCA ) berfungsi sebagai tempat pertumbuhan bakteri, karena mengandung glukosa yang digunakan

sebagai sumber energi bagi mikroorganisme.

Kemudian sampel

diinkubasi selama 48 jam dengan suhu 37 0 C secara terbalik. Inkubasi secara terbalik bertujuan agar media tidak terkena tetesan air yang melekat pada dinding tutup cawan petri. Suhu 370 C digunakan untuk menyesuaikan suhu pada lingkungan asli dari bakteri tersebut. Praktikum

yang

dilakukan

kali

ini,

tidak

sesuai

dengan

prinsip

pengenceran menurut (Waluyo, 2007) yaitu semakin banyak jumlah pengenceran yang digunakan, maka semakin sedikit jumlah mikroba yang tumbuh. Seharusnya jumlah

mikroba

pada

pengenceran

10-5

lebih

banyak

dibanding

dengan

pengenceran 10-6 dan 10-7 . Namun hasil yang diperoleh tidak sesuai dengan keadaan yang sebenarnya. Pada pengenceran 10 -5 kadang jumlah bakterinya lebih sedikit dibandingkan dengan pengenceran 10 -6 ,kadang kala pengenceran 10-7 lebih banyak dibandingkan denganpengenceran 10 -6 dan 10-5 . Metode hitungan cawan yang digunakan pada praktikum ini memiliki kekurangan yaitu, hasil perhitungan tidak selalu menunjukkan jumlah mikroba yang sebenarnya. Berdasarkan hasil pengamatan, biakkan yang digunakan yaitu kultur A dan kultur B, dengan menggunakan metode cawam. Kultur A yaitu Escherichia Coli dan kultur B Bacillus Cereus. kultur A dilakukan pengamatan oleh kelompom 11,13,16, dan 18. Sedangkan kultur B dilakukan pengamatan oleh kelompok 12,14,17 dan 19. Kelompok 11 memperoleh hasil 7,4 ×107

CFU/gr, dengan

jumlah mikroba yang tidak dapat untuk dihitung ( TBUD ) sebanyak 3, yaitu pada pengenceran, 10-5 (U1), 10-7 (U1 dan U2). Kelompok 13 memiliki hasil 1,45 ×107 CFU/gr, dengan jumlah koloni yang TBUD pada pengenceran 10-6 ( U2), 10-7 ( U1 dan U2 ). Kelompok 16 memperoleh hasil >1,0 ×107 CFU/gr, hasil ini, diperoleh karena baik pada pengenceran 10-5 ( U1,U2 ), 10-6 ( U1,U2 ) dan 10-7 ( U1,U2 )

85

jumlah koloni mikroba tidak bisa untuk di hitung (TBUD ). Sedangkan kelompok 18, memperoleh hasil 1,95 ×109

CFU/gr, dengan jumlah koloni mikroba yang

TBUD pada pengenceran 10-5 ( U1), dan 10-6 (U2 ). Untuk kelompok 15 dan 20 tidak melakukan praktikum dikarenakan keterbatasan waktu. Kultur B yang di lakukan oleh kelompok, 12,14,17,dan 19, untuk kelompok 12, diperoleh hasil 3,85 ×107 CFU/gr, dengan TBUD pada pengenceran 10-5 ( U2 ). Kelompok 14 memiliki hasil >1,0 ×107 CFU/gr, hasil ini, diperoleh karena jumlah koloni, baik pada pengenceran 10-5 ( U1,U2 ), 10-6 ( U1,U2 ) dan 10-7 ( U1,U2 ) tidak bisa untuk dihitung (TBUD ). Kelompok 17 diperoleh hasil 1,44 ×107 CFU/gr, tanpa adanya koloni yang TBUD. Sedangkan kelompok 19 diperoleh hasil 2,65 ×108

CFU/gr, dengan jumlah koloni yang TBUD, terjadi

pada pengenceran 10-5 ( U1 ). Perhitungan koloni bakteri dapat dinyatakan dalam TBUD. TBUD yaitu singkatan dari tidak bisa untuk dihitung. Hal ini dosebabkan karena koloni yang terbentuk pada media terlalu banyak. Selain itu dapat di sebabkan oleh jumlah koloni telah melewati batas perhitungan, yaitu 25 – 250. Hal ini disebabkan oleh beberapa faktor, diantaranya pengenceran masih rendah. Dengan rendahnya tingkat pengenceran, sehingga konsentrasi bakteri dalam suspensi masih banyak. Dapat juga di sebabkan karena penyebaran bakteri kurang merata, hal ini yang membuat bakteri tumbuh secara menumpuk, sehingga susah untuk dihitung. Perhitungan jumlah koloni didasarkan pada pertumbuhan suatu mikroba. Pertumbuhan setiap jenis mikroba tidak selalu sama, namun selalu tergantung pada

kondisi lingkungan

sekitar.

Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan

mikroba antara lain, suhu, cuaca,dan kebutuhan nutrisi serta pH yang diperlukan. Suhu minimal akan membuat pertumbuhan mikroba terhambat, bahkan dapat terhenti.

Sedangkan

jika

menggunakan

suhu

maksimal

akan

membuat

pertumbuhan mikroba tidak akan terjadi. Selain itu, pH juga mempengaruhi pertumbuhan suatu mikroba. pH yang sesuai dengan pH habitat asli dari mikroba yaitu pH 7,0 dan sedikit mikroba yang dapat tumbuh atau berkembang pada pH 4,0.

86

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan, maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut : 1. Mikroorganisme merupakan makhluk hidup yang berukuran kecil, yang hanya dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop. 2. Perhitungan koloni merupakan salah satu cara yang digunakan untuk menghitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada suatu media. 3. Satuan perhitungan dalam menghitung jumlah koloni yaitu CFU ( Colony Foarming Unit ) atau unit yang digunakan untuk memperkirakan jumlah koloni bakteri. 4. Bakteri yang digunakan yaitu Escherichia Coli, dan Bacillus cereus. Dengan menggunakan media Plate counte Agar ( PCA), yang mengandung glukosa sebagai sumber energi bagi pertumbuhan bakteri. 5. Faktor

yang

mempengaruhi

pertumbuhan

mikroba

antara

lain,

suhu,

cuaca,dan kebutuhan nutrisi serta pH yang diperlukan.

87

ACARA VI MORFOLOGI JAMUR BENANG

88

ACARA VI MORFOLOGI JAMUR BENANG

PENDAHULUAN

Latar Belakang Jamur merupakan mikroorganisme yang tergabung dalam takson kingdom fungi. Berdasarkan sistem Whittaker, kingdom fungi memiliki ciri khas yaitu bersifat heterotrof. Kingdom yang bersifat heterotrog, akan mengabsorbsi nutrient dan memiliki kitin pada dinding selnya. Jamur dapat bersifat saprotrof dengan mendapatkan nutrisi dari organisme hidup atau bersimbiosis mutualisme dengan satu organisme lainnya. Produksi kitin sejenis polisakarida adalah Synapormarphy (sifat yang serupa ) antara fungi hewan dan Chearaflagellata. Hal ini menjadi bukti bahwa secara evolusioner fungi lebih dekat dengan hewan dibandingkan tumbuhan (Waluyo, 2007). Jamur ( fungi ) banyak ditemukan disekitar lingkungan kita. Jamur dapat tumbuh subur, terutama pada musim hujan, karena jamur menyukai habitat yang lembab. Jamur dibagi menjadi dua kelompok, yaitu kapang ( mold), dan khamir ( yeast). Namun kebanyakan spesies jamur termasuk kedalam kelompok kapang ( mold). Tubuh vegetatif kapang berbentuk filamen panjang, bercabang seperti benang. Benang terrsebut dapat disebut dengan hifa,hifa akan memanjang serta menyerap makanan dari permukaan substrat. Jamur tidak mempunyai batang, daun, akar, serta tidak memiliki sistem pembuluh, seperti pada tumbuhan tingkat tinggi. Jamur memiliki banyak sel, jamur tidak memiliki khlorofil, sehingga jamur tidak mampu untuk membuat makanan sendiri. Hal ini menyebabkan jamur memanfaatkan sisa – sisa bahan organik dari makhluk hidup. Pengamatan morfologi sangat penting dilakukan untuk membantu proses identifikasi jenis jamur. Sehingga jamur dapat di manfaatkan atau dapat diproses sesuai dengan jenisnya. Oleh karena itu, perlu dilakukan pengamatan morfologi jamur benang, sehingga dapat membedakan morfologi jamur satu, dengan jamur lainnya.

89

Tujuan Praktikum Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui morfologi beberapa jamur benang secara

mikroskopis dalam membedakan jenis jamur

benang satu dengan yang lainnya.

90

TINJAUAN PUSTAKA

Jamur benang atau kapang merupakan golongan fungi yang membentuk lapisan

jaringan

misellium dan spora yang tampak.

Namun tidak

dapat

membentuk badan buah yang makroskopis. Miseellium terdiri dari filamen tubular yang tumbuh yaitu hifa. Antara datu hifa dengan hifa yang lainnya biasanya dipisahkan oleh septa. Septa memiliki pori – pori yang memungkinkan organe, bahkan terkadang nukleus untuk lewat. Beberapa hifa bersifat coenositik ( memiliki banyak inti ) dan tidak memiliki septa. Hida dapat memiliki beberapa modifikasi seperti, hifa reproduktif ( untuk berkembangbiak ), hifa nutritif ( untuk menyerap nutrisi), rizoid ( untuk menempel ke inang atau substrat ) dan lain sebagainya (Singleton & Sainsbury, 2006) Jamur tersusun dari benang – benang sel yang panjang, yang dihubungkan bersama dari ujung ke ujung. Benang – benang tersebut biasanya disebut sebagai hifa. Banyak jamur yang memiliki dinding penyekat ( septa) dalam hifa,sehingga terdapat bnyak sel yang memiliki Nucleus masing – masing.

