Buffer

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9/13/2008

Preparado por: Ileana M. Rivera

¿Qué es un buffer? Es una solución que permite evita un cambio en pH ž Es de mucha importancia ya que cada reacción enzimática, cada célula y cada extracción tienen un pH óptimo ž Se usa en cualquier experimento que se requiera mantener la actividad y/o la estructura de un material biológico ž

Seguridad en el Laboratorio Nunca asumir que el material es seguro para manejar ž Conocer la composición y los peligros asociados de cada material con el que se trabaja ž

— Verificar el MSDS

ž

Seguir las recomendaciones del fabricante al momento del manejo — — — — —

Guantes Gafas Hood Mascara Identificación

Preparado por: Ileana M. Rivera Agosto Diciembre 2008

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9/13/2008

¿Qué agua utilizar? ž

El agua es un componente importante en las soluciones — La calidad, composición y pH pueden

afectar drásticamente los experimentos ž

Asumir que el agua es el solvente a menos que se indique lo contrario

Clasificaciones para el agua: ž

De plomería: — Contiene minerales e impurezas ○ Algunos minerales pueden inhibir algunas reacciones químicas o prevenir el crecimiento de bacterias ○ No es una variable reproducible en los experimentos

ž

De laboratorio: — Tratada con osmosis reversible o destilación — Adecuada para hacer buffers

ž

Reactiva — Mediante destilación o deionización ha sido

purificada — Puede ser utilizada para cultivos de células,

reactivos bioquímicos y como buffers ž

Ultra-pura — Tratada con ultrafiltración para asegurarse

que es libre de endotoxinas ○ Endotoxinas, componente de la pared celular

de las bacterias

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Términos importantes ž

Destilación — Método mas usado para la purificación de

agua ž

Osmosis — El agua pasa a través de una membrana

semipermeable y las impurezas no la pueden atravesar ž

Deionización — Remoción de iones mediante el paso por

una resina de aniones o cationes

Molaridad (M) ž

Para hacer una solución a una molaridad en particular necesitamos saber el volumen requerido y el peso molecular de la substancia

Dilución La mayor parte del trabajo de laboratorio es hacer diluciones del buffer ya preparado ž C1V1 = C2V2 ž

— Donde: ○ C1 = la concentración antes de la dilución ○ V1 = el volumen antes de la dilución ○ C2 = la concentración después de la dilución ○ V2 = el volumen después de la dilución

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pH Todos los buffer y soluciones usadas en biología requieren estar a un pH adecuado ž El pH afecta la solubilidad ž pH Meter ž

— Tiene un electrodo sensitivo que mide las

concentraciones de H+ — Se debe calibrar antes de cada uso ○ Se usan tres puntos pH = 4, 7 y 10 ○ Se remueve el exceso de fluido con Kimwipes, sin causar fricción ○ Se lava el electrodo usando agua destilada

Almacenamiento de Buffers ž

Se pueden guardar a 4 ºC o a temperatura de salón — Las soluciones concentradas se mantienen

a temperatura de salón ya que el frio las precipita ž

Los reactivos sensibles a luz se deben almacenar en botellas de color oscuros y en una caja cubriendo el envase con papel de aluminio

Razones para Descartar un Buffer ž

Descoloración — Asegurarse que el buffer originalmente no

sea de color ž

Contaminación — Hongos — Bacterias

ž

Precipitación

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9/13/2008

¿Qué vamos a hacer? ž

Preparar el MFI buffer — 100 mM KCl — 7 mM KH2PO4 — 18 mM K2HPO4 — 1 mM EDTA — Disolver en agua destilada (~ 1,800 mL) — Llevar el pH a 7 con NaOH (1 – 10 M)

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