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Enzimas 1-Objetivos de aprendizaje  Explicar la importancia de la cuantificación de los parámetros cinéticos Km y Vmax.  Deyterminamos la Km y Vmax de la fosfatasa acida es una reacción que sigue la cinetica de MICHAELIS y MENTEN, asi como otros arreglos algebraicos BURK. 2- INTRODUCCION TEORICA Los valores de Km y Vmax, son contantes cinéticas que reflejan la acción de una enzima, estos valores se pueden obtener por análisis de los datos cinéticos que se obtienen midiendo por separado las velocidades iniciales a diferentes tiempos. Generalmente cada minuto, con diferentes concentraciones de sustratos, pero con una misma cantidad de enzima en cada tubo. Km, es la concentración de sustrato necesario para alcanzar la mitad de la velocidad máxima. Vmax, es la eficiencia de acción de una enzima es decir se refiere al número de moles de sustrato transformado por unidad de tiempo por mol de enzima. Cuando cambian las condiciones de reacción, cambian los valores Km y Vmax. Por tanto debe medirse la Vmax y la Km de cada E. 3 materiales y reactivos     

Tubos de ensayo Gradillas, pipetas Matraces aforados de 25 y50ml clase A Cronometro Espectrofotómetro

Reactivos  Sustrato: fosfato de p-nitro fenilo  Enzima: fosfatasa acida 4-PARTE EXPERIMENMTAL Fundamento de la reacción.Las fosfatasas, son enzimas que se encuentran en la sangre circulante, se denomina también fosfomonoesterasas, incluyen dos tipos importantes, la fosfatasa la calina, presente en el hígado y en los huesos y la fosfatasa acida, producida por el tejido prostático, por los eritrocitos y las plaquetas cataliza la hidrolisis La fosfatasa acida, tiene como sustrato al p- nitro fenil fosfato, la hidrolisis de este sustrato forma como producto el p nitro fenol, el cual absorbe a 405 nm, lo que permite su cuantificación.

La reacción

5 PROCEDIMIENTO Condiciones de reacción: Sustrato: varia Enzima: constante Temperatura : 37C PH: APROX. 5 PREPARACION DE CONCENTRACION DE SUSTRATO 1 preparar 5 ml de una solucion madre de sustrato p nitrofenil 10 Mm. Apartir de esta preparar (en matraces aforado), 10 ml de las siguientes soluciones de sustrato 0,5-0,75-2.0-4,0-6,0-8,010mM 2- esquema general de trabajo Tubos B /reactivos

1(S) 0,5mM

2(S) 0,75mM