Sel jamur yang

memiliki penyekat ( sekat ) disebut dengan hifa bersepta. Beberapa kelas fungi mempunyai hifa tidak bersepta yan terlihat sebagai satu sel panjang yang mengandung banyak nukleus, hifay semacam ini disebut sebagai hifa senosit (Sumanti, 2008). Jamur benang memiliki spesies atau genus yang beragam, dengan ciri – ciri atau morfologi yang berbeda. Salah satu genus dari jamur benang yaitu Rhizopus sp. Jamur ini termasuk dalam jamur saprofit yang dapat tumbuh ditanaman maupun di hewan. Rhizopus sp merupakan kapang yang dapat menghasilkan enzim, enzim yang dihasilkan yaitu enzim protease. Protease disebut juga peptidase atau protenase, yaitu enzim yang dapat mengkatalisis hidrolisis ikatan peptida menjadi oligopeptida pendek dan asam amino bebas. Peptida dan asam amino bebas tersebut lebih mudah diserap tubuh, dibanding dengan rantai panjang protein. Rhizopus sp banyak memiliki manfaat, terutama dalam bidang pangan dan peternakan, sebagai bahan pakan ternak(Endrawati & Kusumaningtyas, 2007).

91

Mengidentifikasi jamur benang lebih utama dilakukan dengan melakukan pengamatan morfologi. Dalam pengamatan morfologi terdapat beberapa hal yang perlu diperhatikan, antara lain, tipe hifa, tipe spora, tipe badan buah serta bentuk khusus. Tipe hifa meliputi, hifa bersepta atau tidak, jernih atau keruh, serta berwarna atau tidak. Tipe spora dibagi menjadi 2 tipe, yaitu tipe spora seksual dan tipe spora aseksual. Spora seksual misalnya, Cospole Zygospore, Ashospora dan Basudiospora. Spora aseksual misalnya Candida, Sporangiosporadan oidia. Tipe badan buah me;iputi bentuk, ukuran, warna, dan letak spora atau konisi. Bentukan khusus dapat berupa stolon, rizoid, selka, apofisa, dan lain lain (Soetarto, 2008).

92

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari selasa, 27 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram Alat dan Bahan Praktikum a. Alat – alat Praktikum Adapun alat – alat yang digunakan dalam praktikum ini antara lain, gelas benda, kaca penutup, mikroskop cahaya, pipet tetes, jarum preparat, botol semprot dan jarum Ose. b. Bahan – bahan Praktikum Adapun bahan – bahan yang digunakan dalam praktikum ini antara lain, biakan Rhizopus sp, alkohol dan aquades Prosedur Kerja Jamur

Diletakkan pada gelas benda dengan jarum ose

Ditetesi aquades

Ditutup dengan gelas penutup

Diamati morfologi jamur benang

93

HASIL PENGAMATAN

Hasil Pengamatan Tabel 6.1 Hasil Pengamatan Morfologi Jamur Benang Klp Biakan Gambar Literatur 11 Rhizopus sp

Perbesaran : 40×/ 1.25

12

1. Sporangiosfor 2. Spora

Perbesaran : 40×/ 1.25 Sumber : ( Suryani,2012)

Rhizopus sp

1. Spora 2. Sporangiosfor

Perbesaran : 40×/ 1.25 14

Perbesaran : 40×/ 1.25 Sumber : ( Suryani,2012)

Rhizopus sp

Perbesaran : 40×/ 1.25 13

Rhizopus sp

Keterangan 1. Spora 2. Sporangiospora

Perbesaran : 40×/ 1.25 Sumber : ( Suryani,2012) 1. Spora 2. Sporangiosfor

94

Perbesaran : 40×/ 1.25 15

Perbesaran : 40×/ 1.25 Sumber : ( Suryani,2012)

Rhizopus sp

1. Spora 2. Sporangiosfor 3. Sporangiospora

Perbesaran : 40×/ 1.25

Perbesaran : 40×/ 1.25 Sumber : ( Suryani,2012)

95

PEMBAHASAN

Jamur benang atau kapang merupakan golongan fungi yang membentuk lapisan

jaringan

misellium dan spora yang tampak.

Namun tidak

dapat

membentuk badan buah yang makroskopis. Miseellium terdiri dari filamen tubular yang tumbuh yaitu hifa. Antara datu hifa dengan hifa yang lainnya biasanya dipisahkan oleh septa. Septa memiliki pori – pori yang memungkinkan organe, bahkan terkadang nukleus untuk lewat. Beberapa hifa bersifat coenositik ( memiliki banyak inti ) dan tidak memiliki septa. Hida dapat memiliki beberapa modifikasi seperti, hifa reproduktif ( untuk berkembangbiak ), hifa nutritif ( untuk menyerap nutrisi), rizoid ( untuk menempel ke inang atau substrat ) dan lain sebagainya (Singleton & Sainsbury, 2006). Morfologi jamur merupakan ilmu yang mempelajari tentang bentuk jamur dan mencakup

bagian –

bagiannya.

Pengamatan morfologi jamur penting

dilakukan untuk memahami dan mengetahui morfologi beberapa jamur benang secara makroskopik. Pengamatan morfologi juga dapat membedakan jenis jamur benang yang satu dengan yang lainnya. Hal – hal yang perlu diperhatikan pada saat pengamatan morfologi jamur benang anatar lain, tipe hifa, bersepta atau tidak, jernih atau keruh, dan berwarna atau tidak. Selain itu tipe spora, meliputi spora seksual atau spora aseksual. Tipe badan buah, meliputi bentuk, ukuran, warna, letak spora dan konidia, serta bentuk khusus. Jamur dapat berkembang biak secara vegetatif dan generatif dengan berbagai macam spora. Perkembangbiakan jamur secara vegetatif dengan cara fragmentasi,

membelah

diri,

bertunas,

spora

kembara,

dan

konidiospora.

Sedangkan secara generatif melalui perkawinan yang dilakukan oleh dua jenis hifa yang berbeda, yang menghasilkan peleburan dua sel/gamet. Pada umumnya, jamur tidak memiliki alat yang dapat menghasilkan hifa yang dapat kawin. Hal ini mengakibatkan hifa yang dapat kawin disebut hifa positif (+), sedangkan hifa yang tidak dapat kawin disebut hifa negatif (-). Praktikum ini menggunakan sampel jamur pada tempe yaitu Rhizopus sp. Ciri – ciri jamur ini yaitu koloni berwarna putih, berangsur menjadi abu – abu.

118

Terdapat stolan, sporangiospora tumbuh dari stolan dengan mengarah ke udara. Kolumela berbentuk oval hingga bulat dengan dinding halus atau sedikit kasar. Reproduksi secara aseksual dengan spora non matil yang dihasilkan oleh sporangium dan secara seksual dengan konjungasi Rhizopus

tumbuh baik pada

pH 3,4 sampai 6. Semakin tinggu pH, semakin menurun tingkat pertumbuhan jamur, karena pH tinggi tidak sesuai dengan pertumbuhan jamur. Praktikum

ini

dilakukan

pengamatan

morfologi jamur,

agar

dapat

membedakan jamur yang satu dengan jamur yang lain. Hal pertama yang dilakukan yaitu mensterilkan jarum Ose, sterilisasi bertujuan untuk menghindari adanya kontaminasi pada biakan. Kemudian diambil biakan jamur dengan jarum ose dan diletakkan pada gelas benda. Gelas benda berfungsi untuk meletakkan mikroba yang akan diamati di bawah mikroskop. Setelah itu ditetesi aquades dan ditutup dengan gelas penutup. Gelas penutup berfungsi untuk merekatkan jamur yang akan diamati serta agar tidak terkontaminasi oleh mikroba lain. Setelah itu, diamati dengan mikroskop, mikroskop berfungsi untuk mengamati benda atau obbjek yang berukuran kecil. Berdasarkan

hasil pengamatan,

pada

biakan

Rhizopus

sp

dengan

perbesaran 40×/ 1.25. Pengamatan dilakukan oleh kelompok 11,12,13,14,15 dengan menggunakan biakan dan perbesaran yang sama. Pada kelompok 11,12,13, dan 14, hasil yang diperoleh hanya terlihat spora dan sporangiosfor. Sedangkan pada kelompok 15, diperoleh hasil, terlihat spora, sporangiosfor dan sporangiospora.

Jika

dibandingkan

dengan

literatur

yang

menggunakan

perbesaran dan biakkan yang sama. Pengamatan Rhizopus sp menurut ( suryani,2012) terlihat memiliki ciri – ciri, antara lain, memiliki rizoid, terlihat sporanguim berbentuk bulat hingga semi bulat, dan berwarna coklat kehitaman, kolumela berbentuk bulat, elips, dan memiliki garis permukaan. Penggunaan jamur benang dalam bidang pangan, digunakan dalam proses fermentasi, seperti Rhizopus Oligospora yang digunakan dalam pembuatan tempe. Aktivitas jamur ini menjadikan nutrisi yang ada pada tempe siap dikomsumsi oleh manusia. Aktivitas enzim yang dihasilkan menjadi protein terlarut dalam tubuh manusia. Produk tempe telah banyak dikembangkan menjadi produk gsoflavon

119

yang penting bagi kesehatan. Selain itu, Rhizopus sp juga dapat digunakan dalam produk lainnya, seperti pada produk olahan susu. Faktor – faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jamur diantaranya, yakni faktor subsit, kelembapan, suhu,pH substrat dan senyawa kimia lainnya. Substart merupakan sumber utama nutrient

bagi jamur. Kelembapan jamur

termasuk faktor penting bagi pertumbuhan jamur. Kelembapan jamur yang dibutuhkan oleh setiap jamur berbeda – beda, tergantung pada kebutuhan/ jenisnya. Suhu lingkungan juga berperan penting dalam pertumbuhan jamur, suhu yang tinggi dapat mengakibatkan pertumbuhan jamur terhambat. pH juga termasuk faktor penting dalam pertumbuhan jamur, karena terdapat enzim yang dapat mempengaruhi substansi jika pH yang digunakan tidak sesuai dengan pH asli dari jamur.

