IZOLAREA VIRUSURILOR IN CULTURI CELULARE EFECTE CITOPATICE
DIRECŢIILE DIAGNOSTICULUI VIRUSOLOGIC 1. Izolarea virală 2. Demonstrarea prezenţei virusului / componentelor sale 3. Diagnosticul serologic
Izolarea virusurilor 3 sisteme de izolare • Culturi de celule • Ou de găină embrionat • Animalul de laborator
AVANTAJE / DEZAVANTAJE ALE SISTEMELOR DE IZOLARE VIRALA
AVANTAJE
DEZAVANTAJE
ANIMAL DE LAB Infectie naturala
Cost / etica
O.G.E.
Cost
Susceptibilitate limitata
CULTURI DE CELULE
Sensibilitate buna / Susceptibilitate disponibilitate variabila
Componentele culturilor de celule: Celule dispersate+ mediu nutritiv Mediu nutritiv • • • •
solutie salina tamponata - Earle, Hanks substanţe nutritive ( SFV, lizate proteice) vitamine antibiotice şi antifungice
Condiţii necesare pentru păstrarea în viaţă a celulelor din cultura celulară • • • •
Condiţii aseptice pH adecvat Temperatură constantă atmosferă cu 10% CO2
CLASIFICAREA CULTURILOR DE CELULE • Culturi de celule dispersate » Culturi primare » Tulpini celulare » Linii celulare- CELULE TRANSFORMATE
CELULE TRANSFORMATE 1. conţin gene implicate în imortalizarea în vitro (cultivare nr. infinit pasaje) modificari cromozomiale => cariotip aneuploid; 2. se multiplică haotic, cerinţe nutritive foarte scăzute (se multiplică la concentraţii foarte scăzute de SFV), glicoliza anaerobă = sursa principala de energie. 3. membrană celulară modificată în compoziţie (absenţa fibronectinei => scaderea adeziunii intercelulare 4. nu au inhibitie de contact, se dispun dezordonat diferit de ţesutul din care derivă 5. inoculare la animale => TUMORI 6. modificarea morfologiei (rotunde, refrigente) 7. au antigene de suprafaţă diferite de N codif. de virus /celule gazda=> neoantigene 8. aglutinează uşor cu lectinele (antigene vegetale) 9. modificarea mesageri secunzi (AMPc)
Echipament de laborator
Hote cu flux laminar pentru obtinerea, si propagarea culturilor de celule si izolarea virala
TIPURI DE EFECTE CITOPATICE • SINCITIAL: HIV, v rujeolos, VRS • PICNOTIC – LITIC • enterovirusuri – v. poliomielitice; v. Coxsackie;
• INCLUZIONAR
ECHO
EFECT CITOPATIC SINCITIAL
EFECT CITOPATIC INCLUZIONAR • Intracitoplasmatic acidofil: v rabic, v vaccinal • Intranuclear
-acidofil: papovavirusuri
- bazofil: adenovirusuri • Mixt: v herpetice, v rujeolos
ECP picnotic litic
INCLUZII CITOPLASMATICE (RABIE) patognomonic in SNC - CORPII BABES NEGRI in cornul lui Ammon si neuronii piramidali din cerebel
INCLUZII INTRANUCLEARE (BOALA CU INCLUZII CMV)
INCLUZII INTRANUCLEARE