Cobas Ct E Ng.pdf

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cobas*

cobas® CT/NG Teste qualitative de acidos nucleicos para utiliza9ao com os cobas ® 6800/ 8800 Systems Para diagnostico in vitro

cobas * CT/NG

P/N: 07460066190

cobas * CT/NG Positive Control Kit

P/N: 07460082190

cobas * 6800/8800 Buffer Negative Control Kit

P/N: 07002238190

cobas® CT/ NG

Utilizagao prevista , diagnostico in O cobas CT / NG para utilizagao com os cobas 6800/8800 Systems e um teste automatizado, qualitativo de Chlamydia da vitro , que utiliza reagao de polimerizagao em cadeia ( PCR ) em tempo real, para a detegao direta do ADN trachomatis (CT) e/ ou do ADN da Neisseria gonorrhoeae ( NG ) em urina de homens e mulheres, amostras de esfregagos , vaginais colhidas pela propria mulher por ordem do medico, amostras de esfregagos vaginais colhidas pelo medico anorretais, amostras de esfregagos endocervicais, amostras de esfregagos orofaringicos ( garganta ) e amostras de esfregagos todas colhidas em cobas® PCR Media ( Roche Molecular Systems, Inc.), e amostras cervicais colhidas em Solugao eo PreservCyt . Este teste destina-se a ser utilizado como auxiliar no diagnostico de doengas causadas pela clamidia gonococo em individuos sintomaticos e assintomaticos. ®

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Resumo e explicagao do teste Fundamentos , com uma A infegao por CT e a causa bacterial principal de doengas transmitidas sexualmente no mundo inteiro nte ocorrencia anual de aproximadamente 89,1 milhoes de casos.1 A C. trachomatis e a doenga bacteriana sexualme < 24 anos.3 transmitida ( DST) mais frequentemente referida nos EUA 1 ,2 e a prevalencia e maior em pessoas com idades de 446,6 casos por Em 2013, foram reportados ao CDC 1.401.906 casos de C. trachomatis, que corresponde a uma taxa populagao de 100.000 pessoas.3 1 ciclo de vida bifasico unico. A CT e uma bacteria gram - negativa, sem mobilidade, obrigatoriamente intracelular , com um , endometrite e salpingite; se A CT causa uma variedade de infegoes tais como a uretrite, cervicite, proctite, conjuntivite doenga inflamatoria nao for tratada, a infegao pode subir para o utero, as trompas de falopio e os ovarios, causando , conjuntivite, artrite e lesoes pelvica, gravidez ectopica e infertilidade por fator tubario. A sindrome de Reiter ( uretrite 1 permanecem assintomaticos, infegoes mucocutaneas ) tamb £m tern sido associada com a infegao genital por CT. Muitas 4 medica . Os pacientes muitas vezes ficam e um grande numero de pacientes infetados podera nao procurar assistencia nascidas de maes infetadas podem novamente infetados se os seus parceiros sexuais nao forem tratados. As criangas em homens e mulheres sao o aumento de contrair conjuntivite, faringite e pneumonia . Os sintomas predominantes irregular .1 e disuria; as mulheres tambem podem apresentar hemorragia uterina

secregao

mulheres e feito atraves de testes a amostras da primeira urina O diagnostico da infegao urogenital por C. trachomatis em . O diagnostico da infegao uretral por da matinal ou de amostras de esfrega <;os colhidos do endocervix ou vagina ;o uretral ou uma amostra de primeira urina matinal. C. trachomatis em homens pode ser feito testando um esfrega < ) sao os testes mais sensiveis para estas amostras e portanto sao ( Os testes de amplifica<;ao de acidos nucleicos NAATs 5 , A infegao anorretal e orofaringica por C. trachomatis em pessoas recomendados para detetar a infegao por C. trachomatis orais, recetivas podem ser diagnosticadas fazendo testes no local anatomico que se envolvem em relaqoes sexuais, anais ou

da exposiqao. as mulheres sexualmente ativas com menos de 25 anos, e tambem nas Recomenda -se o rastreio anual da CT em todas de um risco acrescentado de infeqao ( por ex., as que tenham um novo parceiro mulheres mais velhas quando na presenqa , tenham um parceiro sexual com mais parceiros ou um parceiro sexual que sexual, tenham mais de um parceiro sexual 6 ). Foi demonstrado que programas de rastreio da clamidia fazem diminuir as tenha uma infeqao transmitida sexualmente 7,8 insuficiente a evidencia para suportar o rastreio de rotina da CT em homens taxas de DIP nas mulheres. Embora seja , de eficacia e de estudos economicamente viaveis, o rastreio de homens jovens jovens, devido a relativa falta de fiabilidade em cenarios clinicos com uma alta prevalencia de clamidia ( por ex., clinicas sexualmente ativos devera ser considerado 07997981001 -01 PT Doc Rev. 1.0