120

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan, maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut : 1. Jamur benang merupakan golongan fungi yang membentuk lapisan jaringan misellium dan spora yang nyata, namun tidak dapat membentuk badan buah yang makroskopik 2. Rhizopus sp termasuk jamur benang yang memiliki ciri – ciri diantaranya, memiliki rhizoid, spora berbentuk bulat atau semi bulat dan sporangiospora berbentuk tak teratur. 3. Pengamatan morfologi jamur penting dilakukan, untuk mengetahui morfologi jamur benang dan dapat membedakan jenis jamur benang yang satu dengan yang lainnya. 4. Jamur Rhizopus sp dapat bersifat menguntungkan dan merugikan. Dalam bidang pangan, jamur ini dapat digunakan untuk fermentasi. 5. Faktor – faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jamur diantaranya, yakni faktor subsit, kelembapan, suhu,pH substrat dan senyawa kimia lainnya.

121

ACARA VII MORFOLOGI KHAMIR DAN SPORA KHAMIR

ACARA VII MORFOLOGI KHAMIR DAN SPORA KHAMIR

122

PENDAHULUAN

Latar Belakang Jamur atau fungi adalah kelompok organisme eukariotik yang membentuk kingdobg tersendiri dalam ilmu taksonomi, yakni kingdom fungi. Kingdom Fungi adalah kingdom yang menghimpun berbagai genus dan spesies terkait dengan jamur. Adanya pengelompokkan jamur menjadi kingdon terdensiri akibat adanya perbedaan ciri jamur dengan organisme lain. Ciri-ciri yang membedakan tersebut antara

lain

struktur

reproduksinya.

tubuhnya,

Berdasarkan

sumber

junlah

makanannya,

selnya,

kingdom

pertumbuhannya, fungi

dan

diklasifikasikan

menjadi dua kelompok, yaitu kapang (multiseluler) dan khamir (uniseluler). Khamir merupakan fungi uniseluler (bersel tungal) yang mikroskopis dan tidak membentuk percabangan permanen. Khamir hidup tersebar secara luas dialam, terutama pada bahan-bahan yang mengandung gula, tanah, kebun, buahbuahan, di dalam tubuh serangga dan terdapat juga dalam getah pohon. Bentuk dan ukuran selnya bervariasi tergantung pada jenisnya. Pada umumnya, sel khamir berbentuk oval, silinder, bulat dan batang (Nazaruddin, 2016). Khamir

sejauh

ini banyak

digunakan dalam membantu pengolahan

makanan. Keberadaan khamir mampu menambah nutrisi, pemberi aroma maupun rasa pada makanan tersebut. Contohnya seperti Saccharomyces cerevisiae yang membantu dalam pembuatan roti, bir, brem dan lain sebagainya. Oleh karena itu, perlu diadakan praktikum ini untuk mengetahui sifat morfologi dari khamir mengingat pentingnya manfaat khamir dalam kehidupan sehari-hari terutama dalam bidang pangan. Tujuan Praktikum Adapun tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui morfologi khamir, membedakan sel yang mati dan yang hidup, serta menghitung persentase khamir.

123

TINJAUAN PUSTAKA

Khamir (yeast) adalah kelompok fungi bersel satu yang memiliki ukuran mikroskopik.

Beberapa

genera

ada

yang

membentuk

miselium

dengan

percabangan dan beberapa lainnya tidak membentuk percabangan permanen. Khamir ada yang hidup secara saprofit dan adapula yang parasit. Khamir berkembang biak dengan cara seksual dan aseksual. Perkembangbiakkan khamir secara seksual (generatif) dilakukan dengan cara konjugasi. Terdapat tiga macam konjugasi,

yaitu

konjugasi

isogami,

konjugasi

heterogami,

dan

konjugasi

askospora.

Perkembangbiakan khamir secara aseksual (vegetatif) dilakukan

dengan cara pembentukan tunas, pembelahan sel, dan pembentukan spora aseksual. Sel khamir mempunyai ukuran sel yang bervariasi, yakni memiliki panjang sekitar 1-5 mikron sampai 20-25 mikron dan lebar 1-10 mikron. Bentuk sel khamir pun beranekaragam (Pelczar, 2005). Khamir memiliki bentuk bukat oval seperti jeruk, silindris, segitiga, memanjang seperti miselium sejati, ogival dengan bentuk bulat panjang dan ujung runcing di salah satu ujungnya, dan segitiga melengkung. Bagian struktur khamir terdiri atas dinding sel, sitoplasma, vakuola, butir lemak, albumin, dan pati. Selsel khamir mempunyai lapisab dinding luar yang terdiri atas polisakarida kompleks dan di bawahnya terdapat membran sel. Sitoplasma mengandung suatu inti yang bebas (discreate nucleus) dan bagian yang berisi sejumlah besar cairan disebut vakuola. Pewarnaan khusus akan membantu melihat intinya. Khamir tidak bergerak karena tidak mempunyai struktur flagella atau alat gerak lainnya (Colome, 2001). Saccharomyces

cerevisiae

adalah

salah satu contoh khamir yang

digunakan dalam pengamatan morfologi khamir. Pengamatan morfologi dapat dilakukan secara makroskopis dan mikroskopis. Pengamatan makroskopis hanya dapat dilakukan jika khamir telah diinokulasi dalan medium. Kenampakan khamir pada medium meliputi tekstur koloni, warna koloni, bentuk atau margin koloni, elevasi, dan permukaan koloni. Pengamatan secara mikroskopis dilakukan dengan cara membuat preparat biakan di atas kaca objek, kemudian dilihat karakternya

124

pada mikroskop. Karakteristik isolat khamir yang diamati secara mikroskopis menunjukan reproduksi generatif, vegetatif, dan bentuk selnha. Saccharomyces cerevisiae memiliki tipe reproduksi vegetatif dengan multi-lateral budding, selselnya berbentuk globose, ellips atau silindris, bulat dan oval. Koloni spesies ini sering kali memiliki tekstur kental dan tidak memiliki pigmen karotenoid, serta memiliki bentuk bundar dengan elevasi cembung. Karakteristik fisiologi yang terkenal dari jenis khamir ini adalah kemampuannya melakukan fermentasi anaerob atau semi anaerob pada sutu atau lebih jenis gula untuk menghasilkan etanol dan CO 2 (Ashliha, 2014). Pengamatan morfologi sel khamir secara mikroskopis dapat dilakukan dengan

cara

membuat

preparat

biakan

di atas

kaca benda,

kemudian

mengamatinya dengan mikroskop. Hal ini dapat dilakukan, namun terkadang sel khamir yang nampak pada mikroskop sulit dibedakan antara yang satu dengan yang lain. Pengecatan sel adalah langkah untuk dapat membuat sel yang satu kontras dengan yang lain. Pengecatan sel yang ditujukan untuk mengamati morfologi sel khamir dapat dilakukan dengan pengecatan sederhana menggunakan methylene blue. Preparat khamir terlebih dahulu diberi cat methylene blue 0.1% untuk membedakan antara sel yang mati dan sel yang masih hidup. Sel yang masih hidup akan berwarba trabsparab karena membran selnya masih memiliki sifat selektif permeabel sehingga cat tidak dapat masuk. Adanya kemampuan selektif permeabel tersebut juga berkaitan dengan masih adanya kandungan enzim di dalam sel khamir sehingga sifat tersebut masih berfungsi. Sel yang mati berwarna biru karena membran selnya sudah tidak memiliki sifat selektif permeabel dan sudah tidak ada kendungan enzim di dalamnya. Hal ini mengakibatkan cat dapat masuk dan menyebabkan sel berwarba biru (Soetarto, 2008).

