Reporte 7

Universidad de San Carlos de Guatemala Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia Escuela de Química Farmacéutica Departamento de Farmacognosia y Fitoquímica Fitoquímica Lab. Fitoquímica I Miércoles Gaveta No.11 Surama

(2005); Alejandra López (200610028); Dolly Salguero (200614160); Alejandra Alonzo (200614280). REPORTE PRÁCTICA NO. 8

INVESTIGACION DE ACEITES VOLATILES EN HOJAS DE MENTA

INTRODUCCIÓN Aceites esenciales son los constituyentes odoríferos que se encuentran en forma liquida entre las células o glándulas de las plantas. Se encuentran en especies de la familia Umbeliferae, Rutaceae, mirtaceae y Piperaceae. La estructura de los aceites esenciales se derivan de unidades de isopreno y en su mayoría son monoterpenos, sesquiterpenos o compuestos aromáticos En la practica efectuada se procedió a la determinación de aceites escenciales contenidos en hojas de menta, con los objetivos identificar el contenido de aceites esenciales en menta, determinar la presencia de mentol y aplicar el método de detección con tratamiento. La importancia de identificar los aceites esenciales en las plantas esta en que son usadas en medicina, en perfumería y industria de alimentos. A partir de un extracto orgánico de hojas secas de menta se procedió a el análisis por cromatografía; como estándar se uso colucion de tolueno – metanol ( 1:30) y como fase móvil tolueno – acetato de etilo (93:7), la cromatoplaca después de correr se observo sin tratamiento y luego con tratamiento de vainillina – acido sulfúrico, obteniéndose bandas a las cuales se les determinaron los Rf. Se confirmó que la menta tiene una variedad de aceites esenciales, en esta variedad se encuentra el mentol, que le da un aroma característico a la planta y sus propiedades de anestésico leve para tratar dolores de garganta y de muela.

RESULTADOS CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA SIN TRATAMIENTO

Tabla No.1: colores de banda en cromatografía en capa fina sin tratamiento a 254 nm No. de Banda

Canela

Pericón

Estándar

1

Café claro

azul

No Fluorescencia

2

café claro

azul

------------------Fuente: Experimental

Tabla No.2: colores de bandas en cromatografía en capa fina sin tratamiento a 365 nm No. de Banda

Canela

Pericón

Estándar

1

Café - verde

verde

No Fluorescencia

2

-----------------

Verde claro

-----------------

3

-----------------

Azul violeta

-----------------

4

-----------------

Azul violeta claro

-----------------

5

-----------------

Azul - celeste

----------------Fuente: Experimental

CROMATOGRAFÍA EN CAPAR FINA CON TRATAMIENTO Tabla No.3: colores de bandas en cromatografía en capa fina con tratamiento a 365 nm No. de Banda

Canela

Pericón

Estándar

1

Café claro

azul

café

2

café claro

azul

--------------------Fuente: Experimental

Tabla No..4: colores de bandas en cromatografía en capa fina con tratamiento a 365 nm No. de Banda

