Cultivo De Protoplastos

CULTIVO DE PROTOPLASTOS

Para el éxito del cultivo • Tipo y edad del material de origen de los protoplastos. • Sistema de cultivo y la densidad de los protoplastos contenidos en él. • Adecuada composición del medio.

• En células jóvenes es posible manejar fácilmente la inducción y el mantenimiento de la actividad mitótica que en las células altamente especializadas.

SISTEMAS DE CULTIVO • MEDIO LIQUIDO • MEDIO SÓLIDO

MEDIO LIQUIDO • se usa colocándolo en capas delgadas o en gotas de 50 a 250 ul.

MEDIO SÓLIDO • se usa mezclando en él los protoplastos cuando tenga de 35-40°C, depositándolo, en capas delgadas, en las cajas petri.

• Frecuentemente los protoplastos se cultivan en medio liquido y las células en división o las microcolonias derivadas se cultivan en medios sólidos.

• Adams et al (1983) utilizaron un medio solido para cultivo de protoplastos; cuando las colonias se habían desarrollado, el medio se volvió a derretir a 40°C y las colonias se transfirieron por medio de una pipeta.

MEDIOS • Entre los medios de cultivo que se han utilizado con éxito están: • Medio 8p. De Kao et al (1975) • Medio de Kao • Medio To de Caboche (1980) • Medio Nagata et al (1971)

Sales orgánicas • Bajos niveles de nutrimentos, puesto que los protoplastos aislados tienen una eficiente camptación.

ESTABILIZADORES OSMOTICOS • Para evitar el estrés celular y como resultado una baja eficiencia del cultivo • Se usan generalmente azúcares

REGULADORES DE CRECIMIENTO • Generalmente requieren auxinas y citocininas, para la división celular. • Las auxinas también pueden ocasionar la vacuolización y ruptura de los protoplastos.