125

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 27 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Alat dan Bahan Praktikum a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah mikroskop binokuler, gelas benda, gelas penutup, lampu bunsen, vortex, jarum ose, tabung reaksi, dan tisu. b. Bahan-bahan Praktikum Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah alkohol, methylene blue, aquades, biakan khamir A fresh dan biakan khamir B 24 jam. Prosedur Kerja Disiapkan alat dan bahan

Dibersihkan gelas benda dengan alcohol

Diambil biakan murni dengan jarum ose

Disebarkan pada gelas benda

126

Ditetesi 1 tetes methylene blue

Difiksasi

Dibilas dengan aquades

Ditutup dengan gelas tutup

Diamati dibawah mikroskop

132

HASIL PENGAMATAN

Tabel 7.1 Hasil Pengamatan Morfologi Khamir dan Spora Khamir Klp 11

Biakan

Gambar

Literatur

Khamir A fresh

Keterangan Mati = 173 Hidup = 2 %kematian = ∑𝑚𝑎𝑡𝑖 ∑ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝

= Perbesaran: 40x/0.65

12

Khamir 24 jam

Perbesaran: 40x/0.65 Sumber : uipi.com.br

B

173 2

𝑥 100% 𝑥 100%

= 98,6 % % kehidupan = 100% - 98,6% = 1,14 % Mati = 534 Hidup = 9 %kematian = ∑𝑚𝑎𝑡𝑖 ∑ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝

𝑥 100%

534

Perbesaran: 40x/0.65 13

Perbesaran: 40x/0.65 Sumber : uipi.com.br

Khamir A fresh

= 9 𝑥 100% = 98,34 % % kehidupan = 100% -98,34% = 1,66 %

Mati = 200 Hidup = 45 %kematian = ∑𝑚𝑎𝑡𝑖 ∑ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝

𝑥 100%

200

Perbesaran 40x/0.65

Perbesaran : 40x/0.65 Sumber : uipi.com.br

= 45 𝑥 100% = 0,816 % %kehidupan = 100% - 0,816%=0,991%

133

14

Khamir 24 jam

B

Mati = 471 Hidup = 61 %kematian = ∑𝑚𝑎𝑡𝑖 𝑥 100% ∑ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝 471

Perbesaran: 40x/0.65 15

Perbesaran : 40x/0.65 Sumber : uipi.com.br

Khamir A fresh

= 61 𝑥 100% = 11,47 % %kehidupan = 100% - 11.47% = 88,53% 1. Mati = 245 2. Hidup = 22 %kematian = ∑𝑚𝑎𝑡𝑖 ∑ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝

𝑥 100%

245

= 22 𝑥 100%

Perbesaran: 40x/0.65

Perbesaran: 40x/0.65 Sumber : uipi.com.br

= 91,76 % %kehidupan = 100% - 91,76% = 8,24%

134

PEMBAHASAN

Khamir merupakan mikroorganisme bersel tunggal yang berukuran 5 sampai 20 mikron. Khamir biasanya memiliki ukuran 5 sampai 10 kali lebih besar daripada bakteri. Terdapat berbagai macam bentuk Khamir (ragi) tergantung cara pembelahan selnya. Sel khamir dapat berbentuk bulat, batang, dan lonjong. Sel khamir sering dijumpai secara tunggal, akan tetapi apabila anak-anak sel yang terbentuk tidak terlepas dari induknya setelah pembelahan, maka akan terjadi bentuk pseudemissellium. Khamir tidak dapat bergerak, karena tidak memiliki flagel. Beberapa jenis khamir membentuk kapsul diluar (Buchle, 2008). Morfologi khamir merupakan ilmu yang mempelajari tentang bentuk dan pola pertumbuhan pada khamir. Pentingnya pengamatan morfologi khamir agar dapat mengetahui bentuk, ukuran, pola pertunasan, ada tidanya pseudohifa, hifa sejati dan reproduksi. Setiap khamir memiliki nama, genus yang berbeda tergantung

pada

fase

reproduksinya.

Pengamatan

morfologi khamir dapat

dilakukan dengan pengecatan sederhana. Khamir berkembang biak dengan cara aseksual dan seksual. Secara aseksual yaitu dengan cara bertunas dan fisi (membelah dua setelah mitosis). Sedangkan secara seksual yaitu fusi (penggabungan) dua sel dengan mating type (tipe perkawainan yang berbeda). Zigot hasil fusi akan membentuk 4 hingga 8 spora yang kemudian menyebar. Prosedur kerja pada praktikum kali ini diawali dengan dibersihkannya gelas benda, dan sterilisasi jarum ose dengan alkohol dan api, hal ini bertujuan untuk menghindari adanya kontaminasi dari mikroba lain, kemudain diambil biakan dengan jarum ose dan disebar pada gelas benda. Gelas benda berfungsi untuk meletakkan objek yang akan diamati. Kemudian ditambahkan methylene blue. Penggunaan methylene blueuntuk membedakan sel yang hidup dan sel yang mati dengan membedakan warna. Untuk sel khamir yang masih hidup akan berwarna transparant, sedangkan khamir yang sudah mati akan berwarna biru. Setelah itu dilakukan fiksasi. Fiksasi berfungsi untuk menonaktifkan enzim lgKC sehingga bakteri tidak mengalami lisis dan berubah bentuk pada saat diamati.

135

Selanjutnya dibilas dengan aquades untuk melunturkan methylene blueagar mudah diamati, kemudian ditutup dengan gelas penutup. Gelas penutup berfungsi untuk merekatkan khamir yang akan diamati agar tidak terkena kontaminasi. Kemudian diamati dengan menggunakan mikroskop. Mikroskop berfungsi untuk mengamati bentuk dan struktur dari khamir. Kultur atau biakan yang digunakan pada praktikum ini adalah khamir A dan khamir B. Khamir A merupakan khamir segar, dan khamir B merupakan khamir yang berumur 24 jam. Khamir berukuran 5 sampai 20 mikron dengan bentuk bola, silindris, lengkung, dan lain-lain.sumber khamir terdapat pada tumbuhan, bunga-bunga, buah, tanah, air, dan sampah. Khamir dapat tumbuh dalam media cair dan padat dengan melakukan pembelahan sel. Berdasarkan hasil pengamatan dan perhitungan sel khamir, presentase jumlah sel yang hidup dengan sel khamir yang mati diperoleh hasil yang berbeda untuk setiap kultur yang digunakan. Pada kultur A, dilakukan pengamatan oleh kelompok 11, 13, dan 15. Untuk kelompok 11 diperoleh hasil sebanyak 173 sel khamir yang mati dan 2 sel khamir yang hidup, dengan presentase kematian sebanyak 98,8% dan presentase kehidupan hanya 1,14%. Untuk kelompok 13 diperoleh hasil sebanyak 200 sel khamir yang mati dan 45 sel khamir yang hidup, dengan presentase kematian sebanyak 81,63% dan presentase kehidupan hanya 9,91%. Untuk kelompok 15 diperoleh hasil sebanyak 245 sel khamir yang mati dan sebanyak 22 sel khamir yang hidup, dengan presentase kematian 91,76% dan presentase kehidupan sebanyak 8,24%. Diketahui bahwa kultur A merupakan khamir segar. Kultur yang digunakan selain kultur A, yaitu kultur B. Kultur B merupakan khamir yang berumur 24 jam. Kultur ini dilakukan pengamatan oleh kelompok 12 dan 14. Untuk kelompok 12 diperoleh hasil, sebanyak 534 sel khamir yang mati dan sebanyak 9 sel yang hidup. Dengan presentase kematian sebanyak 98,34 % dan presentase kehidupan sebanyak 1,66%. Untuk kelompok 14 diperoleh hasil, sebanyak 571 sel khamir yang mati dan sebanyak 61 sel khamir yang hidup. Dengan presentase kematian sebanyak 90,33% dan presentase kehidupan 9,65%. Hal ini sesuai dengan (Waluyo, 2007) yang menyatakan bahwa

136

waktu penyimpanan yang lebih pendek atau sebentar , maka khamir yang dihasilkan pun masih sedikit atau tidak terlalu banyak. Pemanfaatan khamir dalam bidang pangan yaitu, dalam susu dan produk olahan lainnya. Daging dan produk olahannya juga dapat memanfaatkan khamir. Pada produk susu dan olahannya, digunakannya pada susu segar dengan jenis khamir Rhodofolura sp., Cryptococcus flavus, dan Candida fermata. Contoh olahannya yaitu, mentega, yoghurt, dan keju. Sedangkan pada olahan daging yaitu sosis dan ham dengan khamir Debaryomyces hansenn, Candida sp., dan Rhodulorulla sp. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan khamir yaitu oksigen, kadar air, suhu, Ph, dan medium pertumbuhan khamir. Khamir (yeast) dapat tumbuh apabila terdapat cukup oksigen, tetapi beberapa spesies dapat tumbuh pada kondisi tanpa oksigen. Yeast dapat dimatikan pada suhu 60o C selama 15 menit. Sehingga suhu dapat menjadi salah satu faktor pertumbuhan khamir (yeast). Khamir (yeast) dapat tumbuh pada Ph 2-8. Medium pertumbuhan yang kaya nutrisi akan meningkatkan laju pertumbuhan dari khamir.

137

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat ditarik beberapa kesimpulan sebagai berikut. 1.

Khamir merupakan mikroorganisme bersel tunggal dengan ukuran 5 sampai 20 mikron dan terdapat dalam beberapa bentuk

2.

Morfologi khamir merupakan ilmu yang mempelajari tentang bentuk dan pola pertumbuhan pada khamir. Pengamatan morfologi khamir penting dilakukan untuk mengetahui bentuk dan ukuran dari khamir.

3.

Pengecatan sederhana dilakukan dengan methylene blue bertujuan untuk membedakan sel khamir hidup dengan sel khamir telah mati

4.

Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan khamir antara lain,

oksigen, kadar

air, suhu, Ph, dan medium pertumbuhan. 5.

Dalam bidang pangan khamir dimanfaatkan dalam pengolahan mentega, yoghurt, keju, sosis, dan ham.