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cobas * CT / NG

ele \ ada sobre g para adolescentes, institui oes de corre <;ao e clinicas de STD ) ou em populates com ser a dete ao ( por ex., MSM ).2,6 O objetivo principal dos rastreios da clamidia entre mulheres devera homens da c a impedimento de complicates e o teste e tratamento dos seus parceiros, enquanto que o rastreio rastreios nao o so devera ser considerado quando os recursos o permitam, a prevalencia for elevada e esses g frequentes e rastreios da clamidia nas mulheres.9,10 Poderao eventualmente ser recomendados rastreios mais mulheres ( por ex., adolescentes) ou em alguns homens ( por ex., MSM ).2 oxidase, sem A N G e o agente etiologico dagonorreia. As NG sao diplococos gram - negativos, positivos para citocromo novas mfe oes por mobilidade e que nao formam esporos. Estima-se que nos Estados Unidos ocorram todos os anos 820.000 de mte oes por N . gonorrhoeae.11 A gonorreia e a segunda doen a mais frequentemente referida . 3 As manifesta <;6es clinicas dias, com NG sao muito numerosas.4 Nos homens, a uretrite aguda apresenta-se apos um periodo de incuba ao de 1 a 10 de uretrite. ^ secre ao uretral e disuria. Apenas uma pequena percentagem de homens permanece assintomatico, sem sinais local de A epididimite aguda e a complica ao mais comum, especialmente em homens jovens. Nas mulheres, o principal ea infe ao e o endocervix. Existe uma alta prevalencia de coalescencia de sintomas com a CT, a Trichomonas vaginalis mulheres Em . vaginose; muitas mulheres permanecem assintomaticas e por conseguinte nao procuram assistencia medica 13 a sintomaticas, podera notar-se um aumento de secre ao, disuria e hemorragia intermenstrual. Pode ocorrer doen , ovarico tubo inflamatoria pelvica ( DIP ) em 10% a 20 % das mulheres, combinada com endometrite, salpingite, abcesso ectopica. peritonite pelvica e peri -hepatite.14 A DIP pode originar cicatriza ao tubaria que pode causar infertilidade e gravidez , doen a Outros locais de infe ao gonococica em homens e mulheres sao o reto, a faringe, a conjuntiva e, num grau inferior a apresenta -se como infe ao gonococica disseminada. As crian as de maes infetadas podem contrair conjuntivite.

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Recomenda -se o rastreio anual de infe ao por N. gonorrhoeae em todas as mulheres sexualmente ativas com menos de 25 anos, e tambem nas mulheres mais velhas com um maior risco de infe ao ( por ex., as que tenham um novo parceiro sexual, tenham mais de um parceiro sexual, tenham um parceiro sexual com mais parceiros ou um parceiro sexual que tenha uma ITS).6 Fatores de risco adicionais incluem o uso inconsistente de preservative entre pessoas com varios parceiros sexuais, existencia anterior ou coexistencia de infe oes transmitidas sexualmente e troca de sexo por dinheiro ou droga .2 Para alem da utiliza <;ao em rastreio de infetes uretrais, o CDC tambem recomenda a utiliza ao de testes de amplificato de acidos nucleicos ( NAATs) para o rastreio anual de rotina de homens que fazem sexo com outros homens 5 ( MSM ) relativamente a infetes anorretais ou orais.

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Fundamentos dos testes de CT/ NG ,

1 0 metodo recomendado para o rastreio da CT e da NG sao os NAATs. - Para mulheres, o tipo de amostra recomendado e o esfregafo vaginal e para os homens e recomendada a primeira urina matinal. Outros tipos alternativos de amostras aceitaveis para mulheres incluem um esfregafo endocervical quando for indicado um exame pelvico , ou uma amostra da primeira urina matinal, mas uma amostra de urina podera detetar ate menos 10% de infetes comparativamente aos esfregafos vaginais e endocervicais. Para homens, alem da amostra de urina, um esfrega o uretral tambem e aceitavel. Adicionalmente, no caso de MSM, o CDC recomenda pelo menos um rastreio anual para a CT, a partir de amostras 2 uretrais ou anorretais, e para a NG, a partir de amostras uretrais, anorretais ou orais.

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O cobas* CT/ NG para utiliza ao nos cobas* 6800 /8800 Systems ( doravante designado como cobas* CT / NG neste documento) e um teste qualitative automatizado, de polimerizato em cadeia ( PCR ) em tempo real, concebido para detetar ADN de CT e de NG em amostras urogenitais, orofaringicas e anorretais de pacientes homens e mulheres, satisfazendo assim a necessidade medica de um teste rapido de rastreio molecular de alto rendimento para utiliza ao como auxiliar no diagnostic das doen$as causadas pela clamidia e o gonococo em individuos sintomaticos e assintomaticos

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cobas 6 CT / NG

o

Explica

^ do testeum

teste qualitative que e executado no cobas* 6800 System e no cobas* 8800 System . O cobas* CT/ NG ADN CT/ NG em amostras endocervicais, vaginais, orofaringicas, anorretais, de urina e cervicais de cientes mu eres infetadas e em amostras orofaringicas, anorretais e de urina de pacientes homens. Sao utilizados ° n as esPeci c°s dos alvos para a dete<;ao, mas nao a descrimina ao entre o plasmideo criptico e o gene . , a . . . .0 11Jciona mente, sao utilizados primers e duas sondas especificos dos alvos para a dete ao, mas naopara Se U nc as conservadas na regiao DR-9 da NG . O controlo interno de ADN , utilizado * monitoriza t o o processo de prepara ao de amostras e amplifica ao por PCR, e introduzido em cada amostra durante o nto da amostra . Adicionalmente, o teste utiliza um controlo positivo de titulo baixo e um controlo negativo. P

