Determinacion De Antocianinas.docx

DETERMINACION DE ANTOCIANINAS MATERIALES        

Metanol grado HPLC Acetonitrilo grado HPLC Agua Ultrapura Ácido trifluoroacetico grado HPLC Ácido formico (> 99%) Ácido cítrico Cloruro de potasio Acetato de sodio

ESTANDARES        

cyandin-3-O-glucoside chloride (kuromanin chloride), cyandin3-O-rutinoside chloride (keracyanin chloride), pelargonidin-3-O-glucoside, cyanidin chloride, delphinidin chloride, malvidin chloride, malvidin-3-O-galactoside chloride, malvidin-3-O-glucoside chloride

EQUIPOS    

Licuadora Centrifugas Ependorf Tubos de 50 Ml.

METODO DE EXTRACCION    

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Colocar 25 g de muestra (fruto) en 100 mL de solvente (metanol acidificado). Las muestras son homogenizadas en una licuadora por 30 s. Trasladar la muestra homogenizada en tubos de centrifugación de 50 mL, para ser centrifugados por 5 minutos a 7197 RCF para remover la materia particulado. Sonicar por 60 minutos A 25℃, 59 kHz Transferir 1 mL del sobrenadante de la muestra a un tubo de centrifugación de 1.5 mL (Eppendorf) y centrifugar nuevamente a 20817 RCF para continuar eliminando las partículas. El sobrenadante fue pipeteado en viales de HPLC para su análisis, las muestras deben ser almacenadas a -20℃.

MEDICION EN HPLC

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Centrifugar el extracto de la muestra a 6000 rpm por 20 minutos, Diluir la muestra a razón de 1:5 (v/v) en ácido trifluoroacetico (TFA)al 0.5%

Condiciones cromatográficas Velocidad de flujo

: 1.5 mL/min.

Volumen de inyección

: 5 µL

Temperatura de la columna

: 35 ± 5℃

Detector

: 520 nm DAD.

Gradiente

: Solvente A: solución acuosa de metanol al 20% conteniendo 0.5% de TFA. Solvente B: metanol. Las condiciones isocráticas durante 30 minutos con 100% de disolvente A, condiciones de gradiente lineal de 100% A a 90% A en los siguientes 30 minutos y luego condiciones isocráticas con 90% de A y 10% de B hasta el final del análisis.

Columna

: C - 18 (250 x 4.6mm, 5µm).