Canela

Pericón

Estándar

1

Amarillo- verdoso

azul

Amarillo

2

azul

Azul - celeste

Amarillo

3

--------------------

azul

---------------------

4

---------------------

Azul

--------------------Fuente: Experimental

Tabla No. 5: Valores de Rf para bandas con tratamiento Rf Canela Pericón

Estándar

1

0.61

0.24

0.61

2

0.79

0.51

0.76

3

----------------

0.64

-----------------

4

-----------------

0.93

-----------------Fuente: Experimental

Tabla No. 6 : Método Micrométrico Canela

Mx 1

Mx 1+ KOH

Mx 2

Mx 2+ KOH

Mx 3

Mx 3+ KOH

Mx 4

Mx 4+ KOH

No fluorescen cia

Amarillo

Azul

Amarillo y Azul violeta

No fluorescencia

Amarillo -café

No fluorescencia

Café amarillo

No fluorescencia

No fluorescencia

Amarillo

No fluorescencia

Amarillo verdoso

Pericón

AmarilloNo verdoso fluorescencia No fluorescen cia

Fuente: Experimental

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En la práctica efectuada se determino la presencia de Cumarinas, metabolitos secundarios ampliamente distribuidos en plantas, principalmente de las familias Umbelífera y Rutácea, como en el caso de la corteza de la canela y las hojas de pericón. El interés en la identificación y aislamiento de estos metabolitos secundarios esta en que entre sus efectos farmacológicos, actúa sobre el sistema vascular tanto en territorio arterial como venoso y su utilidad en el tratamiento de algunas alteraciones de la piel como por ejemplo la psoriasis debido a sus propiedades fotosensibilizantes, lo que quiere decir que es ampliamente utilizado para tratar problemas de salud. (5). La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una capa uniforme de un adsorbente; en éste caso se utilizó la sílice gel como adsorbente polar, mantenido sobre una cromatoplaca de aluminio. Se utilizó como fase móvil un solvente apolar, identificado como Tolueno-acetato de etilo (93:7). Se realizó la separación cromatografía de las muestras respectivas de canela, pericón previamente extraídas con metanol; y estándar de Cumarinas al 1% en metanol, ésta separación se consiguió mediante la diferencia entre las fuerzas de adhesión de las moléculas de los componentes a una fase móvil y fase estacionaria. Al colocar la cromatoplaca directamente bajo las luz UV a 254 nm y 365 nm, sin usar ningún tipo de tratamiento se identificó de forma presuntiva que la canela contiene furanocumarinas por la fluorescencia color café de las manchas; en pericón se identifico la presencia de Cumarinas, por la fluorescencia azul de las manchas, y el estándar de Cumarinas no fluoreció, debido a la bajo cantidad que fue aplicada en la cromatoplaca (ver tabla No. 1 y No. 2). (2). La cromatoplaca se sometió a tratamiento químico con solución etanólica de hidróxido de potasio al 5-10%, debido a que las Cumarinas se caracterizan por tener un sistema benzo–alfa-pirona con anillo lactónico, estructuras que son solubilizadas por soluciones alcalinas, produciendo color que ayuda a su identificación. El análisis fitoquímico en pericón al observar bajo la luz UV- 365 nm;, dio como resultado la aparición de cuatro bandas con una fluorescencia azul violeta, azul, celeste, por lo que se identifica la presencia de Cumarinas. En canela la fluorescencia fue amarilla, al igual que en el estándar por lo que también hay Cumarinas presentes. (Ver tabla No. 4)(3). Los valores de Rf, se obtuvieron de las bandas observadas en la cromatoplaca con tratamiento químico. La banda 1 de canela, banda 3 de pericón y banda 1 de estándar tienen Rf comparables muy parecidos, pero en el caso de la banda de canela y el estándar, además de tener Rf idéntico, el color de la fluorecencia fue el mismo, por lo que se confirma la presencia del mismo tipo de Cumarinas. La banda 2 de canela y banda 2 de estándar, también tiene un valor de Rf parecido, por lo que podría determinarse la existencia de otro tipo de camarina en la canela. (Ver tabla no. 5). Se debe mencionar que el porcentaje de Cumarinas en canela es de 0.065%, mientras que en pericón es únicamente de 0.015%.

Para separar alícuotas de los extractos de canela y pericón, se usó cromatografía en columna llenada mediante la técnica de papilla, donde el material de relleno fue Silica y la fase móvil tolueno – acetato de etilo ( 93:7), la cual es mezcla de solventes con polaridades distintas y en distintas proporciones, escogidas por su afinidad a las Cumarinas. De cada extracto se obtuvieron varios alícuotas, para determinar la alícuota que contenía Cumarinas, se sometieron a un pre análisis de identificación, a través de UV365, por lo que solo se escogieron cuatro alícuotas de cada planta para ser utilizadas en el método macrométrico para identificación de Cumarinas. En el caso de canela, las cuatro escogidas fueron las obtenidas al final de la extracción debido a que por la polaridad de los constituyentes químicos de la canela, estos eluyen de último. El método macrométrico consistió en aplicar dos manchas de cada alícuota, una sin tratamiento químico y otra con tratamiento químico, como se observa en la tabla No. 6, canela sin tratamiento no floreció, solo en el caso de la muestra 3 que floreció azul (presencia de cumarinas), en pericón no floreció ninguna muestra sin tratamiento, por lo que se necesita de tratamiento químico para poder identificar las Cumarinas que están presentes. Al aplicar KOH a las manchas, debido al rompimiento del anillo de lactona de las Cumarinas, bajo la luz UV- 365 nm, se observa fluorescencia; en las cuatro muestras de canela se identificó la presencia de Cumarinas por la fluorescencia azul, verde y amarilla. En las muestras de pericón con tratamiento químico solo la 2 y 4 fluorescieron, esto se pudo deber que no se realizó de forma correcta la separación por cromatografía en columna, o no se escogieron las alícuotas con mayor concentración de Cumarinas para el análisis.