O cobas CT/ NG e

mulhde

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Princfpios do procedimento

CT/ NG baseia -se na prepara ao totalmente automdtica de amostras ( extra < ao e purifica ao dos acidos nucleicos) am ca * e ete9ao P r PCR. Os cobas* 6800/8800 Systems sao constituidos pelo modulo de abastecimento ° ° d e .amost s, o modulo de transference , o modulo de processamento e o modulo analitico. A gestao automatica de dados e executada pelo software cobas* 6800/ 8800, que atribui resultados de teste a todos os testes, na forma de positivos, negativos ou invalidos. Os resultados podem ser examinados diretamente no ecra do sistema ou impressos como um relatorio.

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Acidos nucleicos de amostras de pacientes, controlos externos e moleculas adicionadas de ADN do controlo interno ( DNA IC) sao extraidos simultaneamente. Em resumo, sao libertados acidos nucleicos bacterianos ao adicionar proteinase

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e reagente de lise a amostra . Os acidos nucleicos libertados ligam -se a superficie de silica das particulas de vidro magneticas adicionadas. As substancias nao ligadas e impurezas, tais como proteinas desnaturadas, detritos celulares e potenciais inibidores da PCR, sao removidas com os posteriores passos de lavagem , e os acidos nucleicos purificados sao eluidos das particulas de vidro magneticas, com tampao de elui ao, a elevada temperatura.

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A amplifica ao seletiva dos acidos nucleicos alvo da amostra e conseguida atraves da utilizac ao de primers senso e anti senso especificos para o alvo que sao selecionados de regioes plasmidicas e genomicas altamente conservadas da CT e da NG. Uma regiao do plasmideo criptico da CT e o do gene ompA ( alvo duplo ) e duas sequencias conservadas da regiao DR - 9 da NG sao amplificadas pelo cobas* CT/ NG. A amplifica ao seletiva do DNA - IC e conseguida atraves da utilizaqao de primers senso e anti -senso especificos para a sequencia - alvo que sao selecionados para que nao tenham qualquer homologia com a regiao alvo da CT ou da NG. £ utilizada uma enzima polimerase do ADN termoestavel para a amplifica ao por PCR. As sequencias do alvo e do DNA -IC sao amplificadas simultaneamente utilizando um perfil

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universal por amplifica ao por PCR com passos e numero de ciclos de temperatura predefinidos. A mistura principal inclui trifosfato de desoxiuridina (dUTP ) , em vez de trifosfato de desoxitimidina ( dTTP) , que e incorporado no ADN acabado de sintetizar ( amplicon ). Quaisquer amplicons contaminantes de corridas de PCR anteriores sao eliminados durante o primeiro ciclo termico pela enzima AmpErase, que e incluida na mistura principal da PCR.16 No entanto , os amplicons acabados de formar nao sao eliminados, uma vez que a enzima AmpErase fica inativa quando exposta a temperaturas acima dos 55 °C.

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cobas ^ CT/ NG

A mistura principal do cobas* PT / Mr / 1NLr contem duas sondas de detecao especificas para sequences alvo da CT, duas sondas de detecao espec 'f Se < ncias aIvo da e uma para o DNA - IC. As sondas estao marcadas com corantes reporter fluorescent C S a VO > ue Perrn * tem a detecao simultanea de alvos da CT, alvos da NG e do DNA - IC ° em tres canais ciiferentes uando nao ligado a sequencia do alvo, o sinal fluorescente das sondas intactas e suprimido ^ por um corante d - Durante passo de amplifica ao por PCR , a hibridiza <;ao das sondas com a cadeia simples ° de ADN especifica d 112 c va em a sonda * pela atividade exonuclease 5' a 3 ' da polimerase do ADN, 8 originando a separa ao do COrantes 0 rePorter e o de supressao e a gera <;ao de um sinal fluorescente. Com cada ciclo ^ ’ da PCR, sao gerada 1Aa es crescentes de sondas clivadas e o sinal cumulativo do corante reporter aumenta concomitantemente Ad e3 em tempo real dos produtos da PCR sao conseguidas medindo a fluorescencia dos cora reporter libertados, para os alvos de CT e de NG e para o DNA - IC respetivamente.

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cobas * Cl NC

Colheita , transporte e armazenamento de amostras Nota. Manuseie todas as amostras e controlos tendo em conta a possibilidade de transmitirem agentes

infecciosos.

Colheita de amostras validadas para utiliza ao com o cobas* CT/ NG , amostras de esfregaqos endocervicais colhidas com o cobas* PCR ^ Collection Kit, amostras de esfrega os vaginais, amostras de esfrega os anorretais e amostras de estregas os orofaringicos colhidas com o cobas* ^ e mulheres colhida com o cobas* PCR Uni Swab Collection Kit , urina de homens PCR Urine Collection Kit e amostras cervicais colhidas em Solu <;ao PreservCyt* (consultar Tabela 9 para uma lista de kits Foram

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eita ). Siga as instru oes para a respetivos kits de colheita. Siga as

colheita de todas as amostras de esfregaijos e de urina descritas nos IFU dos instru ?oes do fabricante para fazer a colheita de amostras cervicais para dentro de

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Solu ao PreservCyt*.