138

ACARA VIII PENGECATAN DAN MORFOLOGI BAKTERI

139

ACARA VIII PENGECATAN DAN MORFOLOGI BAKTERI

PENDAHULUAN

Latar Belakang Mikroorganisme yang ada di alam mempunyai morfologi, tekstur, dan sifatsifatnya yang khas, begittu pula dengan bakteri. Bakteri merupakan organisme prokariotik, dan bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Ukuran bakteri pada umumya sangatlah kecil dan bentuk tubuh bakteri baru dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop. Salah satu cara untuk mengamati bentuk sel sehingga mudah untuk diidentifikasi adalah dengan menggunakan metode pengecatan atau pewarnaan. Bakteri lebih sering diamati dalam olesan terwarnai dengan suatu zat pewarna kimia agar mudah diamati atau dilihat dengan jelas dalam hal ukuran, bentuk, susuanan, dan keadaan struktur internal (Hafran, 2011). Untuk

mengidentifikasi biakan murni bakteri hasil isolasi, mula-mula

diamati morfologi secara mikroskopik melalui pengecatan dan pewarnaan. Salah satunya adalah dengan pewarnaan gram. Pewarnaan gram adalah salah satu prosedur yang paling banyak digunakan untuk mencirikan bakteri. Pewarnaan gram dapat diketahui morfologi sel antara lain sifat gram, bentuk sel, dan penataan sel. Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu metode untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Pengelompokkan ini didasarkan pada percobaan sifat kimia dan fisika dinding sel bakteri. Selain menggunakan pewarnaan atau pengecatan, identifikasi juga dapat dilakukan dengan melihat morfologi koloni dan uji biokimia bakteri. Morfologi koloni bakteri meliputi bentuk, ukuran, tekstur, warna, koloni, dan lain-lain. Uji biokimia dilakukan untuk memastikan jenis atau spesies bakteri. Selain itu, dapat diketahui pula teknik pewarnaan mikroorganisme baik dengan cara pengecatan sederhana maupun pengecatan gram. Oleh sebab itu, praktikum ini penting

140

dilakukan untuk mengetahui cara pengecatan bakteri, morfologi bakteri, dan perbedaan bakteri gram negatif dengan bakteri gram positif. Tujuan Praktikum Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui cara pengecatan gram, mengamati morfologi bakteri, dan perbedaan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif, serta sifat bakteri terhadap pengecatan gram.

141

TINJAUAN PUSTAKA

Cara pengecatan bakteri dapat dibedakan mennjadi tiga, yaitu pengecatan sederhana,

pengecatan

diferensial,

dan

pengecatan

struktural.

Pengecatan

sederhana dapat mewarnai sel atau latar belakangnya sehingga memungkinkan untuk mengamati bentuk sel batang lurus, bengkok, atau bulat, dan apakah susuannya berpasangan atua kluster. Namun, pengecatan sederhana ini tidak dapat digunakan untuk membedakan antara berbagai tipe sel bentuk batang atau bulat. Termasuk dalam pengecatan sederhana adalah pengecatan basa dan pengecatan asam. Pengectaan diferensial mrnggunakan kombinasi pewarna yang berkaitan dengan perbedaan kimia antar sel. Termasuk poengecatan diferensial adalah pengecatan gram dan pengecatan acid-fast. Pengecatan struktural hanya mewarnai satu bagian dari sel sehingga dapat digunakan untuk membedakannya dengan bagian

lain

dari

mikriba.

Termasuk

dalam oengecatan

struktural adalah

pengecatan endospora, pengecatan flagelaa, dan pengevatan kapsul (Lestari L. E., 2018). Salah satu cara pewarnaan yang sering digunakan untuk mengidentifikasi bakteri adalah pewarnaan gram. Berdasarkan pewarnaan gram, bakteri ddibagi menjadi dua golongan tergantung dari reaksi dinding sel terhadap tinta safranin atau kristal violet. Bakteri yang tetap berwarna ungu dengan pewarnaan oleh kristal violet disebut bakteri gram positif, misalnya Clostridium perfringens, Staphylococcus aereus. Bakteri yang warna ungunya hilang jika dibilas dengan alkohol, tetapi tetap berwarna merah muda karena menahan warna merah safranin disebut

bakteri

gram

negatif,

misalnya

Escherichia

coli,

Pseudomonas

oeruginosa. Beberapa bakteri tidak terwarnai dengan pewarnaan gram, misalnya Mycobacterium sp. karena dinding selnya mengandung banyak lipid, sehingga digunakan pewarnaan tahan asam untuk mengidentifikasinya (James, 2006). Morfologi sel bakteri meliputi bentuk dan ukuran sel bakteri. Berdasarkan bentuk morfologinya, maka bakteri dapat dibedakan menjadi empat golongan yaitu bentuk kokus atau bulat, basil (Bacillus) atau batang, koma (vibrio), dan spiral. Sel-sel individu bakteri dapat berbentuk seperti elips, bola, batang

142

(silindris) atau spiral (heliks). Masing-masing ciri ini penting dalam mencirikan morfologi suatu spesies. Beberapa bakteri memiliki bentuk yang berbeda dari bentuk umumnya. Bakteri berukuran kecil sehingga memerlukan mikroskop untuk dapat mengamatinya. Ukuran sel bakteri berbeda-beda tergantung bentuk, umur, keadaan sekeliling, dan jenisnya. Dimensi sel pada umumnya dinyatakan dalam suatu mikrometer (µm), yaitu suatu satuan ukuran yang besarnya 1/1000 mm. Umumnya bakteri mempunyai ukuran panjang 1,0-5,0 mikron dan 0,2-1,5 mikron. Bakteri yang paling umum dipelajari dalam praktikum mikrobiologi dasar yaitu berukuran kira-kira 0,5-1,0 x 2,0-5,0 Nm(Lestari P. d., 2017). Bakteri gram positif berwarna ungu disebabkan kompleks zat warna kristal violet-yodium tetap dipertahankan meskipun diberi larutan pemucat, sedangkan bakteri gram negatif berwarna merah karena kompleks tersebut larut sewaktu pemberian larutan pemucat dan kemudian mengambil zat warna kedua yang berwarna merah. Perbedaan hasil dalam pewarnaan ini disebabkan perbedaan struktur kedua kelompok bakteri tersebut. Dinding sel bakteri gram positif sebagian besar terdiri dari peptidoglikan, sedangkan dinding sel bakteri gram negatif mempunyai kandungan lipida yang tinggi dibandingkan dinding sel gram positif. Lipida ini akan larut dalam alkohol dan aseton yang digunakan sebagai larutan pemucat, sehingga pori-pori dinding sel membesar dan meningkatkan daya larut kompleks kristal violet-yodium pada dinding sel bakteri gram negatif (Hidayat, 2012).

143

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 27 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Alat dan Bahan Praktikum a. Alat-alatPraktikum Adapun alat-alat yang digunakan pada praktikum ini adalah gelas benda, gelas penutup, jarum Ose, lampu bunsen, rak tabung reaksi, tabung reaksi, vortex, mikroskop binokuler, danpipet tetes. b. Bahan-bahanPraktikum Adapunbahan-bahan

yang

diperlukanpadapraktikuminiadalah

tissue,

crystal violet (gram A), aquades, larutan Mordan (gram B), alkohol 70% (gram C), safranin (gram D), bakteri Bacillus Cereus,bakteri Escherichia Coli, bakteri asam laktat, dan bakteri Staphylococcus. Prosedur Kerja Disiapkan alat dan bahan

Dihomogenkan dengan vortex

Diambil biakan dengan jarum ose dan dioleskan keatas gelas benda

Difiksasi

144

Ditambahkan larutan crystal violet (gram A)

Difiksasi 2 menit

Dibilas dengan aquades

Difiksasi

Ditambahkan larutan mordan (gram B)

Difiksasi 2 menit

Dibilas dengan aquades

Difiksasi

145

Ditambahkan alkkohol 70 % (gram C)

Difiksasi 5 detik

Dibilas dengan aquades

Difiksasi

Ditambahkan larutan safranin (gram D)

Difiksasi 2 menit

Dibilas dengan aquades

Ditutup dengan gelas penutup

Diamati dengan mikroskop

Digambar bentuk morfologi bakteri

146

HASIL PENGAMATAN

Hasil Pengamatan Tabel 8.1 Hasil Pengamatan Pengecatan dan Morfologi Bakteri Gram Klp

Nama Bakteri

11

Escherichia coli

Gambar

Literatur

Keterangan

- Warna: Merah - Bentuk: bulat (coccus) - Jenis bakteri : Bakteri gram negatif Perbesaran : 40x/0,65

Perbesaran : 40x/0,65 Sumber : ritapoltekkes.blogspot. com

12

Bakteri Asam Laktat (BAL)

Perbesaran : 40x/0,65

13

Staphylococ cus

Perbesaran : 40x/0,65 Sumber : undip.ac.id

- Warna: Ungu - Bentuk: Batang atau coccus, bergerombol -Jenis bakteri: Bakteri gram positif

- Warna: merah - Bentuk: coccus - Jenis bakteri: Bakteri gram negatif

147

Perbesaran : 40x/0,65

14

Bacillus cereus

- Warna: Ungu - Bentuk: Batang - Jenis bakteri: Bakteri gram positif

Perbesaran : 40x/0,65 15

Perbesaran : 40x/0,65 Sumber : ratihyadani.com

Perbesaran : 40x/0,65 Sumber : www.food navigator.com

Escherichia coli

- Warna: merah - Bentuk: Bulat (coccus) - Jenis bakteri: Bakteri gram negatif

Perbesaran : 40x/0,65

Perbesaran : 40x/0,65 Sumber : ritapoltekkes.blogspot. com

148

PEMBAHASAN

Bakteri merupakan organisme yang berukuran sangat kecil. Bakteri bersifat tembus cahaya atau tidak mampu mengabsorbsi atau membiaskan cahaya. Hal ini menyebabkan bakteri sukar atau tidak tampak jelas jika dilihat menggunakan mikroskop. Pengamatan morfologi bakteri, perlu ditambahkan zat warna. Zat warna dapat mengabsorbsi atau membiaskan sehingga kontras mikroorganisme dengan sekelilingnya dapat ditingkatkan. Penggunaan zat warna dapat memungkinkan pengamatan struktur sel, seperti spora, flagella, dan lain sebagainya (Irianto, 2007) Bakteri dapat dikelompokkan menjadi 2 kelompokyaitu, bakteri gram negatif dan

bakteri gram positif.