CONCLUSIONES 1. La importancia de la identificación de cumarinas, es su amplio uso en medicina tradicional y sus futuras aplicaciones en la medicina

convencional, por sus propiedades beneficiosas a nivel del sistema circulatorio. 2. Tanto las bandas de canela y pericón, sin tratamiento químico, presentaron bajo la luz UV 254 nm y 365 nm, fluorescencia azul, verde – azul y amarillo y, café o azul respectivamente, por lo que de forma presuntiva se confirmo la presencia de Cumarinas. 3. El tratamiento químico con base como el KOH, facilita la observación de Cumarinas, debido a que la estructura benzo – alfa – pirona y el anillo de lactona de las Cumarinas se rompe en medio básico, produciendo un color. 4. La banda 2 de canela y la banda 1 de estándar, tienen el mismo valor de Rf y fluorescencia amarilla por lo que pertenecen al mismo tipo de cumarinas. 5. La banda 3 de pericón tiene un Rf parecido al Rf de la banda 1 del estándar, pero no fluorescieron del mismo color, por lo que no se puede confirmar se pertenecen al mismo tipo de cumarina. 6. el porcentaje de Cumarinas en canela es de 0.065%, mientras que en pericón es únicamente de 0.015%. 7. La pre identificación de Cumarinas en las alícuotas obtenidas de la cromatografía en columna, aseguran la efectividad del método macrométrico para la identificación de Cumarinas. 8. El método macrométrico confirma la presencia de Cumarinas tanto en pericón como en canela, debido a la fluorescencia de las manchas con tratamiento, bajo la luz UV -365 nm.

REFERENCIAS 1. Bruneton, J. Elementos de Fitoquímica y Farmacognosia. Zaragoza: Acribia, 1991, Págs. 517-526. 2. Licda. Medinilla, Manual de Laboratorio de Fitoquímica, Guatemala, 2009. Págs. 24-26. 3. Cruz, Brenda. Tesis “Caracterización de cinco extractos de plantas medicinales nativas de Guatemala, validadas científicamente”. Universidad de San Carlos de Guatemala, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Titulo de química farmacéutica. Guatemala, septiembre del 2005. 4. Licda. Medinilla, clases magistrales. Universidad de San Carlos de Guatemala Menéndez, M. Cátedra de Farmacognosia y Productos Naturales. Facultad de Química. Universidad de Navarra, España. 2005. Disponible en: http://mail.fq.edu.uy/~planta/pdf/FarmacognosiaPE80/PREPARACIONEXTR ACTOS.pdf. Fecha de consulta: 17 de septiembre de 2009.

5. Página consultada en internet el día 17/09/2009 http://mail.fq.edu.uy/~planta/pdf/FarmacognosiaPE80/RELEVAMIENTOFIT OQUIMICO.pdf

ANEXOS Pericón (Tagetes lucida Cav.) SINÓNIMOS Tagetes florida Sweet Hierbanís, jericón, pericón vomol y Santa María

DESCRIPCIÓN BOTÁNICO Tamaño: De hasta 80 cm de alto. Tallo: Generalmente varios o muchos partiendo de la base, más o menos ramificados, glabros. Hojas: Simples, opuestas, indivisas, sésiles, lineares a oblongas, elípticas a oblanceoladas, de 2 a 10 cm de largo, de 0.5 a 2 cm de ancho, agudas a redondeadas en el ápice, márgenes aserrados. Inflorescencia: Cabezuelas dispuestas en corimbos, sobre pedúnculos bracteados de hasta 1 cm de largo; involucro cilíndrico, de 4 a 12 mm de alto, sus brácteas 5 a 7 , con los ápices subulados. Cabezuela/Flores: Flores liguladas 3 ó 4, amarillas, sus láminas flaveladas o suborbiculares, de 3 a 6 mm de largo; flores del disco 5 a 8, sus corolas amarillas, de 4 a 6 mm de largo. Frutos y semillas: Aquenios linear-claviformes, 5 a 8 mm de largo, negruzcos, glabros o algo hispídulos, vilano de 2 escamas aristiformes, de 3 a 5 mm de largo y 4 ó 5 escamas romas de 1 a 2 mm de largo. Características especiales: Con olor a anís al estrujarse. HÁBITAT Planta herbácea perenne, erecta. COMPOSICIÓN QUÍMICA Las hojas y flores contienen: aceite esencial (limoneno 16.5%, β-ocimeno 14%, βcariofileno 28%, mirceno 4-5%, anetol, alilanisol, estragol, éter metìlico de eugenol, tagetona) alcaloides cuaternarios, flavonoides (quercetagetina, patuletina), saponinas, taninos, leucoantocianinas, ácido gálico, glucósidos cianogénicos, Cumarinas (herniarina, dimetil alileter de 7 hidroxicumarina, 6,7,8-trimetoxicumarina), pectina.