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Transporte de amostras As amostras de esfrega ; < os endocervicais colhidas com o cobas* PCR Dual Swab Collection Kit amostras de esfrega < jos vaginais, amostras de esfrega os anorretais e amostras de esfregai;os orofaringicos colhidas com o cobas' PCR Uni Swab Collection Kit, urina de homens e mulheres colhida com o cobas* PCR Urine Collection Kit e amostras cervicais colhidas em Soluipao PreservCyt* podem ser transportadas a temperaturas entre 2 e 30 °C. O transporte de amostras de CT / NG em cobas PCR Media e Soluipao PreservCyt* deve obedecer as regulamenta oes nacionais, federais, estaduais e locais relativas ao transporte de agentes etiologicos.12

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Armazenamento de amostras As amostras de esfrega os endocervicais colhidas com o cobas* PCR Dual Swab Collection Kit, amostras de esfrega<;os vaginais, amostras de esfrega os anorretais e amostras de esfrega os orofaringicos colhidas com o cobas* PCR Uni Swab Collection Kit e a urina de homens e mulheres colhida com o cobas* PCR Urine Collection Kit podem ser armazenadas a temperaturas entre 2 e 30 °C ate 3 meses depois de as amostras terem sido estabilizadas em cobas* PCR Media. As amostras cervicais colhidas em Solu ao PreservCyt* podem ser armazenadas entre 2 e 30 °C ate 3 meses.

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Amostras de urina de homens e mulheres

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Utilize apenas o Kit de Amostras de Urina cobas* PCR para colher amostras de urina para o cobas* CT / NG . O cobas* CT/ NG nao foi validado para utiliza ao com outros dispositivos de colheita de urina ou tipos de meios. A utiliza ao do cobas* CT/ NG com outros dispositivos de colheita de urina ou outros tipos de meios podera originar resultados falsos negativos, falsos positivos e/ ou invalidos. Para evitar contamina ao cruzada de amostras processadas, devem ser utilizadas outras tampas de cor alternativa (neutra; consultar Materials adicionais necessarios) para tapar as amostras dos tubos de cobas* PCR Media, apos o processamento. O cimo do nlvel de liquido das amostras de urina nao testadas devera ficar entre as duas linhas pretas da janela da etiqueta do tubo de cobas* PCR Media. Se o nivel de liquido estiver acima ou abaixo destas linhas, a amostra nao foi colhida adequadamente e nao pode ser utilizada para testes. Se forem necessarios testes adicionais, certifique -se de que resta pelo menos 1, 2 ml de amostra no tubo de cobas* PCR Media.

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Amostras endocervicais, vaginais

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, anorretais e orofaringicas

p esen <;a de muco em amostras endocervicais e cervicais podera causar atrasos no processamento devido a V es - ara um desempenho ideal do teste, as amostras nao devem apresentar muco. Utilize a zaragatoa g an e e poliester do cobas* PCR Dual Swab Collection Kit ou um dispositivo equivalente descartavel para as secre9des cervicais antes de colher a amostra endocervical ou cervical. tl 1Ze aPenas a zaragatoa flexivel do cobas* PCR Dual Swab Collection Kit para colher amostras endocervicais. , e apenas a zaragatoa grande de poliester do cobas* PCR Uni Swab Collection Kit ou do cobas* PCR Dual Collection Kit para colher amostras de esfrega os vaginais, anorretais e orofaringicos. O cobas* CT / NG nao oi validado para uti!iza <;ao com outros dispositivos de colheita ou tipos de meios. A utiliza <;ao do cobas* CT / NG com outros dispositivos de colheita ou outros tipos de meios podera originar resultados falsos negativos, falsos positivos e/ou invalidos. Para evitar contamina ao cruzada de amostras processadas, devem ser utilizadas outras tampas de cor alternativa ( neutra, consultar Materiais adicionais necessarios) para tapar as amostras dos tubos de cobas* PCR Media, apos o processamento.

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Todas as amostras contendo apenas uma so zaragatoa no tubo de cobas PCR Media podem ser diretamente processadas nos cobas 6800 / 8800 Systems. Se desejar, a zaragatoa pode ser removida antes do tubo com a amostra ser introduzido no equipamento; no entanto , deve-se ter o maximo cuidado para evitar a contaminaqio cruzada. Uma amostra colhida adequadamente devera ter uma unica zaragatoa com a haste quebrada pela linha a • tracejado. As hastes de zaragatoas que forem quebradas acima da linha a tracejado ficarao mais compridas que o normal e tambem poderao ser dobradas para caber dentro do tubo de cobas PCR Media. Isto pode criar uma obstru ;< ao no sistema de pipetagem, que podera causar a perda de amostra , de resultados de teste e / ou danos mecanicos no equipamento. No caso de uma zaragatoa ter uma haste quebrada incorretamente, remova - a antes do processamento de amostra nos cobas 6800/8800 Systems. Tome cuidado ao eliminar as zaragatoas; para evitar contamina ao, evite derramar ou tocar com as zaragatoas noutras superficies durante a elimina ao. • Amostras em tubos primarios, sem zaragatoa ou com duas zaragatoas, nao foram colhidas de acordo com as instruqoes descritas nas IFU dos respetivos kits e nao deverao ser testadas. • Ocasionalmente, as amostras de esfrega os content muco excessivo que podera provocar um erro de pipetagem (por ex., um coagulo ou outra obstru ao ) nos cobas 6800 / 8800 Systems. Antes de testar novamente as amostras que apresentavam coagulos durante o processamento inicial, remova e elimine a zaragatoa, e coloque a tampa e agite fortemente estas amostras durante 30 segundos para dispersar o muco em excesso. ® • As amostras com zaragatoas podem ser testadas duas vezes nos cobas 6800 / 8800 Systems enquanto a zaragatoa se encontrar no tubo de colheita. Se forem necessarios testes adicionais, ou se o primeiro teste falhar devido a erro de pipetagem de amostra (por ex., um coagulo ou outra obstru <;ao) , a zaragatoa devera ser removida e o liquido restante devera ter um volume minimo de 1,0 ml. ®