Bakteri gram negatif memiliki dinding

peptidoglikan yang tipis. Bakteri gram negatif memiliki tiga lapisan pelindung, lapisan terluarnya yaitu lipoposakarida (lipid), contoh bakteri gram negatif yaitu Escherichia coli, Staphylococcus, dan lain sebagainya. Sedangkan bakteri gram positif memiliki dinding peptidoglikan yang tebal. Bakteri ini memiliki dinding sel yang mampu menyerap warna violet. Contoh bakteri gram positif antara lain, bakteri asam laktat dan Bacillus cereus. Pengecatan gram merupakan salah satu teknik yang dapat digunakan untuk pewarnaan guna melakukan identifikasi bakteri. Fungsi dari pengecatan gram, untuk memberikan warna pada sel atau bagian-bagian struktur sel, serta membedakan jenis mikroba atau bakteri. Pengecatan gram dapat menunjukkan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Bakteri gram negatif akan memberikan warna merah. Sedangkan bakteri gram positif akan memberikan warna ungu. Pengecatan gram pada bakteri dipengaruhi faktor-faktor, seperti fiksasi, peluntur warna, substrat, dan penggunaan zat warna penutup. Pengecatan gram pada praktikum ini, menggunakan beberapa zat pewarna. Zat pewarna yang digunakan, anatara lain Crystal violet (gram A), larutan mordan (gram B), alkohol 70% (gram C), dan larutan safranin (gram D). Crystal violet

149

(gram A) termasuk cat primer yang akan memberikan warna ungu pada bakteri. Crystal violet bersifat basa sehingga mampu berikatan dengan sel mikroorganisme yang bersifat asam. Larutan mordan (gram B), larutan ini berfungsi untuk mengfiksasi cat primer yang diserap oleh mikroorganisme. Pemberian larutan mordan (gram B) akan mengakibatkan pengikatan warna oleh bakteri menjadi lebih baik atau lebih kuat. Alkohol (gram C) memiliki sifat transparant atau tidak memiliki warna. Alkohol berfungsi untuk membilas atau melunturkan kelebihan zat

warna

pada

bakteri.

Pemberian

alkohol

akan

mengakibatkan

dua

kemungkinan, yaitu mikroorganisme tetap berwarna ungu atau bakteri menjadi tidak berwarna. Larutan safranin (gram D) merupakan pewarna tandingan atau pewarna sekunder. Safranin berfungsi untuk mewarnai kembali sel-sel yang telah kehilangan pewarna utama setelah perlakuan dengan alkohol. Akibat pemberian gram D akan terjadi dua kemungkinan, anatara lain bakteri gram positif akan tetap berwarna ungu karena telah jenuh mengikat cat gram A, atau akan berwarna merah karena cat sebelumnya telah ditentukan oleh cat gram C, sehingga mampu mengikat cat gram D, kemungkinan kedua menunjukkan bahwa bakteri tersebut termasuk bakteri gram negatif. Praktikum kali ini dilakukan oleh lima kelompok, yaitu kelompok 11, 12, 13, 14, dan 15 dengan menggunakan kultur yang berbeda. Untuk kelompok 11 dan 15 menggunakan kultur Escherichia coli. Hasil yang diperoleh menunjukkan warna kultur berwarna merah, dan berbentuk bulat (coccus). Hal ini menunjukkan bahwa

Escherichia

coli

termasuk

bakteri gram negatif.

Kelompok

12

menggunakan kultur Bakteri Asam Laktat, hasil yang diperoleh menunjukkan warna ungu dan berbentuk batang, namun terdapat pula yang bentuknya coccus. Hal ini menunjukkan bahwa Bakteri Asam Laktat termasuk bakteri gram positif. Kelompok

13,

menggunakan

kultur

Staphylococcus,

hasil yang diperoleh

menunjukkan warna merah dan berbentuk coccus. Hal ini menunjukkan bahwa Staphylococcus termasuk bakteri gram negatif. Sedangkan untuk kelompok 14, menggunakan Bacillus cereus,hasil yang diperoleh menunjukkan warna ungu, dan berbentuk batang. Hal ini menunjukkan bahwa Bacillus cereus termasuk bakteri gram positif.

150

Hasil pengamatan yang diperoleh, sesuai dengan pendapat (Jimmo, 2008) yang menyatakan bahwa Escherichia coli dan Staphylococcus merupakan bakteri patogen dan bersifat gram negatif. Bakteri gram negatif memiliki kandungan lipid yang tinggi, serta peptidoglikan yang tipis. Sedangkan bakteri asam laktat dan Bacillus cereus merupakan bakteri patogen yang bersifat gram positif. Bakteri gram positif mengandung peptidoglikan yang tebal, serta membentuk rantai. Bakteri gram positif tetap berwarna ungu karena mampu mempertahankan kompleks zat warna crystal violet meskipun diberi larutan pemucat (alkohol). Sedangkan bakteri gram negatif berwarna merah, hal ini diakibatkan oleh kompleks zat pewarna larut pada saat pemberian alkohol, sehingga mengambil warna merah dari safranin. Faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan pengecatan gram antara lain, proses fiksasi, pelunturan cat warna, substrat, intensifikasi pewarna, dan penggunaan zat penutup. Fiksasi berguna untuk sel bakteri pada gelas benda, mencegah otolisis sel, serta mengubah afisitas yang dapat dilakukan secara fisik dan kimia. Pelunturan zat yang digunakan akan menghasilkan kontras yang lebih baik pada bayangan mikroskop. Substrat merupakan zat warna asam atau basa yang dapat bereaksi dengan senyawa-senyawa tertentu. Intensifikasi warna dilakukan dengan penambahan larutan Mordan. Larutan Mordan yaitu zat kimia yang dapat mengakibatkan sel-sel bakteri dapat diwarnai lebih intensif karena mengikat zat warna pada jaringan sel. Terakhir yaitu zat warna penutup, zat ini diberikan pada akhir pewarnaan yang bertujuan untuk memberikan kontras pada sel-sel yang tidak dapat menyerap zat warna utama.

151

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat di simpulkan sebagai berikut : 1.

Bakteri merupakan organisme yang berukuran sangat kecil dan bersifat tembus cahaya (transparant). Bakteri tidak mampu mengabsorbsi atau membiaskan cahaya.

2.

Bakteri dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Bakteri gram positif memiliki dinding peptidoglikan yang tebal, sedangkan bakteri gram negatif memiliki dinding peptidoglikan yang tipis, namun mengandung lipid yang tinggi.

3.

Pengecatan gram berfungsi untuk memberikan warna pada sel atau bagianbagian struktur sel untuk mempermudah identifikasi.

4.

Hasil pengamatan menunjukan bahwa Escherichia coli dan Staphylococcus termasuk bakteri gram negatif, sedangkan Bacillus cereus dan Bakteri Asam Laktat termasuk bakteri gram positif.

5.

Faktor-faktor fiksasi,

yang

pelunturan

mempengaruhikeberhasilan cat

warna,

substrat,

pengecatanantaralainproses

intensifikasi pewarnaan

dan

penggunaan zat penutup.

152

ACARA IX PENGARUH FAKTOR LINGKUNGAN TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI

153

ACARA IX PENGARUH FAKTOR LINGKUNGAN TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI PENDAHULUAN

Latar Belakang Makhluk hidup yang memiliki ukuran tubuh yang mikroskopik yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang dinamakan mikroorganisme.Mikroorganisme memerlukan syarat-syarat tumbuh untuk mendukung pertumbuhannya.Salah satu makhluk hidup mikroorganisme ialah bakteri yang memiliki ciri tersendiri dari makhluk hidup mikroorganisme lainnya.Bakteri mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas.Beberapa sifat khas yang dimiliki oleh bakteri ialah mampu

berthan

pada

lingkungan

yang

ekstrim dan

memiliki mekanisme

perlindungan dari lingkungan yang tidak sesuai. Faktor yang mempengaruhi kehidupan bakteri di dalam ekosistem terbagi atas dua, yakni abiotik dan biotik.Faktor abiotik meliputi suhu, desinfektan, logam berat, tekanan osmosis, pH dan sinar gelombang pendek, sedangkan faktor biotik meliputi predasi, kompetisi dan interaksi dengan organisme lainnya.Setiap faktor memiliki mekanime masing-masing yang berpengaruh terhadap keberlangsungan pertumbuhan suatu jenis mikrobia.Faktor-faktor tersebut penting diperhatikan sehingga pertumbuhan mikrobia dapat dikendalikan, terutama yang bersifat patogen dan menimbulkan kerugian, serta dapat memacu pertumbuhan mikrobia yang bersifat menguntungkan bagi manusia atau organisme lainnya (Soemarno, 2000). Bakteri umumnya berciri uniseluler (bersel tunggal), prokariot, tidak mempunyai

klorofil,

serta

berukuran

mikroskopik

(sangat

kecil).Bakteri

merupakan suatu organisme yang jumlahnya paling banyak dan tersebar luas dibandingkan dengan organisme lainnya di bumi. Bakteri sebagai makhluk hidup

154

akan berhubungan dengan lingkungannya, baik sesama makhluk hidup maupun dengan lingkungn abiotiknya. Lingkungan bakteri tersebut akan menentukan sifatsifat dari bakteri, seperti bakteri yang mampu pada kondisi suhu tinggi, rendaah, mupun suhu diantara keduanya. Selain itu, pengaruh yang dapat mempengaruhi kehidupan

bakteri

ialah

zat

penghambat

yang

dimiliki

oleh

makhluk

mikroorganisme lainnya yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Oleh karena itu, perlu dilakukan praktikum mengenai pengaruh faktor lingkungan terhadap pertumbuhan bakteri untuk mempelajari faktor lingkungan apa saja yang dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri. Tujuan Praktikum Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui pengaruh faktor lingkungan terhadap pertumbuhan bakteri.