USOS POPULARES Usada en té como tónico, se recomienda contra diarrea, disentería, empacho, vómito, reumatismo, asma, tifoidea, varices y resfriado; se usa también como antihelmíntico, abortivo, emenagogo y carminativo; el humo de la planta al quemarse se usa para ahuyentar mosquitos (Linares et al., 1999; Márquez et al., 1999). Se utiliza y se cultiva como ornamental, también afuera de su área de origen. Además se utiliza como insecticida, para fines ceremoniales y religiosos y para condimentar bebidas y licores

BIBLIOGRAFÍA Francisco Perdomo Roldán y Juana Mondragón Pichardo. Disponible en: [email protected]://www.ehmsa.com/pagina.asp?area=11&id=30. Fecha : 16 de Septiembre de 2009

CANELA (Cinnamomum zeylanicum) SINÓNIMOS Árbol de la canela, Canelero de Ceilán, Canelo, Canelera DESCRIPCIÓN BOTÁNICO El árbol de la canela es un pequeño arbol o arbusto perennifolio con corteza papirácea. - Puede alcanzar 10 m de altura en su estado silvestre, pero se poda en árboles más pequeños y densos para facilitar su cultivo. - Hoja perenne, casi opuestas, con 3 venas prominentes, simples, coriáceas, largas y aromáticas. - Flores en panículas, hermafroditas, muy inconspicuas. - La especia es la corteza interna que se extrae pelando y frotando las ramas y que una vez desprendida, es a su vez separada y vuelta a pelar. - Las cortezas se enrollan una dentro de otra hasta formar una barra de aproximadamente un metro de largo que se seca y blanquea antes de su comercialización. - La corteza se corta en tiras largas y se deja fermentar. Pasadas 24 horas, se separa la capa exterior más rugosa de la corteza y se deja secar la capa interna. Durante el proceso de secado, ésta se enrolla hasta formar las conocidas ramas de canela. - Sus ramas crecen erguidas y recubiertas de numerosas hojas de color verde brillante, siendo rojizos los nervios que las recorren.

HÁBITAT Se cultiva en países cálidos cuyos inviernos no sean fríos. COMPOSICIÓN QUÍMICA Aceite esencial (1-4 %), Sesquiterpenos. Diterpenos: cineilanol, cineilanina, Aldehidos aromáticos (60-75%), Alcoholes aromáticos, Esteres aromáticos (1%), Fenoles (510%).Cumarinas (0,65%), Taninos, Resinas, Mucílago, Procianidinas oligoméricas. USOS POPULARES Infecciones varias: Genito-urinaria: cistitis crónica y bacteriana, uretritis, prostatitis, orquitis, vulvovaginitis. Respiratoria: gripe, bronquitis, enfisema, faringitis, laringitis, traqueitis, sinusitis, rinitis. Digestivas: disenterías, enterocolitis espasmódicas e infecciosas, diarreas, amebiasis, oxiuriasis. Afecciones ginecológicas: amenorreas, dismenorreas, oligornenorreas. Meteorismo, gastritis, úlceras gastroduodenales, espasmos digestivos. Hipertensión arterial, prevención de tromboembolismos. Tópico: infecciones del cuero cabelludo, micosis cutáneas, herpes simple, prevención de caries. BIBLIOGRAFÍA http://www.otramedicina.com/2007/11/28/mas-que-una-especia-la-canela-y-suspropiedades-medicinales/