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cobas* CT / NG

Amostras cervicais colhidas em Solu ao PreservCyt *

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O cobas CT/ NG foi validado para ser utilizado com amostras cervicais colhidas em Solu ao PreservC) t O cobas® CT / NG nao foi validado para ser utilizado com amostras cervicais obtidas em outros tipos de meios. A utiliza ao do cobas CT/ NG com outros tipos de meios podera originar resultados falsos negativos, falsos positivos e/ ou invalidos. Ao colocar aliquotas de amostras cervicais de tubos primarios em tubos secundarios de cobas PCR Media de 13 ml de base redonda com codigos de barras, para processamento nos cobas® 6800 / 8800 Systems, utilize pipetas com pontas com barreira para aerossois ou de deslocamento positivo para manusear amostras. Para evitar contaminacpao cruzada, devem ser utilizadas outras tampas de cor alternativa ( neutra; consultar Materials ®

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adicionais necessarios ) para tapar esses tubos dessas amostras, apos o processamento.

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Proceda com cuidado quando transferir amostras de tubos primarios para tubos secundarios de 13 ml de base redonda com cobas PCR Media. Antes da transference misture com agita <jao forte as amostras dos tubos primarios. Troque as pontas de pipetagem apos cada amostra. As aliquotas das amostras primarias devem conter um volume minimo de 1,0 ml. ®

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cobas* CT/ NG

Embora raras, as muta9oes dentro das regioes altamente conservadas do ADN plasmideo criptico ou genomico da omatis ou do ADN genomico da N . gonorrhoeae cobertas pelos primers e/ ou sondas do cobas* CT/ NG reSUhar na n§ dete ° ° da presen?a da bact'ria eisseria gonorrhoeae podera ocasionalmente trocar material genetico com bacterias comensais frequentemente ontradas na microflora normal da boca e garganta . £ possivel que esta troca possa incluir sequencias isoladas

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que poderao, em raras ocasioes, produzir um sinal positivo com este ensaio.21 Devido a diferenqas basicas entre tecnologias, recomenda - se que , antes de mudar de uma tecnologia para outra , os utilizadores realizem estudos de correla<;ao de metodos nos seus laboratories, para qualificar as diferen as tecnologicas. Os utilizadores deverao seguir os seus proprios procedimentos especificos e politicas especificas . O cobas CT/ NG nao se destina a substituir outros exames ou testes de diagnostico de infe ao urogenital. Os pacientes podem ter cervicite , uretrite, infeqoes do trato urinario ou infe oes vaginais devido a outras causas ou infeqoes simultaneas com outros agentes . O cobas ® CT/ NG nao e recomendado para avalia ao de suspeita de abuso sexual e para outras evidencias medico -

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legais. O cobas CT/ NG nao devera ser utilizado para determinar o sucesso terapeutico, uma vez que poderao estar presentes acidos nucleicos apos terapia antimicrobiana. matinal Recomenda - se que, para testes de urina, o cobas CT / NG seja efetuado em amostras da primeira urina variaveis, tais ( definida como os primeiros 10 a 50 ml do jato urinario ). Nao foram avaliados os efeitos de outras como primeira urina versus jato medio, pos - irriga ao, etc. , uso de tampoes, Nao foram avaliados os efeitos de outras potenciais variaveis, tais como corrimento vaginal irriga ao, etc. e variaveis relativamente a colheita de amostras. a ser tratados com agentes antimicrobianos O cobas ® CT/ NG nao foi avaliado com pacientes que estao atualmente historico de histerectomia . ativos contra a CT ou a NG, assim como pacientes com um devido a inibi<;ao da polimerase. O Controlo Interno de Podem registar-se resultados falsos negativos ou invalidos a identificar as amostras que contem substancias passiveis de CT/ NG esta inclufdo no cobas CT/ NG para ajudar ao por PCR. interferir com o isolamento do acido nucleico e a amplifica master mix do cobas* CT / NG permite a amplifica ao seletiva do ADN A adi ao de enzima AmpErase ao reagente ao dos reagentes, e necessario observar boas praticas de laboratorio e alvo; no entanto, para evitar a contamina especificados neste folheto informativo. cumprir cuidadosamente os procedimentos em pacientes com menos de 14 anos. ® O cobas CT/ NG nao foi avaliado , que utilizaram os produtos de venda livre Replens Vaginal Moisturizer As amostras urogenitais de doentes Gel e RepHresh Clean Balance ou utilizaram Metronidazole Vaginal Gel Vaginal Eliminating Odor RepHresh de interferencias invalidos ou falsos negativos. Para mais detalhes, consulte os resultados ®