155

TINJAUAN PUSTAKA

Mempelajari perilaku mikroorganisme yang ada dilingkungan tempat kita dapat dilakukan dengan cara mempelajari bagaimana respons mikroorganisme terhadap lingkungannya yang menjadi unsur penting dalam aspek mikrobiologi. Mikroba merespons kondisi lingkungan dalam aktivitasnya. Spesies yang berbeda akan

tumbuh

optimum

pada

keadaan

tertentu.

Dalam kondisi optimum

mikroorganisme akan tumbuh dan berkembang secara maksimum. Jika terjadi perubahan keadaan lingkungannya, maka akan terjadi perubahan dalam bentuk morfologi

dan

fisiologi

mikroba

tersebut.

Mikroorganisme

mempunyai

kemampuan yang besar untuk beradaptasi terhadap lingkungan barunya, sehingga mikroorganisme dapat bertahan hidup dalam keadaan lingkungan yang berbeda (Ahmad, 2017). Salah

satu

factor

lingkungan

yang

sangat

berpengaruh

terhadap

pertumbuhan bakteri ialah suhu atau temperature.Mikroba memiliki batas masingmasing terhadap suhu. Efek dari suhu yang ekstrim pada mikroba adalah enzim menjadi inaktif dan kemungkinan hal yang sama terjadi pada beberapa struktur sel lainnya. Terdapat tiga jenis mikroba berdasarkan kisaran suhu yaitu psikofilik dengan suhu minimum 50 C - 00 C dan maksimum 150 C – 200 C.Mikroba mesofilik dengan suhu minimum 100 C - 200 C, optimum 200 C - 400 C dan maksimum 400 C450 C.mikroba termofilik dengan suhu minimum 25 0 C - 450 C, optimum 450 C 500 C dan maksimum 500 C - 600 C (Moat, 2010). Kehidupan bakteri tidak hanya dipengaruhi oleh faktor-faktor lingkungan akan tetapi juga mempengaruhi keadaan lingkungan. Bakteri dapat menyebabkan pH dari medium tempat ia hidup, perubahan ini disebut perubahan secara kimia. Adapun faktor-faktor lingkungan dapat dibagi atas faktor-faktor biotik dan faktor abiotik.Dimana faktor biotik terdiri atas makhluk-makhluk hidup, yang mencakup adanya asosiasi atau kehidupan bersama antara mikroorganisme dapat dalam bentuk

simbiose,

sinergisme,

antibiose

dan

sitropisme.

Sedangkan faktor-

faktor abiotik terdiri atas faktor fisikal (misal: suhu, atmosfer gas, pH, tekanan

156

osmotik, kelembaban, sinar gelombang dan pengeringan) serta faktorkimia (misal: adanya senyawa toksik atau senyawa kimia lain) (Hadioetomo, 2000). Bacillus cereus adalah bakteri aerob gram positif yang mampu membentuk spora dan menyebabkan gastroentesis karena mampu membentuk kompleks diterotoksin.Selnya berukuran besar dibandingkan dengan bakteri batang lainnya serta tumbuh secara aerob fakultatif.Cara membedakan Bacillus cereus dengan Bacillus

lainnya

digunakan

ciri

morfologi

dan

biokimia.Bacillus

cereus

merupakan salah satu jenis bakteri yang masuk kedalam genus Bacillus. Bakteri ini mapu menghasilkan spora yang tahan terhadap panas dan tahan terhadap proses dehidrasi (Linda, 2014)

157

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 26 November 2018 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Alat dan Bahan Praktikum a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini antara lain lampu Bunsen, vortex, tabung reaksi, rak tabung reaksi, jarum ose, cawan petri, driglaski dan incubator. b. Bahan-bahan Praktikum Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini antara lain alcohol, tissue, media Nutrient Agar (NA) dan bakteri Escherichia coli. Prosedur Kerja Biakan

Divortex

Diambil 0,1 ml

Di inkubasi pada cawan petri dengan metode sebar (duplo)

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu dingin, ruang, 370 C, 450 C, dan500 C

Diamati perubahan mikroba

158

HASIL PENGAMATAN

Tabel 9.1 Hasil Pengamatan Pengaruh Suhu Terhadap Pertumbuhan Bakteri Biakan Kelompok Perlakuan U1 U2 11 Suhu dingin 12 Suhu ruang + +++ 13 370 C + +++ 14 450 C +++ +++ 0 15 50 C + + Keterangan : -

= Tidak ada

+

= Sedikit

++

= Banyak

+++

= Sangat banyak

159

PEMBAHASAN

Bakteri

merupakan

mikroorganisme

berukuran

mikroskopik.Bakteri

termasuk mikroorganisme uniseluler yang pada umunya tidak berklorofil, namun ada beberapa yang mampu melakukan aktifitas fotosintesis.Ukuran selbakteri sangat kecil, sehingga hanya dapat dilihat dengan bantuan mikroskop. Bakteri pada umunya memiliki ukuran sel 0,5 µm – 1.0 µm x 2.0 µm – 5.0 µm. Bentuk sel bakteri adalah bulat (coccus), batang (bacil) dan spiral. Bakteri berkembangbiak dengan cara aseksual yakni dengan cara pembelahan diri (Fardiaz, 2008). Bakteri sangat tergantung dengan factor lingkungan.Factor lingkungan yang

dapat

mempengaruhi

suhu.Berdasarkan suhunya,

pertumbuhan

bakteri

salah

satunya

yaitu

bakteri dibahi menjadi tiga jenis, yaitu bakteri

termofilik, bakteri mesofilik dan bakteri psikofilik.Bakteri termofilik merupakan bakteri yang dapat tumbuh dengan baik pada suhu 55 0 C - 650 C.bakteri ini memiliki sifat tahan terhadap suhu tingggi. Bakteri mesofilik merupakan bakteri ynag hidup baik diantara suhu 500 C - 600 C.Bakteri ini bersifat pathogen dan hidup didalam alat pencernaan.Bakteri psikofilik merupakan bakteri yang hidup baik diantara suhu 00 C - 300 C.Bakteri ini dapat hidup pada suhu optimum yaitu 150 C.Bakteri ini hidup (tumbuh) pada tempat dingin diantara daratan maupun lautan. Kondisi yang

efektif untuk

pertumbuhan bakteri yaitu pada suhu

optimum.Suhu optimum yaitu suhu yang mendekati suhu maksimum daripada suhu minimum.Dimana pada suhuminimum, bakteri kurang berkembang dengan baik.Berbeda dengan suhu optimum, suhu optimum merupakan suhu yang terbaik untuk perkembangan bakteri. Setiap bakteri memiliki suhu optimumberbeda-beda, tegantung jenis dan lingkungannya.Suhu optimum utnutk bakteri termofilik yaitu 550 C - 600 C, bakteri mesofilik yaitu 500 C - 600 C dan suhu optimum bakteri psikofilik adalah bekrisar 100 C – 150 C. Berdasarkan hasil pengamatan yang dilakukan oleh 5 kelompok dengan suhu yang berbeda-beda, maka didapatkan hasil pada klompok 11 uang menggunakan kulutr bakteri Escherichia coli yang ditumbuhkan pada media

160

Nutrient Agar (NA) serta pada suhu dingin (00 C) meunjjukkan tidak ada pertumbuhan bakteri, baik pada biakan U1 maupun U2. Kelompok 12 melakukan percobaan dengan menggunakan kultur yang sama pada suhu ruang diperoleh hasil yang menujukkan bahwa pada biakan U1 terdapat sedikit jumlah bakteri yang tumbuh, tetapi pada U2 terdapat sangat banyak jumlah bakteri yang tumbuh. Kelompok 13 dengan menggunakan kultur bakteri yang sama namun dengan suhu yang berbeda, yaitu 370 C didapatkan hasil pada U1 hanya sedikit bakteri yang tumbuh, sedangankan pada U2 terdapat sangat banyak jumlah bakteri yang utmbuh. Percobaan kelompok 14 dengan menggunakan kulturbakteri yang sama bada suhu 450 C didapatkan sangat banyak bakteri yang tumbuh pada U1 maupun U2. Kemudian, pada kelompok 15 dengan menggunakan kultur yang sama, namun suhu yang digunakan yaitu 50 0 C, didapatkan baik pada U1 maupun U2 hanya sedikit bakteri yang tumbuh. Beradasarkan hasil pengamatan yang diperoleh, jika dibandingkan dengan pernyataan (Arisi, 2015) bahwa temperature merupakan salah satu factor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri.Suhu optimum bagi bakteri Escherichia coli yaitu 370 C.Bakteri ini dapat tumbuh pada kisaran suhu 7 0 C sampai dengan 400 C.Hal ini sesuai dengan hasil pengamatan bahwa pada suhu dingin (0 0 C) tidak ditemukan bakteri yang tumbuh. Hal ini dikarenakan suhu dingin merupakan suhu minimum dari bakteri Escherichia coli .sedangkan pada suhu 500 C, terdapat sedikit bakteri yang tumbuh karena suhu yang digunakan telah melewati batas optimum. Pada suhu ruang sampai dengan suhu 45 0 C, ditemukan sangat banyak bakteri yang tumbuh.Hal ini dikarenakan pada kisaran suhu tersebut masuk dalam kategori suhu optimum bagi pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Bakteri banyak ditemukan dimana saja, hamper disemua tempat.Namun lingkungan hidup bakteri tersebut berbeda-beda.Perbedaan tersebut dikarenakan sifat dan jenis bakteri yang berbeda-beda. Sehingga bakteri akan mencari lingkungan yang sesuai dengannya atau sesuai dengan kebutuhan nutrisinya. Faktoe lingkungan sangat berpengaruh terhadap bakteri.Perumbahan

factor

pertumbuhan dan aktifitas

lingkungan dapat mengakibatkan perubahan sifat

morfologi dan fisiologi bakteri tersebut.

