Urocultivo

Urocultivo Objetivo: que el alumno con los conocimientos ya adquiridos realice un urocultivo con el medio Mac Conkey, además de identificar las bacterias desarrolladas en el medio de cultivo y llevar acabo una tinción para hacer una buena observación de las bacterias, pero es mas importante la observación de su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio que la identificación de micro organismos. Introducción: El urocultivo permite la identificación del número y los tipos de bacterias presentes en la orina. Una vez identificado el tipo de microorganismo, el médico puede recetar el medicamento adecuado para combatirlo. ¿Cuándo se recomienda? • • •

Cuando los síntomas indican una posible infección urinaria como: dolor y sensación de calor al orinar, así como urgencia frecuente de orinar. Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre síntomas de infección. En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que pueda causar algún problema al bebé.

Para que estés bien y puedan realizarte tus estudios • •

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Se necesita la recolección de orina. Debes lavar con agua y con jabón los genitales para evitar una contaminación de la muestra. Por lo general este estudio no requiere que estés en ayunas o limitar o alterar tus actividades antes del estudio, sin embargo, te sugerimos pedirle a tu médico que te dé sus indicaciones. Coméntale a tu médico de todo tipo de medicamentos que estés tomando en ese momento, para ver si es necesario que los interrumpas antes del estudio.

Valores normales • • •

Menos 10,000 U.F.C/ml se considera contaminación Entre 10,000 y 100,000 U.F.C/ml se considera sospecha de infección Mayor a 100,000 U.F.C/ml se considera infección *U.F.C. Unidades Formadoras de Colonias.

Los resultados varían de laboratorio a laboratorio, por lo que, te sugerimos siempre realizar tus análisis en el mismo laboratorio, a menos que tu médico diga lo contrario.

Desarrollo: 1.- preparación de material. Lo primero que se a de hacer es en volver las cajas de petri que se han de utilizar en papel de estraza y sellarlos con cinta testigo. 2.-esterilizar. Se procede a introducir las cajas de petri es un bote de chiles grande y sellarlo con papel aluminio y cinta testigo, después introducirlo en la olla de presión con agua al nivel de tripie, tapar la olla y colocar mecheros de bunsen para que al canse una presión de 15 libras a 121grados centígrados dejarlo así por 15minutos, cuidar que no se pase y si se pasa retirar los mecheros para bajar la presión. 3.-preparacion de medios. En esta practica se preparara el medio Mac Conkey, se vierte los gramos pesados de este en la solución poco apoco para evitar que se hagan grumos se deja reposar 15 minutos, después se pone a baño maría hasta que hierva, al terminar se deja enfriar previamente con un tapón de algodón si es que se a de utilizar después. 4.-sembrado. Se procede tomar el medio y verterlo en una o varias cajas de petri dejarlo cuajar, y se toma una pequeña muestra de la orina infectada, con una asa de platino previamente esterilizada y se procede a sembrar en forma de sig-sag (ejemplo en dibujo de abajo)

Ya terminado el sembrado se introducen los cultivos ala estufa de manera que se coloque al revés paraqué las bacterias vayan hacia el medio, se pone la estufa a una temperatura de 38 grados centígrados. 5.-observcion de colonias. En este paso se sacan los cultivos de la estufa para observar su crecimiento y si no hay contaminación en el cultivo, esto se debe de hacer cercas de un mechero de bunsen para evitar contaminación del cultivo o que el cultivo se contamine. 6.-preparacion de frotis. • • •

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primero Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco. Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra. Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositar la muestra contenida en el asa. Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina. Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.

Tinción Con violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 ºC. Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra.

El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un centímetro de espesor. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina en posición inclinada hacia abajo. Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1 minuto más. El mordiente es cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorantes y determine su fijación a las bacterias Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no escurra más líquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que éste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra más líquido azul. Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita. Una vez que la lámina ya secó, procedemos a teñir nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto. Pasado el minuto correspondiente, se procede a enjuagar la lámina con agua, se escurre el agua sobrante y se seca en la forma anteriormente descrita. De esta manera, ya tendremos listo el frotis para su respectiva observación microscópica. 7.- que se observo. S observaron cocos, espirilicocos, neumococos, etc. Además que las bacterias se cambiara su coloración según se a grampositiva o gramnegativas. 8.-resultados microscópicos.

Conclusiones: de esta práctica se puede decir que es el mejor de los métodos para realizar un urocultivo, además de tener un amplio espectro clínico