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poderao dar resultados

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Tabela 18).

cobas® CT/ NG

Avalia

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o do desempenho

Caracterfsticas principals de desempenho Limite de detecao (LoD) A pretensao de sensibilidade anali'tica da Chlamydia trachomatis para o ensaio e de 40 EB ( Elementary Bodies) por ml para todos os serotipos ( A, B, Ba, C, D, E, F, G, H, I, , K, LI, , 3) assim como para a variante sueca nvCT, em todos os tipos L2 L I de amostra referidos. No entanto, as dilutes de alguns serotipos abaixo de 40 EB/ ml deram resultado positivo utilizando o cobas* CT/ NG para utiliza <;ao com os cobas* 6800 /8800 Systems.

A pretensao de sensibilidade anali'tica da N. gonorrhoeae para o ensaio e de 1.0 CFU (Colony Forming Units) por ml ( 45 estripes da gonorreia testadas ) em todos os tipos de amostra referidos. No entanto, as dilui<;6es de estripes da gonorreia abaixo de 1,0 CFU/ ml deram resultado positivo utilizando o cobas’ CT / NG para utiliza <;ao com os cobas 6800/8800 Systems.

Precisao A precisao interna foi examinada utilizando um painel composto por culturas de CT e NG diluidas numa pool de matriz de amostra de esfrega o endocervical negativa colhida em cobas* PCR Media , uma pool de matriz de urina negativa com cobas* PCR Media e uma pool de matriz de amostra cervical negativa colhida em Solu <;ao PreservCyt*. Os esfregac;os endocervicais destinavam -se a representar todas as amostras de esfrega <;os colhidas em cobas* PCR Media (endocervicais, vaginais, orofarfngicas e anorretais ). Foram testados quatro niveis utilizando o serotipo D da CT e a estripe 2948 da NG

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como os organismos alvo. O painel de precisao foi concebido para incluir membros com concentrates muito baixas, baixas e medias de CT e NG (< 0,7 EB/ ml e < 0,07 CFU / ml, < 4 EB/ ml e < 0,4 CFU / ml e < 12 EB / ml e < 1,2 CFU / ml ) de cada matriz do painel. Foram executados testes com tres lotes de reagentes do cobas* CT/ NG e dois equipamentos, para um total de 24 corridas. A Tabela 14 apresenta uma describe dos paineis de precisao e a taxa de positividade do desempenho do estudo. Todos os membros do painel negativo tiveram resultados negativos durante o estudo todo. A analise do desvio padrao e a percentagem do coeficiente de variato dos valores de Ct dos testes validos efetuados nos membros do painel positivo ( ver Tabela 15 e Tabela 16) produziram intervalos globais de CV ( %) entre 1,62% e 4,05% para a CT e entre 1,17% e 3,55% para a NG.

cobasK CT /NG Tabela 16

Media geral, desvios padroes e coeficientes de

Taxa de positividade

Ct M dio

Dentro da corrida

DP

CV°/o

Esfregago endocervical em cobas® PCR

Entre corridas DP

varia<;ao (% ) para o ciclo limiar, membros do painel 2, 3 e 4 da NG Entre dias

Entre equipamentos

Entre lotes

Total

CV%

DP

CV°/o

DP

CV°/o

DP

CVo/o

DP

CV%

Media

44%

39,1

0, 00

0,00

0,31

0,79

0,84

2,14

0,72

1 ,85

0,57

1 , 46

1 , 28

3,28

940/o

38,1

0,00

0,00

0 ,00

0 ,00

1 , 27

3,34

0 ,00

0 ,00

0, 00

0,00

1 ,27

3,34

100%

36,5

0,00

0,00

0,24

0, 67

0 ,69

1 ,89

0 ,00

0 ,00

0,15

0, 40

0,74

2 ,04

Amostras cervicais colhidas em Solugao PreservCyt® 65%

39,0

0,34

0,87

0, 00

0 ,00

1 ,11

2 ,85

0,08

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0, 45

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1 ,25

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0, 00

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0 ,76

2 ,13

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0 ,81

2,27

cobas ^ PCR Media com Urina 78%

39,1

0, 00

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0 , 66

1 ,35

3, 46

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0,18

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1 ,39

3,55

100%

36,7

0,14

0,38

0 ,16

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0 ,71

1 ,92

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0,00

0,00

0,74

2 ,00

100%

34,9

0 ,00

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0 ,16

0, 47

0 ,37

1 ,06

0 , 06

0 ,18

0 ,00

0,00

0, 41

1.17

Especificidade anah'tica /reatividade cruzada Para avaliar a especificidade analitica, o cobas CT/ NG foi utilizado para testar um painel de 151 bacterias, fungos e virus, incluindo os normalmente encontrados no trato urogenital de homens e mulheres, 17 representantes de estripes Neisseria nao gonorrhoeae e outros organismos filogeneticamente nao relacionados. Os organismos indicados na Tabela 17 foram adicionados em concentrates de aproximadamente 1 x 106 unidades*/ ml para bacterias e de aproximadamente * Media (endocervicais, 1 x 105 unidades*/ ml para virus a pools de amostras de esfregaijos negativas em cobas PCR Solui;ao PreservCyt* . Foram orofaringicas e anorretais) , urina estabilizada em cobas PCR Media e amostras cervicais em com cada organismo misturado , executados testes com cada organismo potencialmente interferente sozinho e tambem indicaram que nenhum desses organismos com culturas de CT e NG a < 12 EB/ ml e < 1,2 CFU / ml. Os resultados falso positivos nas matrizes negativas para CT/ NG. interferiu com a deteqao da CT e da NG ou produziu resultados ®