161

Faktor lingkungan dapat mepengaruhi pertumbuhan bakteri.Factor tersebut kemudian dibagi menjadi dua, yaitu factor biotik dan factor abiotic.Factor biotik merupakan

factor

yang

mencakup

adanya

kehidupan

bersama

antar

mikroba.Sedangkan factor abiotic adalah factor yang meliputi suhu, kelembaban, nilai pH dan lain sebagainya.Suhu termasuk salah satu factor pentingdalam kehidupan.Untuk pertumbuhan mikroba, dikenal tiga tingkatan suhu, yaitu suhu minimum,

suhu

pertumbuhannya

optimum dan harus

memiliki

suhu maksimum.Kelembaban mikroba untuk intensitas

yang

tinggi

atau

memerlukan

kelembaban yang tinggi. Sedangkan, keadaan pH yang baik untuk pertumbuhan bakteri adalah berkisar 6,5 – 7,0.

162

KESIMPULAN

Berdasarkan pada hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat disimpulkan sebagai berikut : 1. Bakteri merupakan mikroorganisme uniseluler yang berukuran sangat kecil, dan pada umumnya berbentuk bulat (coccus), batang (bacil) dan spiral. 2. Bakteri berdasarkan lingkungan hidupnya dibagi menjadi tiga jenis, yaitu bakteri termofilik, bakteri mesofilik dan bakteri psikofilik. 3. Kondisi efektif untuk pertumbuhan bakteri yaitu pada suhu optimum. Suhu optimum bakteri berkisar antara 70 C – 46 0 C. 4. Hasil yang diperoleh menunjukkan bakteri tidak dapat hidup pada suhu dingin, namun banyak pada suhu optimum dan sedikit yang tumbuh pada suhu maksimum. 5. Factor lingkungan terdiri dari dua kelompok, yaitu factor biotik (makhluk hidup) dan factor abiotic (suhu kelembaban, pH dan sebagainya).

163

DAFTAR PUSTAKA

Ahmad., 2017. Mikrobiologi. Kencana. Depok Alam., 2013. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. Gramedia. Jakarta. Amanati, L .,2014.Uji Bakteri Staphylococcus aureus dan Bacillus cereus Pada Mie Instan Yang Beredar di

Pasaran. Jurnal Teknologi Pengolahan.

3(2):74 Arisi, 2015.Biologi.Erlangga. Jakarta Ashliha, I. N., 2014. Karakteristik Khamir dari Pulau Poteran Madura. Jurnal Sains dan Seni Pomits , 3 (2), E49- E52. Bagod, S., 2008. Biologi Sains dalam Kehidipan. Yudhistira Ghalia Indonesia. Jakarta. Bibina., 2010. Bahan Ajar Mikrobiologi. UI Press. Jakarta. Colome, J. S., 2001. Laboratory Exercise in Microbiology.W.B. Sounders Company. Philadelphia Dwidjoseputro., 2010. Dasar-dasar Mikrobiologi.PT Djambatan. Jakarta Elfidasari, D. A., Saraswati, M., Nurfaidianti, G., Samiah, R., & Setiawati, V., 2011. Perbandingan Kualitas Es di Lingkungan Universitas Al - Azhar Indonesia dengan Restoran Fast Food di Daerah Senayan dengan Indikator Escherechia Coli Terlarut. Jurnal Al- Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi , 1 (1), 18-23. Endrawati, D., & Kusumaningtyas, E. , 2007. Beberapa Fungsi Rhizopus sp dalam Meningkatkan Nilai Nutrisi Bahan Pakan. Wartazoa , 27 (2), 81-88. Fardiaz., 2008. Mikrobiologi Pangan I . Gramedia. Jakarta Fitri,L., 2011. Isolasi dan Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri Kinolitik. Jurnal Ilmiah Pendidikan Biologi , 3(2):1-6. Ghoni., 2013. Mikrobiologi Dasar. Papar Sinar Sinanti. Jakarta Hadioetomo, A., 2000. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Yrama.Bogor Hafran, D., 2011. Mikrobiologi. Universitas Terbuka. Jakarta Handayani, N. I., Moenir, M., Setianingsih, N. I., & Malik, R. A., 2016. Isolasi

164

Bakteri Heterotrofik Anaerobik pada Pengolahan Air Limbah Industri Tekstil. Jurnal Riset Teknologi Pencegahan Pencemaran Industri , 7 (1), 37 -44. Hidayat, R. d., 2012. Identifikasi Streptococcus Equi dari Kuda yang Diduga Menderita Strangles. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , 17 (3), 199-203. Irianto., 2007. Mikrobiologi. Yrama Widya. Bandung Irianto, K. 2006. Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme. Yrama Widya.Bandung: Istianah, N., Wardani, A. K., & Heppy S, F. , 2018. Teknologi Bioproses. Universitas Brawijaya Press. Malang James, J. C. , 2006. Prinsip-Prinsip Sains untuk Keperawatan. Erlangga. Jakarta Jimmo., 2008 . Bakteri. UMM. Malang: Juwita, U., Haryani, Y., & Jose, C., 2014. Jumlah Bakteri Colifrom dan Deteksi Escherichia Coli pada Daging Ayam di Pekanbaru. JOM FMIPA , 1 (2), 48-55. Moat, L., 2010.Mikrobiologi Terapan. Erlangga. Jakarta Pelczar, M., 2008.Dasar-Dasar Mikrobiologi.UniversitasIndonesia. Jakarta Soemarno, S., 2000.Morfologi Bakteri. Gramedia. Jakatra Laila, K., 2009. Pengetahuan Alat Praktikum. UNS.Semarang: Lay, B. W. ,2008. Analisis Mikroba di Laboratorium. PT. Raja Grafindo Persada. Jakarta Lestari, L. E. , 2018 . Dasar-Dasar Mikrobiologi di Bidang Gizi dan Kesehatan. Gadjah Mada University Press.Yogyakarta Lestari, P. d., 2017 . Mikrobiologi Berbasis Inkuiry. Gunung Samudera. Malang Linda, A., 2014. Bakteri Staphylococcus aureus dan Bacillus cereus Pada Mie Instan Yang Beredar di Pasaran. Jurnal Teknologi Pengolahan , 74-86. Moat., 2010. Mikrobiologi Terapan. Erlangga. Jakarta Muniarti, A., 2002. Buku Pedoman Praktikum Mikrobiologi. IPB Press. Bogor Murwani, S., 2015. Dasar-dasar Mikrobiologi Veteriner. Universitas Brawijaya Press. Malang.: Muwardi, S.2015. Dasar- Dasar Mikrobiologi Veterener. Universitas Brawijaya

165

Press. Malang: Naimah, S., & Ermawati, R., 2006.. EFEK FOTOKATALIS NANO TiO2 TERHADAP

MEKANISME

ANTIMIKROBA

E

COLI

DAN

SALMONELA. Jurnal Riset Insustri , 113-120. Natsir, D., & Sartini.,2006. Mikrobiologi Farmasi Dasar. Universitas Hasanuddin Makassar. Makassar: Nazaruddin., 2016. Buku Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Umum. Universitas Mataram. Mataram: Pelczar, M. C. (2005). Dasar-dasar Mikrobiologi Edisi 1 . Universitas Indonesia Press. Jakarta Singleton, & Sainsbury., 2006. Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3rd Edition . John Willey and Sans Sussex. England Soemarno, S., 2000. Morfologi Bakteri. Gramedia. Jakarta Soetarto., 2008. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi untuk Mahasiswa Fakultas Biologi. UGM Press. Yogyakarta Sumanti., 2008. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pangan. Djambatan Jakarta. Suryani, Y., Andayaningsih, P., & Hermawan, I., 2012. Isolasi dan Identifikasi Jamur Selulotik pada Limbah Produksi Bioetanol dari Singkong yang Berpotensi dalam Pengolahan Limbah menjadi Pakan Domba. Jurnal ISTEK , 6 (1-2), 1-10. Syakbania, D. N., & Wahyuningsih, A. S. (2017). Program Keselamatan dan Kesehatan Kerja di Laboratorium Kimia. Jurnal HIGEIA , 1 (2), 49-57. Umi, B., 2008 Diktat Mikrobiologi Dasar I. Universitas Lmbung Mangkurut. Banjar Baru : Waluyo., 2007. Dasar - dasar Mikrobiologi Pangan. UI Press. Jakarta Waluyo, L. (2008). Teknik dan Metode Dasar dalam Mikrobiologi . UMM Press. Malang: Wibowo, A. P., & Andriyani, R. (2016). Perhitungan Jumlah Bakteri Escherichia Coli dengan Pengolahan Citra Melalui Metode Thresholding dan Counting Morphology. Jurnal Ilmiah Teknologi Informasi Terapan , 2 (3), 235 -243.

166