®

(Colony Forming Units - unidades formadoras de colonias) , Todas as bacterias foram quantificadas utilizando CFU Chlamydophila psittaci em que foi utilizado IFU ( Inclusion Forming Units •xceto a Chlamydophila pneumoniae e a virus foram quantificados utilizando unidades/ ml conforme determinado inidades formadoras de inclusoes). Todos os . ,eio TCIDso Endpoint Dilution Assay. O Trichomonas vaginalis e o HPV16 foram quantificados em celulas/ ml

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cobas ® CT/ NG

Tabela 17

rganismos testados relativamente a especificidade analitica/ reatividade cruzada

Achromobacter xerosis Acinetobacter ca/coaceticus Acinetobacter Iwoffi Actinomyces israelii Actinomyces pyogenes Aerococcus viridans Aeromonas hydrophila A /caligenes faecalis Bacillus subti/is

Bacteriodes fragilis Bacteroides caccae Bacteroides ureo /yticus Bifidobacterium adolescentis Bifidobacterium breve Bifidobacterium longum Blautia producta

Branhame /la catarrhalis

Haemophilus ducreyi Haemophilus influenzae Helicobacter pylori

Neisseria polysaccharea Neisseria sicca

HPV 16

Neisseria subflava Neisseria weaverii

HSV -1

Paracoccus denitrificans

HSV-2

Peptostreptococcus anaerobius Peptostreptococcus asaccharolyticus

Adenovfrus humano 40 Enterovfrus humano 71 Rotavirus humano Kingella denitrificans Kingella kingae

Peptostreptococcus magnus Plesiomonas shigelloides

Propionibactenum acnes

Proteus mirabilis

Klebsiella oxytoca

Proteus penneri

Klebsiella pneumoniae

Proteus vulgaris

Lactobacillus acidophilus Lactobacillus brevis Lactobacillus crispatus Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis Lactobacillus jensenii

Providencia rettgeri Providencia stuartii

Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas fluorescens Pseudomonas putida

Brevibacterium linens Campylobacter coli Campylobacter jejuni

Lactobacillus lactis

Rahnella aquatilis

Lactobacillus ons

Rhizobium radiobacter

Candida albicans

Lactobacillus parabuchneri

Candida glabrata

Lactobacillus reuteri

Rhodospirillum rubrum Saccharomyces cerevisiae

Candida parapsilosis

Lactobacillus vaginalis Lactococcus lactis cremoris

Candida tropicalis

Chlamydia psittac /

Chlamydophila pneumoniae Chromobacter vio /aceum Citrobacter freundii

Clostridium difficile [Serogrupo B) Clostridium perfrmgens Corynebacterium genitalmm Corynebacterium xerosis Cryptococcus neoformans Citomegalovirus

Deinococcus radiodurans Derx / a gummosa Eikene /la corrodens

Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterococcus avium Enterococcus casseliflavus

Enterococcus faecalis

07997981001-01PT Doc Rev. 1.0

Legionella pneumophila Leuconostoc paramensenteroides aka. Weissella Listeria monocytogenes

Salmonella choleraesuis Salmonella minnesota Salmonella typhimurium

Serratia denitrificans Serratia marcescens

Micrococcus luteus Moraxella lacunata Moraxella os /oensis

Shigella dysenteriae Staphylococcus aureus

Morganella morgana

Staphylococcus saprophyticus

Mycobacterium smegmatis

Streptococcus agalactiae

Mycoplasma genitalium Mycoplasma hommis Neisseria cmerea Neisseria denitrificans

Streptococcus anginosus

Neisseria e /ongata subsp. elongata

Streptococcus mitis

Neisseria elongata subsp. mroreducans Neisseria flava

Streptococcus mutans

Neisseria flavescens Neisseria kochii Neisseria lactamica

Streptococcus pyogenes

Staphylococcus epidermidis

Streptococcus bovis Streptococcus dysgalactiae

Streptococcus equinis

Streptococcus pneumoniae

Streptococcus salivarius

Streptococcus sanguis

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MUP HprwSS ^ ^ IkrrmMi NeanKitfsena

Neasetta macacae

Streptomyces griseus

Nensena mentngrtida Serogrupo A

Trichomonas vaginalis Ureaplasma urealyticum

Nensena menngtudts Serogrupo B Nensena menmgitidts Serogrupo C Newer

memngitida Serogrupo D

Vei /lonella parvula

Nr , liens mermg/ tnJa Serogrupo WI 35

Vibrio cho /erae Vibrio parahaemolyticus

Nenserm metmgnxUs Serogropo Y

Yersinia enterocolitica

*

Nansens mucosa

Nemena perflays

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UlffX

Neisseria

Gemelln haemolysans

mucosa

Neisseria per Ilava

Interferencia Foram avaliados os efeitos de produtos femininos, de venda livre ou sob prcscn o , q w > Jtr v » aIn « »\ ira* 010' * * “ *‘ ** urogenitais ( Tabela 18), de produtos de higiene oral de venda livre que podem e ^ cm l ( l » anorrcUi ( Tabela 19) e de produtos de higiene e sob prescrigao que podem estar prestntts e amostras du vaginais g r es os ^ ^ testes foram efetuados utilizando amostras clinicas em pools ( foram utiliza . ntc jntcrfCrentes a nivci* p , r ^ PreservCyt* para representar amostras urogenitais) com adigao de substancias p qUAl Hqs de amostras negatives de uma utilizagao normal do paciente. As substancias interferentes foram test ^ ^ t « vl^ ^ osira » an de consoante o tipo CT/ NG, assim como em pools de amostras com CT/ NG a 120 EB / ml e Foram utilizados neste estudos os serotipos D e I da CT e as estripes 29 18 c 8 o Replens

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Metronidazole

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11 Dos produtos femininos de venda livre ou sob prescrigao testados em amt st falsos negativos ou l £ie l RepHresh Odor Eliminating Vaginal Gel e o RepHresh Clean Balance pro de ' Qfaringicos ou dos produtos Nenhum dos produtos de higiene oral de venda livre testados em esfregagos no teste qua . interferencia anorretal de venda livre e sob prescrigao testados em esfregagos anorretais p ^ uziram examinados em concentragoes previstas de uma utilizagao tipica o pr i

^

Tabela 1 8

Lista de substancias testadas em relagao a interferencia em a Nome do Produto

Isupositdrios Norforms

Creme vaginal Clindamycin Phosphate

Premarin

CVS Tioconazole 1 (Equate tioconazole 1) Creme anti - prurido Equate Vagicaine

y

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duragSo Replens

Hidratante vaginal de longa . • Summer s Eve Spray desodorizante feminino

Estrace

..

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Foam

Contraceptive -Vdyu a V U - Vaginal VCF \ /onina|J) Vagi

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(Espuma Contraceptiva

-

Gel K Y Ultra (substitui o K-Y Silk E)

Yeast Gard

Gel vaginal Metronidazole*

Advanced

Creme antifungico vaginal em embalagem de combinag§o Monistat 3

Azo Standard * (apenas urina

Creme anti - prurido de tratamento completo Monistat

Gel Vaginal de Eliminagao

de Odores RepHresh

RepHresh Clean Balance

Gyne-Lotrimin 7 * O Metronidazole, o Replens e o RepHresh

)

apresentaram interferencia a niveis

que potencialmente podem

presentes em amostras clinicas. zaragatoas simuladas * Os produtos RepHresh foram testados utilizando 28

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inferior e 3,6% para o intervalo superior [ 0%: 3,6% ].

Contamina9ao cruzada

utUizar o 6800 /8800 Systems ao co nos cruzada ao taxa e Foram efetuados estudos para avaliar a potencial contamina de desempenho , a estudo serem cobas* CT / NG. A contamina <;ao cruzada pode causar resultados falsos posit 0,5% (2 / 432) , ao sendo como determin * contamina ao cruzada de amostra para amostra do cobas CT / NG foi corridas. Nao foi observadacom decorrer no testadas alternadamente amostras altamente positivas e negativas preparadas 0 amostras utilizand eUn e foram prepara a testes contamina ao cruzada de corrida para corrida (0/ 282). Os este estudo foram cobas* PCR Media , urina estabilizada em cobas* PCR Media e com Solu < de amostras de pac . obtido sinal o o / amostras altamente positivas para gerar um valor de Ct que excede 95 utiliza ao de rotma numa amostras encontra ^ infetados na popula ao de utiliza ao prevista. A probabilidade de conseguinte, a taxa de a ao cobas* CT / NG e proporcional a prevalencia de CT e NG na popula <; que seja inferio ^ CT / NG e provavel rotina contam n contamina ao cruzada de amostra para amostra na utiliza <;ao de de 100%, a taxa j ma preva a ^ 0,5% x 5% x prevalencia de CT na popula ao em teste. Mesmo cruzada seria 0 ,5% x 5% x 100% = 0,025%.

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cobas ® CT /NG

Informagoes adicionais Caracteristicas principals do ensaio Tipos de amostras

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• •

• • •

• Quantidade de amostra

•

necessaria

#

• Duragao do teste

Media Esfregago endocervical colhido em cobas " PCR ® Media Esfregago vaginal colhido em cobas PCR cobas " PCR Media Esfregago vaginal colhido pela prdpria mulher em Media Esfregago orofaringico colhido em cobas " PCR Esfregago anorretal colhido em cobasa PCR Media ® PCR Media Urina de homens e mulheres estabilizada em cobas ® Amostra cervical colhida em Solugao PreservCyt

400 pi para todas as amostras de esfregagos ® 400 para a$ amostras de PreservCyt

^

850 pi para as amostras de urina

• < 3,5 horas para o primeiro resultado